CC BY
143
БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ BIOLOGICAL SCIENCES
УДК 618.3:577.164.17 ББК 57.12
В 57
Татаркова Е.А.
Аспирант кафедры ботаники факультета естествознания Адыгейского государственного университета, Майкоп, тел. (8772) 593941, e-mail: [email protected] Тугуз А.Р.
Доктор биологических наук, профессор кафедры ботаники, зав. иммуногенетической лабораторией НИИ комплексных проблем Адыгейского государственного университета, Майкоп, тел. (8772) 593941, email: [email protected]
Цикуниб А.А.
Врач-акушер-гинеколог Майкопской городской клинической больницы, зав. акушерским отделением патологии беременности № 2 (малых сроков), Майкоп, e-mail: [email protected]
Руденко К.А.
Кандидат биологических наук, преподаватель Майкопского государственного технического университета, Майкоп, e-mail: [email protected] Муженя Д.В.
Кандидат биологических наук, инженер-генетик иммуногенетической лаборатории НИИ комплексных проблем Адыгейского государственного университета, Майкоп, e-mail: [email protected] Смольков И.В.
Аспирант кафедры ботаники факультета естествознания Адыгейского государственного университета, Майкоп, тел. (8772) 593941, e-mail: [email protected] Шумилов Д.С.
Аспирант кафедры ботаники факультета естествознания Адыгейского государственного университета, Майкоп, тел. (8772) 593941, e-mail: [email protected]
Влияние полиморфных вариантов генов фолатного цикла на процесс раннего прерывания беременности у жительниц Республики Адыгея
(Рецензирована)
Аннотация. Впервые для жителей Республики Адыгея определено частотное распределение аллелей и генотипов полиморфизмов генов фолатного цикла (MTHFR 677 C>T, MTHFR 1298 A>C, MTR 2756 A>G, МТЯЯ 66 A>G) и проанализирована предикторная значимость SNP (Single nucleotide polymorphisms - единичных нук-леотидных замен) генов фолатного цикла при угрозе прерывания беременности в первом триместре. С угрозой прерывания беременности в первом триместре у жительниц Республики Адыгея ассоциирован A66 аллель (х2=6,88; Р=0,009; OR=3,98) и гетерозиготный генотип A66G гена MTRR, который повышает риск развития патологии в 6 раз (х2=11,22; Р=0,004; OR=6,15). «Нормальный» А66 аллель гена MTRR у русских женщин связан с угрозой раннего прерывания беременности (х2=5,54; Р=0,02; OR=4,72). С нарушением течения беременности у адыгеек, в отличие от русских женщин, ассоциирован «нормальный» аллель С677 (/=6,32; Р=0,01; OR=9,4) и С677С генотип гена MTHFR (/=6,65; Р=0,04; OR=19,3).
Ключевые слова: гены фолатного цикла, MTHFR, MTR, MTRR, SNP генов, ассоциации с патологией беременности, угроза прерывания беременности на ранних сроках, Республика Адыгея, предикторы, мульти-факториальные заболевания.
Tatarkova E.A.
Post-graduate student of Botany Department of Natural Science Faculty, Adyghe State University, Maikop, ph. (8772) 593935, e-mail: [email protected] Tuguz A.R.
Doctor of Biology, Professor of Botany Department of Natural Science Faculty, Head of Immunogenetic Laboratory of Research Institute of Complex Problems, Adyghe State University, Maikop, ph. (8772) 593941, e-mail: [email protected]
Tsikunib A.A.
Doctor-obstetrician-gynecologist of the Maikop City Clinical Hospital, Head of Obstetric Department of Pathology of Pregnancy No. 2 (small terms), Maikop, e-mail: [email protected]
Rudenko K.A.
Candidate of Biology, Lecturer of Maikop State Technical University, Maikop, e-mail: [email protected]
Muzhenya D.V.
Candidate of Biology, Engineer-Geneticist of Immunogenetic Laboratory ofResearch Institute of Complex Problems, Adyghe State University, Maikop, e-mail: [email protected]
Smolkov I.V.
Post-graduate student of Botany Department of Natural Science Faculty, Adyghe State University, Maikop, ph.
(8772) 593935, e-mail: [email protected]
Shumilov D.S.
Post-graduate student of Botany Department of Natural Science Faculty, Adyghe State University, Maikop, ph.
(8772) 593935, e-mail: [email protected]
Influence of polymorphic folate gene variants on process of early pregnancy interruption at inhabitants of Adyghea Republic
Abstract. For the first time a frequency distribution of alleles and genotypes of folate gene polymorphisms (MTHFR 677 C>T, MTHFR 1298 A>C, MTR 2756 A>G, MTRR 66 A>G) is defined for inhabitants of Adyghea Republic, as well as the predictor importance of SNP (single nucleotide polymorphisms - single nucleotide replacements) of folate cycle genes at threat of pregnancy interruption in the first trimester is analyzed. A threat of pregnancy interruption in the first trimester at inhabitants of Adyghea Republic is associated with A66 allele (x2=6,88; Р=0,009; OR=3.98) and heterozygotic genotype of A66G gene of MTRR which increases 6 times risk of development of pathology (x2=11,22; Р=0,004; OR=6,15). "Normal" A66 allele of MTRR gene at the Russian women is related to threat of early pregnancy interruption (y2=5,54; Р=0,02; OR=4.72). The disturbances in the course of pregnancy at Adyghes, unlike the Russian women, are associated with "normal" C677 allele (x2=6,32; Р=0,01; OR=9.4) and C677C of MTHFR gene genotype (x2=6.65; Р=0,04; OR=19,3).
Keywords: genes of a folate cycle, MTHFR, MTR, MTRR, SNP of genes, associations with pregnancy pathology, threat of pregnancy interruption at early terms, Adyghea Republic, predictors, multi-factorial diseases.
1. Введение
Генная сеть невынашивания беременности (НБ) включает полиморфные варианты более 40 генов, которые могут быть использованы в качестве молекулярно-генетических предикторов развития репродуктивных потерь (РП) в первом триместре беременности. В мировых популяциях наиболее изучены SNP генов 5,10-метилентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR), метионин-синтазы (MTR) и метионин-синтазы редуктазы (MTRR), обуславливающие патологию беременности, генетическую предрасположенность к хромосомным перестройкам и аномалиям развития плода [1-25].
По данным Трифоновой Е.А., наибольший вклад в НБ вносят полиморфизмы гена MTHFR: rs4846052, A1298C (rs1801131), rs6541003, rs2066462, C677T (rs1801133) и rs2274976. Однако с патологией беременности часто связывают миссенс-мутацию (C677T, rs1801133) и транзицию (А1298С, rs1801131) гена MTHFR. Замены цитозина на тимин в 677 положении ДНК (677 С^Т) и, соответственно, аланина на валин в каталитическом домене фермента (p.Ala222Val) изменяют свойства белкового продукта. А1298С (1298 A^C) полиморфизм, представляющий собой транзицию аденина (A) на цитозин (С) в позиции 1298 участка ДНК гена MTHFR, приводят к замене остатка глутаминовой кислоты на аланин в регу-ляторном домене фермента (p.Glu429Ala). Обе замены в гене MTHFR приводят к повышению гиперцистеинемии и гипометилированию ДНК - одной из причин развития осложнений и репродуктивных потерь в первом триместре беременности [1, 4-6, 9-12].
В исследованиях последних лет отмечают роль полиморфизмов других генов фолатно-го цикла (ФЦ): A2756G (A^G) rs1805087, аллельного варианта гена В12-зависимой метионин-синтазы (MTR) и А66G (66 A^G) rs1801394 SNP гена метионин-синтаза редуктазы (MTRR). Согласно немногочисленным данным, замена аденина на гуанин (A^G) в 2756 позиции гена MTR и, соответственно, 919 Asp^Gly в аминокислотной последовательности белка MTR может быть ассоциирована с генетической предрасположенностью к невынашиванию беременности и акушерской патологией - нарушению развития нервной трубки (расщелина позвоночника), хромосомными аномалиями (синдром Дауна), изолированным расщелинам губы и неба у плода. При A66G MTRR (66 A^G) SNP замена аминокислоты изо-лейцин на метионин (Ile22Met) изменяет биохимические свойства фермента, который в конечном итоге приводит к аналогичным патологиям [2, 9-12, 15, 16].
По данным Madjunkova S. и др. (2011 г.), распространенность мутаций MTHFR C677T, MTHFR A1298C, MTR A2756G и MTRR A66G не отличается между группами женщин и их партнеров-мужчин, что говорит о целесообразности использования для анализа рисков угрозы прерывания беременности результатов скрининга только матери [13, 14]. Связь между C677T (MTHFR) и A66G (MTRR) полиморфизмами в геноме матери и синдромом Дауна у плода подтверждена в мета-анализах, проведенных в 2013 г., но для A1298C SNP гена MTHFR и A2756G гена MTR не установлено ассоциации с хромосомными аномалиями [14, 15].
В мировых популяциях полиморфизмы генов ФЦ распределены неравномерно и сведения об их ассоциации с РП весьма противоречивы. Поэтому для выбора генетических маркеров репродуктивных потерь необходимо учитывать региональные популяционно-специфические различия, особенно для такого многонационального субъекта Российской Федерации (РФ), как Республики Адыгея (РА) [1-25], так как ранее такие исследования не проводились.
Цель работы: определение роли SNP генов фолатного цикла (MTHFR 677 C>T (Ala222Val), MTHFR 1298 A>C (Glu429Ala), MTR 2756 A>G (Asp919Gly), MTRR 66 A>G (Ile22Met)) в репродуктивной патологии с угрозой прерывания беременности на ранних сроках у жительниц РА.
2. Материалы и методы
1. Выделение ДНК с помощью реактивов «Проба ГС-Генетика» (ДНК-Технология, Москва) с последующим определением концентрации и чистоты образцов ДНК на спектрофотометре NanoDrop 2000с "Thermo Scentific" (USA).
2. SNP-типирование полиморфных вариантов генов MTHFR 677 C>T, MTHFR 1298 A>C, MTR 2756 A>G, МТRR 66 A>G в образцах ДНК 51-й жительницы РА (г. Майкоп) методом ПЦР в режиме "Real-Time" на тест-системах ДНК-Технология (Москва). В обследуемую группу (n=36) включены пациентки репродуктивного возраста (18-41 лет, средний возраст 27,5±1,9 лет) акушерского отделения № 2 патологии малых сроков беременности ГБУЗ РА «Майкопская городская клиническая больница» с верифицированным диагнозом угрозы прерывания беременности в срок до 13 недель. В анамнезе обследованных женщин - ранние РП (прерывание по типу неразвивающейся беременности или самопроизвольного аборта).
Контрольная группа (доноры, n=16) представлена неродственными здоровыми жительницами РА репродуктивного возраста (20-45 лет, средний возраст 30,1±4,3 лет), имеющих одного и более здоровых детей, в анамнезе которых отсутствуют проявления и наследственная отягощенность по исследуемой нозологии, а также медицинские аборты и внематочная беременность.
Критерии исключения: беременность, наступившая в результате вспомогательных репродуктивных технологий; тяжелая соматическая патология и хронические заболевания женщины в стадии декомпенсации (заболевания печени, почек, сердечно-сосудистой системы с нарушением их функций); мертворождения; хромосомные аномалии и врожденные пороки развития (ВПР) плода.
Соответствие распределений SNP ожидаемым значениям при равновесии Харди-Вайнберга и сравнения частот аллельных вариантов/генотипов проводили с использованием критерия х (хи-квадрата с поправкой Йетеса), отношения шансов - OR (odds-ration) при уровне значимости Р<0,05 и 95% доверительном интервале (95% С1).
3. Результаты и обсуждения
Распределение четырех SNP генов ФЦ в обследованных группах женщин соответствовало равновесию Харди-Вайнберга, но статистически значимые различия (Р<0,01) в частотах аллельных вариантов между донорами и группой женщин с угрозой ранних репродуктивных потерь (прерыванием по типу неразвивающейся или раннего выкидыша) определены только для А66G одного гена MTRR (табл. 1).
Таблица 1
Частоты БКР генов фолатного цикла в контрольной группе и у женщин с угрозой прерывания беременности на ранних сроках
Полиморфизмы Генотипы / Аллели Больные (n=361, 362, 343, 374) Доноры^ (n=151, 122, 163, 134) х2 Р OR
Знач. 95% CI
К t-. H чо S о С677С С677Т Т677Т 0,583 0,361 0,056 0,400 0,533 0,067 1,46 0,48 2,10 0,49 0,82 0,62 - 7,16 0,15 - 1,68 0,07 - 9,83
С677 677Т 0,764 0,236 0,667 0,333 1,03 0,31 1,62 0,62 0,64 - 4,12 0,24 - 1,57
MTHFR A1298C2 A1298A A1298C C1298C 0,306 0,583 0,111 0,500 0,500 0,000 2,41 0,3 0,44 1,40 3,46 0,12 - 1,67 0,38 - 5,20 0,17 - 69,09
A1298 1298C 0,597 0,403 0,750 0,250 1,81 0,18 0,49 2,02 0,18 - 1,39 0,72 - 5,71
m H S <N <c А2756А А2756G G2756G 0,588 0,353 0,059 0,438 0,563 0,000 2,54 0,28 1,84 0,42 2,54 0,55 - 6,10 0,13 - 1,43 0,12 - 55,99
А2756 2756G 0,765 0,235 0,719 0,281 0,25 0,62 1,27 0,79 0,49 - 3,30 0,30 - 2,04
С 40 E чо s < А66А А66G G66G 0,162 0,649 0,189 0,077 0,231 0,692 11,22 0,004* 2,32 6,15 0,10 0,25 - 21,37 1,43 - 26,40 0,02 - 0,44
А66 66G 0,486 0,514 0,192 0,808 6,88 0,009* 3,98 0,25 1,36 - 11,68 0,09 - 0,74
Примечание: * - достоверность различий при Р<0,05; х2>3,6
Для обследованных групп жительниц РА характерна более высокая частота «мутантно-го» аллеля 66G в генотипе по сравнению с нормальным А66 MTRR. В общей группе женщин с угрозой выкидыша на ранних сроках значительно чаще выявляется «нормальный» А66 ал-лельный вариант гена MTRR (х2=6,88; Р=0,009), повышающий риск развития осложнений беременности примерно в 4 раза, что противоречит мировым данным об ассоциации патологий беременности с «мутантным» аллелем [1-14]. Ген MTRR локализован в хромосоме 5p15.31 и кодирует цитоплазматический фермент метионин-синтаза редуктазу, играющую важную роль в синтезе белка и участвующую в большом количестве биохимических реакций, связанных с переносом метильной группы. Одна из них - обратное превращение гомоцистеина в метионин [9-11]. Согласно нашим первичным данным, наличие гетерозиготного генотипа А/G гена MTRR является прогностически неблагоприятным фактором, повышающим вероятность прерывания беременности в 6 раз (х2=11,22; Р=0,004). Для генов MTHFR и MTR статистически значимых различий между контролем и группой с патологией не выявлено.
Поиск маркерных SNP генов ФЦ, ассоциированных с угрозой ранних РП у жительниц РА разных этнических групп (на примере русских и адыгеек), дал несколько неожиданные результаты, представленные в таблицах 2 и 3.
Так, у русских женщин с повышенным риском развития патологического состояния ассоциирована А66 аллель гена MTRR (х2=5,54; Р=0,02; OR=4,72), которая в гомо- (13,6%) и в гетерозиготном состоянии (63,6%) чаще выявляется среди данного контингента и практически не обнаруживается у женщин с нормальным течением беременности. В работе Добролюбова А.С. (2006 г.) приводятся сведения о распространении 66G полиморфизма у жителей Ивановской области: частота гетерозиготных носителей 66G аллеля составляет около 45,0-50,0%, а гомозиготных ~ 25,0% [3, 6]. В наших исследованиях у русских женщин с угрозой прерывания беременности частота гетерозиготного А/G генотипа по 66 локусу значительно выше (63,6%), что может быть связано не только с высоким риском РП, но и предрасположенностью обследованных пациенток к некоторым мультифакториальным заболеваниям [2-16].
Таблица 2
Частоты БКР генов фолатного цикла в этнической группе русских женщин
По- лимор физмы Генотипы / аллели Больные (и=211, 222, 203, 224) Доноры^ (w=111, 102, 123, 104) 2 X Р OR
Знач. 95% CI
Н чо S о С677С С677Т Т677Т 0,524 0,381 0,095 0,545 0,455 0,000 0,26 0,61 0,92 0,74 2,95 0,21 - 3,96 0,17 - 3,24 0,13 - 66,95
С677 677Т 0,524 0,381 0,545 0,455 1,15 0,56 0,92 0,74 0,21 - 3,96 0,17 - 3,24
* 2 к ^ Р <N A1298A A1298C C1298C 0,318 0,545 0,136 0,400 0,600 0,000 1,53 0,46 0,70 0,80 3,77 0,15 - 3,30 0,18 - 3,65 0,18 - 80,13
A1298 1298C 0,591 0,409 0,700 0,300 0,70 0,4 0,62 1,62 0,20 - 1,92 0,52 - 5,00
m Н "ч S <N <с А2756А A2756G G2756G 0,600 0,350 0,050 0,500 0,500 0,000 1,15 0,56 1,50 0,54 1,92 0,35 - 6,35 0,13 - 2,31 0,07 - 51,03
А2756 2756G 0,775 0,225 0,750 0,250 0,05 0,82 1,15 0,87 0,35 - 3,76 0,27 - 2,85
MTRR A66G4 А66А A66G G66G 0,136 0,636 0,227 0,000 0,300 0,700 6,92 0,03 3,77 4,08 0,13 0,18 - 80,13 0,82 - 20,38 0,02 - 0,68
А66 66G 0,455 0,545 0,150 0,850 5,54 0,02* 4,72 0,21 1,21 - 18,46 0,05 - 0,83
Примечание: * - достоверность различий при Р<0,05; х2>3,6
Таблица 3
Частоты SNP генов фолатного цикла в этнической группе женщин-адыгеек
По- лимор физмы Генотипы / аллели Больные (и=10!, 92, 93, 104) Доноры (n=41, 22, 43, 34) 2 X Р OR
Знач. 95% CI
Е н р Ü S о С677С С677Т Т677Т 0,700 0,300 0,000 0,000 0,750 0,250 6,65 0,04* 19,29 0,14 0,11 0,80 - 466,26 0,01 - 2,00 0,00 - 3,40
С677 677Т 0,850 0,150 0,375 0,625 6,32 0,01* 9,44 0,11 1,43 - 62,24 0,02 - 0,70
* 2 к ^ Р <N A1298A A1298C C1298C 0,333 0,667 0,000 1,000 0,000 0,000 2,93 0,23 0,11 9,29 0,26 0,00 - 2,93 0,34 - 252,46 0,00 - 16,86
A1298 1298C 0,667 0,333 1,000 0,000 1,83 0,18 0,21 4,68 0,01 - 4,61 0,22 - 100,99
3 & 8 <с А2756А A2756G G2756G 0,667 0,222 0,111 0,250 0,750 0,000 0,64 0,42 6,00 0,10 1,59 0,42 - 85,25 0,01 - 1,50 0,05 - 47,52
А2756 2756G 0,778 0,222 0,625 0,375 0,66 0,42 2,10 0,48 0,34 - 12,86 0,08 - 2,92
MTRR A66G4 А66А A66G G66G 0,200 0,700 0,100 0,333 0,000 0,667 5,49 0,06 0,50 15,00 0,06 0,03 - 8,71 0,60 - 376,72 0,00 - 1,32
А66 66G 0,550 0,450 0,333 0,667 0,87 0,35 2,44 0,41 0,36 - 16,55 0,06 - 2,77
Примечание: * - достоверность различий при Р<0,05; х2>3,6
Ген МТЯЯ кодирует метионин-синтаза редуктазу, играющую важную роль в синтезе белка и участвующую в большом количестве биохимических реакций, связанных с переносом метильной группы [9-11]. В этом гене описаны разные типы мутаций и ряд полиморфных вариантов, снижающих активность фермента, особенно на фоне сочетания с генотипами
MTHFR С677Т, MTHFR Т677Т, MTR A2756G и MTR G2756G и дефицита витамина В12 [1, 311]. Работами Добролюбова А.С. подтверждена ассоциация полиморфного аллеля MTRR 66G в гомо- и гетерозиготном состоянии с развитием привычной невынашиваемости беременности (ПНБ) на ранних сроках [6].
Полиморфизмы генов MTHFR С677Т и MTRR A66G исследованы при ПНБ, синдроме Дауна, большое количество работ посвящено spina bifida, роль двух других полиморфизмов (MTHFR А1298С, MTR A2756G) изучена в меньшей степени и их причастность к репродуктивным нарушениям еще не вполне ясна [8, 9-15]. Однако в популяциях Китая и Южной Кореи при анализе взаимосвязи между полиморфизмом A66G метионин-синтазы редуктазы (MTRR) и восприимчивости к повторным самопроизвольным абортам ассоциация не была выявлена [13, 17].
С нарушением течения беременности у адыгеек в отличие от русских женщин ассоциирован «нормальный» аллель С677 гена MTHFR (х2=6,32; Р=0,01), в 9,4 раз повышающий риск ранних РП. Носительство гомозиготного С677С генотипа (х2=6,65; Р=0,04) у адыгеек сопряжено с 19-кратным возрастанием вероятности прерывания беременности, что может быть обусловлено спецификой гена MTHFR (1p36.22), кодирующего белок MTHFR (мети-лентетрагидрофолатредуктазу). Дефицит этого фермента приводит к тератогенному (повреждающему плод) и мутагенному (повреждающему ДНК) действию. При этом происходит инактивация клеточных генов, в том числе - онкогенов. [9-11, 18].
Частота носительства «мутантной» аллели (62,5%) среди женщин-адыгеек с нормальным течением беременности, родивших одного и более здоровых детей, значительно превышает аналогичные показатели для мировых популяций (до 55% у испанцев) [9-11, 14-22]. В России частота встречаемости 677Т аллеля в московском регионе составляет 29%, у жителей Сибири - 32% [1]. У жительниц РА, адыгеек, (Южный Федеральный округ) повышена частота «мутантного» аллеля, но с угрозой прерывания беременности в первом триместре ассоциирован «нормальный» С677 аллельный вариант и гомозиготный генотип С677С гена MTHFR.
Высокая частота аллеля 677T в популяциях, вероятнее всего, обусловлена действием естественного отбора, реализация которого связана: с сохранением одноуглеродных радикалов тетрагидрофолатного метаболизма для жизненно важного синтеза ДНК и РНК при недостаточности питания; с накоплением в популяции аллеля, снижающего риск развития рака толстой кишки. Более того, 677T полиморфизм опосредует ген-средовые взаимодействия между MTHFR и содержанием фолиевой кислоты, что подтверждено в ряде экспериментальных работ [1, 13, 18, 19].
Роль SNP MTHFR в патологии беременности обсуждается в ряде отечественных и зарубежных исследований, но данные по ассоциации с различными формами репродуктивных нарушений весьма противоречивы. Носительство C677T и T677T генотипов MTHFR повышает риск развития умеренной гипергомоцистеинемии, особенно на фоне понижения фолат-ного статуса. По данным Трифоновой Е.А., у гомозигот по «мутантному» аллелю наиболее распространенного SNP гена MTHFR - C677T, активность фермента in vitro снижена на 70%, а у гетерозигот - на 35%. Такая генетическая предрасположенность в сочетании с погрешностью в питании приводит к задержке роста и антенатальной смерти плода, отслойке плаценты, позднему гестозу (токсикозу), преэклампсии. Однако у здоровых жительниц Каталонии (Испания) и женщин с потерями беременности показано отсутствие связи частот C677T генотипов MTHFR с уровнями гомоцистеина в плазме [1-16, 20, 21].
В популяции ростовских женщин (Россия, 2011 г.) превалирует С677 - «нормальный» аллель гена MTHFR и доля его гомо- (С/С) и гетерозигот С/Т, а также повышена частота «мутантного» аллеля 66G (0,57%) по сравнению с «нормальным» А66 аллельным вариантом (0,43%) гена MTRR, что согласуется с нашими результатами - у женщин РА частота аллеля А66 (33,3%) ниже, чем 66G (66,7%) [16].
Ряд исследований подтверждает отсутствие достоверных различий в частотах SNP C677T тромбофилического гена MTHFR в норме и при патологии, корреляции с невынаши-
ваемостью беременности (Турция, 2012-2014 гг.; Египет, 2011 г.; Бразилия, 2014 г), а также с рецидивирующим спонтанным абортом (Бразилия, Южная Корея, Северная Индия, 20112014 гг.). В группах синегальских и немецких женщин не выявлено достоверной ассоциации полиморфизма C677T MTHFR с ранними или поздними потерями беременности (НБ) [9-11, 19]. В Польше частоты распределения С677Т полиморфных вариантов гена MTHFR в контрольной группе (n=200) и у женщин с ПНБ (более 2 выкидышей на ранних сроках; n=313) существенно не различались (Р=0,58) и составляли, соответственно, 8,4% и 11,1% [21-23]. Аналогичные результаты получены для русских жительниц РА, у которых частота «мутант-ного» аллеля 677Т гена MTHFR несколько выше, чем у доноров (33,3% против 23,6%; Р=0,31) (табл. 1).
В противоположность этому у жителей Северной Индии, Болгарии, Китая (20072012 гг.), наоборот, подтверждена ассоциация мутантного аллеля 677Т, генотипов С/Т и Т/Т SNP C677T гена MTHFR с рисками развития РП первого триместра и наследственной тром-бофилии - основного фактора риска патологии беременности (Испания, 2014 г.). Результаты проведенного Cao Y. и др. в 2013 году мета-анализа показали существенную связь между C677T MTHFR и НБ неясного генеза у жителей Восточной Азии и в смешанных популяциях, но отсутствие ассоциаций для европейцев [9-11, 24].
Для второго по распространенности А1298С полиморфного варианта гена MTHFR в наших исследованиях не установлено ассоциации с угрозой прерывания беременности на ранних сроках, но частота 1298С аллеля гена MTHFR в общей группе женщин с НБ в первом триместре повышена по сравнению с донорами (соответственно 40,3% и 25%; табл. 1). Аналогичная тенденция прослеживается и при анализе распределения этих SNP в этнических группах русских и адыгеек (табл. 2, 3). Результаты экспериментальных данных неоднозначны и требует дополнительных исследований, так как генотип С1298С MTHFR снижает активность фермента MTHFR примерно до 60% от нормы, приводит к неопластическому перерождению клеток и повышенному риску эмбриональных опухолей. Комбинация гетерози-готности А1298С MTHFR и С677Т MTHFR способствует повышению концентрации гомоци-стеина в плазме, последующему снижению уровня фолата, вызывающему дефекты нервной трубки у плода, увеличение рисков развития тромбозов, спонтанного аборта, позднего гесто-за и др. Компаунд-гетерозиготы по маркерам С677Т и А1298С, согласно некоторым исследованиям, характеризуются уменьшением активности фермента MTHFR на 40-50%. У жителей России частота 1298С аллеля варьирует от 24 до 38%; среди мировых популяций - от 4% (Сенегал) до 41% (Израиль; Новая Гвинея) [1-12]. SNP А1298С гена MTHFR рассматривается в качестве фактора риска многих РП: самопроизвольного аборта, возникающего на фоне ги-пометилирования ДНК и нерасхождения хромосом (Южная Корея, 2011 г); наследственной тромбофилии (Испания); НБ, связанных с маточно-плацентарной недостаточностью (Австралия, Иран, Турция, 2008-2012 гг.) [9-11, 17].
Nair R.R. и др. в 2013 г. (Индия) на основе мета-анализа и по результатам собственных исследований с использованием абортивного материала показал, что А/С и С/С генотипы по 1298 локусу гена MTHFR значительно повышают риск спонтанного прерывания беременности [23]. Отсутствие ассоциации с НБ первого триместра показаны для популяции североиндийских, египетских, синегальских женщин [9-11]. В работах Lino F. и др. (2015 г.) постулируется отсутствие связи полиморфизмов С677T и A1298C гена MTHFR с рецидивирующим спонтанным абортом [18]. Мета-анализ (Cao Y. и др.) 2013 года, включающий 1163 больных и 1061 здоровых женщин, подтвердил отсутствие значимой корреляции между 1298C полиморфизма гена MTHFR и ПНБ неясного генеза [24]. Мутация A1298C MTHFR, по данным мета-анализа Rai V. и др. (2014 г), основанном на результатах 17 исследований, не имеет связи с НБ [9-11].
При анализе характера мультифакториальной патологии родословных пациенток с угрозой прерывания беременности (РА) обнаружено преобладание сердечно-сосудистой (инфаркт миокарда, инсульт, варикозная болезнь), онкологической и эндокринной патологий (поликистоз, сахарный диабет, эндемичный зоб). Наследственная отягощенность сердечно-
сосудистыми и онкологическими заболеваниями обследованных женщин-носительниц полиморфных вариантов генов фолатного цикла соответствует мировым данным о возможных осложнениях, ассоциированных с SNP этих генов [7]. В родословных женщин с угрозой РП распространенность заболевания щитовидной железы связана с дефицитом по важному биогенному элементу - йоду, недостаток которого носит регионарный характер, специфичный для территории РА [25]. Полученные данные подтверждают целесообразность детального изучения родословной семьи в каждом случае нарушений репродуктивных функций с последующим назначением молекулярно-генетических исследований.
Таким образом, у жительниц РА выявлены маркерные полиморфизмы генов ФЦ, связанные с нарушением развития плодного места и последующими акушерскими осложнениями. Угроза раннего прерывания беременности у русских женщин ассоциирована с «нормальным» аллелем A66 гена MTRR, а у адыгеек - с C677 полиморфизмом гена MTHFR.
4. Выводы
1. С угрозой прерывания беременности в первом триместре у жительниц РА ассоциирован A66 аллель (х2=6,88; Р=0,009; OR=3,98) и гетерозиготный генотип A66G гена MTRR, который повышает риск развития патологии в 6 раз (х2=11,22; Р=0,004; OR=6,15).
2. «Нормальный» А66 аллель гена MTRR у русских женщин связан с угрозой раннего прерывания беременности (х2=5,54; Р=0.02; OR=4,72).
3. У адыгеек, в отличие от русских женщин с риском репродуктивных потерь ассоциирован «нормальный» аллель С677 гена MTHFR (х2=6,32; Р=0,01, OR=9,44). Носительство гомозиготного С677С генотипа (х2=6,65; Р=0,04; OR=19,29) у адыгеек сопряжено с 19-кратным возрастанием вероятности прерывания беременности.
Примечания:
1. Трифонова E.A., Еремина Е.Р. Генетическое разнообразие и структура неравновесия по сцеплению гена MTHFR в популяциях Северной Евразии // Acta Naturae. Т. 4, № 1. 2012. С. 55-71.
2. Лифанов A^. Aссоциация полиморфизмов генов MTHFR, MTR и MTRR с развитием гипергомоци-стеинемии у спортсменов // Ученые записки университета им. П.Ф. Лесгафта. 2013. № 8. С. 98-101.
3. Hobbs C.A. Polymorphisms in Genes Involved in Fo-late Metabolism as Maternal Risk Factors for Down // Am. J. Hum. Genet. 2000. Vol. 67. P. 623-630.
4. Ковалевская Т.С., Вассерман H.H. Генетические аспекты невынашивания беременности // Медицинская генетика. 2003. Т. 2, № 11. С. 480-484.
5. Беспалова O.H. Генетические факторы риска невынашивания беременности: автореф. дис. ... д-ра мед. наук. СПб., 2009. 40 с.
6. Добролюбов A.C, Липин M.A. Полиморфизм генов фолатного обмена и болезни человека // Вестник новых медицинских технологий. 2006. Т. XIII, № 4. С. 71-73.
7. Aлиева Т.Д. Изучение роли ассоциации полиморфизмов генов фолатного цикла и хромосомного полиморфизма у матери в формировании репродуктивных потерь // Вюник проблем бюлогп i ме-дицини. 2013. Т. 1, № 104. С. 78-84.
8. Бескоровайная Т.С. Влияние аллелей полиморфных генов системы HLA II класса, фолатного обмена, гемостаза и детоксикации на репродукцию человека: автореф. дис. ... канд. мед. наук. М., 2005. 92 с.
9. [Электронный ресурс]. URL: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/
10. [Электронный ресурс]. URL:
References:
1. Trifonova E.A., Eremina E.R. Genetic diversity and structure of linkage disequilibrium of MTHFR gene in populations of Northern Eurasia // Acta Naturae. Vol. 4, No. 1. 2012. P. 55-71.
2. Lifanov A.D. Association of polymorphisms of MTHFR, MTR and MTRR genes with the development of hyperhomocysteinemia of athletes // Scientific Notes of University named after P.F. Lesgaft. 2013. No. 8. P. 98-101.
3. Hobbs C.A. Polymorphisms in Genes Involved in Fo-late Metabolism as Maternal Risk Factors for Down // Am. J. Hum. Genet. 2000. Vol. 67. P. 623-630.
4. Kovalevskaya T.S., Vasserman N.N. Genetic aspects of spontaneous miscarriage // Medical Genetics. 2003. Vol. 2, No. 11. P. 480-484.
5. Bespalova O.N. Genetic risk factors for miscarriage: Diss. abstract for the Dr. of Med. degree. SPb., 2009. 40 pp.
6. Dobrolyubov A.S., Lipin M.A. Polymorphism of genes of folate metabolism and human diseases // Bulletin of New Medical Technologies. 2006. Vol. 13, No. 4. P. 71-73.
7. Alieva T.D. Study of the role of the association of polymorphisms of genes of folate cycle and chromosomal polymorphism of mother in the formation of reproductive losses // Bulletin of the Problems of Biology and Medicine. 2013. Vol. 1, No. 104. P. 78-84.
8. Beskorovaynaya T.S. Influence of alleles of polymorphic genes of the HLA II class system, folate metabolism, haemostasis and detoxication on human reproduction: Diss. abstract for the Candidate of Med. degree. M., 2005. 92 pp.
9. [Electronic resource]. URL: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/
10. [Electronic resource]. URL:
http://www.genecards.org/
11. [Электронный ресурс]. URL: http://www.ensembl.org/index.html
12. Association of methionine synthase and thymidylate synthase genetic polymorphisms with idiopathic recurrent pregnancy loss / J.H. Kim [et al.] // Fertil Steril. 2013. P. 1674-1680.
13. Association of methionine synthase reductase gene polymorphism with unexplained recurrent spontaneous abortion / Q.N. Guo [et al] // Zhonghua Fu Chan Ke Za Zhi. 2012. No. 10. Р. 742-746.
14. Madjunkova S., Volk M. Detection of thrombophilic mutations related to spontaneous abortions by a multiplex SNaPshot method // Genet. Test Mol. Bio-markers. 2012. No. 4. P. 259-264.
15. Yang M., Gong T. Maternal gene polymorphisms involved in folate metabolism and the risk of having a Down syndrome offspring: a meta-analysis // Mutagenesis. 2013. No. 6. Р. 661-671.
16. Деревянчук Е.Г. Эпигенетические, молекулярно-генетические и биохимические критерии нарушений эмбриогенеза человека: автореф. дис. ... канд. биол. наук. Ставрополь, 2011. 18 с.
17. Association between MTHFR 1298A>C polymorphism and spontaneous abortion with fetal chromosomal aneuploidy / S.Y. Kim [et al.] // Am. J. Re-prod. Immunol. 2011. Vol. 66, No. 4. P. 252-258.
18. Lino F.L., Traina E. Thrombophilic mutations and polymorphisms, alone or in combination, and recurrent spontaneous abortion // Clin Appl. Thromb. Hemost. 2015. Vol. 21, No. 4. P. 365-372.
19. The association between inherited thrombophilia and recurrent pregnancy loss in Turkish women / U. Isaoglu [et al.] // Clin. Exp. Obstet. Gynecol. 2014. Vol. 41, No. 2. P. 177-181.
20. Association of MTHFR genetic variants C677T and A1298C on predisposition to spontaneous abortion in Slavonic population / J.A. Hubacek [et al.] // Clin. Chim. Acta. 2015. P. 104-107.
21. Creus M., Deulofeu R. Plasma homocysteine and vitamin B12 serum levels, red blood cell folate concentrations, C677T methylenetetrahydrofolate reduc-tase gene mutation and risk of recurrent miscarriage: a case-control study in Spain // Clin. Chem. Lab. Med. 2013. Vol. 51, No. 3. P. 693-699.
22. Slezak R., Laczmanski L The role of 1691G>A (Leiden) mutation in Factor V gene, 20210G>A in prothrombin gene and 677C>T in MTHFR gene in etiology of early pregnancy loss] // Ginekol. Pol. 2011. No. 6. P. 446-450.
23. Nair R.R., Khanna A. Association of maternal and fetal MTHFR A1298C polymorphism with the risk of pregnancy loss: a study of an Indian population and a meta-analysis // Fertil Steril. 2013. Vol. 99, No. 5. P. 1311-1318.
24. Association study between methylenetetrahydro-folate reductase polymorphisms and unexplained recurrent pregnancy loss: a meta-analysis / Y. Cao [et al.] // Gene. 2013. Vol. 514, No. 2. P. 105-111.
25. Ожева Р.Ш. Влияние экологических факторов внешней среды на показатели здоровья детского и подросткового населения северо-кавказского региона // Новые технологии. Майкоп, 2012. № 1. С. 229-234.
http://www.genecards.org/
11. [Electronic resource]. URL: http://www.ensembl.org/index.html
12. Association of methionine synthase and thymidylate synthase genetic polymorphisms with idiopathic recurrent pregnancy loss / J.H. Kim [et al.] // Fertil Steril. 2013. P. 1674-1680.
13. Association of methionine synthase reductase gene polymorphism with unexplained recurrent spontaneous abortion / Q.N. Guo [et al] // Zhonghua Fu Chan Ke Za Zhi. 2012. No. 10. P. 742-746.
14. Madjunkova S., Volk M. Detection of thrombophilic mutations related to spontaneous abortions by a multiplex SNaPshot method // Genet. Test Mol. Bio-markers. 2012. No. 4. P. 259-264.
15. Yang M., Gong T. Maternal gene polymorphisms involved in folate metabolism and the risk of having a Down syndrome offspring: a meta-analysis // Mu-tagenesis. 2013. No. 6. P. 661-671.
17. Derevyanchuk E.G. Epigenetic, molecular, genetic and biochemical criteria of violations of human embryogenesis: Diss.abstract. for the Candidate of Biol. degree. Stavropol, 2011. 18 pp.
18. Association between MTHFR 1298A>C polymorphism and spontaneous abortion with fetal chromosomal aneuploidy / S.Y. Kim [et al.] // Am. J. Re-prod. Immunol. 2011. Vol. 66, No. 4. P. 252-258.
19. Lino F.L., Traina E. Thrombophilic mutations and polymorphisms, alone or in combination, and recurrent spontaneous abortion // Clin Appl. Thromb. Hemost. 2015. Vol. 21, No. 4. P. 365-372.
20. The association between inherited thrombophilia and recurrent pregnancy loss in Turkish women / U. Isaoglu [et al.] // Clin. Exp. Obstet. Gynecol. 2014. Vol. 41, No. 2. P. 177-181.
21. Association of MTHFR genetic variants C677T and A1298C on predisposition to spontaneous abortion in Slavonic population / J.A. Hubacek [et al.] // Clin. Chim. Acta. 2015. P. 104-107.
22. Creus M., Deulofeu R. Plasma homocysteine and vitamin B12 serum levels, red blood cell folate concentrations, C677T methylenetetrahydrofolate reduc-tase gene mutation and risk of recurrent miscarriage: a case-control study in Spain // Clin. Chem. Lab. Med. 2013. Vol. 51, No. 3. P. 693-699.
23. Slezak R., Laczmanski L The role of 1691G>A (Leiden) mutation in Factor V gene, 20210G>A in proth-rombin gene and 677C>T in MTHFR gene in etiology of early pregnancy loss] // Ginekol. Pol. 2011. No. 6. P. 446-450.
24. Nair R.R., Khanna A. Association of maternal and fetal MTHFR A1298C polymorphism with the risk of pregnancy loss: a study of an Indian population and a meta-analysis // Fertil Steril. 2013. Vol. 99, No. 5. P. 1311-1318.
25. Association study between methylenetetrahydro-folate reductase polymorphisms and unexplained recurrent pregnancy loss: a meta-analysis / Y. Cao [et al.] // Gene. 2013. Vol. 514, No. 2. P. 105-111.
26. Ozheva R.Sh. The influence of ecological factors of environment on health indices of children and teenagers of the North Caucasus region // New Technologies. Maikop, 2012. No. 1. P. 229-234.
