CC BY
91
УДК 579.66:547.94
Н. И. Петухова (к.биол.н., доц.), А. А. Шараева (асп.), В. В. Зорин (чл.-корр. АН РБ, д.х.н., проф., зав. каф.)
ВЛИЯНИЕ ОЛЕАТА НАТРИЯ НА РАЗВИТИЕ ВОЗДУШНОГО МИЦЕЛИЯ ГРИБА MORTIERELLA ALPINA ГР-1 - ПРОДУЦЕНТА АРАХИДОНОВОЙ КИСЛОТЫ
Уфимский государственный нефтяной технический университет, кафедра биохимии и технологии микробиологических производств 450062, г. Уфа, ул. Космонавтов, 1; тел. (347)2431935, e-mail: [email protected]
N. I. Petukhova, A. A. Sharaeva, V. V. Zorin
EFFECT OF SODIUM OLEATE ON THE DEVELOPMENT OF THE AERIAL MYCELIUM OF ARACHIDONIC ACID PRODUCER FUNGUS - MORTIERELLA ALPINA GR-1
Ufa State Petroleum Technological University 1, Kosmonavtov Str, 450062 Ufa, Russia; ph. (347) 2431935, e-mail: [email protected]
Показано, что добавление олеата натрия в концентрации 2% в овсяную среду приводит к практически полному подавлению развития воздушного мицелия при поверхностном культивировании гриба Mortierella alpina ГР-1 — продуцента арахидоновой кислоты. Внесение в среду глицерина (2—6 %) и 0.2—0.4 % сульфата цинка восстанавливает способность гриба образовывать воздушный мицелий. В присутствии 2% олеата натрия в среде воздушный мицелий наиболее активно развивается при 6% глицерина и 0.2% сульфата цинка. Выход биомассы воздушного мицелия, образующегося в этих условиях, сопоставим с выходом биомассы, полученной на овсяной среде без добавок (контроль), тогда как содержание в нем липидов в 2.2 раза выше, чем в контрольном варианте. Содержание арахидо-новой кислоты достигает 64% (от суммы жирных кислот).
Ключевые слова: арахидоновая кислота; микробиологический синтез липидов; Mortierella alpina; олеат натрия.
Перспективным сырьем для получения путем микробиологического синтеза ряда практически важных продуктов (полиоксибутирата, гетерополисахаридов, гликолипидов, липаз) может служить соапсток — отход щелочного рафинирования растительных масел, содержащий в своем составе мыла жирных кислот, триацилглицериды и глицерин, которые микроорганизмы могут использовать в качестве ростовых субстратов или предшественников метаболитов 1-5.
Дата поступления 30.05.14
It is shown that sodium oleate at a concentration of 2% is almost completely suppresses the development of the aerial mycelium of arachidonic acid producer fungus Mortierella alpina GR-1 at surface cultivation on oat media. Adding to the impact of glycerol (2—6 %) and 0.2—0.4 % zinc sulfate restores the ability of the fungus to form aerial mycelium. In the presence of 2% sodium oleate in the medium, aerial mycelium the most rapidly developing at 6% glycerol and 0.2% zinc sulfate. Yield aerial mycelium biomass produced under these conditions comparable with yield biomass obtained on oat medium alone (control), while the content of the lipid is 2.2 times higher than in the control embodiment. The arachidonic acid content is 64% (of total fatty acids).
Кey words: arachidonic acid; lipids microbiological synthesis; Mortierella alpina; sodium oleate.
Ранее нами было показано, что гриб Mortierella alpina 18-1 и его мутант ГР-1 на глицеринсодержащих средах синтезируют ли-пиды с высоким содержанием арахидоновой кислоты (65—67 от суммы жирных кислот) 6-8, являющейся сырьем для синтеза ряда низкомолекулярных биорегуляторов, а также применяющейся в качестве лекарственного средства, пищевой и кормовой добавки, стимулятора роста и индукторов неспецифической устойчивости растений 9-18. Недавно была исследована возможность использования для биосинтеза арахидоновой кислоты подсолнечного соапсто-
ка. Было показано, что гриб Mortierella alpina ГР-1 способен расти на поверхности овсяной среды с сульфатом цинка (0.12%), в присутствии 0.5—4 % соапстока, содержащего около 50% сухих веществ 19. При низких концентрациях соапстока (0.5—1 % асв) гриб формирует обильный воздушный мицелий, содержащий липиды, в которых на долю арахидоновой кислоты приходится до 56% от суммы жирных кислот, однако, при более высоких концентрациях соапстока в среде (2—4 % асв) происходит подавление развития воздушного мицелия гриба и формирование мицелиальной пленки, покрывающей поверхность субстрата, в которой накапливаются липиды с низким содержанием арахидоновой кислоты (около 5% от суммы кислот) 19.
Следует отметить, что аналогичный рост гриба Mortierella alpina ГР-1 наблюдался при его культивировании на овсяной среде с фракцией жирных кислот, также получающейся как отход при производстве подсолнечного масла 19. Внесение жирно-кислотной фракции в среду в концентрации 1% подавляло образование воздушного мицелия, хотя субстратный мицелий в виде биопленки на поверхности субстрата формировался. Это указывает на то, что причиной ингибирующего действия высоких концентраций соапстока на развитие воздушного мицелия гриба Mortierella alpina ГР-1 может служить присутствие в его составе в качестве основных органических компонентов солей жирных кислот.
В настоящей работе исследовано влияние олеата натрия на развитие воздушного мицелия Mortierella alpina ГР-1 и накопление в нем липидов, содержащих арахидоновую кислоту, при поверхностном культивировании гриба на овсяной среде, а также осуществлен поиск веществ, снижающих его ингибирующее действие.
В качестве потенциальных стимулирующих добавок использовали глицерин — компонент соапстока и сульфат цинка. Глицерин может служить альтернативным источником углерода и энергии, а ионы цинка, являясь кофакторами многих дегидрогеназ, окисляющих различные соединения 20, возможно, будут ускорять утилизацию олеата натрия. Можно также ожидать, что превращение глицерина в интермедиаты трансгидрогеназного (пиру-ват-оксалоацетат-малатного) цикла, функцией которого является генерирование восстановителя — восстановленного никотинамидаденин-динуклеотида (NADPH) 21, необходимого для функционирования десатураз 22, будет стиму-
лировать процессы конверсии олеиновой кислоты в полиненасыщенные жирные кислоты. Кроме того, глицерин, превращаясь в 3-фос-фоглицерин и далее в лизофосфатидную кислоту 23, будет увеличивать пул этих акцепторов ацильных групп и, тем самым, будет способствовать включению жирных кислот в состав липидов.
Олеат натрия, глицерин и сульфат цинка вносили в среды в концентрациях 0.5—2 %, 2— 8 % и 0.03—0.4 %, соответственно. В качестве контроля использовали овсяную среду без добавок. Среды инокулировали грибным мицелием в трех точках на поверхности каждой чашки Петри (диаметр 10 см) и выращивали грибы в течение 20 сут при 25±2 оС.
При исследовании влияния концентрации олеата натрия на рост гриба на овсяной среде без добавок глицерина и сульфата цинка обнаружено, что в концентрации 0.5% наблюдается небольшое стимулирование развития воздушного мицелия (рис. 1). Однако, при превышении этой концентрации проявляется ин-гибирующее действие испытуемого соединения на образование воздушного мицелия. При концентрации олеата натрия в среде, равной 1%, выход биомассы (в расчете на одну чашку Петри) был в 1.6 раза ниже, чем в контроле, а в присутствии 2% соли олеиновой кислоты воздушный мицелий практически не образуется.
Олеат натрия, %
Рис. 1. Влияние олеата натрия на развитие воздушного мицелия при культивировании гриба Mortierella alpinаTР-1 на овсяной среде в течение 20 сут при 25±2 оС
Обнаружено, что при внесении в среду наряду с 2% олеата натрия дополнительных добавок (глицерина и сульфата цинка) его негативное действие на развитие воздушного мицелия снижается. В частности, внесение в среду 2% глицерина и 0.2% сульфата цинка способ-
Рис. 2. Фотографии двадиртисуточньж культур гриба, полученных на овсяной среде с различными добавками
ствует развитию обильного воздушного мицелия, несмотря на присутствие в ней 2% олеата натрия (рис. 2).
Внесение глицерина в концентрации 2—6 % в среду, содержащую 2% олеата натрия и 0.2% сульфата цинка, увеличивает выход биомассы (в расчете на одну чашку Петри) до уровня, сопоставимого с контрольным вариантом (среда без добавок). Дальнейшее увеличение концентрации глицерина до 8% в среде приводит к подавлению развития воздушного мицелия (рис. 3). В то же время, в отсутствие глицерина воздушный мицелий на среде с 0.2% сульфата цинка и 2% олеата натрия практически не развивается.
0,4
0,3-
£
(3 S 0,2-
s¡
и
0,1-
á
_
_
,-,-г
0 2 4 6
Глицерин, %
_
■ среда с 2% олеата натрия и 0.2% сульфата цинка □ среда без добавок (контроль)
-г-
8
казало, что определенный уровень ионов цинка в среде является существенным для формирования воздушного мицелия в этих условиях. В отсутствие олеата натрия в среде увеличение концентрации сульфата цинка с 0.03% до 0.4 % подавляет развитие воздушного мицелия. Напротив, в присутствии олеата натрия в среде сульфат цинка в области концентраций 0.03 — 0.4% стимулирует формирование воздушного мицелия (рис. 4).
0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0
к W
□ глицерин - 6%
I глицерин - 6%, олеат натрия - 2%
0,03
0,2
0,4
Рис. 3. Влияние глицерина на развитие воздушного мицелия при культивировании гриба Мог^вгвИа а1ртаГР-1 на овсяной среде, содержащей2% олеата натрия и 0.2% сульфата цинка, в течение20 сут при 25±2 оС
Полученные результаты показывают, что глицерин является существенным фактором, обеспечивающим развитие обильного воздушного мицелия при культивировании гриба на среде, содержащей олеат натрия в ингибирую-щей концентрации, тогда как сульфат цинка не оказывает какого-либо влияния на этот процесс.
Однако, исследование роста гриба при различных концентрациях сульфата цинка на овсяных средах, содержащих 6% глицерина, и средах с 6% глицерина и 2% олеата натрия по-
Сульфат цинка, %
Рис. 4. Влияние концентрации сульфата цинка на въжод биомассы воздушного мицелия при культивировании гриба на овсяной среде с 6% глицерина в присутствии и в отсутствие2% олеата натрия в течение 20 сут при 25±2 оС
В исследованной области концентраций сульфата цинка наибольший выход биомассы воздушного мицелия достигается при культивировании гриба на среде без олеата натрия при концентрации сульфата цинка 0.03%. В этих условиях выход биомассы в 1.4 раза превышает ее выход, полученный в лучшем варианте при использовании сред, содержащих 2% олеата натрия (рис. 4).
Стимулирование глицерином развития воздушного мицелия при культивировании гриба Mortierella alpina ГР-1 на овсяной среде, содержащей 2% олеата натрия и 0.2% сульфата цинка (рис. 3), сопровождается увеличением содержания липидов в биомассе с 21 до 44 %
0
при возрастании его концентрации от 2 до 6 % (табл. 1). В отсутствие олеата натрия в среде, содержащей 6% глицерина и 0.2 сульфата цинка, содержание липидов в воздушном мицелии достигает только 32%. В условиях наиболее активного развития мицелия (на среде без олеата натрия, содержащей 6% глицерина и 0.03% сульфата цинка) содержание липидов также было ниже (39%). Это указывает на то, что в присутствии олеата натрия интенсифицируется накопление липидов в воздушном мицелии (табл. 1).
Следует отметить, что в отсутствие добавок в овсяную среду в воздушном мицелии накапливается не более 19% (от асв) липидов (табл. 1).
При исследовании жирно-кислотного состава липидов, накопленных в воздушном мицелии на средах, содержащих 6% глицерина и 0.2% сульфата цинка, установлено, что содержание арахидоновой кислоты в присутствии 2% олеата натрия выше (64% от суммы жирных кислот), чем в его отсутствие (48% от суммы жирных кислот) и сопоставимо с уровнем этой кислоты в липидах, полученных при культивировании гриба на среде с 6% глицерина и 0.03% сульфата цинка, обеспечивающей наиболее активное формирование воздушного мицелия (табл. 2). Увеличение концентрации сульфата цинка с 0.2% до 0.4% в среде с 2% олеата натрия и 6% глицерина вызывает сни-
жения содержания арахидоновой кислоты в липидах с 64 до 55 %.
Таким образом, внесение глицерина (2— 6%) и сульфата цинка (0.2—0.4%) в овсяную среду, содержащую олеат натрия в ингибиру-ющих концентрациях, восстанавливает способность гриба Mortierella alpina ГР-1 образовывать воздушный мицелий. В присутствии 2% олеата натрия в среде воздушный мицелий наиболее активно развивается при 6% глицерина и 0.2% сульфата цинка. Выход биомассы воздушного мицелия, образующегося в этих условиях, сопоставим с контрольным вариантом, полученным на овсяной среде без добавок. В то же время содержание липидов в таком мицелии (44% от асб—абсолютно сухая биомасса) в 2.2 раза превышает контрольное значение. При этом содержание арахидоновой кислоты остается высоким — 64% (от суммы жирных кислот).
Полученные данные подтверждают предположение о том, что при культивировании грибов Mortierella alpina на средах с соапсто-ком, натриевые мыла, входящие в его состав, подавляют развитие воздушного мицелия. Можно полагать, что ингибирующее действие мыл в некоторой степени можно компенсировать оптимизацией содержания глицерина в соапстоке и внесением в него сульфата цинка в оптимальной концентрации.
Таблица 1
Содержание липидов, накапливаемых в воздушном мицелии при культивировании гриба Mortierella alpina ГР-1 в течение 20 сут 25±2 оС на овсяных средах, содержащих различные концентрации олеата натрия, сульфата цинка и глицерина
Олеат натрия, % Глицерин, % Сульфат цинка, % Липиды, % (от асб)
0 0 0 19
0 6 0.03 39
0.2 32
2 21
2 4 0.2 28
6 44
Таблица 2
Жирно-кислотный состав липидов, накапливаемых в воздушном мицелии при культивировании гриба Mortierella alpina ГР-1 в течение 20 сут при 25±2 оС на различных средах
Гли- Олеат Сульфат Жирные кислоты*, % (от суммы)
церин, % натрия, % цинка, % С16:0 С18:0 С18:1 С18:2 С18:3 С20:3 С20:4 С20:5
0 0.03 10 4 9 3 4 1 67 0.4
6 0.2 12 1.5 28 5 2.8 0.8 48 0.5
2 0.2 8 4.5 10 3.6 3.8 2 64 0.8
0.4 10 3 15 4 5 1.5 55 6
* С16:0 — пальмитиновая, С18:0 — стеариновая, С18:1 — олеиновая; С18:2 — линолевая; С18:3 — у-лино-леновая; С20:3 — дигомо-у-линоленовая; С20:4 — арахидоновая; С20:5 — эйкозапентаеновая
Экспериментальная часть
Выращивание грибов проводили в чашках Петри диаметром 10 см методом поверхностного культивирования на овсяной среде (овсяная крупа - 90 г/л) с добавками: 2-8 % глицерина, 0.03-0.4 % ZnSO4-7H2O, 0.5-2 % олеата натрия. В качестве контроля использовали овсяную среду без добавок. Питательные среды стерилизовали в автоклаве в течение 30 мин при температуре 120 °C. В качестве инокулята использовали десятисуточный воздушный мицелий гриба, полученный на овсяной среде. Культивирование осуществляли при температуре 25 ^ в течение 20 сут. Все эксперименты выполняли в трех повторностях.
Биомассу воздушного мицелия собирали и высушивали в сушильном шкафу до постоянного веса при температуре б5 Липиды экстрагировали из сухого мицелия трехкратной обработкой гексаном. Экстракты объединяли, удаляли мелкие частицы биомассы центрифугированием и высушивали. Количество собранной сухой биомассы и выделенных липи-дов оценивали гравиметрически.
Литература
1. Javers J., Gibbons W. R., Karunanithy Ch. // Advances in Microbiology.- 2012.- V.2.- P. 241.
2. Bednarski W., Adamczak M., Tomasik J., Plaszczyk M. // Bioresour. Technol.— 2004.— V.95.— P.15.
3. Benincasa M., Abalos A., Oliveira I., Manresa A. // Anton. Leeuw. Int. J.G.- 2004.- V.85.- P.1.
4. Shabtai Y. // Int. J. Biol. Macromol.- 1990.-V.12.— P.145.
5. Abdelmoez W., Mostafa N. A., Mustafa A. // J. Cleaner Production.- 2013.- V.59.- P.290.
6. Петухова H. И., Ландер О. В. Pахматулли-на Ю. P. Зорин В. В. // Баш. хим. ж.- 2013.-Т.20, №1.- C.94.
7. Петухова H. И., Pахматуллина Ю. P., Яху-това Я. P., ^ирихин Л. В., Зорин В. В. // Баш. хим. ж.- 200б.— Т.13, №1.- C.95.
8. Петухова H. И., Митягина А. В., Зорин В. В. // Баш. хим. ж.- 2010.- Т.17, №5.- C.50.
9. Петухова H. И., Pахматуллина Ю. P., Пантелеева C. H., Зорин В. В. // Баш. хим. ж.—
2007.- Т.14, №1.- C.141.
10. Hou C. T. // J. Ind. Microbiol. Biotechnol.-
2008.- V.35.— P.501.
11. Ceron Garcэa M. C., Fernandez Sevilla J. M., Acien Fernandez F. G., Molina Grima E., Garcэa Camacho F. // J. Appl. Phycol.- 2000.- V.12.-P.239.
12. Chi Z., Pyle D., Wen Z., Frear C., Chen S. // Process Biochemistry.- 2007.- V.42.- P.1537.
13. Athalye S. K., Garcia R. A., Wen Z. // J. Agric. Food Chem.- 2009.- V.57.- P.2739.
Для определения жирнокислотного состава грибных липидов получали метиловые эфи-ры жирных кислот, как описано в работе 24. Идентификацию метиловых эфиров ЖК проводили на хроматомасс-спектрометре НР-5896 с масс-селективным детектором НР-5972А, стеклянной капиллярной колонкой длиной 50 м, 5% фенилметилсиликона на НР-5, температура ионного источника 120 оС, ускоряющее напряжение 3 кВ, энергия ионизации 70 еВ. Режим изменения температуры колонки программировали со скоростью 10 град/мин от 50 до 250 оС. Количественный анализ состава полученных препаратов метиловых эфиров жирных кислот осуществляли на хроматографе Хроматэк Кристалл с пламенно-ионизационным детектором на капиллярной колонке 60т х 0.32тт ГО Solgel-Wax х 0.5мт. Режим анализа: температура термостата колонки — 250 оС, температура детектора — 320 оС, температура испарителя — 320 оС, скорость газа-носителя (азот) — 27.5 мл/мин.
References
1. Javers J., Gibbons W.R., Karunanithy Ch. [Polyhydroxyalkanoate production by Pseudomonas putida KT217 on a condensed corn solubles based medium fed with glycerol water or sunflower soapstock]. [Advances in Microbiology], 2012, v. 2, pp. 241-251.
2. Bednarski W., Adamczak M., Tomasik J., Plaszczyk M. [Application of oil re?nery waste in the biosynthesis of glycolipids by yeast]. [Bioresour. Technol.], 2004, v. 95, pp. 15-18.
3. Benincasa M., Abalos A., Oliveira I., Manresa A. [Chemical structure, surface properties and biological activities of the biosurfactant produced by Pseudomonas aeruginosa LBI from soapstock]. [Anton. Leeuw. Int. J.G.], 2004, v. 85, pp. 1-8.
4. Shabtai Y. [Production of exopolysaccharides by Acinetobacter strains in a controlled fed-batch fermentation process using soap stock oil (SSO) as carbon source]. [Int. J. Biol. Macromol.], 1990, v. 12, pp. 145-152.
5. Abdelmoez W., Mostafa N.A., Mustafa A. [Utilization of oleochemical industry residues as substrates for lipase production for enzymatic sunflower oil hydrolysis]. [J. Cleaner Production], 2013, v. 59, pp. 290-297.
6. Petukhova N.I., Lander O.V., Rahmatullina Yu. R., Zorin V.V. Dinamika zhirnokislotnogo sosta-va lipidov griba Mortierella alpina 18-1 — pro-dutsenta arakhidonovoi kisloty i ego glicerinus-toichivogo mutanta pri kul'tivirovanii na srede s glitserinom [Fatty acids composition dynamics of lipids of fungus Mortierella alpina 18-1 — arachidonic acid producer and its glycerol-resistant mutant under glycerol-containing
14. Кудрявцева Л. П., Кудрявцев Н. А. // Научно-практический журнал «Агро XXI».— 2009.— №4-6.- С.6.
15. Озерецковская О. Л., Васюкова Н. И., Чален-ко Г. И., Герасимова Н. Г., Ревина Т. А., Валуева Т. А. // Докл. АН.- 2008.- Т.423, №1.-С.129.
16. Озерецковская О. Л., Васюкова Н. И., Чален-ко Г. И., Герасимова Н. Г., Ревина Т. А., Валуева Т. А. // Прикладная биохимия и микробиология.- 2009.- Т.45, №2.- С.220.
17. Кульнев А. И., Соколова Е. А. Многоцелевые стимуляторы защитных реакций роста и развития растений (на примере препарата иммуно-цитофит).- Пущино: ОНТИ ПНЦ РАН, 1997.-С.100.
18. Петухова Н. И., Ландер О. В., Щербакова Д. В., Зорин В. В. // Баш. хим. ж.- 2013.- Т.20, №1.- C.75.
19. Шараева А. А., Петухова Н. И., Щербакова Д. В., Зорин В. В. // Баш. хим. ж.- 2014.- Т.21, №1.- С.49.
20. Zhao X.Q., Bai F. // J. Biotechnol.- 2012.-V.158.- P.176.
21. Ratledge C. // Biotechnol. Letters.- 2014.-V.36.- P.1557.
22. Kendrick A., Ratledge, C. // Eur. J. Biochem.-1992.- V.209.- P.667.
23. Ji X. J., Ren L. J., Nie Z. K., Huang H., Ouy-ang P. K. // Crit. Rev. Biotechnol.- 2013. P.1 (doi:10.3109/07388551.2013.778229).
24. А.с. 968072. СССР / Султанович Ю. А., Нечаев А. П., Барсукова И. А. //Б.И.- 1982.-№39.
medium cultivation]. Bashkirskii khimicheskii zhurnal [Bashkir chemistry journal ], 2013, v. 20, no. 1, pp. 94-98.
7. Petukhova N.I., Rakhmatullina Yu.R., Yakhu-tova Ya.R., Spirikhin L.V., Zorin V.V. Issledo-vanie korrelyatsii TTH-reduktaznoi aktivnosti s soderzhaniem arakhidonovoi kisloty v lipidkh griba Mortierella alpina 18-1 [Correlation studies of TTH-reductase activity with arachido-nic acid content in Mortierella alpina 18-1 fungi lipids]. Bashkirskii khimicheskii zhurnal [Bashkir chemistry journal ], 2006, v. 13, no. 1, pp. 95-97.
8. Petukhova N.I., Mityagina A.V., Zorin V.V. Sintez polinenasyshhennykh zhirnykh kislot glicerinus-toichivym mutantom Mortierella alpina GR-1 [Synthesis of polyunsaturated fatty acids by glycerol-resistant mutant Mortierella alpina GR 1]. Bashkirskii khimicheskii zhurnal [Bashkir chemistry journal], 2010, v. 17, no. 5, pp. 50-52.
9. Petukhova N.I., Rakhmatullina Yu.R., Pante-leeva S.N., Zorin V.V. Issledovanie sinteza polinenasyshhennykh zhirnykh kislot galorezis-tentnym gribom Mortierella alpina HN1 [Investigation of synthesis of polyunsaturated fatty acids with galo-resistant fungus Mortierella alpina HN1]. Bashkirskii khimicheskii zhurnal [Bashkir chemistry journal ], 2007, v. 14, no. 1, pp. 141-144.
10. Hou C.T. [Production of arachidonic acid and dihomo-y-linolenic acid from glycerol by oil-producing Wlamentous fungi, Mortierella in the ARS culture collection]. [J. Ind. Microbiol. Biotechnol.], 2008, v. 35, pp. 501-506.
11. Ceron Garcia M.C., Fernandez Sevilla J.M., Acien Fernandez F.G., Molina Grima E., Garcia Camacho F. [Mixotrophic growth of Phaeodactylum tricornutum on glycerol: growth rate and fatty acid profile]. [J. Appl. Phycol.] 2000, v. 12, pp. 239-248.
12. Chi Z., Pyle D., Wen Z., Frear C., Chen S. [A laboratory study of producing docosahexaenoic acid from biodiesel-waste glycerol by microalgal fermentation]. [Process Biochemistry], 2007, v. 42, pp. 1537-1545.
13. Athalye S.K., Garcia R.A., Wen Z. [Use of biodiesel-derived crude glycerol for producing eicosapentaenoic acid (EPA) by the fungus Pythium irregular]. [J. Agric. Food Chem.], 2009, v. 57, pp. 2739-2744.
14. Kudryavtseva L.P., Kudryavtsev N.A. Ispol'zovanie biopreparatov v sisteme zashchity l'na-dolguntsa [The use of biologics in the protection of fiber flax]. Nauchno-prakticheskiy zhurnal «Agro XXI» [Scientific and practical journal «Agro XXI»], 2009, no. 4-6, pp. 6-7.
15. Ozeretskovskaya O.L., Vasyukova N.I., Chalen-ko G.I., Gerasimova N.G., Revina T.A., Valueva T.A. Indutsirovanie elisitorami protsessa ranevoi reparatsii klubnei kartofelya [Induction elicitors wound repair of potato tubers]. Doklady akademii nauk [Reports of the Academy of Sciences], 2008, v. 423, no. 1, pp.129-132.
16. Ozeretskovskaya O.L., Vasyukova N.I., Chalen-ko G.I., Gerasimova N.G., Revina T.A., Valueva T.A. Protsess ranevoi reparatsii i indutsi-rovannaya ustoichivost' klubnei kartofelya
[Wound repair and induced resistance of potato tubers]. Prikladnaya Biokhimiya i Mikrobio-logiya [Applied Biochemistry and Microbiology], 2009, v.45, no. 2, pp. 220-224.
17. Kul'nev A.I., Sokolova E.A. Mnogotselevye stimulyatory zashchitnykh reaktsii rosta i razvitiya rastenii (na primere preparata immu-notsitofit) [Multipurpose stimulants protective reactions of the growth and development of plants (for example, drug immunotsitofit)]. Pushchino: USTP PSC RAS Publ., 1997, 100 p.
18. Petukhova N.I., Lander O.V., Shcherbakova D.V., Zorin V.V. Stimulirovanie rosta i antistressovoi ustoichivosti rastenii s pomoshch'yu proizvodnykh polinenasyshchennykh lipidov griba Mortierella alpina GR-1 [Stimulation of plants growth and antiistress resistance by polyunsaturated lipids derivatives of fungus Mortierella alpina GR-1]. Bashkirskii khimicheskii zhurnal [Bashkir chemistry journal ], 2013, v. 20, no. 1, pp. 75-78.
19. Sharaeva A.A., Petukhova N.I., Shcherbakova D.V., Zorin V.V. Vliyanie soapstoka na rost i sintez arahidonovoi kisloty griba Mortierella alpina GR-1 [Influence of soapstock on fungus Mortierella alpina GR-1 growth and arachidonic acid synthesis]. Bashkirskii khimicheskii zhurnal [Bashkir chemistry journal ], 2014, v. 21, no. 1, pp. 49-53.
20. Zhao X.Q., Bai F. [Zinc and yeast stress tolerance: Micronutrient plays a big role]. [J. Biotechnol.], 2012, no. 158, pp. 176-183.
21. Ratledge C. [The role of malic enzyme as the provider of NADP in oleaginous microorganisms: a reappraisal and unsolved problems]. [Biotechnol. Letters], 2014, v. 36, pp. 1557-1569.
22. Kendrick A., Ratledge, C. [Desaturation of polyunsaturated fatty acids in Mucor circinelloides and the involvement of a novel membrane-bound malic enzyme]. [Eur. J. Biochem.], 1992, v. 209, pp. 667-673.
23. Ji X.J., Ren L.J., Nie Z.K., Huang H., Ouyang P.K. [Fungal arachidonic acid-rich oil: research, development and industrialization]. [Crit. Rev. Biotechnol.] 2013, pp. 1-18. doi:10.3109/ 07388551.2013.778229
24. Sultanovich Yu.A., Nechaev A.P., Barsukova I.A. Sposob kolichestvennogo opredeleniya zhirnookislotnogo sostava lipidov mikroorga-nizmov [A method of quantitative determination of fatty acid lipid composition of microorganisms]. Patent USSR, no. 968072, 1982.
Работа выполнена при финансовой поддержке Минобрнауки России в рамках базовой части гос. задания
