CC BY
27
ВЛИЯНИЕ НОРМОТРОФИНА НА СКОРОСТЬ ЗАЖИВЛЕНИЯ РАН ПРИ ОЖОГОВОЙ ТРАВМЕ КОЖИ
Медетханов Фазил Акберович
канд. вет. наук, доцент ФГБОУ ВПО «КГАВМимени Н.Э. Баумана», РФ,
г. Казань E-mail: _ ffazilak2@mail. ru Галимзянов Ильсур Габдулхакович
канд. вет. наук, доцент ФГБОУ ВПО «КГАВМ имени Н.Э. Баумана», РФ,
г. Казань E-mail: ilsour@rambler. ru
INFLUENCE OF "NORMOTROFIN" ON THE SPEED OF WOUND HEALING IN CASE OF BURN INJURY OF SKIN
Fazil Medetkhanov
сandidate of Veterinary Science, associate professor of FSBEIHVE Bauman Kazan
State Academy of Veterinary Medicine, Russia, Kazan
Ilsur Galimzyanov
сandidate of Veterinary Science, associate professor of FSBEI HVE Bauman Kazan
State Academy of Veterinary Medicine, Russia, Kazan
АННОТАЦИЯ
В статье представлены результаты по изучению ранозаживляющего действия фитобиотика Нормотрофин при экспериментальной ожоговой травме кожи. В опытах использованы белые крысы с искусственной термической травмой кожи III-Б степени. Исследованиями установлено, что использование Нормотрофина в терапии ожоговых ран способствует активации репаративных процессов, укорачивает сроки выздоровления, предохраняет организм от глубоких расстройств в системе гомеостаза.
ABSTRACT
In the article there are presented research results of wound healing effect of phytobiotic "Normotrofin" in case of experimental burn injury of skin. White rats with artificial III-B thermal injury of skin have been used. It has been found that use of "Normotrofin" in burn wound treatment promotes activation of reparative processes, shortens recovery and protects organism from profound disturbances in the system of homeostasis.
Ключевые слова: крысы; ожоговая рана; Нормотрофин; местное лечение.
Keywords: rats; burn wound; "Normotrofin"; local treatment.
Термические поражения животных представляют собой одну из сложных проблем современной ветеринарной медицины.
Благодаря фундаментальным исследованиям, проведенным по изучению основных механизмов развития ожоговой травмы и ожоговой болезни, в последние годы разработаны весьма эффективные методы воздействия на отдельные патогенетические звенья комплексных нарушений жизнедеятельности организма у обожженных животных [1].
Однако, несмотря на значительные достижения в этой области, одним из основных и сложных направлений в развитии современной комбустиологии является поиск эффективных средств и способов местного лечения ожогов.
Учитывая это, нами был разработан комплексный фитопрепарат Нормотрофин обладающий широким спектром действия, основанием к применению которого является инструкция, согласованная с Начальником Главного управления ветеринарии КМ РТ от 17.03.2011 г.
Цель исследования. Установить степень ранозаживляющего действия фитобиотика Нормотрофин при экспериментальной ожоговой травме кожи у лабораторных животных.
Материалы и методы. Лечебное действие препарата изучали на самках лабораторных белых крыс с исходной массой от 160 до 175 г. Под наблюдением находились 10 клинически здоровых животных, распределенных с соблюдением принципа аналогов на 2 группы по 5 крыс в каждой. Все они находились в равноценных условиях кормления и содержания.
За сутки до эксперимента кожу в области спины освобождали от волосяного покрова с помощью ножниц. Поверхность кожи освобожденного от волосяного покрова составила 36 см (6х6 см). Предварительно животным выполняли общий тиопентал-натриевый наркоз (70 мг/кг массы тела). Моделирование ожоговой раны III-Б степени проводили контактным способом
с использованием электрического дискового теплоносителя по А. С. Аладышкину [2], с диаметром металлической пластинки 5 см.
Исходная площадь ожоговой травмы у каждого животного в среднем составила 9,0 % от площади поверхности тела. Все манипуляции у животных выполнялись с соблюдением правил гуманного отношения к ним, изложенных в директивах Европейского общества (86/609/ЕЕС) и Хельсинкской декларации [3].
С целью определения скорости естественного заживления ожоговых ран, животным первой группы (контроль) лечение не применяли и раны у них заживали самостоятельно. Животным второй группы, спустя 1,5 часа с момента воспроизведения термической травмы кожи, под некротический пласт инъецировали Нормотрофин. Препарат вводили в дозе 1,0 мл из нескольких точек на расстоянии 0,5—1 см от краев раны. Всего осуществили пять инъекций (1 раз в сутки, через каждые 48 часов). Перед постановкой опыта и в ходе эксперимента животных взвешивали, брали кровь для подсчёта количества эритроцитов, лейкоцитов и выведения лейкоцитарной формулы. Расчет лейкоцитарной формулы производили общепринятым методом с окраской мазков по Романовскому-Гимзе. Забор крови осуществляли из боковой вены хвоста на 9, 14, 21, 28, 35, 42, 49 и 60-е сутки после ожога.
Площадь ожога измеряли планиметрическим способом. Для расчета поверхности тела у крыс использовали формулу 8=Кх^)60, где 8-поверхность тела в квадратных сантиметрах, К — коэффициент равный 12,54, Ш — масса тела животного в граммах [4]. Для оценки регенеративной активности использовали абсолютные и относительные показатели. Степень заживления сравнивали с исходными значениями по группам и по отношению к контролю, при которой абсолютная площадь ожога выражалась в квадратных сантиметрах, а степень заживления вычислялась в процентах как изменение площади по отношению к исходной по группе.
Цифровой материал обрабатывали методом вариационной статистики с определением средних арифметических (М), их стандартных отклонений (м) и критерия достоверности по Стьюденту (Р).
Результаты исследований. Результатами проведенных исследований установлено, что тяжёлая ожоговая травма способствовала некрозу всех слоёв травмированного участка кожи с вовлечением в процесс подлежащих тканей, в результате чего происходило формирование ожога 111-Б степени.
В течение первых суток после ожоговой травмы у всех крыс отмечали нарушение координации движения, вялость. На вторые сутки животные контрольной группы оставались вялыми, становились адинамичными, отказывались принимать корм. На месте травмы наблюдали выраженный коагуляционный некроз с образованием рыхлого, неравномерного по толщине струпа. К концу вторых суток у крыс контрольной группы отмечали отёчность травмированного участка кожи с наличием краевой гиперемии. У 40 % животных на этот период в очаге некроза наблюдали трещины, из которых выделялся серозный экссудат с примесью крови.
На 3—4-е сутки после травмы струп становился более плотным и несколько возвышался по отношению к здоровым участкам кожи. При измерении площади ожога планиметрическим способом установлено, что на 9-е сутки после ожога площадь травмированного участка составила 5,99 % по отношению ко всей поверхности тела животного (табл.1). В эти сроки у 60 % животных данной группы на месте травмы наблюдали выраженный воспалительный процесс, сопровождавшийся скоплением под некротическим пластом гнойного экссудата.
Таблица 1.
Скорость заживления ран в динамике_
Сроки исследования, сутки Площадь травмы, %
Контрольная группа Опытная группа
В начале опыта 9,21±0,04 9,20±0,07
9 * 5,99±0,25 7,00±0,21
14 4,89±0,39 5,13±0,55
21 3,47±0,42 2,04±0,51
28 1,59±0,23 * 0,70±0,13
35 1,00±0,11 0,42±0,22
42 0,69±0,07 * 0.21±0,04
49 0,42±0,18 -
60 0,21±0,04 -
Примечание: * — уровень достоверности различия Р<0,05
Дальнейшими наблюдениями за процессами репарации в динамике установлено, что отношение площади травмы к общей площади поверхности тела на 14-е сутки составило 4,89 %, на 21-е — 3,47 %, на 28-е — 1,59 %, на 35-е — 1,00 %, на 42-е — 0,69 %, на 49-е — 0,42 % и на 60-е сутки — 0,23 %. Полного заживления травмированного участка кожи у животных контрольной группы не происходило, и на месте травмы развивались трофические язвы (рис. 1).
В отличие от крыс контрольной группы, у животных опытной группы, получивших местное лечение в виде инъекций вокруг травмированного участка препаратом Нормотрофин, отмечали более быстрое восстановление поведенческой активности. На вторые сутки крысы были активными, что выражалось в повышении груминга, охотном приеме воды и корма, а также выраженной ответной реакции на хлопок в ладоши.
Отличительной особенностью раневого процесса у животных второй группы являлось наличие незначительного отёка на месте травмы, отсутствие гиперемии по периметру и сухость некротического пласта. Однако, несмотря на это, скорость заживления травмы в течение первых 14-ти суток была менее выражена, чем у животных контрольной группы. На 9-е сутки площадь травмы составила 7,0 % от общей площади поверхности тела, тогда как в контрольной группе она была — 5,99 %, а на 14 день — 5,13 % против 4,89 %. Заживление ожоговых ран у животных опытной группы шло под струпом, по периферии которого отмечался рост эпителиального ободка шириной 0,5 см.
Начиная с 21-х суток у животных опытной группы наблюдали увеличение скорости заживления раневого процесса по сравнению с контрольными животными. В эти сроки площадь травмы у них составила 2,04 %, тогда как в контрольной группе этот показатель составил 3,47 %. В последующие сроки также отмечалось прогрессирующее заживление участка травмы у крыс опытной группы. Полное заживление травмированного участка кожи в среднем по опытной группе наступало на 44—45-е сутки, что на 17—18 суток раньше по сравнению с животными контрольной группы (табл. 2). Заживление травмированного участка кожи сопровождалось формированием рубца (рис. 1).
Таблица 2.
Сроки заживления ожоговых ран при лечении Нормотрофином
Группа Период полного заживления, сутки Разница сроков заживления к контролю, сутки Скорость заживления в сутки, %
Контрольная 62,67±6,42 1,62±0,17
Опытная 44,60±4,26 - 18 2,46±0,21
Результатами гематологических исследований установлено, что у животных обеих групп, до включения их в эксперимент, количественное соотношение эритроцитов и лейкоцитов было одинаковым (табл. 3). Однако уже на 3 сутки с момента травмы кожи у крыс контрольной группы достоверно снизилось общее количество эритроцитов и увеличилось число лейкоцитов. На 9—14-е сутки различия по содержанию эритроцитов и лейкоцитов между группами были сохранены.
К 21-м суткам отмечали некоторую перестройку организма животных опытной группы, которая сопровождалась снижением количества эритроцитов, по сравнению с контрольными аналогами. Между тем, количество лейкоцитов в крови у животных контрольной группы сохранялось на более высоком уровне.
Таблица 3.
Показатели крови крыс в динамике при ожоговой травме кожи
Группа Показатель__Срок исследования, сутки
Фон 3 9 14 21 35 42 60
Контрольная Эритроцит ы, х1012л 5,86 ±0,3 6 5,21 ±0,61 5,52 ±0,1 3 5,18 ±0, 4 5,26 ±0,1 5,25 ±0,3 5,02 ±0,2 3 5,62 ±0,3
Лейкоциты, х109л 11,47 ±0,4 6 15,77 ±0,13 15,33 ±0,7 7 15,0 ±0, 2 16,23 ±0,1 4 16,6 ±0,9 17,37 ±0,1 5 13,8 ±0,4 2
Опытная Эритроцит ы, х1012л 6,02 ±0,1 4 5,77 ±0,16 5,60 ±0,7 2 5,57 ±0, 7 5,07 ±0,3 4 5,52 ±0,1 6,69 * ±0,4 6,44 ±0,2 5
Лейкоциты, х109л 11,17 ±0,6 12,37 „ „ ** ±0,8 14,47 ±0,7 1 13,0 ±0, 2 12,97 ±0,5 12,6 ±0,1 12,34 ±0,3 6 11,43 ±0,5
Примечание: *, ** — уровни достоверности различия, соответственно Р<0,05; Р<0,01.
На 42 сутки эксперимента у крыс опытной группы, происходила стабилизация изучаемых показателей и восстановление их до уровня фоновых, что находились в соответствии с завершением сроков эпителизации и выздоровлением животных.
Восстановление показателей крови контрольных животных до уровня нормы носило несколько запоздалый характер. Их нивелировка с фоновыми значениями совпала со сроками заживления травмированного участка.
При сопоставлении лейкоцитарной формулы с процессами регенерации травмированных тканей установлено, что в фазу экссудации происходит активация клеток гранулоцитарного ряда (табл. 4). Уже на третьи сутки после травмы в крови у животных обеих групп увеличивалось количество эозинофилов, причем эозинофилия в начальный посттравматический период была более выраженной в опытной группе, чем в контрольной. С 9 по 14-е сутки происходила нивелировка между группами по изучаемому показателю. Начиная с 21-х суток и до конца эксперимента в лейкоформуле отмечалась некоторая перестройка, что сопровождалось увеличением числа эозинофилов в крови у крыс контрольной группы, тогда как у особей опытной группы количество эозинофилов было достоверно ниже контрольных значений в 1,5—3 раза. Кроме того, альтерация тканей, вызванная ожоговой травмой, приводила к
изменениям и со стороны клеток нейтрофильного ряда, а именно, начиная с 14 суток после травмы в периферической крови стали появляться юные нейтрофилы и значительно возросло количество палочкоядерных. Наблюдаемая нейтрофилия со сдвигом ядра влево была наиболее выражена у животных контрольной группы.
Сегментоядерные нейтрофилы также подвергались изменениям, уровень которых был ниже исходных значений в течение первых двух недель в контрольной и опытной группах на 19 и 28 % соответственно.
Начиная с 21-х суток количество сегментоядерных нейтрофилов в контрольной группе снизилось по отношению к исходным величинам на 60,1 %, тогда как у животных, подвергавшихся лечению, их количество несколько повысилось и содержание их было ниже исходных величин на 25,6 %. Установившаяся разница в содержании зрелых нейтрофилов между группами сохранялась до 42-х суток. Полное восстановление изучаемого показателя до уровня исходных величин в опытной группе отмечалось на 60-е сутки после травмы, а у контрольных животных их количество продолжало оставаться на низком уровне и отставало от фоновых значений по группе на 22,5 %.
В отношении процентного распределения лимфоцитов в мазках крови было установлено, что у крыс опытной группы происходило уменьшение их содержания относительно фоновых значений. Так, на третьи сутки после травмы, количество лимфоцитов у них было ниже исходных величин на 17,0 %, тогда как у особей контрольной группы данный показатель не изменялся. Последующие инъекции Нормотрофина под некротический пласт животным опытной группы, приводило к постепенному увеличению у них числа лимфоцитов. В частности, на 14-е сутки их содержание у опытных животных было выше, чем в контрольной на 7,4 % (р<0,01). У животных контрольной группы данный показатель значительно уменьшился и был ниже исходных величин на 16,7 %. Относительное восстановление числа лимфоцитов до фоновых значений у леченных животных было отмечено к 28-м суткам. В
контрольной группе количество лимфоцитов продолжало оставаться на более низком уровне и к концу периода эксперимента не восстанавливалось до исходных величин.
Повреждение покровных тканей с формированием очага воспаления способствовало активации и клеток-макрофагов, что особенно было выражено у животных опытной группы в фазу острого воспаления. Так, на третьи сутки после травмы содержание числа моноцитов в крови у крыс опытной группы было выше, чем у контрольных животных на 77,7 % при р<0,01. Подобное соотношение между моноцитами животных опытной и контрольной групп сохранялось в лейкоцитарной формуле в течение первых двух недель. На 21-е сутки травмы, наоборот, отмечали резкое увеличение моноцитов у животных контрольной группы, что было выше на 13,5 % по сравнению с опытной группой. В конце экспериментального периода количество моноцитов крови у животных опытной группы восстановилось до фоновых значений. У крыс контрольной группы их содержание было ниже исходных показателей на 33,3 %, что, на наш взгляд, связано с формированием трофических язв у животных данной группы.
Рисунок 1. Крысы контрольной (К) и опытной (О) групп на 62 сут после
травмы.
Таблица 4.
Динамика лейкоцитарной формулы крови крыс при термической травме кожи
Срок исследования, сутки Группа Показатель
Эозинофилы Нейтрофилы Лимфоциты Моноциты
Юные Палочкоядерные Сегментоядерные
Исходные Контроль 1,80±0,42 2,60±0,14 17,8±2,66 74,2±3,81 3,6±0,90
Опыт 2,00±0,50 2,20±0,18 17,2±2,61 75,2±2,38 3,40±0,57
3 Контроль 2,80±0,42 6,20±0,42 13,4±0,74 74,0±1,00 3,60±0,57
Опыт 4,40±0,45 13,6±0,67*** 13,2±0,65 62,4±0,74*** 6,40±0,57**
9 Контроль 3,2±1,06 13,8±0,60 14,2±1,04 65,0±1,08 3,8±0,45
Опыт 3,6±0,27 12,6±0,74 13,6±0,64 63,8±3,35 6,4±0,42*
14 Контроль 3,60±0,45 2,60±0,45 11,4±0,76 14,4±0,76 61,8±0,74 6,20±0,50
Опыт 3,40±0,27 1,60±0,45 11,4±0,67 12,4±0,57 66,4±0,57** 4,80±0,42
21 Контроль 5,20±0,74 5,20±1,08 8,10±0,36 7,10±0,71 66,2±2,01 8,40±0,67
Опыт 3,80±0,42 1,80±0,22* 4,80±0,42*** 12,8±0,65*** 69,4±0,76 7,40±0,65
28 Контроль 5,2±0,67 5,8±1,02 8,4±1,12 6,8±0,82 66,2±2,18 7,6±0,27
Опыт 3,6±0,42* 2,0±0,27* 4,6±0,48* 13,6±0,64*** 70,6±1,18 5,6±0,67
35 Контроль 5,40±0,67 9,20±0,42 8,00±0,35 6,80±0,82 67,0±1,06 3,60±0,45
Опыт 3,40±0,27* 1,80±0,42** 4,60±0,57*** 15,2±0,65*** 71,0±1,17* 4,00±0,50
42 Контроль 8,20±1,39 5,60±1,04 9,20±0,82 8,40±2,33 65,6±3,13 3,00±1,22
Опыт 2,60±0,57** 2,60±0,57* 5,20±0,42** 13,8±0,74 71,6±1,30 4,20±0,82
60 Контроль 5,20±0,89 2,00±0,71 14,6±0,91 13,8±1,47 62,0±3,37 2,40±0,82
Опыт 2,40±0,57* 4,40±0,57** 17,6±1,16 72,4±1,84 3,20±0,96
Примечание: ****** — уровни достоверности различия, соответственно Р<0,05; Р<0,01 и Р<0,001
Таким образом, экспериментальными исследованиями установлено, что применение фитобиотика Нормотрофин при ожоговой травме кожи оказывает положительный эффект на репаративный процесс. В частности использование фитобиотика препятствует формированию выраженного воспалительного отека на месте травмы, способствует поддержанию гомеостаза и ускоряет процессы регенерации поврежденных тканей.
Список литературы:
1. Аладышкин А.С. Защитная реакция организма животных при термической травме кожи и заживление глубоких ожоговых ран с применением прополисовой мази: Дис. ... канд. вет. наук / Аладышкин Александр Сергеевич. Казань, 1965. — 286 с.
2. Аладышкин А.С. Видовая репаративная реактивность животных при термической травме и возможности её коррекции /А.С. Аладышкин // Тез. докл. Республ. научн. конф. Казань, КВИ, 1988, — с. 144.
3. Директива 2010/63/ EU европейского парламента и совета Европейского союза по охране животных, используемых в научных целях. СПб., 2012. — 48 с.
4. Трахтенберг И.М. Проблемы нормы в токсикологии (современные представления и методические подходы, основные параметры и константы) / И.М. Трахтенберг, Р.Е. Сова, В.О. Шефтель, Ф.А. Оникиенко // Под общей редакцией И.М. Трахтенберга. М.: Медицина, 1991. — 204 с.
