CC BY
20ОРИГИНАЛЬНАЯ СТАТЬЯ
ORIGINAL ARTICLE
Влияние нейтронного излучения на жизнеспособность опухолевых клеток, культивируемых в присутствии изотопа бора 10B
О.Ю. Волкова1, к. б. н., ст. науч. сотр.; Л.В. Мечетина1, 5, к. б. н., ст. науч. сотр.; А.В. Таранин1, 5, д. б. н., заведующий лабораторией; А.А. Заборонок2, к. м. н., доцент; K. Nakai2, д. м. н., доцент;
С.И. Лежнин3, 5, д. ф.-м. н., профессор, гл. науч. сотр.;
С.А. Фролов3, инженер;
Д.А. Касатов4, мл. науч. сотр.;
А.Н. Макаров4, к. ф.-м. н., мл. науч. сотр.;
И.Н. Сорокин4, к. т. н., науч. сотр.;
Т.В. Сычева4, инженер;
И.М. Щудло4, аспирант;
С.Ю. Таскаев4, 5, д. ф.-м. н., вед. науч. сотр.
1ФГБУН «Институт молекулярной и клеточной биологии» Сибирского отделения Российской академии наук,
пр-т Академика Лаврентьева, 8/2, Новосибирск, 630090, Российская Федерация; 2University of Tsukuba, Tsukuba, 305-8577, Japan;
3Новосибирский филиал ФГБУН «Институт проблем безопасного развития атомной энергетики» Российской академии наук,
пр-т Академика Лаврентьева, 1, Новосибирск, 630090, Российская Федерация;
4ФГБУН «Институт ядерной физики им. Г.И. Будкера» Сибирского отделения Российской академии наук, пр-т Академика Лаврентьева, 11, Новосибирск, 630090, Российская Федерация; 5ФГБОУ ВО «Новосибирский национальный исследовательский государственный университет», ул. Пирогова, 2, Новосибирск, 630090, Российская Федерация
Impact of neutron radiation on the viability of tumor cells cultured
in the presence of boron-10 isotope
O.Yu. Volkova1, PhD in Biol. Sci., Senior Research Associate; L.V. Mechetina1, 5, PhD in Biol. Sci., Senior Research Associate;
A.V. Taranin1, 5, Dr. of Biol., Head of the Laboratory; A.A. Zaboronok2, MD, PhD, Associate Professor; K. Nakai2, MD, PhD, DSc, Associate Professor; S.I. Lezhnin3, 5, Dr of Phys. and Math., Professor, Chief Research Associate;
S.A. Frolov3, Engineer; D.A. Kasatov4, Junior Research Associate; A.N. Makarov4, PhD in Phys. and Math. Sci., Junior Research Associate;
I.N. Sorokin4, PhD in Tech. Sci., Research Associate;
T.V. Sycheva4, Engineer; I.M. Shchudlo4, Postgraduate; S.Yu. Taskaev4,5, Dr of Phys. and Math., Leading Research Associate
11nstitute of Molecular and Cellular Biology of the Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences, prospekt Akademika Lavrent'eva, 8/2, Novosibirsk, 630090, Russian Federation;
2University of Tsukuba, Tsukuba, 305-8577, Japan; 3Novosibirsk Brunch of the Nuclear Safety Institute of the Russian Academy of Sciences, prospekt Akademika Lavrent'eva, 1, Novosibirsk, 630090, Russian Federation; 4G.I. Budker Institute of Nuclear Physics of the Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences, prospekt Akademika Lavrent'eva, 11, Novosibirsk, 630090, Russian Federation; 5Novosibirsk State University, ul. Pirogova, 2, Novosibirsk, 630090, Russian Federation
Цель исследования - изучение влияния потока нейтронов, формируемого на ускорительном источнике эпитепловых нейтронов ИЯФ им. Г.И. Будкера, на жизнеспособность опухолевых клеток человека и клеток млекопитающих, культивируемых в присутствии изотопа бора 10В.
Материал и методы. Клетки глиомы человека U251 и T98G и клетки китайского хомячка CHO-K1 и V-79 инкубировали в ростовой среде, содержащей L-борфенилаланин, обогащенный изотопом 10В в различных концентрациях. Клетки облучали потоком нейтронов на ускорительном источнике эпи-тепловых нейтронов. Для оценки жизнеспособности облученных клеток использовали клоногенный тест. Поглощенные дозы, полученные в результате упругого рассеяния быстрых нейтронов на ядрах вещества, и дозы, полученные в результате захвата нейтронов бором, рассчитывали с использованием кода NMC. Поглощенные дозы гамма-излучения измеряли дозиметром смешанного излучения.
Результаты. Проведен анализ жизнеспособности борсо-держащих и интактных клеток линий глиом человека U251 и T98G и клеток китайского хомячка CHO-K1 и V-79 после облучения нейтронным пучком. Показано, что облучение клеток всех четырех линий, культивируемых в присутствии 10B, уменьшает их колониеобразующую способность по сравнению с контролем. Повышение содержания бора в ростовой среде приводит к достоверному уменьшению доли выживших клеток. Наиболее выраженное влияние облучения на способность к пролиферации наблюдается для клеток глиомы человека линии U251.
Заключение. На культурах опухолевых клеток человека и клеток млекопитающих показано, что поток нейтронов, формируемый на созданном в ИЯФ им. Г.И. Будкера ускорительном источнике эпитепловых нейтронов, эффективно снижает жизнеспособность опухолевых клеток в присутствии 10B.
Ключевые слова: бор-нейтронозахватная терапия; ускорительный источник нейтронов; линии опухолевых клеток глиом человека.
Для цитирования: Волкова О.Ю., Мечетина Л.В., Тара-нин А.В., Заборонок А.А., Nakai K., Лежнин С.И., Фролов С.А., Касатов Д.А., Макаров А.Н., Сорокин И.Н., Сычева Т.В., Щуд-ло И.М., Таскаев С.Ю. Влияние нейтронного излучения на жизнеспособность опухолевых клеток, культивируемых в присутствии изотопа бора 10В. Вестник рентгенологии и радиологии. 2016; 97 (5): 283-8. DOI: 10.20862/0042-4676-2016-97-5-283-288
Для корреспонденции: Волкова Ольга Юрьевна; E-mail: [email protected]
Objective: to investigate the impact of a neutron beam formed with the accelerator-based epithermal neutron source designed at the G.I. Budker Institute of Nuclear Physics (INP) on the viability of human and animal tumor cells cultured in the presence of boron-10 isotope.
Material and methods. Human U251 and T98G glioma cells and Chinese hamster CHO-K1 and V-79 cells were incubated at various concentrations in the culture medium containing 10B-enriched L-boronophenylalanine. The cells were irradiated with a neuron beam using the accelerator-based epithermal neuron source. A clonogenic assay was used to evaluate the viability of the irradiated cells. The absorbed doses obtained from elastic scattering of fast neutrons by substance nuclei and the doses obtained from boron neutron capture were calculated using the NMS code. The absorbed doses of gamma-radiation were measured with a mixed radiation dosimeter.
Results. The viability of boron-containing and intact human U251 and T98G cell lines and Chinese hamster CHO-K1 and V-79 cells was analyzed after neutron beam radiation. Irradiation of all four cell lines were cultured in the presence of 10B was shown to reduce their colony-forming capacity compared with the control. Elevated boron levels in the culture medium resulted in a significant decrease in the proportion of survived cells. Radiation had the most pronounced impact on the proliferative capacity of the human U251 glioma cell lines.
Conclusion. The cultures of human tumor cells and mammalian cells demonstrated that the neutron beam formed with the accelerator-based epithermal neutron source designed at the INP, was effective in reducing the viability of tumor cells in the presence of 10B.
Index terms: boron neutron capture therapy; accelerator-based neutron source; human glioma tumor cell lines.
For citation: Volkova O.Yu., Mechetina L.V., Taranin A.V., Zaboronok A.A., Nakai K., Lezhnin S.I., Frolov S.A., Kasatov D.A., Makarov A.N., Sorokin I.N., Sycheva T.V., Shchudlo I.M., Taska-ev S.Yu. Impact of neutron radiation on the viability of tumor cells cultured in the presence of boron-10 isotope. Vestnik Rentgenologii i Radiologii (Russian Journal of Radiology). 2016; 97 (5): 283-8 (inRuss.). DOI: 10.20862/0042-4676-2016-97-5-283-288
For correspondence: Ol'ga Yu. Volkova; E-mail: volkova@ mcb.nsc.ru
Information about authors:
Volkova O.Yu., http://orcid.org/0000-0002-8329-7182 Mechetina L.V., http://orcid.org/0000-0001-6785-2919 Taranin A.V., http://orcid.org/0000-0002-9184-4238 Zaboronok A.A., http://orcid.org/0000-0002-6833-9866 Nakai K., http://orcid.org/0000-0002-0702-2304 Lezhnin S.I., http://orcid.org/0000-0002-0903-7016 Frolov S.A., http://orcid.org/0000-0001-5027-3582 Kasatov D.A., http://orcid.org/0000-0001-5649-524X Makarov A.N., http://orcid.org/0000-0002-2020-0793 Sorokin I.N., http://orcid.org/0000-0002-2164-3318 Sycheva T.V., http://orcid.org/0000-0002-7613-9952 Shchudlo I.M., http://orcid.org/0000-0002-8130-5249 Taskaev S.Yu., http://orcid.org/0000-0002-5313-2563
Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest. Acknowladgements. A study carried out by the grant of the Russian Science Foundation (project № 14-32-00006) with the support of the G.I. Budker Institute of Nuclear Physics of the Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences.
Введение
Бор-нейтронозахватная терапия (БНЗТ) - перспективный метод противоопухолевой терапии, основанный на накоплении
в опухоли стабильного изотопа бора 10В и последующем облучении эпитепловыми нейтронами [1, 2]. В результате поглощения нейтрона бором происходит
Received 24 March 2016 Accepted 20 April 2016
ядерная реакция с большим выделением энергии в клетке, что приводит к ее гибели. Проведенные на ядерных реакторах клинические испытания показали,
что БНЗТ позволяет лечить глио-бластомы мозга, метастазирую-щие меланомы и ряд других злокачественных опухолей [2]. Для широкого внедрения методики в клиническую практику требуются источники эпитепло-вых нейтронов на основе ускорителя заряженных частиц. Разработка ускорительных источников эпитепловых нейтронов, наиболее приемлемых для БНЗТ, ведется во многих научных центрах - в Университете Нагоя (Япония) [3], Университете Цукуба (Япония) [4], Национальном онкологическом центре в Токио [5] и в Институте ядерной физики им. Г.И. Будкера СО РАН в Новосибирске [6].
Целью исследования являлось изучение влияния потока нейтронов, формируемого на ускорительном источнике эпитепловых нейтронов ИЯФ им. Г.И. Буд-кера, на жизнеспособность опухолевых клеток человека и клеток млекопитающих в присутствии изотопа 10В. В качестве агента доставки бора в исследованиях использован один из рекомендованных для БНЗТ препаратов - обогащенный изотопом 10В L-р-борфенилаланин (BPA), характеризующийся низкой токсичностью и обеспечивающий достаточное содержание бора в опухолевых клетках [7-11]. Клинические испытания БНЗТ с использованием BPA продемонстрировали терапевтическую эффективность и хорошую переносимость пациентами этого препарата [12-14].
Работа выполнена на ускорительном источнике эпитепловых нейтронов ИЯФ им. Г.И. Будкера с использованием BPA в качестве агента для доставки 10В в культивируемые in vitro опухолевые клетки.
Материал и методы
Клеточные культуры. Линии клеток глиомы человека U251, клеток глиобластомы человека T98G, клеток яичника китайского хомячка CHO-K1 и фибро-
бластов легкого китайского хомячка V-79 были получены из Российской коллекции клеточных культур позвоночных Института цитологии РАН (Санкт-Петербург). Клетки этих линий культивировали в среде Iscove's DMEM (Sigma-Aldrich, США), с добавлением 10%-й эмбриональной сыворотки телят (Hy-clone, Thermo Scientific, Великобритания) и 1%-го раствора антибиотиков и антимикотиков Antibiotic Antimycotic Solution (Sigma-Aldrich, США), при 37 °С, во влажной атмосфере, содержащей 5% СО2. Культуры клеток пересевали в соотношении 1:3 (клетки человека) и 1:5 (клетки китайского хомячка) с помощью раствора, содержащего 0,25% трипсина и 1 mM этилендиамин-тетрауксусной кислоты (ЭДТА).
В качестве борсодержащего соединения использовали L-бор-фенилаланин (BPA), обогащенный изотопом 10В (>99,5% 10B, Katchem Ltd., Чехия), приготовленный по методу, описанному K. Yoshino et al. [15]. Для получения растворимого препарата к 0,25 М раствору D(-)-фруктозы (Sigma-Aldrich, США) добавляли борфенилаланин до концентрации 0,1 М и доводили pH раствора до 9,5 с помощью 1 М NaOH. Затем раствор перемешивали до полного растворения борфенила-ланина, доводили pH до 7,2 с помощью 1 M HCl и стерилизовали фильтрацией через мембранный фильтр с размером пор 0,22 мкм. Готовый стоковый раствор содержал борфенилаланин в концентрации 20 мг/мл (концентрация 10В - 1100 мкг/мл, или 1100 ppm).
Инкубация клеток с борфе-нилаланином. Клетки линий U251, T98G, CHO-K1 и V-79 в экспоненциальной фазе роста высевали в культуральные флаконы (площадь 25 см2, TPP, Швейцария) в количестве 106 клеток на флакон. Через 24 ч в культуральные флаконы добавляли раствор BPA и инкубировали клетки каждой линии в среде, содержащей 10В в концентрациях
10, 20, 40 и 100 ppm, в течение 2 ч. Контрольные клетки инкубировали в среде, не содержащей 10В. После инкубации в борсодер-жащей среде клетки собирали в центрифужные пробирки, осаждали центрифугированием, переносили в полипропиленовые пробирки и облучали потоком нейтронов.
Облучение клеток потоком нейтронов проводили на ускорительном источнике эпитепловых нейтронов ИЯФ им. Г.И. Будкера, включающем ускоритель-тандем с вакуумной изоляцией и литиевую нейтроногенерирующую мишень [6, 16]. Клетки помещали внутрь фантома из оргстекла диаметром 200 мм высотой 220 мм на глубину 24 мм от верхней поверхности. Фантом устанавливали под нейтроногенерирующую мишень [17] по оси на расстоянии 10 мм от низа мишени. Облучение проводили в течение 40 мин при токе протонного пучка 1,5 мА, энергии 2 МэВ. Для контроля стабильности генерации нейтронов использовали детектор нейтронов с литийсодержащим сцинтиллятором GS20 производства Saint-Gobain Crystals (США). Поглощенная доза, полученная в результате упругого рассеяния быстрых нейтронов на ядрах вещества, и поглощенная доза, полученная в результате захвата нейтронов бором, рассчитана с использованием кода NMC [18], моделирующего перенос нейтронов в трехмерной геометрии и использующего базу данных сечений ENDF-VII. Поглощенная доза гамма-излучения измерена дозиметром смешанного излучения ДВГН-01 [19].
Клоногенный анализ. Для оценки цитотоксичности BPA использовали клоногенный тест, основанный на подсчете количества колоний, образуемых выжившими клетками [20]. После инкубации в борсодержащей среде клетки подсчитывали в гемо-цитометре (NanoEnTek, США) и высевали по 200 клеток на пять чашек Петри диаметром 6 см
100 ■
3
со :т сс
I
I
О
о
о ф
о
80-
60-
40.
20-
0
80
60
40
20
0
120 100. 80 60 40 20 0
0
100
0
100
а 0 100 б
Концентрация в ростовой среде, ppm
Рис. 1. Результаты анализа цитотоксичности борфенилаланина для клеток линий Ш51 (а), T98G (б) и У-79 (в), проведенного с помощью клоногенного теста
(ТРР, Швейцария). Затем культивировали клетки в течение 10-14 сут. Образовавшиеся колонии фиксировали 6%-м раствором глутарового альдегида (Sigma-Aldrich, США), окрашивали 0,5%-м кристаллическим фиолетовым (Вектон, Россия) и подсчитывали визуально.
Для оценки влияния нейтронного излучения на жизнеспособность клеток, инкубированных в среде с 10В, клоногенный анализ проводили после облучения клеток. Контрольные клетки без бора высевали по 200 клеток на чашку, клетки, инкубированные с 10В в концентрации 10, 20 и 40 ррт - по 500, 1000 и 2000 клеток на чашку соответственно. На каждую концентрацию бора и контроль брали по пять чашек. Результаты клоногенного теста представляли в виде доли образовавшихся на чашке колоний от числа высеянных клеток. После подсчета колоний статистичес-
кую обработку полученных результатов проводили с использованием ^критерия Стьюдента.
Результаты
Для оценки цитотоксичности используемого препарата ВРА был проведен клоногенный анализ клеток глиомы человека И251, клеток глиобластомы человека Т98С и фибробластов легкого китайского хомячка У-79 после их инкубации с ВРА в течение 2 ч. Из рисунка 1 видно, что внесение ВРА в ростовую среду в концентрации, соответствующей 100 ррт 10В, не влияет на эффективность образования колоний и, соответственно, не приводит к снижению жизнеспособности клеток И251, Т98С и У-79.
Далее клетки линий И251, Т98С, СНО-К1 и У-79, предварительно инкубированные в среде с концентрацией бора 10, 20 и 40 ррт, облучали потоком нейтронов. Одновременно облучали
Зависимость поглощенной дозы облученных клеток от содержания 10В в ростовой среде
контрольные клетки, инкубированные в среде без 10В. Данные концентрации 10В были выбраны на основании того, что они не являются цитотоксичными для клеток человека и млекопитающих. Кроме того, ранее было показано, что при использовании 10В в концентрациях от 10 до 40 ррт происходит накопление бора в клетках [21-23]. Значения поглощенных доз для используемых концентраций бора приведены в таблице.
С помощью клоногенного теста проведен анализ жизнеспособности борсодержащих и интакт-ных клеток линий И251, Т98С, СНО-К1 и У-79 после облучения нейтронным пучком. Результаты представлены на рисунке 2. Согласно полученным данным, для всех линий происходит подавление колониеобразующей способности и, соответственно, уменьшение доли выживших облученных клеток при наличии
10В
Концентрация 10В в ростовой среде, ррт Поглощенная доза, Гр
реакции 10В(п, а)7Ц от быстрых нейтронов от гамма-излучения суммарная
0 0 0,9 0,4 1,3
10 1,2 0,9 0,4 2,5
20 2,4 0,9 0,4 3,7
40 4,8 0,9 0,4 6,1
V-79 CHO-K1 U251 T98G
40
Концентрация 10B в ростовой среде, ppm
Рис. 2. Зависимость выживаемости облученных нейтронами клеток Ш51, T98G, СНО-К1 и У-79 от концентрации бора в ростовой среде, полученная по данным клоногенного теста
бора в ростовой среде. Колоние-образующая способность понижена и у контрольных клеток, которые не инкубировались в борсо-держащей среде, но облучались потоком нейтронов, что объясняется действием сопутствующего гамма-излучения и быстрых нейтронов. Кроме того, известно, что клетки стабильных линий характеризуются не абсолютной эффективностью клонирования (от 50% для клеток глиобластом до 80% для клеток V-79 и до 90% для клеток CHO-K1) (http:// www.lgcstandards-atcc.org).
Анализ данных, представленных на рисунке 2, свидетельствует об усилении репродуктивной гибели клеток при увеличении дозы, полученной клетками в результате поглощения бором нейтронов. Повышение содержания бора в ростовой среде у всех линий клеток приводит к достоверному (p <0,05) уменьшению доли выживших облученных клеток с бором по сравнению с долей выживших после облучения контрольных клеток без бора. При увеличении концентрации 10B до 40 ppm способность к пролиферации сохранили только 33% клеток U251, 43,5% клеток CHO-K1, 49% клеток V-79 и 54% клеток T98G по сравнению с кон-
трольными клетками. Наиболее выраженное влияние облучения на способность к пролиферации наблюдается для клеток глиомы человека линии И251. При облучении клеток этих линий, предварительно инкубированных с 10В в концентрации 40 ррт и получивших дозу 6,1 Гр, доля выживших клеток уменьшается в 3 раза по сравнению с долей выживших облученных клеток, не содержащих бора. С учетом данных таблицы полученные результаты свидетельствуют о том, что способность к пролиферации клеток подавляется пропорционально поглощенной дозе, полученной клетками при облучении.
Обсуждение
Бор-нейтронозахватная терапия является перспективным методом в лечении опухолей головного мозга, что объясняется трудностями их лечения традиционными методами. Основная проблема связана с такими особенностями, как инфильтратив-ный характер роста этих опухолей, отсутствие четких границ распространения и возможность появления рецидивных опухолей [24]. Культуры стабильных линий опухолевых клеток глиобла-стом являются простой и вполне
адекватной моделью для проведения исследований, направленных на развитие БНЗТ [9-11].
В данной работе, посвященной оценке эффективности БНЗТ на ускорительном источнике эпи-тепловых нейтронов, мы использовали опухолевые линии клеток глиобластом человека U251 и T98G. Также в качестве моделей in vitro мы использовали линии клеток китайского хомячка CHO-K1 и V-79. Выбор последних двух линий обусловлен тем, что они широко применяются в радиационной биологии для исследования механизмов клеточной гибели после воздействия ионизирующего излучения, в том числе после воздействия на клетки потока нейтронов [21, 25, 26]. Для всех четырех линий показано достоверное подавление проли-феративной способности облученных клеток. Наибольший эффект наблюдался для глиомы U251, которая, как было отмечено, обладает повышенной по сравнению с другими линиями способностью накапливать в клетках 10B [27]. Полученные на in vitro моделях результаты показывают, что увеличение концентрации 10B в ростовой среде ведет к снижению жизнеспособности облученных потоком нейтронов клеток. С учетом полученных данных об отсутствии токсичности препарата BPA в использованных концентрациях можно сделать вывод о том, что репродуктивная гибель клеток линий U251, T98G, CHO-K1 и V-79 обусловлена повреждающим действием излучения при проведении БНЗТ.
Заключение
На культурах опухолевых клеток человека и клеток млекопитающих впервые показано, что поток нейтронов, формируемый на созданном в ИЯФ им. Г.И. Буд-кера ускорительном источнике эпитепловых нейтронов, эффективно снижает жизнеспособность опухолевых клеток в присутствии 10B. Экспериментальные модели in vitro, предложенные
в работе, будут использованы для дальнейших экспериментов, направленных на развитие и совершенствование бор-нейтроно-захватной терапии.
Конфликт интересов
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Финансирование
Исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда (проект № 14-32-00006) при поддержке Института ядерной физики им. Г.И. Будкера СО РАН.
Литература / References
1. Locher G.L. Biological effects and therapeutic possibilities of neutrons. Am. J. Roentgenol. Radium Ther. 1936; 36: 1-13.
2. Sauerwein W., Wittig A., Moss R., Nakagawa Y. (eds). Neutron capture therapy: pronciples and applications. Springer; 2012.
3. Tsuchida K., Kiyanagi Y., Uritani A., Watanabe K., Shimizu H., Hirota K. et al. Development of an accelerator-driven compact neutron source for BNCT in Nagoya University. In: Book of abstracts of the 16 International Congress on Neutron Capture Therapy. 2014, June 14-19; Helsinki, Finland: 206-7.
4. Kumada H., Kurihara H., Yoshio-ka M., Kobayashi H., Matsumoto H., Sugano T. et al. Development of beryllium-based neutron target system with three-layer structure for accelerator-based neutron source for boron neutron capture therapy. Appl. Radiat. Isot. 2015; 106: 78-83.
5. Abe Y., Fuse M., Fujii R., Nakamu-ra M., Imahoru Y., Itami J. Hospital-based boron neutron capture therapy in National Cancer Center. An installation design for the accelerator-based epithermal neutron source. In: Abstracts of 15th International Congress on Neutron Capture Therapy. 2012, Sept. 10-14; Tsukuba, Japan: 109-10.
6. Таскаев С.Ю. Ускорительный источник эпитепловых нейтронов. Физика элементарных частиц и атомного ядра. 2015; 46 (6): 1770-830. [Taskaev S.Yu. Accelerator based epithermal neutron source. Fizika Elementarnykh Chas-tits i Atomnogo Yadra (Physics of Elementary Particles and Atomic Nuclei, Russian journal). 2015; 46 (6): 1770-830 (in Russ.).]
7. Wittig A., Huiskamp R., Moss R., Bet P., Kriegeskotte C., Scherag A. et al. Biodistribution of (10)B for
Boron Neutron Capture Therapy (BNCT) in a mouse model after injection of sodium mercaptoun-decahydro-closo-dodecaborate and l-para-boronophenylalanine. Radiat. Res. 2009; 172 (4): 493-9.
8. Wittig A., Moss R., Sauerwein W. Glioblastoma, brain metastases and soft tissue sarcoma of extremities: candidate tumors for BNCT. Appl. Radiat. Isot. 2014; 88: 46-9.
9. Sun T., Zhou Y., Xie X., Chen G., Li B., Wei Y. et al. Selective uptake of boronophenylalanine by glioma stem/progenitorcells. Appl. Radiat. Isot. 2012; 70 (8): 1512-8.
10. Wittig A., Sauerwein W., Coderre J. Mechanisms of transport of p-bo-rono-phenylalanine through the cell membrane in vitro. Radiat. Res. 2000; 153 (2): 173-80.
11. Yasui L., Kroc T., Gladden S., Andorf C., Bux S., Hosmane N. Boron neutron capture in prostate cancer cells. Appl. Radiat. Isot. 2012; 70 (1): 6-12.
12. Yamamoto T., Nakai K., Kageji T., Kumada H., Endo K., Matsuda M. et al. Boron neutron capture therapy for newly diagnosed glioblas-toma. Radiother. Oncol. 2009; 91 (1): 80-4.
13. Kankaanranta L., Seppala T., Koivu-noro H., Valimaki P., Beule A., Collan J. et al. L-boronophenylala-nine-mediated boron neutron capture therapy for malignant glioma progressing after external beam radiation therapy: a Phase I study Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 2011; 80 (2): 369-76.
14. Wadabayashi N., Honda C., Mishima Y., Ichihashi M. Selective boron accumulation in human ocular melanoma vs surrounding eye components after 10B1-p-borono-phenylalanine administration. Prerequisite for clinical trial of neutron-capture therapy. Melanoma Res. 1994; 4 (3): 185-90.
15. Yoshino K., Suzuki A., Kakihana H., Honda C., Mishima Y., Kobaya-shi T. et al. Improvement of solubility of p-boronophenylalanine by complex formation with monosac-charides. Strahlenther. Onkol. 1989; 165 (2-3): 127-9.
16. Иванов А.А., Касатов Д.А., Кош-карев А.М., Макаров А.Н., Остре-инов Ю.М., Сорокин И.Н. и др. Получение протонного пучка с током 5 мА в ускорителе-тандеме с вакуумной изоляцией. Письма в Журнал технической физики. 2016; 42 (12): 1-8. [Ivanov A.A., Kasatov D.A., Koshkarev A.M., Ma-karov A.N., Ostreinov Yu.M., Soro-kin I.N. et al. Generation of the proton beam of 5 mA on a tandem accelerator with vacuum insulation. Pis 'ma v Zhurnal Tekhnicheskoy Fiziki (Technical Physics Letters, Russian journal). 2016; 42 (12): 1-8 (in Russ.).]
17. Bayanov B., Kashaeva E., Maka-rov A., Malyshkin G., Samarin S.,
Taskaev S. A neutron producing target for BINP accelerator-based neutron source. Appl. Radiat. Isot. 2009; 67 (7-8): 282-4.
18. Yurov D., Anikeev A., Bagryan-sky P., Brednikhin S., Frolov S., Lezhnin S. et al. Parameters optimization in a hybrid system with a gas dynamic trap based neutron source. Fusion Eng. Des. 2012; 87 (9): 1684-92.
19. Санников А.В., Лебедев В.Н., Ку-старев В.Н., Савицкая Е.Н., Спи-ров Е.Г. Индивидуальный дозиметр смешанного излучения ДВГН-01: Разработка и исследование характеристик. Препринт ИФВЭ 2005-6. Протвино; 2005. [Sannikov A.V., Lebedev V.N., Kustarev V.N., Savitskaya E.N., Spirov E.G. The individual dosimeter of mixed radiation DVGN-01: development and study of characteristics. IHEP Preprint 2005-6. Protvino; 2005 (in Russ.).]
20. Franken N., Rodermond H., Stap J., Haveman J., Bree C. Clonogenic assay of cells in vitro. Nat. Protoc. 2006; 1 (5): 2315-9.
21. Yoshida F., Matsumura A., Shibata Y., Yamamoto T., Nakauchi H., Oku-mura M. et al. Cell cycle dependence of boron uptake from two boron compounds used for clinical neutron capture therapy. Cancer Lett. 2002; 187 (1-2): 135-41.
22. Sato E., Yamamoto T., Shikano N., Ogura M., Nakai K., Yoshida F. et al. Intracellular boron accumulation in CHO-K1 cells using amino acid transport control. Appl. Radiat. Isot. 2014; 88: 99-103.
23. Yoshida F., Yamamoto T., Nakai K., Zaboronok A., Matsumura A. Additive effect of BPA and Gd-DTPA for application in accelerator-based neutron source. Appl. Radiat. Isot. 2015; 106: 247-50.
24. Van Meir E.G., Hadjipanayis C.G., Norden A.D., Shu H.K., Wen P.Y., Olson J.J. Exciting new advances in neuro-oncology: the avenue to a cure for malignant glioma. Cancer J. Clin. 2010; 60 (3): 166-93.
25. Okumura K., Kinashi Y., Kubota Y., Kitajima E., Okayasu R., Ono K. et al. Relative biological effects of neutron mixed-beam irradiation for boron neutron capture therapy on cell survival and DNA double-strand breaks in cultured mammalian cells. J. Radiat. Res. 2013; 54 (1): 70-5.
26. Kinashi Y., Takahashi S., Kashi-no G., Okayasu R., Masunaga S., Suzuki M. et al. DNA doublestrand break induction in Ku80-deficient CHO cells following Boron Neutron Capture Reaction. Radiat. Oncol. 2011; 5 (6): 106.
27. Wang P., Zhen H., Jiang X., Zhang W., Cheng X., Guo G. et al. Boron neutron capture therapy induces apoptosis of glioma cells through Bcl-2/Bax. BMC Cancer. 2010; 2 (10): 661.
Поступила 24.03.2016 Принята к печати 20.04.2016
