Влияние модифицированного биофлавоноида на лимфоциты-эффекторы реакции контактной чувствительности у мышей Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

иммунология № 3, 2015

иммуномодуляторы

© коллектив авторов, 2015 удк 615.356:577.164.3].015.44.076.9

Албегова Д.З.1, Павлова С.И.23, Негребецкий В.В.1, Кягова А.А.1, Козырь Л.А.1, Козлов ИГ.12

ВЛИЯНИЕ МОДИФИЦИРОВАННОГО БИОФЛАВОНОИДА НА ЛИМФОЦИТЫ -ЭФФЕКТОРЫ РЕАКЦИИ КОНТАКТНОЙ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ У МЫШЕЙ

1Кафедра фармакологии гБОУ ВПО Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова Минздрава России, 117997 Москва; 2ФгУ ФНКЦ Детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Д. Рогачева, Москва; 3ФгБОУ ВПО Чувашский государственный университет им. И.Н. Ульянова, Чебоксары

Реакция контактной чувствительности мышей (КЧ) к 2,4-динитрофторбензолу (ДНФБ) является моделью иммунного ответа in vivo, воспроизводящей контактный дерматит у человека. Считают, что иммунный ответ при развитии КЧ опосредуется преимущественно Т-лимфоцитами, поскольку эти клетки могут адоптив-но переносить реакцию от сенсибилизированного экспериментального животного несенсибилизированному. КЧ проявляется в виде воспаления (обычно кожи) в месте повторного попадания антигена. Нами модель КЧ воспроизводилась на мышах линии СВА путем накожной сенсибилизации ДНФБ. Целью исследования стало выявление механизмов иммуномодулирующего действия кверцетина дигидрата и модифицированного биофла-воноида, используя метод адоптивного переноса КЧ спленоцитами и T-лимфоцитами. Было показано, что модифицированный биофлавоноид значительно сильнее подавляет адоптивный перенос КЧ в сравнении с квер-цетина дигидратом, не вызывая апоптоза клеток-эффекторов.

Ключевые слова: флавоноиды; контактная гиперчувствительность; иммуносупрессия.

Для цитирования: Иммунология. 2015; 36(3): 150-153. Albegova D.Z.1, Pavlova S.I.2'3, Negrebetsky V.V.1, Kyagova A.A.1, Kozyr L.A.1, Kozlov I.G.12

INFLUENCE OF MODIFIED BIOFLAVONOID ON EFFECTOR LYMPHOCYTES IN REACTION OF CONTACT SENSITIVITY IN MICE

'N.I. Pirogov Russian National Research Medical University, Moscow, Russia; 2D. Rogachev Federal Research and Clinical Center for Pediatric Hematology, Oncology and Immunology, Moscow, Russia; 3 Chuvash State University, Cheboksary, Russia

Reaction of contact sensitivity in mice (CS) to 2,4-dinitrofluorobenzene (DNFB) is a model of the immune response in vivo, reproducing the disease contact dermatitis in humans. It is believed that with the development of the immune response is mediated predominantly by T lymphocytes, because these cells can adoptive transfer reaction from an experimental animal sensitized with non-sensitized. CS manifest in the form of inflammation (usually the skin) in place in getting repeat antigen. In our laboratory model of CS reproduced in CBA mice by dermal sensitization of DNFB. The aim of the study was to identify the mechanisms of immunomodulatory action of quercetin dihydrate and modified bioflavonoid using the method of adoptive transfer of contact sensitivity with splenocytes and T-lymphocytes. It was shown that the modified bioflavonoid more stronger suppress adoptive transfer of CS in comparison with quercetin dehydrate, without inducing apoptosis of effector cells.

Keywords: flavonoids; contact; hypersensitivity; immunosuppression.

citation: Immunologiya. 2015; 36(3): 150-153. (in Russian)

Флавоноиды представляют собой одно из самых структурно-разнообразных (более 4000 индивидуальных представителей) семейств вторичных метаболитов растительной клетки полифенольной структуры. На сегодняшний день их рассматривают как активные продукты метаболизма растений, играющие важную роль в процессах фотосинтеза, дыхания, формирования устойчивости к инфекционным агентам. Согласно результатам многочисленных современных исследований можно утверждать, что эти природные соединения обладают широким диапазоном биологических активностей, проявляя противовоспалительные, иммунотропные, антиканцерогенные, противоопухолевые и другие свойства [1, 2]. Данные эффекты могут реализовываться благодаря тому, что флавоноиды влияют на фосфорилирование ключевых молекул сигнальных

Для корреспонденции: Козлов Иван Генрихович, bigbeaver-90@mail.ru

For correspondence: Kozlov Ivan Genrikhovich, bigbeaver-90@mail.ru

путей в клетках, ингибируя активность протеинтирозинкиназ [3]. В связи с этим мы предположили, что флавоноиды могут стать новым источником для изыскания лекарственных препаратов с иммуномодулирующей активностью.

Нами были проведены исследования с использованием модели контактной чувствительности (КЧ), индуцированной 2,4-динитрофторбензолом (ДНФБ) у мышей, где кверцетина дигидрат (КД) и модифицированный биофлавоноид (МБФ) с различной эффективностью подавляли развитие реакции КЧ. Ингибирование КЧ зависело от пути введения исследуемых агентов животным и максимально проявлялось при внутривенном введении [4]. В дальнейшем в этой же модели были предприняты попытки выяснения механизмов действия КД и модифицированного биофлавоноида (МБФ). С учетом многоэтапности реализации реакции КЧ стало очевидно, что механизмы ограничения развития данной реакций под действием тех или иных иммуномодулирующих агентов могут быть многообразными.

Цель работы - исследование возможного влияния изучаемых веществ на функциональную активность зрелых имму-

нокомпетентных клеток, участвующих в реализации КЧ. Для этого был использован метод адоптивного переноса, в основе которого лежит индукция КЧ при введении несенсибилизи-рованному животному зрелых Т-лимфоцитов-эффекторов от сенсибилизированного сингенного донора.

Материал и методы

Препараты. В опытах использован полученный экспериментальным путем модифицированный биофлавоноид, а также препарат сравнения - КД.

В клеточную суспензию вносили раствор КД или МБФ в этаноле (рабочая концентрация 5-10-8 моль/мл) так, чтобы финальная концентрация этанола не превышала 1%. В качестве контроля использовали соответствующие объемы растворителя. Во всех экспериментах после 30-минутной инкубации (37°С, 5% CO2) с препаратами клетки отмывали от тестируемых агентов и медленно вводили внутривенно мышам в объеме 0,5 мл раствора Хенкса с 10 mM HEPES-буфера.

Лабораторные животные. В экспериментах были использованы мыши линии СВА (H-2k) (самцы массой тела 1820 г, возраст 8-10 недель), полученные из питомника РАМН (Крюково, Московская область). Животные содержались на стандартном пищевом рационе вивария при свободном доступе к воде и пище.

Модель КЧ. Инициацию реакции КЧ к ДНФБ у мышей проводили согласно общепринятому экспериментальному подходу с незначительными модификациями [5]. Животных сенсибилизировали путем аппликации на выбритую кожу брюшка 50 мкл 0,3% раствора ДНФБ в ацетоне на 0-й день. Через 6 сут после сенсибилизации на внутреннюю поверхность правого уха наносили разрешающую дозу ДНФБ (5 мкл 0,2% ДНФБ). На левое ухо наносили 5 мкл растворителя (ацетона). Отрицательным контролем (К-) служила группа интактных (несенси-билизированных) мышей, получивших только аппликацию разрешающей дозы ДНФБ. Через 24 ч после повторного нанесения ДНФБ оценивали интенсивность реакции КЧ по разнице отека правого и левого уха (специфическое локальное воспаление). Толщину ушей измеряли в миллиметрах специальным микрометром, снабженным световым сигналом (Россия).

Адоптивный перенос КЧ. Из сенсибилизированных ДНФБ мышей-доноров через 6 сут после сенсибилизации выделяли клетки селезенки. Суспензию спленоцитов (3-107 кл/мышь, 0,5 мл) или CD3+-популяцию, выделенную из того же количества клеток селезенки, медленно внутривенно вводили в хвостовую вену интактным мышам-реципиентам. В опытной группе клетки инкубировали с КД или МБФ в течение 30 мин при 37°С и 5% CO2, в контрольной - с соответствующим объемом растворителя. Через 1 ч после переноса клеточной суспензии мышам-реципиентам, включая интактных мышей (К-, отрицательный контроль), наносили разрешающую дозу ДНФБ на внутреннюю поверхность уха. На внутреннюю поверхность другого уха в качестве контроля наносили такой же объем ацетона. Еще через 24 ч регистрировали интенсивность реакции КЧ мышей-реципиентов вышеописанным методом.

Иммуномагнитная сепарация. Для получения отдельной популяции спленоцитов использовали метод негативной селекции и набор реактивов Dynal Mouse Negative Isolation Kit (In-vitrogen Dynal AS, Норвегия). Фракции клеток, не относящихся к интересующей популяции, удаляли, обрабатывая спленоциты коктейлем моноклональных антител (IgG, высокоспецифичные к поверхностным популяционным маркерам) и связывающими их парамагнитными полимерными микрочастицами Dynalbeads. Сепарацию проводили в магнитном поле штатива DynalMag-2 (Invitrogen Dynal AS, Норвегия). Очищенную популяцию, не прикрепившуюся к полимерным микрочастицам (в составе супернатанта), отмывали и после подсчета использовали для обработки исследуемыми агентами in vitro, а затем вводили внутривенно экспериментальным животным.

Контроль чистоты популяции осуществляли методом проточной цитометрии на цитофлуориметре Cytomics FC500 (Beckman-Coulter, США) с использованием флуорохром-

Рис. 1. Интенсивность реакции при адоптивном переносе КЧ спленоцитами сенсибилизированных мышей-доноров интактным мышам-реципиентам.

(К-) - отрицательный контроль, (К+) - положительный контроль без адоптивного переноса, (К /+) - адоптивный перенос КЧ спленоцитами (3-107/ мышь), КД - адоптивный перенос спленоцитов, инкубированных с КД, МБФ - адоптивный перенос спленоцитов, инкубированных с МБФ.

меченных моноклональных антител к CD3-антигенам мышей (Invitrogen, США).

Оценка жизнеспособности и «раннего» апоптоза. Количественные исследования жизнеспособности и апоптоза клеток при воздействии изучаемого агента проводили методом проточной цитофлуориметрии, используя Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit (Beckman Coulter, США). Для анализа использовали аликвоты, содержащие 106 клеток.

статистическая обработка. Для статистического анализа результатов использовалась программа Excel для Windows XP. Все результаты выражались как значения среднего ± стандартное отклонение. Полученные в ходе экспериментов данные распределялись по нормальному закону, поэтому для оценки достоверности различий применяли критерий Стьюдента, вычисляя коэффицент достоверности. Различие средних показателей считалось достоверным, если величина коэффицента достоверности соответствовала уровню значимости p<0,05.

результаты

Нами был использован метод адоптивного переноса реакции КЧ сингенным животным для изучения прямого влияния КД и МБФ на спленоциты мышей, а также на T-лимфоциты, выделенные из суспензии спленоцитов с помощью иммуно-магнитной сепарации.

Результаты экспериментов по адоптивному переносу КЧ спленоцитами сенсибилизированных мышей-доноров ин-тактным мышам-реципиентам представлены на рис. 1.

Как демонстрирует гистограмма, в группе К- аппликация разрешающей дозы ДНФБ не вызывала развития реакции КЧ: разница толщины ушей составляла 0,016±0,006 мм. Напротив, перенос спленоцитов от сенсибилизированных ДНФБ доноров интактным мышам-реципиентам приводил к сенсибилизации, что проявлялось в развитии у последних КЧ уже при первичной аппликации ДНФБ на ухо. У мышей данной группы отек составил 0,186±0,008 мм, что было сравнимо с интенсивностью КЧ в группе положительного контроля (K+) без адоптивного переноса (0,2±0,005 мм). Однако в том случае, когда спленоциты предварительно (до введения мышам-реципиентам) инкубировали в течение 30 мин с МБФ, адоптивный перенос КЧ не наблюдался. Отек уха в этой группе мышей составлял в среднем 0,015±0,003 мм, что достоверно не различалось с таковыми значениями в группе отрицательного контроля (0,016±0,006 мм) и было на 92% (p <0,05) ниже в сравнении с группой K /+ (адоптивный перенос КЧ спленоцитами). Прединкубация спленоцитов с КД с последующим введением мышам-реципиентам не отменяла адоптивного переноса КЧ. Отек уха в этой группе мышей составлял в среднем 0,098±0,006 мм, что было ниже на 47% в сравнении с группой K /+.

Для оценки апоптогенного эффекта КД и МБФ спле-ноциты инкубировали 0,5, 2, 6 и 12 ч в их присутствии, за-

Рис. 2. Интенсивность реакции при адоптивном переносе КЧ популяциями спленоцитов сенсибилизированных мышей-доноров ин-тактным мышам-реципиентам.

К" - отрицательный контроль, К /+ - адоптивный перенос КЧ спленоци-тами, CD3 - адоптивный перенос КЧ Т-лимфоцитами, КД - адоптивный перенос Т-лимфоцитов, инкубированных с КД, МБФ - адоптивный перенос Т-лимфоцитов, инкубированных с МБФ.

тем окрашивали аннексин-ФИТЦ и пропидий йодидом. Ни в одной из проб не наблюдали повышения доли аннексин-положительных клеток при инкубации с исследуемыми агентами в сравнении с контрольными образцами.

Следующим экспериментальным шагом стала иммуно-магнитная сепарация Т-лимфоцитов из суспензии спленоцитов мышей, сенсибилизированных ДНФБ, с целью их адоптивного переноса интактным мышам.

Результаты экспериментов по изучению влияния КД и МБФ на адоптивный перенос КЧ Т-лимфоцитами представлены на рис. 2. Как и предполагалось, Т-лимфоциты сенсибилизированных мышей эффективно переносили КЧ несен-сибилизированным реципиентам. Выраженность реакции (0,181±0,007 мм) статистически не отличалась от группы с адоптивным переносом суммарной клеточной фракции спле-ноцитов (0,186±0,008 мм). Инкубация in vitro сепарированных Т-лимфоцитов с МБФ блокировала способность этих клеток адоптивно переносить КЧ интактным мышам. Отек уха составил 0,016 ± 0,004 мм, что практически совпадало с аналогичным показателем в группе отрицательного контроля и было на 91,2% (p <0,05) ниже в сравнении с группой "Т-лимфоциты". По всей вероятности МБФ супрессировал активность адаптивно сформированных Т-лимфоцитов-эффекторов КЧ.

Прединкубация in vitro сепарированных Т-лимфоцитов с КД не отменяла адоптивного переноса КЧ интактным мышам. Отек уха составил 0,092 ± 0,005 мм, что было на 50,5% (p <0,05) ниже в сравнении с группой "Т-лимфоциты". Вероятно, КД только частично супрессировал активность адаптивно сформированных Т-лимфоцитов-эффекторов КЧ.

Таким образом, в результате проведенного исследования можно сделать следующие выводы.

1. Эксплантированные на 6-е сутки спленоциты ДНФБ-сенсибилизированных мышей способны адоптивно переносить КЧ интактным мышам-реципиентам.

2. Инкубация с МБФ (5-10-8 моль/мл) in vitro экс-плантированных на 6-е сутки спленоцитов ДНФБ-сенси-билизированных мышей отменяла адоптивный перенос КЧ сингенным мышам-реципиентам. В свою очередь использование КД полностью не отменяло адоптивного переноса КЧ. Ингибирование МБФ и КД реакции КЧ не сопровождалось апоптозом клеток.

3. Т-лимфоциты, выделенные из эксплантированных на 6-е сутки спленоцитов ДНФБ-сенсибилизированных мышей способны адоптивно переносить КЧ сингенным интактным мышам-реципиентам.

4. Инкубация с МБФ (5-10-8 моль/мл) in vitro сепарированных Т-лимфоцитов ингибирует адоптивный перенос КЧ сингенным мышам-реципиентам, тогда как КД только частично супрессирует активность адаптивно сформированных Т-лимфоцитов-эффекторов КЧ.

Обсуждение результатов

Используя методику адоптивного переноса КЧ, было изучено прямое влияние КД и МБФ на суммарную фракцию сплено-цитов мышей, полученную спустя 6 суток после сенсибилизации ДНФБ, а также на T-лимфоциты, выделенные из суспензии этих спленоцитов с помощью иммуномагнитной сепарации.

В контрольной группе реакция КЧ достоверно переносилась спленоцитами ДНФБ-сенсибилизированных мышей-доноров сингенным интактным мышам-реципиентам при внутривенном введении их в количестве свыше 2-107 клеток в расчете на 1 мышь. При адоптивном переносе 108 сплено-цитов/мышь развивался отек уха такой же выраженности, как в группе мышей K+ (инициация КЧ и ее разрешение в одном и том же животном). В случаях, когда переносили меньшее количество спленоцитов, наблюдалась незначительная тенденция к снижению интенсивности реакции. Исходя из этих предварительных результатов, в данной работе для адоптивного переноса КЧ использовали 3-107 клеток в расчете на 1 мышь. Сепарация и перенос отдельных популяций клеток проводились из такого же количества спленоцитов.

Как показали проведенные исследования, 30-минутная обработка спленоцитов сенсибилизированных мышей МБФ перед их переносом полностью отменяла развитие КЧ у син-генных мышей-реципиентов, при этом данный эффект не был связан с гибелью клеток вследствие индукции их апоп-тоза или цитотоксичности.

В литературе представлены противоречивые сведения, касающиеся фенотипа клеток, являющихся эффекторами КЧ. Предполагают, что фенотип индуцированных клеток-эффекторов КЧ зависит прежде всего от вида гаптена, а также от генетических особенностей сенсибилизированного организма. Однако большинство исследований показывают, что сенсибилизация мышей ДНФБ приводит к генерации клеток-эффекторов КЧ, имеющих фенотип CD8+ [6, 7].

Как и следовало ожидать, исходя из данных литературы, в контрольной группе реакция КЧ эффективно переносилась также отдельно Т-лимфоцитами, поэтому дальнейшая наша цель — выделение субпопуляций CD8+ и CD4+ из суспензии спленоцитов сенсибилизированных мышей и исследование их способности в достаточной степени переносить КЧ.

Прямое воздействие МБФ на Т-лимфоциты сенсибилизированных мышей, подобно обработке всех спленоцитов, полностью блокировало адоптивный перенос КЧ.

Таким образом, в результате проведенного исследования и сравнения двух препаратов показано, что иммуномодули-рующие эффекты МБФ в большей мере, чем КД, реализуются на эффекторной стадии развития реакции КЧ.

литература

1. Vicentini F.T., He T., Shao Y. et al. Quercetin inhibits UV irradiation-induced inflammatory cytokine production in primary human keratinocytes by supressing NF-kB pathway. J. Dermatol. Sci. 2011; 61(3): 162-8.

2. Dagne A., Melkamu T., Schutten M.M. et al. Enhanced inhibition of lung ad-enocarcinoma by combinatorial treatment with indole-3-carbinol and silibinin in A/J mice. Carcinogenesis. 2011; 32(4): 561-7.

3. Akiyama T., Ishida J., Nakawaga S. et al. Genistein, a specific inhibitir of tyrosine-specific protein kinases. J. Biol. Chem. 1987; 262: 5592-5.

4. Албегова Д.З., Павлова С.И., Негребецкий В.В. и др. Модифицированный биофлавоноид супрессирует реакцию контактной гиперчувствительности у мышей. Российский иммунологический журнал. 2014; 8, №2(1): 11-4.

5. Kim T.Y., Kripke M.L., Ullrich S.E. Immunosuppression by factors released from UV-irradiated epidermal cells: selective effects on the generation of contact and delayed hypersensitivity after exposure to UVA or UVB radiation. J. Invest. Dermatol. 1990; 94: 26-32.

6. Gober M.D., Gaspari A.A. Allergic contact dermatitis. Curr. Dir. Autoimmun. 2008; 10: 1-26.

7. Kehren J., Desvignes C., Krasteva M. et al. Cytotoxicity is mandatory for CD8(+) T cell-mediated contact hypersensitivity. J. Exp. Med. 1999; 189 (5): 779-86.

Поступила 30.09.14

references

1. Vicentini F.T., He T., Shao Y. et al. Quercetin inhibits UV irradiation-induced inflammatory cytokine production in primary human keratinocytes by supressing NF-kB pathway. J. Dermatol. Sci. 2011; 61(3): 162-8.

2. Dagne A., Melkamu T., Schutten M.M. et al. Enhanced inhibition of lung ad-enocarcinoma by combinatorial treatment with indole-3-carbinol and silibinin in A/J mice. Carcinogenesis. 2011; 32(4): 561-7.

3. Akiyama T., Ishida J., Nakawaga S. et al. Genistein, a specific inhibitir of tyrosine-specific protein kinases. J. Biol. Chem. 1987; 262: 5592-5.

4. Albegova D. Z., Pavlova S. I., Negrebetskiy et al. Modified bioflu-monoid suppresses the reaction of contact hypersensitivity in mice.

Rossiyskiy immunologicheskiy zhurnal. 2014; 8, №2(1): 11-4. (in Russian)

5. Kim T.Y., Kripke M.L., Ullrich S.E. Immunosuppression by factors released from UV-irradiated epidermal cells: selective effects on the generation of contact and delayed hypersensitivity after exposure to UVA or UVB radiation. J. Invest. Dermatol. 1990; 94: 26-32.

6. Gober M.D., Gaspari A.A. Allergic contact dermatitis. Curr. Dir. Autoimmun. 2008; 10: 1-26.

7. Kehren J., Desvignes C., Krasteva M. et al. Cytotoxicity is mandatory for CD8(+) T cell-mediated contact hypersensitivity. J. Exp. Med. 1999; 189 (5): 779-86.

Received 30.09.14

иммуноонкология

© коллектив авторов, 2015 удк 616-006.04-078.33-076.5-074

Дейнеко Н.Л.1, Булычева Т.И.1, Григорьев А.А.1, Вольпина О.М.2, Владимирова Н.М.2

экспрессия ОнКОМАРКЕРнОГО белка B23/HУКЛE0Ф03МИHА Б РАзлИЧнЫХ опухолевых клетках

1ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России, 125167, г Москва; 2Учреждение РАН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997, г. Москва

Методом иммуноцитохимического окрашивания в реакции непрямой иммунофлюоресценции проведено исследование опухолевых клеток различной этиологии на ограниченном контингенте больных с использованием аффинно-очищенных противопептидных антител (АТ), специфичных к мономерным (АТ 19-36) формам белка В23, и АТ к олигомерным (АТ 283-294) формам, избирательно выявляющих изоформу В23.1, в сравнении с коммерческими моноклональными АТ к белку В23 с целью определения их диагностической и прогностической значимости. В результате исследований подтверждено, что белок В23, исследованный ранее в основном в качестве аргирофиль-ного белка иммуногистохимическим методом, может использоваться в качестве маркера злокачественности опухолей также при проведении иммуноцитохимического метода, который более доступен в лабораторной практике. Установлено, что не вся молекула белка В23 отвечает за информативность метода, а только олигомерная форма, маркирующая белок в ядрышках опухолевых клеток в виде многочисленных фокусов свечения высокой интенсивности, в отличие от мономерной формы, локализованной в цито- и нуклеоплазме клеток при отсутствии свечения в ядрышках. Показано, что степень экспрессии изоформы белка В23.1, выявляемая противопептидными АТ 283-294, может стать новым маркером злокачественных опухолей по количеству, форме и интенсивности окрашивания ядрышек в опухолевых клетках.

Ключевые слова: опухолевые маркеры; мономерная и олигомерная форма белка В23/нуклеофозмина; противо-пептидные антитела; иммуноцитохимический метод.

Для цитирования: Иммунология. 2015; 36(2): 153-158. Deineko N.L.1, Bylycheva T.I.',Grigoryev A.A.1, Volpina O.V.2, Vladimirova N.M.2

EXPRESSION OF THE ONCOLOGICAL MARKER POTEIN B23/NUCLEOPHOSMIN VARIOS TUMOR CELLS National Center for Hematology, 125167, Moscow; 2Institute of Bioorganic Chemistry, 117997, Moscow Using the method of immunocytochemical staining in the reaction of indirect immunofluorescence we conducted a study of tumor cell of different etiologies on a limited number of patients using affinity purified antipeptide antibodies against monomeric (AT 19-36) forms of the protein B23 and antibodies against oligomeric forms (AT 283-294) that selectively stains isoform B23.1 compared to the commercial antibody against the protein B23 to determine their diagnostic and prognostic significance. As a result it was confirmed that the protein B23 known as an argyrophillic protein could also be used as a marker of malignancy of tumors when applying not only the immunohistochemical but also immunocytochemical method that is more accessible in the laboratory practice. It was established that not all molecule of the protein B23 is responsible for the informative value of the method but only the oligomeric form that marks the protein in the nucleoli of the tumor cells as multiple shining foci of high intensity as opposed to the monomeric form that is located in the cytoplasm and nucleoplasm with no luminescence present in the nucleoli.

It was shown that the degree of expression of the isoform B23.1 that is revealed with the antipeptide antibodies AT 283-294 could serve as a new marker of the malignant tumors based on the quantity , form and intensity of staining of the nucleoli in the tumor cells.

Key words: tumor marker; monomeric and oligomeric forms of the protein B23/nucleofosmin; antipeptide antibodies; immunocytochemical method.

citation: Immunologiya. 2015; 36(2): 153-158. (in Russian)

Для корреспонденции: Булычева Татьяна Ивановна, tb@blood.ru For correspondence: Bulycheva Nat'yana Ivanovna, tb@blood.ru