CC BY
29
ка». Б.И. Челнокова, Е.М. Иванов, П.Ф. Кику. Зарегистрировано в Реестре баз данных 06.04.2007.
Svidetel'stvo № 2007620135.Elektronnaya baza dan-nykh «Mineral'nye vody Dal'nego Vostoka». B.I. Chel-nokova, E.M. Ivanov, P.F. Kiku. Zaregistrirovano v Re-estre baz dan-nykh 06.04.2007.
12. Челнокова Б.И. Мелководненское месторождение морских лечебных иловых грязей о. Русский. В сб. Природа без границ: морская экология. Владивосток. Изд-во «Рея»; 2009; С. 314-316.
Chelnokova B.I. Melkovodnenskoe mestorozhdenie morskikh lechebnykh ilovykh gryazej o. Russkij. V sb.: Priroda bez granits: morskaya ehkologiya. Vladivostok. Izd-vo «Reya»; 2009; 314-316.
13. Минеральные воды и лечебные грязи Дальнего Востока: справочник, издание 2-е дополненное. Сост. Б.И. Челнокова, Е.М. Иванов, Т.А. Гвозден-ко. Владивосток: Изд-во Дальневост. федер. ун-та; 2010; 128 с.
Mineral'nye vody i lechebnye gryazi Dal'nego Vostoka: spravochnik, izdanie 2-e dopolnennoe. Sost. B.I. Chelnokova, E.M. Ivanov, T.A. Gvozdenko. Vladivostok: Izd-vo Dal'ne-vost. feder. un-ta; 2010; 128 s.
14. ГОСТ Р 54316 - 2011 «Воды минеральные природные питьевые». М.: Стандартинформ, 2011: 41 с.
GOST R 54316 - 2011 «Vody mineral'nye prirodnye pit'evye». M.: Standartinform; 2011; 41 s.
15. Веремчук Л.В., Челнокова Б.И., Гвозденко Т.А., Лемешко Т.В. Рекреационные ресурсы Пара-
тунской курортной зоны Камчатской области. Вопр. курортологии, физиотерапии и лечебной физической культуры. 2012; 5: 64-67.
Veremchuk L.V., Chelnokova B.I., Gvozdenko Т.А., Lemeshko T.V. Rekreatsionnye resursy Paratunskoj kurortnoj zony Kamchatskoj oblasti. Vopr. kurortolo-gii, fizioterapii i lechebnoj fizicheskoj kul'tury. 2012; 5: 64-67.
16. Кнышова В.В. Применение азотно-кремни-стых минеральных вод в восстановительном лечении гастроэнтерологических больных. Материалы XIX межрегиональной научно-практической конференции реабилитологов Дальнего Востока «Развитие медицинской реабилитации на Дальнем Востоке»,. Хабаровск; 2016; 52-55.
Knyshova V.V. Primenenie azotno-kremnistykh mineral'nykh vod v vosstanovitel'nom lechenii gas-troehnterologicheskikh bol'nykh. Materialy XIX mezhregional'noj nauchno-prakticheskoj konferentsii re-abilitologov Dal'nego Vostoka «Razvitie meditsinskoj rea-bilitatsii na Dal'nem Vostoke», Khabarovsk; 2016; 52-55.
17. Минеральные воды и лечебные грязи Дальнего Востока: справочник, издание 3-е дополненное. Сост.Б.И. Челнокова, Т.А. Гвозденко. Владивосток: Изд-во Дальневост. федер. ун-та; 2017; 220 с.
Mineral'nye vody i lechebnye gryazi Dal'nego Vostoka: spravochnik, izdanie 3-e dopol-nennoe. Sost. B.I. Chelnokova, T.A. Gvozdenko. Vladivostok: Izd-vo Dal'nevost. feder. un-ta; 2017; 220 s.
Сведения об авторе
Челнокова Б.И., к.г.-м.н., научный сотрудник лаборатории медицинской экологии и рекреационных ресурсов Владивостокского филиала ФГБНУ «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания» - Научно-исследовательский институт медицинской климатологии и восстановительного лечения, 690105, г. Владивосток, ул. Русская, 73-г. e-mail: berta-20@mail.ru.
© Коллектив авторов, 2017 г. doi: 10.528/zenodo.835330
Удк 614.715:616-092.9:574.24
В.И. Янькова1, Т.И. Виткина1, Н.Е. Зюмченко2, Л.С. Барскова1, К.С. Голохваст12
влияние модельных взвесей микроразмерных твердых взвешенных частиц атмосферного воздуха на морфофункциональную характеристику и параметры пероксидации липидов альвеолярных макрофагов крыс линии вистар
1 Владивостокский филиал ФГБНУ «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания» -Научно-исследовательский институт медицинской климатологии и восстановительного лечения, г. Владивосток
2 ФГБАОУ ВО «Дальневосточный федеральный университет» МО РФ, г. Владивосток
Цель исследования - изучить влияние модельных взвесей микроразмерных твердых взвешенных частиц (ТВЧ) на морфофункциональное состояние и пероксидацию липидов культуры клеток альвеолярных макрофагов (АМ). Из бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ) 17 крыс линии Вистар выделяли и культивировали АМ. Макрофаги нагружали модельными взвесями ТВЧ, идентичных по составу и содержанию частиц атмосферного воздуха районов с незначительной (взвесь № 1) и высокой (взвесь №
2) техногенной нагрузкой. Морфофункциональное состояние культуры клеток макрофагов до- и после воздействия взвесей ТВЧ изучали визуально с помощью светового микроскопа. Ответную реакцию оценивали по динамике гидроперекисей липидов (ГПЛ) и общего антиоксидантного статуса (TAS) в
культуре клеток и среде их культивирования. Установлено, что культура клеток АМ наиболее активно фагоцитирует микрочастицы модельной взвеси № 2, в большей степени обогащенной кварцевыми фракциями РМ1, чем частицы модельной взвеси № 1. В результате такого воздействия значительно повышается содержание гидроперекисей липидов в АМ. Сохранение TAS при воздействии обеих модельных взвесей на культуру АМ на уровне интактной группы культуры макрофагов свидетельствует
0 неспособности АМ с незавершенным фагоцитозом поддерживать высокий потенциал антиоксидантный защиты, сдерживающий образование активных форм кислорода (АФК) и переокисление липидов мембран. Полученные результаты свидетельствуют, что модельная взвесь, идентичная по составу и содержанию мелкодисперсных ТВЧ атмосферному воздуху района с высокой техногенной нагрузкой, вызывает наиболее выраженную окислительную модификацию липидов и способствует развитию «окислительного взрыва» в культуре АМ. Интенсивность оказанного воздействия модельных взвесей зависит как от содержания в них легко фагоцитируемых фракций ТВЧ - PM1 и PM2,5, а также и от содержания в них частиц кварцевой природы, усиливающих продукцию свободных радикалов в клетках, вызывающих морфофункциональные изменения макрофагов и гибель клеток.
Ключевые слова: крысы альвеолярные макрофаги, морфофункциональная характеристика, пероксидация липидов, микроразмерные твердые взвешенные частицы атмосферного воздуха.
Для корреспонденции: Янькова В.И., e-mail: jankova_nch@list.ru.
V.I. Yan'kova1, T.I. Vitkina1, N.E. Zyumchenko2, L.S. Barskova1, K.S. Golokhvast12
the impact of model suspensions of micro-sized suspended particulate matter of atmospheric air on morphological and functional characteristics and parameters of lipid peroxidation of alveolar macrophages of vistar's line rats
1 Vladivostok Branch of Far Eastern Scientific Center of Physiology of Respiration - Research Institute of Medical Climatology and Rehabilitation Treatment, Vladivostok, Russia
2 Far Eastern Federal University, Vladivostok, Russia
The aim. To study the influence of model suspensions of micro-sized suspended particulate matter (SPM) on the morphofunctional condition and peroxidation of lipids in cell cultures of alveolar macrophages (AM). Materials and methods. AM were isolated from bronchoalveolar lavage (BAL) of 17 Vistar's line rats and cultivated. Macrophages were loaded by model suspensions of SPM, which were identical in the composition and the content of particles of atmospheric air of areas with insignificant (suspension № 1) and high (suspension № 2) technogenic load. Morphofunctional condition of cell culture of macrophages before and after the impact of suspensions of SPM was studied visually by light microscope. The response was evaluated by dynamics of lipid hydroperoxides (HPL) and total antioxidant status (TAS) in the cell culture and their culture medium. Results. It is found, that cell culture of АМ more actively phagocytose microparticles of model suspension № 2, that the most enriched by quartz fractions of РМ1, than the model suspension № 1. As a result of this impact, the content of lipid hydroperoxides in АМ is increased significantly. Preservation of TAS during impact of both model suspensions on culture of АМ on the level of intact group of macrophage culture shows of inability of АМ with incompleted phagocytosis to support a high potential anti-oxidant protection, constraining formation of the active form of oxygen (AFO) and peroxidation of membrane lipids. Conclusions. Findings testify to model suspension, that is identical in the composition and the content of fine SPM of atmospheric air of the area with high technogenic load, causes the most expressed oxidative modification of lipids and promotes the development of «oxidative explosion» in AM culture. The intensity of the impact of model suspensions depends on the presence of easy phagocytosed fractions of SPM - PM1 and PM2,5 and the quartz particles in them. These particles amplify the production of free radicals in cells that cause morphological and functional changes of macrophages and cell death.
Keywords: rats, alveolar macrophages, morphofunctional characteristic, lipid peroxidation, micro-sized suspended particulate matter of atmospheric air.
For correspondence: Yan'kova V.I., e-mail: jankova_nch@list.ru
Conflict of interests. The authors are declaring absence of conflict of interests.
Financing. The study had no sponsor support.
В последние годы наблюдается рост числа эколо-гозависимых заболеваний, в том числе заболеваний органов дыхания, причем загрязнение атмосферного воздуха является одним из ведущих факторов высокого риска данных заболеваний [1, 2, 3.]. Одним из регламентирующих критериев загрязненности атмосферного воздуха являются твердые взвешенные вещества, установлена их связь с заболевания брон-хо-легочной системы. Наибольшую опасность для здоровья представляют микроразмерные частицы атмосферных взвесей, воздействие которых на живой организм принципиально отличается от влияния крупноразмерных поллютантов [4]. Длительное воздействие повышенных концентраций твердых взвешенных частиц (ТВЧ) с аэродинамическим диаметром менее 2,5 мкм (РМ2,5) в атмосферном воздухе сокращает продолжительность жизни в популяции от несколько месяцев до нескольких лет [5].
Органы дыхания представляют собой наиболее уязвимую мишень воздействия ТВЧ. В них имеются все необходимые условия для развития окислительного стресса: непосредственный контакт с кислородом атмосферного воздуха, являющимся мощным окислителем, высокие концентрации субстрата окисления - ненасыщенных жирных кислот, присутствие в дыхательных путях альвеолярных макрофагов, продуцирующих в процессе фагоцитоза активные формы кислорода (АФК).
Цель. Изучить влияние модельных взвесей микроразмерных твердых взвешенных частиц, идентичных по составу частицам атмосферного воздуха районов г. Владивостока с незначительной и высокой техногенной нагрузкой, на морфофункциональ-ное состояние и пероксидацию липидов в культуре клеток альвеолярных макрофагов экспериментальных животных.
Материалы и методы. Экспериментальные исследования проводили на крысах линии Вистар с соблюдением биоэтических норм содержания и эвтаназии животных. У 17 крыс осуществляли отбор бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ), из которого выделяли и культивировали альвеолярные макрофаги по методу [6], модифицированному нами для используемого объекта исследования.
Через двое суток культивирования проводили нагрузочные тесты модельными взвесями твердых взвешенных частиц (ТВЧ) в дозе 1 мг/лунку (или 2 мг/мл культуральной среды). Для этого использовали модельные взвеси ТВЧ, идентичные по качественному составу и количественному содержанию частицам атмосферного воздуха районов г. Владивостока с незначительной (взвесь № 1) и высокой (взвесь № 2) техногенной нагрузкой. Взвеси отличались друг от друга по содержанию респирабельных фракций ТВЧ со средним арифметическим диаметром 0-1 мкм (PM1) и 0-2,5 мкм (PM2,5), оседаю-
щих в области от дыхательных бронхиол до альвеол. Взвесь № 1 содержала PM1 - 1,6%, PM2,5 - 4,9%, взвесь № 2 - PM1 - 27,8% и PM2,5 - 34,1%. В культуру клеток макрофагов от каждой особи добавляли модельные взвеси № 1 (группа 2) и № 2 (группа 3), клеточная культура макрофагов без нагрузки являлась интактной (группа 1). После добавления к культуре макрофагов модельных взвесей планшеты продолжали выдерживать в инкубаторе при 37°C и 5%-ном СО2 в течение 3 суток.
Mорфофункциональное состояние культуры клеток интактных макрофагов и при воздействии взвесей ТВЧ изучали с помощью светового микроскопа Axio Observer A1 (Carl Zeiss, Германия).
Воздействие микроразмерных ТВЧ атмосферного воздуха на макрофаги бронхоальвеолярного ла-важа крыс оценивали по динамике гидроперекисей липидов (ГПЛ) и общего антиоксидантного статуса (TAS) в культуре клеток и среде их культивирования до и после проведения нагрузочных тестов модельными взвесями. Определение ГПЛ проводили спектрофотометрически в гептан-изопропанольных экстрактах при длине волны 233 нм [7]. TAS определяли с помощью набора фирмы Randox Laboratories Limited (UK). Mетод основан на спектрофотоме-трическом определении концентрации катионов ABTS+, придающих раствору сине-зеленую окраску в результате их образования из 2,2'-азино-ди-[3-этилбензтиазолин сульфоната] (ABTS) при инкубации с пероксидазой (метмиоглобин) и пероксидом водорода, по величине экстинции при длине волны 600 нм. Aнтиоксиданты, находящиеся в пробе, уменьшают оптическую плотность пропорционально их концентрации.
Статистический анализ полученных данных проводили с помощью программы «Statistica 6.0», использовали модуль «Непараметрическая статистика» («Обычные описательные статистики», «Сравнение двух независимых групп»). Проверка гипотезы о различиях в двух сравниваемых группах проводилась с помощью U-критерия Mанна-Уитни. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез (р) принимался равным 0,05. Результаты непараметрической описательной статистики представлены в виде медианы ^е) и квантилей распределения (25- и 75%-ный квантили, X25 и X75 соответственно).
Результаты. Морфофункциональная характеристика альвеолярных макрофагов при воздействии модельных взвесей атмосферных твердых частиц микроразмерного ряда. Aльвеолярные макрофаги 1-ой (интактной) группы через одни сутки культивирования имели округлую форму, образовывали небольшие скопления (рис. 1A). Признаки прикрепления к субстрату (планшету) проявляла только небольшая часть клеток. Продолжение культивирова-
ния в течение 5-х суток (общая продолжительность эксперимента) приводило к изменению морфологии макрофагов 1-ой группы в результате их прикрепления к стенкам планшета, изменялась форма, они распластывались, образуя отростки, в цитоплазме были заметны хорошо выраженные крупные ядра (рис. 1Б).
Б
Рис. 1. Культура альвеолярных макрофагов крыс при воздействии модельных взвесей атмосферных твердых частиц микроразмерного ряда: А - 1-е сутки культивирования; Б - 5-е сутки культивирования
При добавлении в среду культивирования клеток макрофагов модельных взвесей ТВЧ и их последующем культивировании в течение трех суток наблюдали проявление фагоцитарной активности, интенсивность которой отличалась во 2-ой и 3-ей опытных группах. В макрофагах 2-ой группы наблюдали слабую фагоцитарную активность альвеолярных макрофагов, которые поглощали небольшое количество взвешенных частиц (рис. 2А). Относительно высокую фагоцитарную активность проявляли макрофаги 3-ей группы, цитоплазма некоторых макрофагов практически полностью была заполнена частицами модельных взвесей (рис. 2Б). Следует отметить, что в культурах макрофагов 2-ой и 3-й групп в отличие 1-ой группы были обнаружены разрушенные клетки, при визуальном наблюдении численность таких клеток была выше в 3-ей группе.
Проокислительное действие модельных взвесей ТВЧ в макрофагах бронхоальвеолярного лаважа. Воздействие модельных взвесей ТВЧ на культуру макрофагов БАЛ проявлялось в изменении содержания ГПЛ (табл.), характеризующих процессы свободно-радикального окисления липидов мембран клеток. Уровень ГПЛ во 2-ой группе культуры клеток и среде их культивирования не превышал значения этого по-
Рис. 2. Культура альвеолярных макрофагов при добавлении модельных взвесей (пятые сутки культивирования, третьи сутки культивирования после добавления взвеси): А - № 1, идентичной по составу ТВЧ взвеси района с незначительной техногенной нагрузкой; Б - № 2, идентичной по составу ТВЧ взвеси района с высокой техногенной нагрузкой
казателя в макрофагах 1-ой первой группе. Вероятно, это обусловлено преобладанием (78%) во взвеси частиц достаточно больших размеров (10-140 мкм), которые не могут фагоцитироваться клетками (рис. 1А). В тоже время поглощение клетками макрофагов незначительного количества (5%) частиц мелкодисперсной фазы (0,1-2,5 мкм) не вызывало статистически значимых изменений в содержании ГПЛ, сохраняя их уровень на уровне клеток, не подверженных каким-либо воздействиям (физиологический уровень). Наиболее выраженные изменения содержания ГПЛ наблюдались в макрофагах 3-ей группы, отличающиеся от данного показателя 1-ой группы на 51% в культуре клеток (p=0,028) и на 30% (p=0,048) в суммарном их содержании в макрофагах и культуральной жидкости. Подтверждением усиленной интенсификации процессов пероксидации липидов при воздействии на АМ микровзвеси №2 (группа № 3) является динамика суммарного показателя ГПЛ в культуре клеток и среде их культивирования, характеризующаяся повышением его значения на 38% (p=0,007) относительно интактной группы и на 33% (p=0,035) по сравнению с действием микровзвеси № 1.
Воздействие на культуры клеток макрофагов модельных взвесей микроразмерных ТВЧ, идентичных по составу ТВЧ атмосферного воздуха районов с различной степенью техногенной нагрузки, не приводило к статистически значимым отличиям показателя TAS между 1-ой, 2-ой и 3-ей группами.
Обсуждение. В результате проведенных исследований установлено, что поглотительная способ-
А
Таблица
Динамика ГПЛ и показателя TAS в культурах макрофагов БАЛ и среде культивирования при воздействии модельных
взвесей твердых частиц микроразмерного ряда (Ме, Х25 - Х75)
Содержание Объект исследования 1 группа интактная, n=17 2 группа нагрузка модельной микровзвесью № 1, n=17 3 группа нагрузка модельной микровзвесью № 2, n=17
Культура клеток 1,36 1,14-1,62 1,75 1,06-2,18 2,06 1,58-3,08 р,-3=0,028
ГПЛ, усл. ед. Культуральная среда 1,86 1,54-2,62 1,31 0,96-1,72 1,74 1,28-2,60 р2-3=0,035
Суммарное содержание 3,22 3,14-4,20 3,03 2,56-3,76 4,18 2,94-5,28 р1 3=0,048 р2-3=0,007
Культура клеток 0,17 0,13-0,18 0,15 0,11-0,17 0,16 0,15-0,19
TAS, ммоль/л Культуральная среда 0,12 0,03-0,21 0,04 0,02-0,13 0,19 0,15-0,22
Суммарное содержание 0,20 0,15-0,40 0,19 0,16-0,24 0,18 0,19-0,25
ность АМ, подвергшихся воздействию модельных взвесей ТВЧ атмосферного воздуха зависит от содержания в них микроразмерных частиц РМ2,5, размеры которых сопоставимы с размерами бактериальных клеток кокковой формы (0,5-2 мкм). Наиболее высокая фагоцитарная активность в культуре клеток АМ опытной группы, подвергшихся воздействию ТВЧ модельной взвеси (№ 2), идентичной по составу ТВЧ атмосферному воздуху района с высокой техногенной нагрузкой (рис. 2Б), может быть обусловлена высоким содержанием в ней микроразмерных частиц, особенно фракции РМ1. Известно, что твердые нерастворимые частицы до 0,5 мкм интенсивно поглощаются альвеолярными макрофагами (более 300 частиц на одну клетку), частицы размером 1,9 мкм - в значительно меньшем количестве (примерно 6 частиц на клетку), а частицы крупнее 3 мкм трудно поддаются фагоцитозу (1 частица на 3 клетки) [6, 8].
Часть частиц модельных взвесей соответствующих размеров, преимущественно РМ1, и состоящих в основном из минеральных веществ (кварц), металлов, сажи и пепла, захватывается альвеолярными макрофагами, накапливается в фаголизосо-мах цитоплазмы и не переваривается в процессе фагоцитоза. В результате этого цитоплазма АМ может быть полностью заполнена ТВЧ (рис. 2Б), незавершенный фагоцитоз может в дальнейшем приводить к их разрушению.
Известно, что альвеолярные макрофаги представляют собой редкий случай, когда клетки в культуре активно продолжают использовать окислительное фосфорилирование, а не гликолиз, как большинство остальных клеточных культур [9]. Экспозиция модельных взвесей ТВЧ с фагоцити-
рующими клетками стимулирует усиленное образование токсических метаболитов кислорода - активных форм кислорода (АФК), которые вовлекаются в повреждение фагоцитов, опосредованное окислительной модификацией и биодеградацией макромолекул липидов, белков, ДНК [10, 11, 12, 13]. Интенсивность процессов липоперок-сидации при воздействии на макрофаги модельных взвесей ТВЧ различного состава, определяемая по динамике ГПЛ, значительно отличается по сравнению с интактной группой АМ (табл.). При действии на АМ модельной взвеси № 1, содержащей незначительную массовую долю частиц РМ1 и РМ2,5 (1,6% и 4,9% соответственно), интенсивность процессов ПОЛ сохранялась на уровне интактной группы в культуре макрофагов и в культуральной среде. Значительно выраженная интенсификация процессов пероксидации липи-дов (ПОЛ) в АМ при действии модельной взвеси ТВЧ № 2 обусловлена высоким содержанием в ней легко фагоцитируемых фракций ТВЧ РМ1 и РМ2,5, превышающих их количество во взвеси №1 в 15 и 7 раз соответственно. Вероятно, что интенсивность ПОЛ в фагоцитирующих клетках при действии двух изучаемых взвесей микроразмерных ТВЧ также связана и со значительными различиями в них содержания кварцевых частиц (взвесь № 2 - 70%, взвесь № 1 - 40%). Кварц из всех известных минералов, входящих в состав городской пыли, наиболее интенсивно вызывает активацию «дыхательного взрыва» в АМ опосредованного образованием токсических метаболитов кислорода, т.к. может напрямую активировать основной фермент, генерирующий кислородные метаболиты - НАДФН-оксидазу [14, 15].
Компоненты антиоксидантной системы (АОС), всегда присутствующие и в цитоплазме клеток, и во внеклеточном матриксе, стабилизируют клетку от «окислительного взрыва». Общий антиоксидант-ный статус (TAS), определяемый как концентрация антиоксидантов в исследуемом образце, при воздействии обеих модельных взвесей на культуру АМ сохраняется на уровне интактной группы культуры макрофагов. В тоже время наблюдаемая тенденция достаточно хорошо подтверждает тезис о снижении функциональной активности макрофагов при воздействии на них мелкодисперсных частиц, обогащенных фракциями РМ1 и РМ2,5 преимущественно кварцевой природы, в результате усиленной выработки ими АФК. Нарушение функциональной активности, заключающееся в неспособности АМ с незавершенным фагоцитозом поддерживать высокий антиоксидантный потенциал, сдерживающий образование АФК и переокисление липидов мембран, приводит к гибели клеток.
Заключение. Результаты проведенных исследований, позволяют сделать вывод, что воздействие ТВЧ мелкодисперсных фракций модельной взвеси, идентичной по содержанию и составу частиц атмосферному воздуху района с высокой техногенной нагрузкой, вызывает наиболее выраженную окислительную модификацию липидов макрофагов БАЛ и способствует развитию «окислительного взрыва». Интенсивность пероксидации липидов мембран обусловлена различным содержанием в модельных взвесях респирабельных фракций твердых взвешенных частиц (РМ1 и РМ2,5) преимущественно кварцевой природы, наиболее активно фагоцитируемых макрофагами БАЛ и способствующих усилению образованию в них АФК.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Финансирование. Исследование проводилось без привлечения спонсорских средств.
ЛИТЕРАТУРА/ REFERENCES
1. Crouse D.L., Peters P.A., van Donkelaar A., et al. Risk of nonaccidental and cardiovascular mortality in relation to long-term exposure to low concentrations of fine particulate matter: a canadian national-level cohort study. Environmental Health Perspectives. 2012; 120(5): 708-714.
2. Gehring U., Gruzieva O., Agius R.M. et al. Air pollution exposure and lung function in children: the ESCAPE project. Environmental Health Perspectives. 2013; 121(11-12): 1357-1364.
3. Виткина Т.И., Веремчук Л.В., Кику П.Ф. Воздействие факторов окружающей среды на иммуно-метаболический статус жителей промышленных центров Приморского края // Бюлл. ВСНЦ СО РАМН. 2013; 3-2 (91): 44-47.
Vitkina T.I., Veremchuk L.V., Kiku P.F. Vozdejstvie faktorov okruzhayushhej sredy na immunometaboli-cheskij status zhitelej promyshlennykh tsentrov Primor-skogo kraya. Byull. VSNTS SO RAMN. 2013; 3-2 (91): 44-47 (in Russia).
4. Lim S.S., Vos T., Flaxman A.D. et al. A comparative risk assessment of burden of disease and injury attributable to 67 risk factors and risk factor clusters in 21 regions, 1990-2010: a systematic analysis for the global burden of disease study 2010. The Lancet. 2012; 380(9859): 2224-2260.
5. Brook R.D., Rajagopalan S, Pope C.A., et al. Par-ticulate matter air pollution and cardiovascular disease: an update to the scientific statement from the American Heart Association. Circulation. 2010; 121(21): 2331-2378.
6. Tarnok A., Dorger M., Berg I., Gecken G., Schluter T. Rapid screening of possible cetotoxic effects of particulate air pollutants by measurement of chenges in cytoplasmic free calcium, cytosolic pH, and plasma membrane potential in alveolar macrophages by flow cytometry. Cytometry. 2001; 43(3): 204-210.
7. Новгородцева Т.П., Эндакова Э.А., Янькова В.И. Руководство по методам исследования параметров системы «перекисное окисление липидов-ан-тиоксидантная защита» в биологических жидкостях. Владивосток: Изд-во Дальневост. ун-та; 2003; 80 с.
Novgorodtseva T.P., Endakova Е.А., Yan'kova V.I. Rukovodstvo po metodam issledovaniya parametrov sistemy «perekisnoe okislenie lipidov-antioksidantnaya zashhita» v biologicheskikh zhidkostyakh. Vladivostok: Izd-vo Dal'nevost. un-ta; 2003; 80 s.
8. Yue, H., Wei W., Yue Zh. et al. Particle size affects the cellular response in macrophages. European Journal of Pharmaceutical Sciences. 2010; (41): 650-657.
9. Zhang X., Goncalves R., Mosser D.M. The isolation and characterization of murine macrophages. Curr. Protoc. Immunol. 2008; 14: 1-18.
10. Владимиров Ю. Свободные радикалы в биологических системах. Соросовский образовательный журнал. 2000; 6(12): 13-19.
Vladimirov Yu.A. Svobodnye radikaly v bio-logicheskikh sistemakh. Sorosovskij obrazovatel'nyj zhurnal. 2000; 6(12): 13-19.
11. Mikkelsen R.B., Wardman P. Biological chemistry of reactive oxygen and nitrogen and radiation-induced signal transduction mechanisms. Oncogene. 2003; 22(37): P. 5734-5754.
12. Martindale J.L., Holbrook N.J. Cellular response to oxidative stress: signaling for suicide and survival. Journal of Cellular Physiology. 2002; 192(1): 1-15.
13. Mоller P., Loft S. Oxidative damage to DNA and lipids as biomarkers of exposure to air pollution. Environmental Health Perspectives. 2010; 118(8): 1126-1136.
14. Соодаева С.К. Активация НАДФН-оксидазы фагоцитов пылевыми частицами. Пульмонология. 1996; (3): 65-66.
Soodaeva S.K. Aktivatsiya NADFN-oksidazy fagotsitov pylevymi chastitsami. Pul'monologiya. 1996; (3): 65-66.
15. Breznan D, Goegan P, Chauhan V, Karthikey-an S, Kumarathasan P, Cakmak S,et al. Respiratory
burst in alveolar macrophages exposed to urban par-ticlesis not a predictor of cytotoxicity. Toxicol in vitro. 2013; (27):1287-97. http://dx.doi.org/10.1016/j. tiv.2013.02.014.
Сведения об авторах
Янькова В.И., к.б.н., доцент, с.н.с. лаборатории медицинской экологии и рекреационных ресурсов, Владивостокский филиал ФГБНУ «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания» СО РАМН - НИИ медицинской климатологии и восстановительного лечения; тел.: 8(423)278-82-05, e-mail: jankova_nch@list.ru;
Виткина Т.И., д.б.н., профессор РАН, зав. лаб. медицинской экологии и рекреационных ресурсов, Владивостокский филиал ФГБНУ «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания» СО РАМН - НИИ медицинской климатологии и восстановительного лечения; тел.: 8 (423) 278-82-01, e-mail: tash30@mail.ru;
Зюмченко Н.Е., к.б.н., доцент кафедры клеточной биологии и генетики Школы естественных наук ФГАОУ ВО «Дальневосточный федеральный университет» Министерства образования и науки РФ, тел.: 8(423)265-24-24 доб. 2544, e-mail: zyumchenko.ne@dvfu.ru;
Барскова Л.С., м.н.с. лаборатории медицинской экологии и рекреационных ресурсов, Владивостокский филиал ФГБНУ «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания» СО РАМН - НИИ медицинской климатологии и восстановительного лечения; тел.: 8(423)278-82-02, e-mail: pretty_people_2016@mail.ru;
Голохваст К.С., д.б.н., с.н.с. лаборатории медицинской экологии и рекреационных ресурсов, Владивостокский филиал ФГБНУ «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания» СО РАМН - НИИ медицинской климатологии и восстановительного лечения; тел.: 8(423)278-82-05, e-mail: droopy@mail.ru.
