CC BY
26
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ОБЗОРЫ
Влияние материнских бактериальных инфекций на экспрессию транспортеров лекарственных препаратов в плаценте человека
В. Петровик, Д. Койовик, А. Крессман, М. Пикет-Миллер
Кафедра фармацевтических наук, фармацевтический факультет Лесли Дан Торонтского университета, Торонто, Канада
Состояние проблемы. В трансмембранном транспорте эндогенных субстратов и ксенобиотиков принимает участие несколько переносчиков, ответственных за выведение и захват веществ в плаценте. Экспрессия и функция этих переносчиков могут изменяться при развитии осложнений при беременности, связанных с воспалительными процессами в материнском организме. Цель нашего исследования заключалась в изучении влияния хориоамнионита, бактериальной интраамнианальной инфекции, на экспрессию клинически значимых транспортеров в плаценте человека.
Методы. Были собраны образцы плаценты, полученные после прежде- и своевременных родов у женщин с диагностированным хориоамнионитом, а также образцов плаценты соответствующего гестационного срока у женщин без акушерских осложнений; при сборе образцов использовали предварительно определенные критерии исключения. Количественный анализ экспрессии белков-переносчиков проводили при помощи вестерн-блоттинга, а уровень экспрессии матричной РНК (мРНК) цитокинов и переносчиков оценивали посредством полимеразной цепной реакции в режиме реального времени.
Результаты. В случаях инфицирования образцов плаценты, полученных после преждевременных родов (ПР), уровень мРНК провоспалительных цитокинов IL-6, IL-ip и TNF-a был в 2,5-3 раза выше по сравнению с данными контрольных образцов, взятых из плаценты от женщин при ПР (p<0,05). В плацентах женщин с инфекцией и ПР выявлено снижение уровня экспрессии ABCG2 и SLCO2B1 на 48-57% (p<0,05) по сравнению с данными контрольных образцов, полученных после ПР у здоровых женщин. Изменения уровней экспрессии мРНК и белка в целом соответствовали друг другу. В случае своевременных родов отмечали значимое снижение уровня экспрессии мРНК ABCG2 и белка SLCO2B1 по сравнению с данными от контрольных образцов. Значимых изменений уровней экспрессии ABCB1 и SLCO4A1 не выявлено, однако уровень транскриптов ABCB1 сильно коррелировал с экспрессией IL-6, IL-1P и TNF-a (p<0,001), что может указывать на возможное вовлечение цитокин-опосредованной регуляции.
Заключение. Материнские инфекции оказывают неблагоприятное влияние на экспрессию ключевых переносчиков лекарственных препаратов в плаценте, что позволяет предположить возможность нарушения транспорта лекарственных препаратов от матери к плоду в результате изменений уровней экспрессии переносчиков ABC и OATP в плаценте.
Ключевые слова:
переносчики
лекарственных
препаратов,
инфекция,
хориоамнионит,
плацента,
воспаление,
цитокины
International Immunopharmacology. 2015; Vol. 26:349-56;
http://dx.doi.Org/10.1016/j.intimp.2015.04.020
Maternal bacterial infections impact expression of drug transporters in human placenta
V. Petrovic, D. Kojovic, Department of Pharmaceutical Sciences, Leslie Dan Faculty
A. Cressman, M. Piquette-Miller of Pharmacy, University of Toronto, Toronto, ON, Canada
Background. Several effiux and uptake transporters in the placenta are involved in the transmembrane transport of endogenous substrates and xenobiotics. Their expression and function may be altered in maternal complications associated with inflammation. Our objective was to examine the effect of chorioamnionitis, a bacterial intra-amniotic infection on the expression of clinically important transporters in human placenta.
Method. Human placental samples were collected from preterm and term pregnancies diagnosed with chorioamnionitis infection and were gestational age-matched with samples from pregnancies with no obstetric complications, using predefined exclusion criteria. Transporter protein expression was quantified using Western blots while cytokine and transporter mRNA expression was measured via real-time polymerase chain reaction.
Results. mRNA levels of pro-infiammatory cytokines IL-6, IL-1p and TNF-a were markedly elevated by 2.5- to 3-fold in preterm placentas with infection, relative to preterm controls (p<0.05). Expression of ABCG2 and SLCO2B1 was downregulated by 48 to 57% (p<0.05) in placentas from women with infection and preterm parturition, relative to preterm healthy controls. Protein and mRNA expression changes were generally consistent. At term, ABCG2 mRNA and SLCO2B1 protein expression levels were significantly downregulated, relative to controls. Significant changes in ABCB1 and SLCO4A1 expression were not observed, however ABCB1 transcript levels strongly correlated with IL-6, IL-1p and TNF-a expression (p<0.001), potentially suggesting involvement of cytokine-mediated regulation.
Conclusions. Collectively, these data show that maternal infections impact the expression of key drug transporters in placenta, suggesting that materno-fetal drug transport may be altered by changes in placental expression of ABC and OATP transporters.
Keywords:
drug transporters,
infection,
chorioamnionitis,
placenta,
in ammation,
cytokines
На протяжении внутриутробной жизни плацента выполняет функции поглощения питательных веществ и барьера от потенциально вредоносных агентов. В синцитиотрофобласте плаценты в большом количестве экспрессируется несколько переносчиков АТФ-связывающих кассет (ABC), обеспечивающих выведение веществ, а также переносчик растворимых веществ, опосредующий их поглощение. Полагают, что эти переносчики контролируют экспозицию плода различным эндо- и экзогенным веществам. Эти переносчики принимают участие в транспорте широкого спектра веществ с различной химической структурой: от крупных липофильных препаратов и токсинов до органических анионов, углеводов и желчных кислот [1]. Результаты предшествующих исследований на животных моделях и клеточных линиях продемонстрировали, что провоспали-тельные цитокины и состояния, сопровождающиеся воспалением, способны изменять уровни экспрессии переносчиков ABC и OATP (обзор представлен в [2-4]). Однако интерес к изучению возможного влияния воспалительного процесса у матери на транспланцентарный транспорт препаратов и экспозицию плода появился лишь в последнее время.
ABC-переносчики, ответственные за выведение веществ -белок-транспортер множественной лекарственной устойчивости 1 (MDR1, ABCB1, P-гликопротеин) и белок резистентности рака молочной железы (BCRP, ABCG2), - играют особую роль в экспозиции плода лекарственным препаратам, поскольку в большом количестве представлены в плаценте и принимают участие в ограничении плацентарного транспорта многих клинически значимых лекарств [5, 6]. Уровень базальной экспрессии ABCG2 в плаценте является наиболее высоким по сравнению с другими тканями [7]; это также наиболее высоко экспрессируемый переносчик ABC в плаценте, что указывает на важность его функции [8]. ABCG2 и ABCB1 локализуются на апикальной поверхности синцитиетрофо-бласта, выполняя функцию защитного механизма для плода,
активно устраняя субстраты, проникающие из кровотока матери, а также опосредуя клиренс эндогенных субстратов, поступающих из кровотока плода [9, 10].
Также плацента принимает участие в транспорте стероидных и тиреоидных гормонов, необходимых для сохранения беременности и нормального развития плода. В плаценте транспортный полипептид органических анионов (OATP) 2B1 (SLCO2B1) опосредует базолатеральный захват сульфа-тированных стероидных конъюгатов [11], таких как предшественник эстрогена, дигидроэпиандостерона сульфат (ДГЭА) и 3-сульфатный метаболит эстрогена. OATP4A1 (SLCO4A1), характеризующийся апикальной экспрессией, плацентарный захват гормонов щитовидной железы, жизненно важных для нормального роста и развития плода [12]. SLCO4A1 и SLCO2B1 - это два OATP с наиболее высоким уровнем экспрессии в плаценте человека. Однако в настоящее время данных, касающихся их участия в регуляции плацентарного транспорта, недостаточно [7]. Эти представители семейства OATP также вовлечены в транспорт некоторых лекарственных средств, имеющих клиническое значение [1].
На животных моделях исследовали влияние воспаления на экспрессию переносчиков в плаценте. Результаты исследований на беременных грызунах, предварительно получавших эндотоксин, продемонстрировали опосредованное воспалением снижение уровня плацентарной экспрессии нескольких переносчиков ABC и OATP с соответствующим изменением их активности. Кроме того, были получены доказательства снижения уровня фетальной экспозиции препарата [13-15]. Однако данные о влиянии воспаления и инфекции на транспорт лекарственных препаратов у беременных женщин ограничены, несмотря на то что многие распространенные акушерские осложнения связаны с воспалительной реакцией. Известно, например, что инфицирование значительно повышает уровни провоспалительных цитоки-нов, включая IL-6, в материнской сыворотке крови и амнио-тической жидкости [16]. Согласно опубликованным данным,
МАТЕРИНСКАЯ КРОВЬ
SLCO4A1
Апикальная часть
ABCB1
ABCG2
Слой
синцитиотрофобласта
Базолатеральная часть
SLCO2B1
КРОВЬ ПЛОДА
Рис. 1. Локализация АВСВ1, АВС02, Б1-С02В1 и Б1.С04А1 в плаценте. Клеточный слой синцитиотрофобласта плаценты экспрессирует ряд белков базально-латерального транспорта, которые вносят вклад в барьерную функцию плаценты. В их число входят группа мембранных транспортных белков БЮ, обеспечивающих захват Б1_С02В1 и Б1_С04А1, а также АВС-транспортеры, выводящих АВСВ1 и АВСв2 [8]
материнский бактериальный вагиноз развивается в 6-32% случаях беременности, хламидийная инфекция - в 2-21% случаев, а инфекции мочевыводящих путей вследствие стрептококковой бактериурии поражают 2-4% беременных [17, 18]. Эти бактериальные инфекции могут приводить к хориоамниониту - серьезному акушерскому осложнению, которое включает воспаление плаценты, а также плацентарную часть амниона и хорион. Эта инфекция осложняет до 4% всех родов, включая 1-2% своевременных и до 15% преждевременных родов [19, 20]. Недавно было обнаружено повышение уровня транскриптов ABCB1 и ABCG2 в плацентах на фоне воспалительной реакции после преждевременных родов (ПР). Эти данные коррелировали с повышением уровня К-8 [21]. До сих пор неизвестно, меняется ли в результате воспалительной реакции уровень плацентарной экспрессии этих переносчиков в случаях доношенной беременности и есть ли сопутствующие изменения уровня экспрессии переносчиков ОАТР. Поскольку уровень экспрессии белка часто сильно коррелирует с функциональными изменениями транспортной системы, цель данного исследования заключалась в более глубоком изучении уровня экспрессии мРНК и белков ABCG2 и АВСВ1, а также переносчиков SLC02B1 и SLC04A1 в плацентах, полученных после преждевременных и своевременных родов у женщин, беременность которых осложнялась инфекцией и воспалением. Хориоамнионит был выбран в качестве подходящего примера материнской инфекции в связи с его высокой распространенностью и значимостью в акушерстве. Перечисленные переносчики исследовали в связи с их важной ролью в трансплацентарном переносе клинически значимых эндо- и экзоген-
ных веществ. Более того, авторы полагают, что транспорт определенных субстратов совместно регулируется парами переносчиков, обеспечивающих их выведение и захват. Например, если специфический транспорт субстрата осуществляется одновременно BCRP и OATP2B1, скоординированная активность этих переносчиков играет важную роль в его трансплацентарном переносе [22]. Локализация переносчиков в синцитиотрофобласте, рассматриваемая в данном исследовании, представлена на рис. 1.
Материал и методы
Сбор образцов
В рамках программы биобанка Исследовательского центра здоровья матери и ребенка (RCWIH) в клинике Mount Sinai, Торонто, Канада, был проведен забор 50 образцов человеческой плаценты, соответствующих критериям включения/исключения. Исследование проводили в соответствии с политикой исследовательского этического комитета клиники Mount Sinai и принципами Хельсинкской декларации. Подробную информацию о получении образцов, обработке плаценты и проведении количественной оценки полученных данных можно найти на веб-сайте биобанка RCWIH http:// biobank.LunenfeLd.ca [23]. При своевременных и преждевременных родах образцы плаценты распределяли в группу хо-риоамниоита (INF-T и INF-PT) и контрольную группу (CTL-T и CTL-PT). Патологические изменения, сопровождающие случаи хориоамнионита, исследовали и классифицировали в соответствии с критериями, сформулированными RedLine и соавт. [24]. Данная система классификации включает 3 стадии прогрессирования заболевания (3 - наиболее высокая), причем каждая из них имеет 2 степени выраженности, характеризующие воспалительные реакции у матери и плода. Контрольные образцы плаценты собирали у здоровых женщин с соответствующим сроком гестации (своевременные или преждевременные роды). При проведении исследования авторы могли использовать все клинические данные, полученные из медицинских карт пациенток и собранные в рамках программы биобанка RCWIH для клиники Mount Sinai. Клинические данные всесторонне анализировали, чтобы убедиться в соответствии всех пациенток заданным критериям включения/исключения, а также в том, что все лекарственные препараты, применявшиеся пациентками, не являлись установленными ингибиторами или индукторами исследуемых переносчиков. Из контрольной группы исключали женщин с сопутствующими заболеваниями, способными повлиять на экспрессию переносчиков (например, различными эндокринными, сердечно-сосудистыми, гематологическими, неврологическими, воспалительными, аутоиммунными, почечными или печеночными осложнениями), а также женщин с диагностированными инфекциями, акушерскими осложнениями (включая преэклампсию, гестационный диабет и др.); женщин, выживших после злокачественных новообразований; и женщин, куривших либо употреблявших рекреационные наркотики в период беременности. Аналогичные критерии исключения применяли в отношении группы INF, за исключением диагностированной интраамниотической инфекции,
представляющей хориоамнионит. Образцы, включенные в настоящее исследование, были получены благодаря возможности доступа к материалам RCWIH биобанка с 2010 по 2013 г.
Вестерн-блоттинг и экспрессия транспортных белков
Из ткани плаценты массой 300 мг выделяли общие мембранные фракции. Образцы гомогенизировали при помощи автоматического пестика в лизирующем буфере (0,1 M ТРИС-HCl, pH 7,5, содержащий смесь ингибиторов протеаз 1-3 мкл/мл и фенилметилсульфонилфторид 50 мкг/мл; Sigma-Aldrich, Oakville, ON). Гомогенаты центрифугировали с ускорением 2000g в течение 20 мин; полученный супернатант повторно центрифугировали с ускорением 100 000g в течение 60 мин при температуре 4 °C. Белковый осадок промывали и растворяли в небольшом объеме лизирующего буфера. Для количественного определения концентрации общего белка использовали метод Бредфорда с применением в качестве стандартов бычьего сывороточного альбумина (БСА). Выделенные образцы белка (30-45 мкг) в загрузочном буфере Лэммли нагревали при температуре 36 °C в течение 20 мин, после чего разделяли при помощи электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии 10% додецилсульфата натрия и переносили на мембраны из по-ливинилидендифторида (PVDF) (Bio-Rad Laboratories Canada, Mississauga, ON).
Неспецифическое связывание блокировали, помещая мембраны PVDF в 5% раствор обезжиренного сухого молока в ТРИС-буферизированном физрастворе (TBST), после чего инкубировали всю ночь при температуре 4 °C с первичным антителом в 2% растворе обезжиренного молока в TBST. Использовали моноклональное антитело мыши к P-гликопротеину (клон F4, 1:500, Sigma-Aldrich), моноклональное антитело мыши к ABCG2 (клон BXP-21, 1:500, Abcam, Inc., Cambridge, MA), поликлональные антитела кролика к SLCO2B1 (1:1000, Sigma-Aldrich) и к SLCO4A1 (клон OATP-E H-145, Santa Cruz Biotechnology Inc., Santa Cruz, CA). Данные о молекулярной массе биомаркеров были получены из Bio-Rad Laboratories. Впоследствии мембраны промывали в TBST и инкубировали с вторичными антителами (антимышиными 1:3000 или антикроличьими 1:10 000, Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc., West Grove, PA), меченными пероксидазой хрена в 2% растворе обезжиренного молока в TBST. Для обнаружения иммунореактивных белков в мембранах использовали набор для хемилюминесцент-ного определения (Amersham Biosciences, Baie d'Urfe, QC), а для визуализации - устройство FluorChem Xplor (Alpha Innotech, San Leandro, CA). Для количественного анализа оптической плотности полос белка использовали программное обеспечение для визуализации Alpha Ease FC (Alpha Innotech). Для подтверждения эквивалентной белковой нагрузки все результаты нормализовали к уровню ß-актина (AC-15, 1:75,000, Sigma-Aldrich). Для контроля вариабельности между различными гелями при использовании каждого геля выполняли эксперимент с калибровочным образцом. Для каждого белкового блота нормализованные отношения белка преобразовывали в процент от калибровочного образца.
Анализ экспрессии мРНК посредством количественной полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (кОТ-ПЦР)
Методы экстракции РНК, синтеза комплементарной ДНК (кДНК) и кОТ-ПЦР были описаны ранее [23]. В общих чертах, общую РНК экстрагировали из 50-75 мг ткани плаценты при помощи реактива ТРИзол (Invitrogen, Carlsbad, CA). Выход и чистоту (A260/280>1,90 и A260/320>1,60) измеряли при помощи спектрофотометра NanoDrop (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA). 4 мкг экстрагированной общей РНК превращали в кДНК посредством реакции обратной транскрипции с использованием набора для кОТ-ПЦР Maxima First Strand cDNA Synthesis Kit (MBI Fermentas, Hanover, MD) в соответствии с инструкцией производителя, в амплификаторе Eppendorf (Eppendorf AG, Hamburg, Германия).
Концентрацию мРНК ABCB1, ABCG2, SLC02B1, SLC04A1, 1L-6, IL-1ß и TNF-a в плаценте с хориоамнионитом и плаценте из группы контроля соответствующего возраста ге-стации определяли при помощи количественной полиме-разной цепной реакции (ПЦР) с обратной транскрипцией с применением технологии LightCycler и флуоресцентрым выявлением красителя SYBR Green 1 (Roche Diagnostics, Montreal, QC). Олигонуклеотиды для ПЦР синтезировали в детской больнице The Hospital for Sick Children (Центр синтеза ДНК, Торонто, ON). Для исключения амплификации геномной ДНК их конструировали таким образом, чтобы они связывали соединения соседних экзонов. Последовательности праймеров для ABCB1, ABCG2 и ß-актина были описаны ранее [23]. Впервые созданные последовательности праймеров включали SLC02B1 5'-ACCGTTATTG CATCCCTGCT-3' (прям), 5'-CTCACCCGCTGGCCCTATC-3' (обр); SLC04A1 5'-TCCTGCACTAACGGCAACTC-3' (прям), 5'-CCGGGATGCCCCCTAGTA TT-3' (обр); 1L-6 5'-GGATTCAATGAGGAGACTTGCC-3' (прям), 5'-CATC TGCACAGCTCTGGCTT-3' (rev); IL-1ß 5'-AGATGAAGTGCTCCTTCCAGG-3' (прям), 5'-CATGGCCACAACAACTGACG-3' (обр); TNF-a 5'-CCCATG TTGTAGCAAACCCTC-3' (прям), 5'-ATGAGGTACAGGCCCTCTGA-3' (обр). Для количественного анализа уровня экспрессии использовали программное обеспечение Roche LightCycler 11 (версия 3.5). Экспрессию генов нормализовали к экспрессии мРНК ß-актина при помощи метода ACt с коррекцией эффективности реакции и выражали в виде отношения гена к ß-актину, представляя как процент от значений в контрольной группе. В некоторых образцах уровень отдельных транскриптов генов был ниже границ обнаружения.
Статистический анализ
Данные анализировали при помощи программного обеспечения Prism 6 (GraphPad Software, San Diego, CA). Для результатов вестерн-блоттинга и кОТ-ПЦР белок (или ген) в виде отношения исследуемый белок^-актин преобразовывали в процент от калибровочных величин, после чего представляли в виде процента от контроля для каждой плацентарной группы. Данные анализировали при помощи двустороннего í-критерия для независимых выборок или критерия Фишера наименьшей значимой разности с определением объединенного стандартного отклонения для групп. Для анализа силы линейной взаимосвязи между уровнем экспрессии цитокинов и уровнем переносчиков использо-
вали корреляцию Пирсона. Уровень значимости определяли для а=0,05 и обозначали как p<0,05. При отсутствии других указаний все результаты были представлены в виде средних значений ± стандартные ошибки (SE).
Результаты
Клинические характеристики
Значимые клинические характеристики пациентов контрольной группы и группы хориоамнионита перечислены в табл. 1. Авторы собрали 10 образцов плаценты, полученных в результате беременностей, осложненных хориоамнио-нитом и завершившихся в срок (^-Т, 39,8±0,6 нед), и 14 образцов плаценты, полученных в результате беременностей, завершившихся ПР (^-РТ, 29,3±2,5 нед). Образцы плацент от пациенток группы ^-Т получить было сложнее, поскольку одним из основных клинических исходов хориоамнионита являются ПР. ^-РТ классифицировали как 2-ю или 3-ю стадию, что указывало на промежуточную и выраженную степень воспалительной реакции у матери. Степень выраженности воспалительной реакции в образцах ^-РТ варьировала от легкой до тяжелой (1-3-я стадии). У большинства женщин с хориоамнионитом были документально зафиксированные
данные, касающиеся воспалительной реакции у плода. Помимо гистологических проявлений у большинства женщин из группы хориоамнионита также присутствовали клинические симптомы инфекции, включая лихорадку и тахикардию. Образцы плацент, составивших контрольную группу, как от доношенных беременностей (СК-Т, 38,8±0,8 нед), так и от беременностей, завершившихся ПР (СК-РТ, 32,8±2,5 нед), были получены у здоровых пациенток. Гистологическое исследование патологии не выявило. Несмотря на то что несколько контрольных образцов были получены у женщин с положительными результатами теста на колонизацию стрептококка группы В (GBS+), клинических данных, свидетельствующих в пользу инфицирования ни у одной женщины из контрольной группы не выявлено. Статус GBS+ является бессимптомным и отличается от случаев инфекции GBS. Препараты, применявшиеся у женщин, не являлись известными индукторами исследуемых переносчиков (дополнительные материалы к этой статье доступны по ссылке: http://dx.doi. огд/10.1016/].тУшр.2015.04.020).
Результаты статистического анализа представлены в виде средних значений ± стандартного отклонения (SD) Все остальные результаты приводятся в виде частоты (% от общего значения).
Таблица 1. Клинические данные
Характеристики Преждевременные роды, Преждевременные Своевременные роды, Своевременные
контрольная группа роды,ХА контрольная группа роды,ХА
(CTL-PT) (INF-PT) (CTL-T) (INF-T)
(n=14) (n=14) (n=12) (n=10)
Возраст, годы 32±5 33±5 31±3 35±4
Этническая принадлежность
Европеоиды 10 (71) 8 (57) 8 (67) 4 (40)
Азиаты 2 (14) 2 (14) 4 (33) 1 (10)
Негроиды 1 (7) 3 (21) 0 (0) 5 (50)
ИМТ 23±3 23±4 23±5 22±2
ХАа
Стадия 1 0 (0) 3 (30)
Стадия 2 8 (57) 5 (50)
Стадия 3 6 (43) 2 (20)
Воспаление у плодаь 12 (86) 4 (40)
Лейкоциты0, *103/мкл 11±2 14±4* 11±4 12±3
Статус GBSd
Положительный 3 (21) 1 (7) 1 (8) 1 (10)
Отрицательный 6 (43) 8 (57) 9 (75) 8 (80)
Неизвестен 5 (36) 5 (36) 2 (17) 1 (10)
Способ родоразрешения
Вагинальный 7 (50) 7 (50) 3 (25) 3 (30)
Кесарево сечение 7 (50) 7 (50) 9 (75) 7 (70)
Гестационный возраст, нед 32,8±2,5 29,3±2,5* 38,8±0,8 39,8±0,6*
Масса тела ребенка при 2088±539 1473±443* 3390±423 3633±327
рождении, г
Пол новорожденного
Мужской 11 (79) 9 (64) 7 (58) 7 (70)
Женский 3 (21) 5 (36) 5 (42) 3 (30)
Примечание. * Статистически значимое отличие от контрольной группы (p<0,05) аХА = хориоамнионит; классификация степени тяжести по Redline и соавт. [24].bВоспаление у плода любой степени выраженности. сСредние значения лейкоцитов соответствуют границам нормы для беременных женщин. dБессимптомная колонизация стрептококком группы B.
iE 800-1-га 800--t 700" Р 6001 500"
g 4001 300-
S. 200-
х 1000--
IL-1ß
CTL-PT INF-PT
CTL-T
INF-T
1200—I
800-L 800—р 7006005004003002001000
IL-6
CTL-PT INF-PT
CTL-T
INF-T
1200-1 800-L 800 j 7006005004003002001000
TNF-a
CTL-PT INF-PT
CTL-T
INF-T
Рис. 2. Изменения экспрессии мРНК провоспалительных цитокинов в тканях плаценты. Уровень экспрессии IL-1ß, IL-6 и TNF-a в группах CTL и INF преждевременных и своевременных родов измеряли при помощи кОТ-ПЦР в соответствии с алгоритмом, описанным в разделе «Материалы и методы». Данные представляют значения, определенные в отдельных образцах, нормализованные к уровню ß-актина, выраженные в процентном отношении от среднего значения в контрольной группе независимо от гестационного срока (p<0,05), при выполнении сравнения с данными соответствующей контрольной группы.
*
*
*
S & 12004
Ответная реакция провоспалительных цитокинов на материнскую инфекцию
Была исследована экспрессия провоспалительных цитокинов в образцах плаценты женщин контрольной группы и группы хориоамнионита, а также проведено сравнение полученных результатов для плацент от беременностей, завершившихся ПР, и для плацент от своевременных родов (рис. 2). Результаты анализа мРНК продемонстрировали значимую 2,5-кратную индукцию IL-1P, 3-кратную индукцию IL-6 и экспрессию TNF-a в образцах плаценты INF-PT, по сравнению с CTL-PT (p<0,05). Уровни экспрессии мРНК всех трех цитокинов сильно коррелировали друг с другом (коэффициент корреляции Пирсона г=0,84 и 0,83 для IL-1P по сравнению с IL-6 и TNF-a, соответственно, и г=0,76 для IL-6 по сравнению с TNF-a; p<0,0001 для всех трех корреляций). Что касается доношенных беременностей различий плацентарной экспрессии мРНК IL-1p, IL-6 и TNF-a между группами CTL-T и INF-T не выявлено.
Влияние материнской инфекции на уровень мРНК и экспрессии белка плацентарных ABC и OATP транспортеров
Уровень экспрессии ABCG2, ABCB1, SLCO2B1 и SLC04A1 исследовали в плацентах женщин с хориоамнионитом, у которых беременность завершилась преждевременными или своевременными родами (INF-PT и INF-T), а также в контрольной группе женщин с соответствующими гестацион-ными сроками (CTL-PT и CTL-T). При сравнении этих групп авторы отметили более низкий уровень экспрессии белков ABCG2 и ABCB1 у женщин с доношенной беременностью по сравнению с теми, у которых беременность завершилась ПР, что соответствует ранее полученным данным [9, 25], свидетельствующим об обратной пропорциональности уровня базальной экспрессии и гестационного возраста. Также авторы отметили более низкий уровень мРНК ABCG2, ABCB1 и SLCO2B1 в образцах плаценты от доношенных беременностей по сравнению с образцами, полученными после ПР (на основании сравнения средних значений Ct для образцов CTL-T и CTL-PT). В связи с этими временными различиями
уровней экспрессии переносчиков количественную оценку и анализ образцов из двух групп гестационного возраста авторы выполняли раздельно.
Что касается беременностей, завершившихся ПР, в плацентах, полученных у ^-РТ, было выявлено снижение экспрессии мРНК и белка ABCG2 приблизительно на 50% (соответственно до 48+11 и 52±13% от значений в контрольной группе) по сравнению с группой СК-РТ (рис. За, р<0,05). В плацентах, полученных от доношенных беременностей, авторы также наблюдали значимое снижение уровня экспрессии мРНК АВСв2 в группе ^-Т до 34+9% от уровня, определенного в образцах СК-Т (рис. Зб, р<0,05). В то же время значимых различий уровня экспрессии белка ABCG2 между ^-Т и СК-Т не выявлено.
В группе Ж-РТ наблюдалось статистически значимое снижение уровня плацентарной экспрессии мРНК БЬС02В1 -до 57+8% от уровня, определенного в группе СК-РТ (рис. 4а, р<0,05). Несмотря на то что уровень экспрессии белка SLC02B1 в образцах плаценты с хориоамнионитом от ПР был снижен до 68+8% от значений в группе СК-РТ, это изменение приближалось, но не достигло уровня статистической значимости (р=0,05) (рис. 4а, правая часть). Интерес вызывает обратная корреляция, наблюдавшаяся между SLC02B1 и К-1р/К-6 в образцах плаценты, полученных после ПР, значения которой были близки к статистически значимым (р=0,093 и 0,056 соответственно). Несмотря на отсутствие значимых различий уровня экспрессии мРНК между группами в случаях доношенных беременностей, уровень SLC02B1, поддающийся определению в иммунологическом анализе, в образцах Ж-Т был значимо снижен до 49+7% относительно СК-Т (рис. 4б, р<0,05). Статистически значимые различия экспрессии мРНК и белка SLC04A1 между группой хориоамнионита и контрольной группой отсутствовали; эти результаты были получены как в группе ПР (100+24 в сравнении с 71+16 для мРНК; 100+10 против 121+8 для белка), так и своевременных родов (100+30 в сравнении с 129+36 для мРНК; 100+5 против 103+4 для белка) (см. рис. 2).
В плацентах женщин из группы Ж-РТ уровень мРНК АВСВ1 был выше и в большей степени подвержен колебаниям по срав-
a) Преждевременные роды 150
= i
125
>== * « 100
75 50 25
^ cû ^ О Otö
i-s о^
о es
0
мРНКABCG2
■£ « I-^ CÛ ^
О о CS I- s ci
и ^
О CS
150 125 100 75 50 25 0
Белок ABCG2
CTL-PT
INF-PT
CTL-PT
INF-PT
б) Своевременные роды
150
100 -
-ÛCÎI-
лвк
OOCÎ i-s о^
нл
о es
50 -
мРНКABCG2
И I-
лвк
О О Й I- s ci
нл
О CS
200 -,
150-
100
50-
0
Белок ABCG2
CTL-T
INF-T
CTL-T
INF-T
ABCG2
ß-актин
Преждевременные роды CTL-PT INF-PT
Своевременные роды CTL-T INF-T
72 кДа
42 кДа
Рис. 3. Влияние инфекционного процесса на уровень экспрессии АВСв2 в плаценте. Экспрессия мРНК и белка в плацентах, полученных от (а) беременностей, завершившихся преждевременными родами и (б) беременностей, завершившихся своевременными родами; (в) репрезентативные иммуноблоты экспрессии белка АВСв2
0
в)
нению с группой CTL-PT (рис. 5a). Несмотря на то что средние значения мРНК ABCB1 не достигали уровня статистически значимых различий, они сильно коррелировали (p<0,0001) с уровнем транскриптов IL-6 (r=0,93), IL-1ß (р=0,87) и TNF-a (р=0,86) (рис. 5б). Значимых различий экспрессии белка ABCB1 между INF-PT и CTL-PT не выявлено. В образцах плаценты, полученных от доношенных беременностей, значимых различий уровня экспрессии мРНК или белка ABCB1 между группами CTL-T и INF-T не выявлено (100+38 по сравнению с 127+45 для мРНК; 100+19 против 63+9 для белка).
Обсуждение
В целом полученные результаты демонстрируют возможность модулирования плацентарного барьера при наличии воспалительного процесса в организме матери, как например, в случае хориоамнионита. Более значимое повышение уровня провоспалительных цитокинов в плацентах,
полученных после ПР у женщин с хориоамнионитом свидетельствует о цитокин-опосредованной регуляции функции переносчиков. Влияние воспалительных заболеваний на экспрессию переносчиков у человека было установлено в нескольких исследованиях [26, 27], однако лишь небольшое количество работ посвящено изучению влияния воспалительной реакции на уровень экспрессии переносчиков в плаценте человека. Результаты исследований in vivo и in vitro, проведенных на беременных грызунах и первичных клеточных линиях плаценты человека, продемонстрировали снижение уровня ABC-транспортеров, отвечающих за выведение веществ из плаценты в ответ на введение бактериального эндотоксина [13-15] или провоспалительных цитокинов [28].
У беременных женщин восходящая бактериальная инфекция влагалища и шейки матки может приводить к развитию хориоамнионита, который представляет подгруппу внутриматочных бактериальных инфекций [19, 29]. При
наличии инфекции уровень IL-1ß, IL-6 и TNF-a в амнио-тической жидкости значительно повышен [16, 29]. Более того, интраамниотическая инфекция и индукция цитокинов в высокой степени коррелируют с гистологическим хориоамнионитом [29]. Результаты данного исследования продемонстрировали 2,5-3-кратное повышение уровня экспрессии рассмотренных провоспалительных цитокинов в группе ПР с инфекцией, подтверждая развитие воспалительной реакции в плаценте у женщин с хориоамнионитом. В то же время у женщин с хориоамнионитом из группы своевременных родов значимого повышения уровня провоспалительных цитокинов не наблюдалось, что могло быть обусловлено степенью тяжести инфекции или сроком беременности. В подавлении высвобождения провоспалительных цитокинов в ответ на бактериальную инфекцию может играть роль высокий уровень прогестерона, секретируемого при доношен-
ной беременности, так как он связан с противовоспалительной активностью (ингибирует пути передачи сигнала клеток Т1п1 и сигнального NF-кB пути [30, 31]). При доношенной беременности хориоамнионит может проявляться как послеродовая инфекция, поэтому транзиторные эффекты в отношении уровня плацентарной мРНК цитокинов могут быть не столь выражены.
Уровень экспрессии мРНК и белка ABCG2 определяли посредством кОР-ПЦР (п=8-12/группе) и вестерн-блот-тинга (п=10-14/группе), соответственно, и нормализовали к уровню р-актина в соответствии с описанием в разделе «Материалы и методы». Прямоугольники представляют собой среднее значение +5£, выраженное как процент от значения в контрольной группе; статистические показатели вычисляли при помощи ¿-критерия, р<0,05, при проведении сравнения с данными контрольной группы.
а) Преждевременные роды
ы с 2
с ^ н в
р о
р
о к а н
н н и
.О а т
л в к
о о -а
Q. M gL
т и
н л
о а
к м
т р
о о
н
150 125 100 75 50 25 0
мРНК SLCO2B1
CTL-PT
INF-PT
б) Своевременные роды 200 -, Ц 175 e-g 150 1 * 1 125 100 75 50 25
-ûrti-OOiÎ i-s о^ о ctf
0
мРНК SLCO2B1
ы с 2
с ^ н в
р о
р
о к а н
н н и
.О а т
л в к
о о -а
р со GL
т и
н л
о а
к м
т р
о о
vp н
150 125 100 75 50 25 0
150 -,
Белок SLCO2B1
Ü -я 125-
о * нн -о CS лв а н и 100-
кт -а cà 75-
о. со
оа * s 50-
О о н 25-
CTL-PT
INF-PT
Белок SLCO2B1
CTL-T
INF-T
CTL-T
INF-T
SLCO2B1 ß-актин
Преждевременные роды CTL-PT INF-PT
Своевременные роды CTL-T INF-T
84 кДа 42 кДа
Рис. 4. Влияние инфекционного процесса на плацентарную экспрессию SLCO2B1. Уровни экспрессии мРНК и белка в плацентах, полученных от (а) беременностей, завершившихся преждевременными родами и (б) беременностей, завершившихся своевременными родами; (в) репрезентативные иммуноблоты экспрессии белка SLCO2B1. Уровень экспрессии мРНК и белка SLCO2B1 определяли посредством кОР-ПЦР (п=8-12/группе) и вестерн-блоттинга (п=10-14/группе) соответственно и нормализовали к р-актину в соответствии с описанием в разделе «Материалы и методы». Прямоугольники представляют среднее значение ± ЭЕ, выраженное как процент от значения из контрольной группы. Статистические показатели вычисляли с помощью {-критерия, р<0,05, при сравнении данных с данными группы контроля
0
в)
б)
1500 -| • IL-1 ß
■ ■ IL-6
о н и 1000 - ▲ А TNF-a
ш
Q_
500
A Vj
А
200
400 ABCB1
600
800
Рис. 5. Экспрессия ABCB1 в плаценте, полученной после преждевременных родов, из групп INF и CTL. (а) Уровень экспрессии мРНК и белка ABCB1 в образцах плаценты, полученных после преждевременных родов, который определяли посредством кОР-ПЦР (п=10-12/группе) и вестерн-блоттинга (п=13-14/группе), соответственно, нормализуя в уровню ß-актина в соответствии с методикой, описанной в разделе «Материалы и методы». Данные представлены в виде средних значений ± SE, выраженных в виде процента от значений, полученных в группе контроля; (б) корреляционный анализ Пирсона связи между уровнем экспрессией мРНК ABCB1 и мРНК цитокинов в группах CTL-PT и INF-PT. Корреляция с IL-1ß (р=0,87), IL-6 (r=0,93) и TNF-a (р=0,86), р<0,0001
0
0
Результаты продемонстрировали статистически значимое снижение уровня экспрессии ABCG2 в группе ПР у женщин с хориоамнионитом, проявляющееся как снижение уровня экспрессии мРНК и белка. В случаях доношенной беременности авторы также наблюдали статистически значимое снижение уровня мРНК ABCG2 в группе хориоамнионита, в то время как уровень экспрессии белка оставался неизменным. В целом эти результаты согласуются с ранее опубликованными данными об изменениях уровня Abcg2 в исследованиях на моделях бактериальной инфекции у животных, где в плацентах крыс после введения бактериального эндотоксина наблюдалось снижение уровня транскрипта и белка Abcg2 в 2 раза по сравнению с данными контрольной группы [15]. В исследовании Mason и соавт. [21], напротив, было отмечено значимое повышение уровня мРНК ABCG2 в образцах плаценты женщин с ПР и хориоамнионитом. В этом исследовании все образцы плаценты были получены от женщин с хориоамнионитом тяжелой степени (3-я стадии), поэтому, возможно, различия в группах пациенток могли внести вклад в получение противоречащих друг другу результатов. Поэтому, несмотря на то что авторы наблюдали значительное повышение уровня плацентарной экспрессии
TNF-a, К-6 и К-1р в исследуемых образцах плацент от ПР с хориоамнионитом, в аналогичной группе данного исследования не выявлено повышение уровня мРНК провоспа-лительных цитокинов. Также авторы не выявили значимой индукции цитокинов в образцах плацент от доношенных беременностей. Опосредованная цитокинами регуляция ABCG2 ранее была продемонстрирована в исследованиях, проводившихся на трофобластах плаценты человека, что свидетельствует об ингибирующем действии К-1р и TNF-a в отношении данного переносчика [28]. Более того, выявлено значимое снижение уровня плацентарной экспрессии ABCG2 мРНК в случаях беременности с синдромом задержки внутриутробного развития (плода), завершившихся ПР, что также сопровождалось значимой индукцией TNF-a. Однако статистически значимой корреляции между уровнями ABCG2 и мРНК цитокинов не выявлено [32].
Регуляция уровня экспрессии АВСВ1 (Р-гликопротеина) в плаценте человека до сих пор в полной мере не изучена. Несмотря на то что авторы не выявили значимых различий уровней экспрессии АВСВ1 в образцах плаценты, полученных от женщин с хориоамнионитом, уровень экспрессии в данной группе характеризуется гораздо большей вари-
абельностью. Интерес вызывает наблюдавшаяся сильная положительная статистически значимая корреляция между уровнем транскрипта ABCB1 и уровнем IL-6, IL-1P и TNF-a в образцах, полученных после ПР в данном исследовании. Такого рода данные согласуются с наблюдениями Mason и соавт. [21], отмечавших повышение уровня плацентарной экспрессии ABCB1, коррелирующего с уровнем IL-8 в случаях беременности, осложненной хориоамнионитом. Было установлено, что IL-ip и TNF-a регулируют экспрессию IL-8 в децидуальных клетках в III триместре беременности [33]. Схожие механизмы можно проследить в клетках трофобла-ста. Корреляции, наблюдавшиеся в данном исследовании, а также в исследованиях других авторов, свидетельствуют о том, что тяжесть инфекционного процесса может быть связана со степенью изменения экспрессии и функциональной активности транспортеров.
По аналогии с изменениями ABCG2 авторы наблюдали статистически значимое снижение уровня экспрессии мРНК и белка SLCO2B1 в группе ПР у женщин с хориоамнионитом. Уровень экспрессии белка данного базолате-рального переносчика в плацентах с хориоамнионитом от доношенных беременностей также был значимо снижен. Насколько известно авторам, это первые данные об индуцированных патологическим процессом изменении уровней экспрессии плацентарного SLCO2B1 у людей. Снижение уровня плацентарной экспрессии транскрипта SLco2b1 ранее было продемонстрировано у крыс после воздействия эндотоксина [15]. Влияние метаболических путей, опосредованных TNF-a, IL-6 и другими цитокинами, на процесс подавления экспрессии мРНК SLCO2B1 было продемонстрировано в экспериментах на первичных ге-патоцитах человека [34, 35]. Данные настоящего исследования, полученные в ходе исследовании плаценты, также позволяют предположить наличие таких путей, поскольку авторы наблюдали обратную корреляцию SLCO2B1 с уровнем IL-1P и IL-6. В то же время были получены данные об индукции транскриптов SLCO2B1 в образцах подвздошной и ободочной кишки, полученных от пациентов с хроническим заболеванием кишечника [36], что предполагает существование специфических для ткани или заболевания факторов такого рода.
В отличие от других переносчиков, различий в уровнях базальной экспрессии SLCO4A1 при ПР и своевременных родах в группе контроля не выявлено. Это соответствует данным исследования Loubitre и соавт. [12], согласно которым уровень экспрессии SLCO4A1 достигает значений, наблюдаемых на сроке доношенной беременности (27-34-я неделя гестации). Более того, авторы не выявили никакого значимого влияния хориоамнионита на уровень плацентарной экспрессии SLCO4A1. Насколько им было известно, до сих пор нет опубликованных данных о влиянии цитокинов на данный переносчик, осуществляющий захват веществ. Однако исходя из полученных данных нарушений уровня плацентарной экспрессии SLCO4A1 у пациенток с задержкой внутриутробного развития плода [12] - еще одним состоянием, связанным с повышением уровня циркулирующих провоспалительных цитокинов, также не выявлено [37]. Следует отметить, что ранее авторы сообщали
о снижении уровня мРНК SLCO4A1 в плаценте у крыс после введения эндотоксина, однако при этом изменения зависели как от времени, так и от дозы препарата, что позволяет предположить: эффекты могут определяться степенью тяжести заболевания [15].
Согласно опубликованным данным, уровень базальной экспрессии некоторых переносчиков снижается по мере увеличения срока гестации [9, 25], что соответствует наблюдавшемуся в данном исследовании снижению уровня базальной экспрессии ABCB1, ABCG2 и SLCO2B1 в контрольных образцах, собранных после своевременных родов (по сравнению с данными, полученными на образцах после ПР). Принимая во внимание то, что женщины из группы INF-PT в среднем рожали на 3 нед раньше, чем в группе CTL-PT, возможно, различия в уровнях экспрессии, наблюдавшиеся между этими группами были бы более выраженными, если бы исследователи учитывали изменения уровней экспрессии во времени. Кроме того, на ответную реакцию на воспалительные стимулы может влиять повышение уровня прогестерона в конце II и в III триместрах. Значение полученных результатов применительно к транспорту субстратов в плаценте человека еще предстоит выяснить. Ранее на животных моделях авторы установили, что изменения уровня переносчиков непосредственно связаны с изменениями уровней аккумуляции и экспозиции субстратов в организме плода [14, 15, 38, 39]. Поскольку наиболее выраженное влияние материнской инфекции наблюдалось в отношении экспрессии ABCG2 и SLCO2B1, необходимо исследовать влияние трансплацентарного транспорта на субстраты этих переносчиков. Любая регуляция векторного транспорта эндогенных субстратов, таких как эстрона-3-сульфат и ДГЭА через плаценту в результате снижения уровня их захвата переносчиком SLCO2B1 или снижения уровня их выведения переносчиком ABCG2, может оказать негативное влияние на синтез стероидных гормонов во время беременности. По аналогии степень экспозиции плода различным ксенобиотикам зависит от нормального функционирования транспортных белков. В число известных субстратов ABCG2 входят антибиотики (нитрофурантоин) и противодиабетические препараты (глибурид), часто назначаемые беременным для лечения инфекций мочевыводящих путей и гестационного диабета. Многие клинически важные антиретровирусные препараты также считают субстратами переносчиков, рассматриваемых в настоящем исследовании, и, следовательно, экспозиция плода может меняться при нарушении их функции. Это имеет особое значение, если принять во внимание более высокую распространенность материнских инфекций, таких как хориоамнионит, наблюдаемую у ВИЧ+-женщин [40].
Таким образом, полученные результаты демонстрируют, что воспалительный процесс в организме матери, развившийся вследствие акушерских осложнений, таких как хориоамнионит, изменяет уровень экспрессии важных переносчиков, осуществляющих выведение и захват лекарственных препаратов из плаценты человека. Несмотря на то что авторы выявили статистически значимые изменения уровней экспрессии ABCG2 и SLCO2B1, при более тяжелой инфекционном процессе может меняться уровень экспрессии и других переносчиков. Данные, подтверждаю-
щие корреляцию инфекционного процесса с уровнем экспрессии провоспалительных цитокинов, свидетельствуют в пользу вовлечении в процесс цитокин-опосредованных метаболических путей. В связи с высокой индивидуальной вариабельностью ответной реакции цитокинов и уровня экспрессии переносчиков, для более глубокого изучения влияния других инфекционных процессов или воспалительных заболеваний на уровень экспрессии и активность трансплацентарных переносчиков необходимо проведение исследований на более крупных популяциях пациентов. Полученные авторами результаты соответствуют данным, ранее полученным в экспериментах на моделях инфекций у грызунов. Однако специфические различия между изменениями, наблюдаемыми в плаценте грызунов и человека в ответ на воспалительную реакцию, диктуют необходимость в проведении более тщательного клинического изучения опосредованного переносчиками влияния на экспозицию плода лекарственными препаратами.
Благодарности
Авторы выражают благодарность донорам и программе биобанка Исследовательского центра здоровья матери и ребенка, исследовательскому институту Самюэля Луненфельда и клинике Маунт Синай/кафедре акушерства и гинекологии Университета системы здравоохранения за предоставление образцов ткани человека, использованных в данном исследовании (http://biobank.LunenfeLd.ca).
Данное исследование финансировалось за счет операционного гранта, предоставленного Канадским институтом медицинских исследований (CIHR). В. Петровик получил премию Doctoral Research Award от CIHR.
Приложение A. Дополнительные данные
Дополнительные данные к настоящей статье можно найти онлайн, перейдя по ссылке http://dx. doi.org/10.1016/j. intimp.2015.04.020.
СВЕДЕНИЯ О ВЕДУШЕМ АВТОРЕ
Мишлин Пикет-Миллер (M. Piquette-Miller) - сотрудник кафедры фармацевтических наук, фармацевтический факультет
Лесли Дан Торонтского университета, Торонто, Канада
E-maiL:m.piquette.miLLer@utoronto.ca
ЛИТЕРАТУРА
1. Staud F., Cerveny L., Ceckova M. Pharmacotherapy in pregnancy; effect of ABC and SLC transporters on drug transport across the placenta and fetal drug exposure // J. Drug Target. 2012. Vol. 20. P. 736-763.
2. Petrovic V., Teng S., Piquette-Miller M. Regulation of drug transporters during infection and inflammation // Mol. Interv. 2007. Vol. 7. P. 99-111.
3. Morgan E.T., Goralski K.B., Piquette-Miller M., Renton K.W. et al. Regulation of drug-metabolizing enzymes and transporters in infection, inflammation, and cancer // Drug Metab. Dispos. 2008. Vol. 36. P. 205-216.
4. Cressman A.M., Petrovic V., Piquette-Miller M. Inflammation-mediated changes in drug transporter expression/activity: implications for therapeutic drug response // Expert Rev. Clin. Pharmacol. 2012. Vol. 5. P. 69-89.
5. Behravan J., Piquette-Miller M. Drug transport across the placenta, role of the ABC drug efflux transporters // Expert Opin. Drug Metab. Toxicol. 2007. Vol. 3. P. 819-830.
6. Ni Z., Mao Q. ATP-binding cassette efflux transporters in human placenta // Curr. Pharm. Biotechnol. 2011. Vol. 12. P. 674-685.
7. Nishimura M., Naito S. Tissue-specific mRNA expression profiles of human ATP-binding cassette and solute carrier transporter superfamilies // Drug Metab. Pharmacokinet. 2005. Vol. 20. P. 452-477.
8. Morrissey K.M., Wen C.C., Johns S.J., Zhang L. et al. The UCSF-FDA transportal: a public drug transporter database // Clin. Pharmacol. Ther. 2012. Vol. 92. P. 545-546.
9. Hahnova-Cygalova L., Ceckova M., Staud F. Fetoprotective activity of breast cancer resistance protein (BCRP, ABCG2): expression and function throughout pregnancy // Drug Metab. Rev. 2011. Vol. 43. P. 53-68.
10. Vahakangas K., Myllynen P. Drug transporters in the human blood placental barrier // Br. J. Pharmacol. 2009. Vol. 158. P. 665-678.
11. Ugele B., St-Pierre M.V., Pihusch M., Bahn A. et al. Characterization and identification of steroid sulfate transporters of human placenta // Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 2003. Vol. 284. P. E390-E398.
12. Loubiere, L.S. Vasilopoulou E., Bulmer J.N., Taylor P.M. et al. Expression of thyroid hormone transporters in the human placenta and changes associated with intrauterine growth restriction // Placenta. 2010. Vol. 31. P. 295-304.
13. Chen Y.-H., Wang J.-P., Wang H., Sun M.-F. et al. Lipopolysaccharide treatment downregulates the expression of the pregnane X receptor, cyp3a11 and mdr1a genes in mouse placenta // Toxicology. 2005. Vol. 211. P. 242-252.
14. Wang J., Scollard D., Teng S., Reilly R. Detection of P-glycoprotein activity in endotoxemic rats by 99mTc-sestamibi imaging // J. Nucl. Med. 2005. Vol. 46. P. 1537-1545.
15. Petrovic V., Wang J.-H., Piquette-Miller M. Effect of endotoxin on the expression of placental drug transporters and glyburide disposition in pregnant rats // Drug Metab. Dispos. 2008. Vol. 36. P. 1944-1950.
16. Murtha A.P., Sinclair T., Hauser E.R., Swamy G.K. Maternal serum cytokines in preterm premature rupture of membranes // Obstet. Gynecol. 2007. Vol. 109. P. 121-127.
17. Money D.M., Dobson S. The prevention of early-onset neonatal group B streptococcal disease // J. Obstet. Gynaecol. Can. 2004. Vol. 26. P. 826-840.
18. Carter T.C., Olney R.S., Mitchell A.A., Romitti P.A. et al. Maternal self-reported genital tract infections during pregnancy and the risk of selected birth defects // Birth Defects Res. Part A Clin. Mol. Teratol. 2011. Vol. 91. P. 108-116.
19. Tita A., Andrews W. Diagnosis and management of clinical chorioamnionitis // Clin. Perinatol. 2010. Vol. 37, N 2. P. 339-354.
20. Edwards R.K. Chorioamnionitis and labor // Obstet. Gynecol. Clin. North Am. 2005. Vol. 32. P. 287-296.
21. Mason C.W., Buhimschi I.A., Buhimschi C.S., Dong Y. et al. ATP-binding cassette transporter expression in human placenta as a function of pregnancy condition // Drug Metab. Dispos. 2011. Vol. 39. P. 10001007.
22. Grube M., Reuther S., Meyer Zu Schwabedissen H., Kock K. et al. Organic anion transporting polypeptide 2B1 and breast cancer resistance protein interact in the transepithelial transport of steroid sulfates in human placenta // Drug Metab. Dispos. 2007. Vol. 35. P. 30-35.
23. Anger G.J., Cressman A.M., Piquette-Miller M. Expression of ABC efflux transporters in placenta from women with insulin-managed diabetes // PLoS One. 2012. Vol. 7. Article ID e35027.
24. Redline R.W., Faye-Petersen O., Heller D., Qureshi F. et al. Amniotic infection syndrome: nosology and reproducibility of placental reaction patterns // Pediatr. Dev. Pathol. 2003. Vol. 6. P. 435-448.
25. Sun M., Kingdom J., Baczyk D., Lye S.J. et al. Expression of the multidrug resistance P-glycoprotein, (ABCB1 glycoprotein) in the human placenta decreases with advancing gestation // Placenta. 2006. Vol. 27. P. 602-609.
26. Englund G., Jacobson A., Rorsman F., Artursson P. et al. Efflux transporters in ulcerative colitis: decreased expression of BCRP (ABCG2) and Pgp (ABCB1) // Inflamm. Bowel Dis. 2007. Vol. 13. P. 291-297.
27. Langmann T., Moehle C., Mauerer R., Scharl M. et al. Loss of detoxification in inflammatory bowel disease: dysregulation ofpregnane X receptor target genes // Gastroenterology. 2004. Vol. 127. P. 26-40.
28. Evseenko D.A., Paxton J.W., Keelan J.A. Independent regulation of apical and basolateral drug transporter expression and function in placental trophoblasts by cytokines, steroids, and growth factors // Drug Metab. Dispos. 2007. Vol. 35. P. 595-601.
29. Saji F., Samejima Y., Kamiura S., Sawai K. et al. Cytokine production in chorioamnionitis // J. Reprod. Immunol. 2000. Vol. 47. P. 185196.
30. McCracken S.A., Gallery E., Morris J.M. Pregnancy-specific down-regulation of NF-kappa-B expression in t cells in humans is essential for
the maintenance of the cytokine profile required for pregnancy success // J. Immunol. 2004. Vol. 172. P. 4583-4591.
31. Druckmann R., Druckmann M.-A. Progesterone and the immunology of pregnancy // J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 2005. Vol. 97. P. 389396.
32. Evseenko D.A., Murthi P., Paxton J.W., Reid G. et al. The ABC transporter BCRP/ABCG2 is a placental survival factor, and its expression is reduced in idiopathic human fetal growth restriction // FASEB J. 2007. Vol. 21. P. 3592-3605.
33. Lockwood C.J., Arcuri F., Toti P., De Felice C. et al. Tumor necrosis factor-alpha and interleukin-1beta regulate interleukin-8 expression in third trimester decidual cells: implications for the genesis of chorioamnionitis // Am. J. Pathol. 2006. Vol. 169. P. 1294-1302.
34. Le Vee M., Lecureur V., Stieger B., Fardel O. Regulation of drug transporter expression in human hepatocytes exposed to the proinflammatory cytokines tumor necrosis factor-alpha or interleukin-6 // Drug Metab. Dispos. 2009. Vol. 37. P. 685-693.
35. Le Vee M., Gripon P., Stieger B., Fardel O. Down-regulation of organic anion transporter expression in human hepatocytes exposed to the proinflammatory cytokine interleukin 1beta // Drug Metab. Dispos. 2008. Vol. 36. P. 217-222.
36. Wojtal K.A., Eloranta J.J., Hruz P., Gutmann H. et al. Changes in mRNA expression levels of solute carrier transporters in inflammatory bowel disease patients // Drug Metab. Dispos. 2009. Vol. 37. P. 18711877.
37. Bartha J., Romero-Carmona R., Comino-Delgado R. Inflammatory cytokines in intrauterine growth retardation // Acta Obstet. Gynecol. Scand. 2003. Vol. 82. P. 1099-1102.
38. Petrovic V., Piquette-Miller M. Impact of polyinosinic/polycytidylic acid on placental and hepatobiliary drug transporters in pregnant rats // Drug Metab. Dispos. 2010. Vol. 38. P. 1760-1766.
39. Anger G.J., Piquette-Miller M. Mechanisms of reduced maternal and fetal lopinavir exposure in a rat model of gestational diabetes // Drug Metab. Dispos. 2011. Vol. 39. P. 1850-1859.
40. Mwanyumba F., Gaillard P., Inion I., Verhofstede C. et al. Placental inflammation and perinatal transmission of HIV-1 // J. Acquir. Immune Defic. Syndr. 2002. Vol. 29. P. 262-269.
