CC BY
30
A.JI. Торопов \ K.H. Коротаева \ Е.О. Самоделкина 2, В.И. Циркин 2,
В.А. Вязников 3, Н.В. Проказова 4 ВЛИЯНИЕ ЛИЗОФОСФАТИДИЛХОЛИИА, ЯИЧНОГО ЖЕЛТКА И ГИСТИДИНА НА АДРЕНО- И М-ХОЛИНОРЕАКТИВНОСТЬ МЫШЦ
A.L. Toropov, K.N. Korotaeva, Е.О. Samodelkina, V.I. Tsirkin,
V. A. Vyaznikov, N. V.Prokazova INFLUENCE OF LYSOPHOSPHATIDYLCHOLINE, EGG YOLK AND HISTIDINE ON ADRENO- AND M-CHOLINOREACTIVITY OF MUSCLES
1 Вятский государственный гуманитарный университет 2Кировская государственная медицинская академия 3Кировская областная клиническая больница 4Институт экспериментальной кардиологии РКНПК, Москва
В опытах с изолированными мышечными объектами лизофосфатидилхин (ЛФХ) и куриный яичный желток (ЯЖ) как источник ЛФХ снижали |3-адренореактивность миометрия крысы и миокарда человека, а гистидин восстанавливал ее. В меньшей степени ЛФХ снижал М-холинореактивность миометрия и миокарда крысы (гистидин не восстанавливал ее) и а-адренореактивность кольцевых сегментов аорты крысы. Сделан вывод о том, что способность ЛФХ снижать эффективность активации рецепторов, сопряженных с G-белком, так же как и способность гистидина восстанавливать ее, зависит от типа рецепторов.
Ключевые слова: лизофосфатидилхолин, яичный желток, гистидин, миометрий, миокард, аорта, а- и (3-адренореактивность, М-холинореактивность.
In experiments with isolated muscular objects lysophosphatidylcholine (LPHCH) and a chicken egg yolk as a source of LPHCH reduced P-adrenoreacivity of rat myometrium and a human myocardium, but histidine restored it. To a lesser degree LPHCH reduced M-cholinoreactivity of rat myometrium and myocardium (histidine did not restore it) and a-adrenoreacivity of ring segments of rat aorta. The conclusion is that ability of LPHCH to reduce efficiency of activation of the receptors connected to G-protein, as well as the ability of histidine to restore it, depends on the type of receptors.
Key words: lysophosphatidylcholine, egg yolk, histidine, myometrium, myocardium, aorta, a- and P-adrenoreacivity, M-cholinoreactivity.
В последние годы ряд авторов рассматривает лизофосфатидилхолин (ЛФХ) как эндогенный фактор, который при определенной концентрации может нарушать эффективность передачи сигнала от рецепторов внутрь клетки [3, 5, 6, 7, 11, 12]. В частности, это показано в отношении М-холинорецепторов (М-ХР) миокарда лягушки и кролика [7, 13], М-ХР желудка крысы [5], [3-адренорецепторов (АР) миокарда лягушки и крысы [6], а-АР гладких мышц почечной артерии коровы [3]. Выявлено также, что куриный яичный желток (ЯЖ), как источник неферментативного образования ЛФХ, может также снижать М-холинореактивность миоцитов желудка [5] и матки [4] крысы. Оказалось, что сниженная ЛФХ а-адренореактивность миоцитов почечной артерии коровы [3] и Р-адренореактивность миокарда крысы [6] может восстанавливаться гистидином, триптофаном, тирозином, предукталом и
милдронатом. Цель нашей работы - продолжить изучение влияния ЛФХ и ЯЖ (как источника ЛФХ) на хемореактивность сократительных структур, которые ранее не исследовались, в частности, на Р-адренореактивность миометрия крысы и миокарда человека, на а-адренорективность гладких мышц аорты крысы и на М-холинореактивность миометрия и миокарда крысы, а также изучить на этих объектах способность гистидина восстанавливать хемореактивность, сниженную ЛФХ или ЯЖ.
Материалы и методы исследования
Выполнено 17 серий опытов, из них 6 серий - на 61 продольной полоске (длиной 5-8 мм и шириной 2-3 мм) рога матки 25 небеременных крыс, взятых в опыт в стадии метаэструса или диэструса; 6 серий - на 60 кольцевых сегментах (шириной 3-4 мм), выделенных из дуги и грудной части аорты 15 крыс-самцов; 4 серии - на 26 полосках (длиною 4-5 мм, шириной 3-5 мм) миокарда крысы и 1 серия - на полосках из 2 биоптатов миокарда правого ушка сердца человека, иссеченного в соответствии с технологией операции при постановке венозной канюли у пациентов при аортокоронарном шунтировании. Забой крыс осуществляли по "Правилам проведения работ с использованием экспериментальных животных" (приказ М3 СССР от 12.08.77). Регистрацию сократительной активности (СА) полосок матки и аорты крысы проводили по методу Циркина В.И. и соавт. [10], а сокращений миокарда - по методу Пенкиной Ю.А. и соавт. [6]. Для этого использовали "Миоцитограф", состоящий из рабочих камер (объемом 1 мл) для тест-объектов. Их непрерывно перфузировали раствором Кребса (при работе с миокардом - оксигенированным раствором Кребса) со скоростью 0,7 или 1,0 мл/мин при 38°С. Прибор содержал термостатирующее устройство, шприцевые дозаторы, самописцы и механоэлектрические преобразователи - механотроны 6МХ1С (МЭЛЗ, Москва) или датчик силы FSL05N2C (фирма Honeywell, США). Сокращения миокарда вызывали стимулами (1 Гц, 5 мс, 25-30 В) от электростимулятора типа ЭСЛ-01, а их регистрацию проводили с помощью аналого-цифрового преобразователя (ЛА-70) и персонального компьютера. Величину сокращений выражали в мН и в процентах к исходному уровню или к 1-му тестированию веществом. Как правило, для оценки влияния ЛФХ или ЯЖ на адрено- или М-холинореактивность тест-объект подвергался трехкратному воздействию адреналина, фенилэфрина или ацетилхолина - до, на фоне и после удаления ЛФХ или ЯЖ из среды. В работе применяли раствор Кребса (рН=7,4) или гиперкалиевый (60 мМ КС1) раствор Кребса (ГРК), а также адреналина гидрохлорид (Московский эндокринный завод), L-гистидин (Sigma-Aldrich, Япония), ацетилхолина хлорид (Acros, Бельгия-США), мезатон (фенилэфрин, 03 «ГНЦЛС», Украина), ЛФХ (Харьковский завод бактерийных препаратов, Украина), которые разводили раствором Кребса или ГРК Результаты исследования подвергнуты обработке методом параметрической статистики (в тексте они представлены в виде М±т); различия оценивали по критерию Стьюдента и считали их достоверными при р<0,05 [1].
Результаты исследования и их обсуждение
Влияние ЛФХ и гистидина на ингибирующий эффект адреналина
Серия 1, проведенная на 10 полосках матки, велась по схеме, включающей 14 этапов: РК —► Ад, 10'8 г/мл —► РК —► Ад, 10'8 г/мл + Гис, 10'6 г/мл —► РК —► ЛФХ, 10'4 г/мл —► ЛФХ, 10'4 г/мл + Ад, 10'8 г/мл + Гис, 10'6 г/мл—► РК —► Ад, 10'8 г/мл + Гис, 10'6 г/мл —► РК —► Ад, 10'8 г/мл + Гис, 10'4 г/мл—>РК. Установлено (Рис.1,А), что исходно суммарная СА у 10 полосок миометрия составляет 71,3±3,2 мН/10мин. ЛФХ (10'4 г/мл) незначительно повышал суммарную СА (до 108,7±2,8% от исходного уровня, р<0,05). Адреналин (10'8 г/мл) проявлял типичный ингибирующий эффект - снижал суммарную С А до 51,9±2,5% от исходного уровня (р<0,05). При совместном действии с гистидином (10'6 г/мл) его ингибирующий эффект достоверно (р<0,05) возрастал - суммарная СА в этом случае снижалась до 16,5±1,0% от исходного уровня. При действии адреналина (10'8 г/мл) совместно с ЛФХ (10'4 г/мл) и гистидином (10'6 г/мл), который на этом и последующих этапах использовался для снижения явления десенситизации, ингибирующий эффект адреналина незначительно, но достоверно (р<0,05) уменьшился, по сравнению с предыдущим воздействием (суммарная СА составила 21,3±1,3% от исходного уровня). После удаления ЛФХ ингибирующий эффект адреналина снизился еще более значительно - при воздействии адреналина совместно с гистидином (10'6 г/мл) суммарная С А уменьшалась соответственно лишь до 56,0±4,0% от исходного уровня. Аналогичный эффект отмечен и при повторном тестировании (55,5±3,8%). Увеличение концентрации гистидина в 100 раз (т.е. до 10'4 г/мл) не усилило достоверно ингибирующий эффект адреналина - и в этом случае суммарная СА снижалась лишь до 44,2±9,9% (различия с двумя предыдущими тестированиями носили недостоверный характер, р>0,1). Однако в отдельных опытах адреналин на фоне такой высокой концентрации гистидина вызывал полное угнетение спонтанной СА (Рис. 1,А), хотя сам по себе он, как установлено ранее [8,9], даже в высоких концентрациях не ингибирует СА миометрия крысы. Таким образом, можно утверждать, что ЛФХ снижает [3-адренореактивность миометрия крысы. Это снижение особенно выражено после удаления ЛФХ, т.е. после 10-минутного латентного периода, и оно сохраняется достаточно долго - не менее 60 минут. Примечательно, что гистидин, который восстанавливает эффективность активации [3-АР, сниженную под влиянием озона и других воздействий [8], даже в высокой концентрации не мог в должной мере проявить функцию внеклеточного и внутриклеточного шаперона (т.е. восстанавливающего фактора) при воздействии ЛФХ. Это говорит о глубоких изменениях, возникающих при действии ЛФХ в системе, обеспечивающей трансмембранную передачу сигнала от [3-АР к внутриклеточным эффекторам.
Рис. 1 Механограммы продольных полосок рога матки небеременных крыс,
демонстрирующие влияние лизофосфатидилхолина (10"4 г/мл; ЛФХ 4), куриного яичного желтка (1:50; ЯЖ 50) и гистидина (10'6, 10'4 г/мл; Гис 6, 4) на |3-адрено- и
о п
М-холинореактивность, оцениваемую по реакции соответственно на адреналин (10" или 10" г/мл; Ад 8 или Ад 7) или ацетилхолин (10"6 г/мл; Ах 6) в условиях спонтанной активности (панели А, В и Г) или на фоне тонуса, вызванного гиперкалиевым (60 мМ КС1) раствором Кребса (КС1, панель Б). Горизонтальные линии под механограммами соответствуют времени действия веществ; калибровка - 10 мН, 10 мин.
Влияние яичного желтка (ЯЖ) и гистидина на ингибирующий эффект адреналина в опытах с деполяризованным миометрием крысы.
Серия 2 проводилась на 10 полосках и состояла из 12 этапов: РК —> ГРК -► ГРК + Ад, 10'7 г/мл —► РК —► ГРК -► ГРК + ЯЖ, 1:50 ^ ГРК + ЯЖ + Ад, 10'7 г/мл —► КР —► ГРК —► ГРК + Ад, 10-7 г/мл —► ГРК + Ад, 10'7 г/мл + Гис, 10'4 г/мл —> РК. Данная серия проводилась для подтверждения вывода о Р-адреноблокирующем действии ЛФХ и о способности гистидина
восстанавливать эффективность проведения сигнала от [3-АР внутрь клетки. В этих опытах (Рис.1,Б) ГРК повышал тонус полосок до 16,2±1,6 мН. Тонус не изменялся под влиянием 50-кратного разведения ЯЖ (он составил 103,5±1,0% от исходного уровня). Адреналин (10'7 г/мл) при 1-м тестировании снижал тонус до 71,2±6,3% от его исходной величины (р<0,05), т.е. адреналин проявлял типичный ингибирующий эффект, воздействуя на метаботропные р2-АР. При 2-м тестировании, проводимом совместно с ЯЖ, адреналин снижал тонус до 74,0±6,6%, т.е. так же, как и при 1-м тестировании (р2-1>0,5). При 3-м тестировании, которое проводилось после удаления ЯЖ, адреналин снижал тонус лишь до 85,9±4,1%, т.е. достоверно меньше, чем при 1-м тестировании (Рз-1<0,05). При 4-м тестировании, которое осуществлялось совместно с гистидином (10'4 г/мл), адреналин снижал тонус уже до 60,2±5,4%, т.е. достоверно (р4_3<0,05) сильнее, чем при 3-м тестировании, и почти так же, как при 1-м тестировании. Это означает, что ЯЖ (как источник ЛФХ) снижает Р-адренореактивность миометрия, но не в период воздействия, а после 10-минутного латентного периода. Эффект последействия ЯЖ, с одной стороны, можно объяснить тем, что помимо ЛФХ в желтке имеются вещества, например, фосфатидилхолин, которые, как установлено [5,7], могут повышать эффективность активации рецепторов и тем самым препятствовать блокирующему действию ЛФХ. С другой стороны, наличие латентного
периода может быть связано с тем, что повреждающий эффект ЛФХ развивается лишь после того, как ЛФХ войдет в мембрану клетки и индуцирует в ней цепь событий, в том числе усиление ПОЛ и активацию протеинкиназы С, фосфорилирующую С-белок и другие вторичные посредники [7]. Результаты серии 2 «реабилитируют» гистидин (как шаперон), так как они продемонстрировали способность гистидина (10'4 г/мл) восстанавливать Р-адренореактивность, сниженную ЛФХ.
Влияние ЯЖ и гистидина на положительный инотропный эффект адреналина в опытах с изолированным миокардом человека.
В серии 3, проводимой по схеме: РК —► Ад —► РК —► ЯЖ, 1:50 —► ЯЖ, 1:50 + Ад -► ЯЖ, 1:50 + Ад + Гис 4 —► РК —► Ад —► Ад + Гис 4 —► РК, (Рис.2,А) желток не влиял на амплитуду вызванных электростимулами сокращений миокарда - на его фоне она составила 91,4±10,4% от исходного уровня, равного 3,0±0,3 мН. Адреналин (10'6 г/мл) при 1-м тестировании повышал амплитуду сокращений до 127,2±8,8% от их исходного уровня (р<0,05), т.е. проявлял типичный положительный инотропный эффект. При 2-м тестировании (совместно с ЯЖ) адреналин также достоверно повышал амплитуду сокращений (до 132,2±6,9%), как и при 1-м тестировании (р2-1>0,1). При 3-м тестировании (после удаления ЯЖ) адреналин повышал амплитуду сокращений только до 109,9±2,6%, что достоверно (р<0,05) ниже, чем при 2-м тестировании. При 4-м тестировании, проводимом совместно с гистидином (10'4 г/мл), адреналин не повышал достоверно амплитуду сокращений (она составила 112,7±6,3% от исходного уровня, р>0,1). Однако в отдельных экспериментах адреналин вызывал выраженный положительный инотропный эффект. Косвенно это говорит о способности гистидина восстанавливать эффективность активации Р-АР, сниженную ЛФХ.
В целом результаты серии 3 позволяют заключить, что ЛФХ, содержащийся в ЯЖ, снижает Р-адренореактивность миокарда человека, а гистидин может восстанавливать ее, но лишь при использовании его в концентрациях, превышающих 10'4 г/мл. Обращает на себя внимание, что Р-адреноблокирующий эффект ЯЖ (как источника ЛФХ) наблюдается, как и в опытах с миометрием крысы, не в момент его воздействия, а после удаления из среды, т.е. с 10-минутным латентным периодом. Это мы объясняем причинами, указанными выше. Результаты опытов с миокардом человека
РК Ах 6 РК Ж50 Ж50 Ж50 РК Ах 6 РК
Ах 6 Ах 6 Гис 4
Рис. 2. Механограммы миокарда человека (панель А) и крысы (панель Б) демонстрирующие влияние адреналина (10"6 г/мл; Ад 6), ацетилхолина (10"6 г/мл; Ах 6), куриного яичного желтка в разведении 1:50 (Ж50), гистидина (10"4 г/мл; Гис 4) на амплитуду сокращений, вызванных электростимулами (1 Гц, 5 мс, 25-30 В). Горизонтальная линия с разделителями означает момент воздействия соответствующего вещества или группы веществ; РК - раствор Кребса; калибровка - 1 мН, 1 мин.
согласуются с данными, полученными в опытах с миокардом лягушки и крысы [6], в том числе, о способности гистидина восстанавливать Р-адренореактивность кардиомиоцитов, сниженную ЛФХ. С этих позиций мы полагаем, что при чрезмерном накоплении ЛФХ в кардиомиоцитах человека, которое, как известно [7], может происходить при активации ПОЛ, будет снижаться эффективность активации Р-АР и тем самым, как считается в литературе [2], будут создаваться предпосылки к формированию артериальной гипертензии. Поэтому для профилактики гипертонии очевидна перспективность применения гистидина, и, как показано Пенкиной Ю.А. и совт. [6], триптофана, тирозина, милдроната и, вероятно, предуктала.
Влияние ЛФХ на тонотропный эффект фенилэфрина (ФЭ) в опытах кольцевыми сегментами аорты крысы.
В сериях 4-9 опыты велись по схеме, включающей 10 этапов: РК —» ФЭ —» РК —» ЛФХ —» РК —» ЛФХ + ФЭ —» РК —» ФЭ —» РК. Исследовались 3 концентрации ЛФХ (10'6 - 10'4 г/мл) и 2 концентрации ФЭ (10'6 и 10'5 г/мл). Установлено, что ЛФХ в концентрациях 10'6и 10'5 г/мл соответственно в 45% и 61% опытов снижает базальный тонус сегментов, а в концентрации 10'4 г/мл не влияет на него. Фенилэфрин как а-адреномиметик в концентрации 10'6 г/мл при 1-м тестировании повышал базальный тонус сегментов на 2,6±0,3 мН, при
2-м тестировании, проводимом совместно с ЛФХ в одной из концентраций (10'6, 10'5 или 10'4 г/мл) ФЭ повышал тонус соответственно до 129,6±16,6% (р2-1>0,1), 171,7±12,0% (р2-1<0,05) и 105,3±16,7% (р2-1>0,1) от тонуса, наблюдаемого при 1-м тестировании. Т.е. во всех случаях ЛФХ не снижал тонотропный эффект ФЭ, а в концентрации 10'5 г/мл даже повышал его. При
3-м тестировании, проводимом после удаления ЛФХ (10'6, 10'5 или 10'4 г/мл),
ФЭ повышал тонус сегментов соответственно до 137,9±19,9% (рз.^ОД),
189,9±19,8% (рз_1<0,05) и 127,3±21,5% (рз-1,2>0,1). Следовательно, и в этом случае ФЭ сохранял способность повышать тонус миоцитов, причем после воздействия ЛФХ в концентрации 10'5 г/мл эта его способность достоверно возрастала. Таким образом, ЛФХ не снизил эффективность активации а-АР, возникающей под влиянием ФЭ в концентрации 10'6 г/мл, а даже усилил ее. Это усиление, возможно, связано с тем, что ЛФХ блокирует Р-АР миоцитов аорты, при активации которых, как показали наши опыты с обзиданом и атенололом, тонотропный эффект ФЭ снижается на 20-30%.
При исследовании эффектов ФЭ в концентрации 10'5 г/мл мы смогли наблюдать и а-адреноблокирующее действие ЛФХ. Оно преимущественно наблюдалось после удаления ЛФХ. Действительно, при 2-м тестировании, проводимом совместно с ЛФХ в одной из концентраций (10'6, 10'5 и 10'4 г/мл), ФЭ повышал тонус соответственно до 126,5±15,0% (Р2-1>0Д), 83,8±8,7% (Р2-1>0,1) и 114,1±19,0% (Р2-1>0Д) от тонуса, наблюдаемого при 1-м тестировании ФЭ. При 3-м тестировании, проводимом после удаления
А
ФЭ - 6 ЛФХ - 6 фэ_б--- ФЭ - 6
ФЭ - 6
ФЭ-6
Рис. 3. Механограммы кольцевых полосок аорты крысы, демонстрирующие влияние лизофосфатидилхолина (ЛФХ) в концентрациях 10"6, 10'5 и 10'4 г/мл (соответственно панели А, Б и В) на вазоконстрикторный эффект фенилэфрина (10'6 г/мл; ФЭ - 6). Горизонтальные линии под механограммами соответствуют времени действия веществ; калибровка 10 мН, 10
ЛФХ, он повышал тонус соответственно до 107,7±31,3% (рз-1,2>0,1), 73,0±7,4% (р3-1<0,05) и 87,9±9,6% (р3-1,2>0,1).
В целом, результаты серий 4-9 указывают на сравнительно высокую устойчивость а-адренергического механизма в миоцитах аорты крысы к действию ЛФХ, что согласуется и с данными Zhang R. et al. [12], полученными в опытах с мезентериальной артерией крысы. В этом отношении миоциты аорты крысы существенно отличаются от миоцитов почечной артерии коровы, а-адренореактивность которых дозозависимо снижается под влиянием ЛФХ (10“7—10"4 г/мл), причем этому снижению препятствуют гистидин, триптофан,
тирозин, милдронат и предуктал [3]. Все это означает, что артериальные сосуды по устойчивости миоцитарного а-адренергического механизма к ЛФХ можно разделить на два типа - 1) относительны устойчивые к воздействию ЛФХ и 2) блокируемые ЛФХ. Следовательно, при чрезмерном накоплении ЛФХ у части сосудов может снижаться а-адренореактивность миоцитов и это будет способствовать формированию артериальной гипертензии. Не исключено, что применение указанных аминокислот, а также милдроната и предуктала как экзогенных шаперонов, будет эффективным при ее профилактике.
Влияние ЛФХ, гистидина и яичного желтка на эффект ацетилхолина в опытах с миометрием крысы.
В опытах серий 10-12, проводимых по схеме: РК —► АХ —► РК —► ЛФХ, 20 мин —► ЛФХ+АХ —► РК —► АХ —► РК (Рис 1,В) с продольными полосками рога матки небеременных крыс ЛФХ (при его воздействии в одной из концентраций - 10'6, 10'5 и 10'4 г/мл) не влиял на их спонтанную С А, так как на его фоне суммарная СА составила соответственно 103,3±9,3%, 98,8±7,3% и 80,9±11,4% от исходного уровня, который в абсолютных значениях был равен соответственно 42,8±7,5; 43,3±12,2 и 41,9±4,7 мН/10 мин. Ацетилхолин (АХ, 10'6 г/мл) при 1-м тестировании достоверно (р<0,05) повышал суммарную СА соответственно до 117,4±17,9; 107,6±11,6 и 102,4±10,4 мН/10 мин. При 2-м тестировании, проводимом на фоне ЛФХ (10'6, 10'5 и 10'4 г/мл), АХ повышал суммарную СА соответственно до 106,0±10,1%, 102,6±8,3% и 103,8±7,4% от уровня, наблюдаемого при 1-м тестировании (р2-1>0,1), т.е. оказывал такой же утеростимулирующий эффект, как и при 1-м тестировании. При 3-м тестировании, т.е. после удаления ЛФХ, он повышал суммарную СА соответственно до 115,6=ь17,7% (рз-1,2>0Д), 103,5±7,4% (рз-1,2>0,1) и 123,0±6,0% (рз_1<0,05) от уровня, наблюдаемого при 1-м тестировании (р2-1> ОД), т.е. оказывал такой же эффект, как при 1-ми 2-м тестированиях. Таким образом, в сериях 10-12 нам не удалось выявить М-холиноблокирующую активность ЛФХ. Это противоречило данным Кононовой Т.Н. [4] о том, что ЯЖ как источник ЛФХ дозозависимо снижает утеростимулирующий эффект АХ в опытах с миометрием крысы. Поэтому мы провели серию 13 (РК—> АХ —> РК —► ЯЖ —► ЯЖ+АХ —► РК —► АХ —► РК —► АХ+Гист -► РК), в которой исследовали влияние ЯЖ (1:50) на сократительный эффект АХ, а также исследовали влияние гистидина (10'4 г/мл) на эффект АХ. В этих опытах ЯЖ (1:50) не влиял на суммарную СА (Рис. 1,Г) - она составила 113,3±7,9% от исходного уровня, равного 52,2±5,7 мН/10 мин. АХ (10'6 г/мл) при 1-м тестировании достоверно (р<0,05) повышал суммарную СА до 184,1±35,7 мН/10 мин. При 2-м тестировании, проводимом совместно с ЯЖ, он повышал суммарную СА до 155,7±21,9 мН/10 мин, или до 90,7±10,7% от суммарной СА, наблюдаемой при 1-м тестировании. Это означает, что ЛФХ, содержащийся в ЯЖ, не снизил утеростимулирующий эффект АХ. При 3-м тестировании (после удаления ЯЖ) он повышал суммарную СА лишь до 132,8=ь31,1 мН/10 мин, или до 71,4±9,5% от 1-го тестирования (р3_1<0,05), т.е. достоверно ниже, чем при
1-м тестировании. Следовательно, ЯЖ снижает М-холинореактивность миоцитов матки крысы, что частично согласуется с данными Кононовой Т.Н [4]. При 4-м тестировании, проводимом совместно с гистидином (10'4 г/мл), АХ повышал суммарную СА до 135,0±22,2 мН/10 мин, или до 82,2±19,6% от 1-го тестирования (р4_13>0,1), т.е. не сильнее, чем при 3-м тестировании. При этом ни в одном опыте гистидин не усилил эффект АХ. Это означает, что гистидин не восстанавливает М-холинореактивность миоцитов матки, сниженную ЯЖ.
Таким образом, если серии 10-12 не позволили выявить М-холиноблокирующую активность ЛФХ, то результаты серии 13 говорят о противоположенном - ЯЖ, содержащий ЛФХ, может снижать эффективность активации М-ХР миоцитов матки крысы. Это противоречие дает нам основание утверждать, что М-холинергический механизм в миоцитах матки крысы относительно устойчив к блокирующему действию ЛФХ, причем степень этой устойчивости, вероятно, зависит от интенсивности ПОЛ в миометрии, что, в свою очередь, может определяться сезоном года и другими факторами [8]. Мы не исключаем, что интенсивность ПОЛ в миоцитах матки при проведении серий 10-12 была намного ниже, чем при проведении серии 13. Мы также полагаем, что в миоцитах матки крысы система «М-ХР-внутриклеточные эффекторы» более устойчива к разобщающему действию ЛФХ и менее чувствительна к гистидину как внутриклеточному шаперону, чем система «Р-АР-внутриклеточные эффекторы» в этих клетках.
Влияние ЛФХ, гистидина и яичного желтка на отрицательный инотропный эффект ацетилхолина в опытах с изолированным миокардом крысы. В сериях 14-16, проводимых по схеме: РК—>АХ—►
РК—>ЛФХ—>ЛФХ+АХ—>РК—>АХ—>РК при регистрации вызванных
электростимулами сокращения полосок миокарда крысы установлено (Рис 2,Б), что ЛФХ в концентрации 10'6 г/мл не влияет на их амплитуду (на фоне ЛФХ она составила 93,1±6,4% от исходного уровня, равного 2,2±0,1 мН). В то же время в концентрациях 10'5 и 10'4 г/мл ЛФХ достоверно (р<0,05) снижал ее соответственно до 80,0±7,9% и 74,2±7,1% от исходного уровня. В опытах, в которых изучали изменение М-холинореактивности миокарда крысы под влиянием ЛФХ в концентрации 10'6 г/мл, было показано, что при 1-м тестировании ацетилхолин (АХ, 10'6 г/мл) достоверно (р<0,05) снижает амплитуду сокращений до 78,7±5,7% от фонового уровня, т.е. проявляет типичный отрицательный инотропный эффект. При 2-м тестировании, проводимом совместно с ЛФХ, он также достоверно снижал амплитуду сокращений (до 84,1±4,8% от фонового уровня), как и при 1-м тестировании. В то же время при 3-м тестировании (после удаления ЛФХ), он уже не проявлял отрицательный инотропный эффект - амплитуда сокращений при воздействии АХ составила 91,1±7,1% от фонового уровня (р>0,1). Таким образом, ЛФХ в концентрации 10'6 г/мл снижает эффективность активации М-ХР кардиомиоцитов крысы, но не в момент воздействия, а после 10-минутного латентного периода. Аналогичные данные были получены нами при исследовании ЛФХ в концентрациях 10'5и 10'4 г/мл. Действительно, в опытах с
ЛФХ в концентрации 10'5 г/мл амплитуда сокращений при трех тестированиях АХ (до, на фоне и после удаления ЛФХ) составила соответственно 69,1 ±4,6%*, 88,6±6,6%* и 89,2±5,9% от фонового уровня (* -различие с фоном достоверно, р<0,05), а в опытах с ЛФХ в концентрации 10'4 г/мл - соответственно, 74,9±4,3%*, 79,0±4,2%* и 97,8±6,8% от фонового уровня.
Таким образом, нами установлено, что ЛФХ в концентрациях 10'6, 10'5 и 10'4 г/мл снижает эффективность активации М-ХР миокарда крысы, но не в момент воздействия, а после удаления из среды, т.е. с 10-минутным латентным периодом. Ранее в опытах с изолированным миокардом лягушки и кролика было показано [7,13], что ЛФХ снижает эффективность активации М-ХР и в период воздействия, и после него. Таким образом, результаты наших исследований лишь частично совпадают с данными литературы и указывают на то, что у крысы устойчивость кардиомиоцитов к М-холиноблокирующему действию ЛФХ, вероятно, выше, чем у лягушки и кролика.
Серия 17 с миокардом крысы (РК—>АХ—>РК—>ЯЖ—>ЯЖ+АХ—► ЯЖ+АХ+ Гист—>РК—► АХ—>РК) проводилась для доказательства способности ЛФХ, входящего в состав ЯЖ, проявлять М-холиноблокирующее действие, и для оценки способности гистидина восстанавливать эффективность трансмембранной передачи сигнала от М-ХР, сниженную ЛФХ. Установлено (рис. 2,В), что ЯЖ (в разведении 1:50) не влияет на амплитуду вызванных сокращений полосок миокарда крысы - при его воздействии она составила 92,8±7,6% от фонового уровня, равного 3,6±0,5 мН. Ацетилхолин (АХ, 10'6 г/мл) при 1-м тестировании достоверно (р<0,05) снижал амплитуду сокращений (до 90,7±2,0% от фонового уровня). При 2-м тестировании, проводимом совместно с ЯЖ, ингибирующий эффект АХ носил недостоверный характер (р>0,1) - амплитуда сокращений при его воздействии составляла 92,9±3,5% от исходного уровня. Следовательно, ЯЖ снизил способность АХ проявлять отрицательный инотропный эффект. При 3-м тестировании проводимом на фоне ЯЖ и гистидина (10'4 г/мл), АХ также не оказывал отрицательный инотропный эффект. Более того, в этом случае амплитуда вызванных сокращений составила 120,2±3,4%, что, вероятно, связано, со способностью гистидина проявлять положительный инотропный эффект. При
4-м тестировании (после удаления ЯЖ и гистидина) АХ по-прежнему не оказывал отрицательный инотропный эффект - в этом случае амплитуда сокращений составила 93,4±3,2% от исходного уровня. Эти данные также косвенно указывают на то, что стимулирующий эффект гистидина имеет обратимый характер.
Таким образом, результаты серии 17 указывают на то, что ЯЖ как источник ЛФХ проявляет М-холиноблокирующую активность; она сохраняется и после удаления ЯЖ. Гистидин не восстанавливает эффективность активации М-ХР, сниженную под влиянием ЯЖ как источника ЛФХ. Это указывает на то, что способность гистидина восстанавливать эффективность проведения сигнала от рецепторов, сопряженных с С-белком, к внутриклеточным эффекторам, является относительно избирательной, т.е. преимущественно она касается адренорецепторов.
Заключение
Результаты исследований говорят о способности ЛФХ (зависимой от типа рецепторов) снижать эффективность передачи сигнала от рецепторов, ассоциированных с G-белком, внутрь клетки. Это означает, что чрезмерное накопление в клетках ЛФХ, например, при активации ПОЛ, может существенно снизить возможность нервной и гуморальной регуляции деятельности клеток. В отношении адренорецепторов, вероятно, эту ситуацию можно избежать путем повышения содержания в среде таких шаперонов как гистидин, триптофан и тирозин. Это указывает на перспективность клинического применения этих аминокислот для профилактики и лечения болезней, возникающих вследствие снижения эффективности адренергических воздействий.
Список литературы
1. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М.: Практика, 1999. 459 с.
2. Демина Н.Л., Циркин В.П., Тарловская Е.И., Костяев A.A. Альфа-адреномодулирующая активность сыворотки крови при артериальной гипертензии // Рос. кардиол. журнал. 2008. № 1 (69). С. 65-70.
3. Кашин Р.Ю., Ноздрачев А.Д., Циркин В.И. Модуляция сократительных ответов гладких мышц почечной артерии коровы на адренергические, холинергические и деполяризующие воздействия // Вестник С-Петербург, университета. Сер. 3 (биология). 2010. Вып. 1. С. 55-71.
4. Кононова Т.Н. Роль эндогенных ß-адрено- и М-холиномодуляторов в регуляции деятельности систем организма человека // Автореф. дис. ... к.б.н. Киров, 2004. 20 с.
5. Куншин A.A., Циркин В.П., Проказова Н.В. Влияние лизофосфатидилхолина, фосфатидилхолина и куриного яичного желтка на сократительные эффекты ацетилхолина в опытах с гладкими мышцами желудка крысы // Бюл. эксп. биол.и медицины. 2007. Т.143. № 6. С. 4-7.
6. Пенкина Ю.А., Ноздрачев А.Д., Циркин В.И. Влияние сыворотки крови человека, гистидина, триптофана, тирозина, милдроната и лизофосфатидилхолина на инотропный эффект адреналина в опытах с миокардом лягушки и крысы // Вестник С.-Петербург, университета. Серия 3 (Биология). 2008. Выпуск 1. С. 55-68.
7. Проказова Н.В., Звездина Н.Д., Коротаева A.A. Влияние
лизофосфатидилхолина на передачу трансмембранного сигнала внутрь клетки. Обзор //Биохимия. 1998. Т. 63. Вып. 1. С. 38-46.
8. Сизова Е.Н., Циркин В.И. Физиологическая характеристика эндогенных модуляторов ß-адрено- и М-холинореактивности. Киров, 2006. 183 с.
9. Сизова Е.Н., Циркин В.И., Туманова Т.В. Влияние пищевых аминокислот на сократительную способность, ß-адрено- и М-холинореактивность гладких мышц крыс // Вопросы питания. 2008. Т.77. № 5. С. 26-32.
10. Циркин В.И., Дворянский С.А., Ноздрачев А.Д. и др.
Адреномодулирующие эффекты крови, ликвора, мочи, слюны и
околоплодных вод человека // ДАН. 1997. Т.352. № 1. С. 124-126.
11. Takenouchi T., Sato M., Kitani H. Lysophosphatidylcholine potentiates Ca2+ influx, pore formation and p44/42 MAP kinase phosphorylation mediated by P2X7 receptor activation in mouse microglial cells. // J. Neurochem. 2007. Vol. 102, № 5. P.1518-1532.
12. Zhang R., Rodrigues B., MacLeod K. Lysophosphatidylcholine potentiates phenylephrine responses in rat mesenteric arterial bed through modulation of thromboxane A2. // J. Pharmacol. Exp. Ther. 2006. Vol.317. №1. P.355-361.
13. Zvezdina N.D., Prokazova N.V., Vaver V.A. et al. Effect of lysolecithin and lecithin of blood serum on the sensitivity of heart to acetylcholine // Biochem. Pharm. 1978. Vol. 27. № 10. P. 2793-2801.
