Влияние литохолевой кислоты на биохимические маркеры воспаления и антиоксидантной защиты в слизистой оболочки полости рта крыс Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-ТЕОРЕТИЧНИЙ РОЗД1Л

УДК 616.36-002-07:616.316-078.33

А. П. Левицкий, д. биол. н., С. А. Демьяненко, к. мед. н., Л. Н. Хромагина, к. мед. н., О.Э. Кнава

ГУ "Институт стоматологии НАМН Украины"

ВЛИЯНИЕ ЛИТОХОЛЕВОЙ КИСЛОТЫ НА БИОХИМИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ ВОСПАЛЕНИЯ И АНТИОКСИДАНТНОЙ ЗАЩИТЫ В СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ПОЛОСТИ РТА КРЫС

При аппликации на слизистую оболочку полости рта крыс геля, содержащего литохолевую кислоту, установлено увеличение уровня маркеров воспаления: МДА (в языке) и эла-стазы (в щеке и в сыворотке крови), а также увеличение активности каталазы и антиоксидантно-прооксидантного индекса АПИ в слизистой щеки и в сыворотке крови. Ключевые слова: литохолевая кислота, слизистая полости рта, МДА, эластаза, каталаза.

А. П. Левицький, С. О. Дем Яненко, Л. М. Хромагша, О. Е. Кнава

ДУ "1нститут стоматологи НАМН Укра'ши"

ВПЛИВ ЛIТОХОЛЕВОÏ КИСЛОТИ НА БЮХШ1ЧН1 МАРКЕРИ ЗАПАЛЕННЯ IАНТИОКСИДАНТНОГО ЗАХИСТУ В СЛИЗОВШ ОБОЛОНЦ1 ПОРОЖНИНИ РОТА ЩУР1В

При аплжаци на слизову оболонку порожнини рота щурiв геля, який метить лтохолеву кислоту, встановлено тдви-щення рiвня маркерiв запалення: МДА (в язищ) i еластази (в щощ i в сироватщ кров€), а також тдвищення активностi каталази та антиоксидантно-прокосидантного тдекса АП1 в слизовш оболонщ щоки i в сироватщ кровi. Ключов1 слова: лтохолева кислота, слизова порожнини рота, МДА, еластаза, каталаза.

A. P. Levitskij, S. A. Demjanenko, L. N. Khromagina, O. E. Knava

SE "the Institute of Dentistry of the NAMS of Ukraine"

THE INFLUENCE OF LITHOCHOLIC ACID UPON BIOCHEMICAL MARKERS OF INFLAMMATION AND ANTIOXIDANT PROTECTION IN ORAL MUCOUS MEMBRANE OF RATS

The applications of gel, containing lithocholic acid, on oral mucous membrane of rats, the growth of the level of markers of inflammation: MDA (in tongue) and elastase (in cheek and blood serum), as well as the increase in activity of catalase and anti-oxidant-prooxidant index API in mucous membrane of cheek and in blood serum, was determined.

Key words: lithocholic acid, oral mucous membrane, MDA, elastase, catalase.

Известно, что при холестазе наблюдаются воспалительно-дистрофические изменения в полости рта,

причиной которых, как считают, являются желчные кислоты [1, 2]. Вместе с тем, имеется ряд работ, которые, напротив, свидетельствуют о благоприятном (защитном) действии желчных кислот при ишемии [3] и токсическом гепатите [4].

Цель настоящего исследования. Изучение влияния желчной кислоты на состояние слизистой оболочки полости рта (СОПР) крыс. Состояние СОПР оценивали по изменению уровня биохимических маркеров воспаления и дистрофии (активность эластазы и концентрация МДА), а уровень антиоксидантной защиты контролировали по активности каталазы и индексу АПИ. В качестве желчной кислоты была избрана литохолевая кислота (ЛХК) - самая токсичная желчная кислота [5].

Материалы и методы исследования. В опыте было использовано 18 крыс линии Вистар (самцы, возраст 13-15 мес., живая масса 350-400 г), которых распределили на 3 группы: 1-ая - контроль; 2-ая - аппликации по 1 мл геля литохолевой кислоты на крысу (1 мг/мл КМЦ, 2,5 %) на 4 часа; 3-я - аппликации геля с (ЛХК) на 24 часа.

Эвтаназию крыс осуществляли под тиопентало-вым наркозом (20 мг/кг) путем тотального кровопускания из сердца. Выделяли слизистые щеки и языка, из которых готовили гомогенаты на 0,05М трис-НС1 буфере рН 7,5 из расчета 20 мг/мл (для щеки) и 50 мг/мл (для языка).

В гомогенатах слизистых определяли концентрацию малонового диальдегида (МДА) с помощью тио-барбитуровой кислоты [6], а активность эластазы с использованием синтетического субстрата [7]. Активности антиоксидантного фермента каталазы определяли молибдатным методом [8]. По соотношению активности каталазы и концентрации МДА рассчитывали антиоксидантно-прооксидантный индекс АПИ [9]. В сыворотке крови определяли концентрацию МДА, активности каталазы и эластазы, а также антиокси-дантно-прокосидантный индекс АПИ.

Результаты исследования и их обсуждение. На рис. 1 представлены результаты определения содержания МДА в слизистой щеки и языка крыс, которым делали аппликации (ЛХК). Из представленных данных видно, что существенное увеличение уровня маркера воспаления наблюдается спустя сутки (правда, достоверное увеличение наблюдается только в слизистой языка).

На рис. 2 показано изменение активности другого маркера воспаления - эластазы. Из этих данных видно, что активность эластазы реагирует на введение ЛХК уже через 4 часа, однако достоверное увеличение активности эластазы наблюдается только через 24 часа (да и то лишь в слизистой щеки).

На рис. 3 представлены результаты определения активности антиоксидантного фермента каталазы. Из представленных данных видно, что в слизистой щеки

© Левицкий А. П., Демьяненко С. А., Хромагина Л. Н.,

Кнава О. Э, 2011.

"Вiсник стоматологИ", № 4, 2011

3

ЛХК вызывает значительное увеличение активности каталазы (через 24 часа почти в 2,5 раза). В слизистой языка наблюдается лишь тенденция к увеличению активности каталазы.

Полученные данные свидетельствуют о своеобразном защитном действии желчной кислоты, что подтверждает данные о способности ЛХК стимулиро-

Рис. 1. Влияние литохолевой кислоты на уровень МДА в СОПР крыс: * - р<0,05.

Рис. 2. Влияние литохолевой кислоты на активность эластазы в СОПР крыс: * - р<0,05.

вать биосинтез другого антиоксидантного фактора -глутатиона [4].

Результаты определения индекса АПИ (рис. 4) аналогичны тем, что наблюдались с каталазой.

Рис. 3. Влияние литохолевой кислоты на активность каталазы в СОПР крыс: * - р<0,001.

Рис. 4. Влияние литохолевой кислоты на индекс АПИ в СОПР крыс: *

- р<0,001.

В таблице представлены результаты определения биохимических маркеров воспаления и антиокси-дантной защиты в сыворотке крови крыс после аппликаций на десну ЛХК. Как видно из этих данных, уровень МДА имеет тенденцию к снижению, что можно объяснить достоверным увеличением активности антиоксидантного фермента каталазы. Это обстоятельство определяет то, что индекс АПИ достоверно увеличен во все сроки исследования после аппликации ЛХК. Локальное действие этой желчной кислоты сказывается на общесоматическом статусе, о чем свидетельствует достоверное увеличение в сыворотке крови одного из биохимических маркеров воспаления - активности эластазы.

Таблица

Влияние литохолевой кислоты на биохимические маркеры воспаления и антиоксидантной защиты в сыворотке крови крыс

Таким образом, проведенные нами исследования указывают на двойственный характер воздействия желчных кислот на СОПР: с одной стороны, они несколько активируют воспалительные процессы, а с другой, - индуцируют активацию защитных систем, в данном случае, антиоксидантной системы. Возможно, эти различия в характере биологического действия желчных кислот могут зависеть от их природы и (или) концентрации. Дальнейшие исследования в этом направлении должны дать ответы на поставленные вопросы.

Выводы. 1. Литохолевая кислота при аппликации на слизистую полости рта увеличивает уровень маркеров воспаления: МДА (в языке), и эластазы (в щеке и сыворотке крови).

2. Литохолевая кислота значительно увеличивает активность каталазы и индекс АПИ в слизистой щеки и сыворотке крови, что свидетельствует о ее защитном действии не только на слизистую полости рта, но и на весь организм.

Список литературы

1. Демьяненко С. А. Применение лецитиновых гепа-топротекторов в стоматологии / С. А. Демьяненко - Симферополь: Тарпан, 2010. - 52 с.

2. Биохимические маркеры воспаления и дисбиоза в слюне больных холециститом / А. П. Левицкий, С. А. Демьяненко, П. И. Пустовойт [и др.] // Вюник стоматологи. -2011. - № 1. - С. 21-23.

3. Cholestasis protects the liver from ischaemic injury and post-ischaemic inflammation in the mouse / P. Georgiev, A. A. Navarini, J. J. Eloranta [et al.] // Gut. - 2007. - V. 56, № 1. -Р. 121-128.

4. Tan K. P. Activation of nuclear factor (Erythroid-2 Like) factor 2 by toxic bile acids provokes adaptive defence re-

sponses to enhance cell survival at the emergence of oxidative stress / K. P. Tan, M. Yang, S. Ito // Mol. Pharmacol. - 2007. -V. 72, № 5. - Р. 1380-1390.

5. Hofmann A. F. Detoxification of lithocholic and, a toxic bile acid: relevance to drug hepatotoxicity / A. F. Hofmann // Drug. Metab. Rev. - 2004. - V. 36. - Р. 703-722.

6. Стальная И. Д. Метод определения малонового ди-альдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты / И. Д. Стальная, Т. Г. Гаришвили // Современные методы в биохимии. - М. : Медицина, 1977. - С. 66-68.

7. Левицкий А. П. Методы определения активности эластазы и ее ингибиторов: метод. рекомендации / А. П. Левицкий, А. В. Стефанов. - К. : ГФЦ, 2002. - 15 с.

8. Гирин С. В. Модификация метода определения активности каталазы в биологических субстратах / С. В. Гирин // Лабораторная диагностика. - 1999. - № 4. - С. 45-46.

9. Биохимические маркеры воспаления тканей ротовой полости (метод. рекомендации) / А. П. Левицкий, О. В. Деньга, О. А. Макаренко [и др.] - Одесса, 2010. - 16 с.

Поступила 17.10.11

УДК 612.017+616.36

А. П. Левицкий, д. биол. н., И. И. Соколова, д. мед. н., М. И. Скидан, К. В. Скидан, к. мед. н.

ГУ "Институт стоматологии НАМН Украины" ГУ "Харьковский национальный медицинский университет"

БИОХИМИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ ВОСПАЛЕНИЯ И ДИСБИОЗА В ДЕСНЕ КРЫС ПРИ ЛОКАЛЬНОМ ДЕЙСТВИИ ЛИТОХОЛЕВОЙ КИСЛОТЫ

При аппликации геля литохолевой кислоты (1 мг/мл) на десну крыс установлено повышение концентрации МДА (в 2 раза) и активности каталазы (в 3 раза). Активность ли-зоцима, напротив, достоверно снижалась. В сыворотке крови концентрация МДА и активность ферментов (эластазы и уреазы) мало изменились, за исключением некоторого снижения активности лизоцима.

Ключевые слова: литохолевая кислота, десна, МДА, ката-лаза, эластаза, уреаза, лизоцим.

А. П. Левицький, 1.1. Соколова, М. I. Скидан, К. В. Скидан

ДУ «1нститут стоматологи НАМН Укра!ни» ДУ «Харювський нацюнальний медичний ушверситет»

БЮХ1М1ЧШ МАРКЕРИ ЗАПАЛЕННЯ I ДИСБ1ОЗУ В ЯСНАХ ЩУР1В ЗА ЛОКАЛЬНО! ДП ЛГГОХОЛЕВО1 КИСЛОТИ

Аплжащя гелю лтохолевоI кислоти (1 мг/мл) на ясна щурiв тдвищуе концентрацю МДА (в 2 рази) та активтсть ка-талази (в 3 рази), активтсть лiзоциму, навпаки, достовiр-но знижуе. В сироватц кровi концентращя МДА i активтсть ферментiв (еластази i уреази) мало змтювались, за винятком деякого зниження активностi лiзоциму.

© Левицкий А. П., Соколова И. И., Скидан М. И., Скидан К. В., 2011.

Показатели Внешние аппликации ЛХК

0 часов 4 часа 24 часа

МДА, мкмоль/л 0,16±0,02 0,14±0,01 р>0,05 0,13±0,01 р>0,05

Каталаза, мкат/л 0,08±0,01 0,10±0,01 р>0,05 0,11±0,01 р<0,05

Индекс АПИ, ед. 5,00±0,22 7,14±0,33 р<0,05 8,46±0,46 р<0,001

Эластаза, мк-кат/л 254,8±13,1 293,0±14,2 р>0,05 302,1±18,7 р<0,05