CC BY
87
УДК: 615.326:552.52
ВЛИЯНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ МОНТМОРИЛЛОНИТ СОДЕРЖАЩЕГО СОРБЕНТА И pH ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ НА ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ ESCHERICHIA COLI К АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫМ ПРЕПАРАТАМ
В.Д. БУХАНОВ1, А.И. ВЕЗЕНЦЕВ1 НГУЕН ХОАЙ ТЬЯУ2, А.А. ШАПОШНИКОВ1 О.Н. ПАНЬКОВА3, П.В. СОКОЛОВСКИЙ1 Л.А. КОЗУБОВА1, С.В. ЖЕРЕБНЕНКО4
1)Белгородский государственный национальный исследовательский университет
“Институт экологических технологий Академии наук и технологий Вьетнама
зБелгородский филиал Всероссийского института экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко
4)Белгородская государственная сельскохозяйственная академия имени В.Я. Горина
В данной статье представлены результаты сравнительного определения чувствительности Escherichia coli к энро-флоксацину и доксициклину, а также итоги исследований по выяснению влияние концентрации обогащённого монтмориллонит содержащего сорбента и рН питательной среды на чувствительность кишечной палочки к антибактериальным препаратам.
Ключевые слова: колибактериоз, определение чувствительности, Escherichia coli, питательные среды, энрофлоксацин, доксициклин, монтмориллонит содержащий сорбент, композиционные препараты.
e-mail: vesentsev@bsu.edu.ru
Желудочно-кишечные болезни человека и животных были и остаются актуальной проблемой для современной медицины и ветеринарии. При этом в нозологической структуре алиментарных инфекций колибактериоз занимает одно из ведущих мест. Вариантная многофакторность данного заболевания делает его трудно контролируемым, в результате чего сельскохозяйственной отрасли наносятся колоссальные убытки от заболевания и падежа животных в пре - и постнатальные периоды развития [1, 2, 3, 4].
Большая вариабельность штаммов Escherichia coli, а также высокая степень изменчивости, затрудняют специфическую профилактику и лечение животных, больных колибактерио-зом. Применяемые антимикробные препараты (антибиотики, сульфаниламиды, нитрофураны) и другие терапевтические средства в большинстве своем малоэффективны и экологически опасны, в связи с образованием антибиотикоустойчивых штаммов и снижением общей реактивности организма животных. Наряду с этим они являются причиной аллергических состояний и часто приводят к развитию дисбактериоза [5, 6].
Терапевтические мероприятия, как правило, осуществляются по двум взаимодополняющим направлениям - введением в организм необходимого и полезного и выведением из организма излишнего и вредного. В большинстве случаев преобладает первое направление, но постепенно зреет понимание важности и необходимости второго, свидетельством чего является успешное развитие эфферентных методов в медицине. В связи с тем, что ухудшается общее экологическое состояние окружающей среды: возрастает воздействие промышленных и бытовых загрязнителей, пестицидов, гербицидов, нитратов, нитритов, стимуляторов роста, антибиотиков, других биохимически чужеродных субстанций, электромагнитных полей и т.д., организм человека и животных постоянно подвергается влиянию различных ксенобиотиков. Поэтому дополнительное введение еще одного лекарственного препарата может привести к отрицательным последствиям, вместо ожидаемых положительных результатов. В этой ситуации полезны методы эфферентной медицины, позволяющие корригировать состояние внутренней среды и снижать токсическую нагрузку на организм [7, 8].
Веществами, способными на своей поверхности адсорбировать патогенные микроорганизмы и продукты их жизнедеятельности, являются энтеросорбенты, это облегчает поиск и разработку современной наукой лекарственных соединений, обладающих высокой эффектив-
ностью при лечении и профилактике колибактериоза и влияющих на патогенные микроорганизмы, независимо от их антигенного состава [9].
В настоящее время накоплен большой массив научно обоснованной информации по практическому использованию энтеросорбции. Кроме того, создание композиционных препаратов, с использованием различных групп сорбентов, расширило возможности применения энтеросорбции в комплексном лечении острых кишечных инфекций, поскольку энтеросорбенты являются средством с многогранной эффективностью, определяемой не только их симптоматическим (антидиарейным) и патогенетическим (дезинтоксикационным и др.), но и этиотропным действием, как в отношении патогенных бактерий, так и вирусов [10].
Однако многие зарегистрированные энтеросорбенты пока еще не нашли широкого применения в силу различных причин:
1) недостаточной информированности врачей о роли энтеросорбентов в лечении больных животных с инфекционной и неинфекционной патологией желудочно-кишечного тракта;
2) незнания достоинств и недостатков тех или иных сорбентов при конкретной болезни и фактически существующего, пока еще скептического, отношения врачей к энтеросорбции.
Поскольку в Российской Федерации и Вьетнаме имеются огромные залежи монтморил-лонитовых глин, то целью нашей совместной работы явилось изучение чувствительности Escherichia coli к антибактериальным препаратам и их сочетаниям с различными концентрациями обогащённого монтмориллонит содержащего сорбента при различных значениях pH питательной среды.
Материал и методы исследований. Определение чувствительности Escherichia coli к энрофлоксацину и сочетанию энрофлоксацина с сорбентом проводили общепринятым методом двойных последовательных разведений препаратов в жидкой питательной среде. Разведение препаратов производили в мясопептонном бульоне (МПБ). Каждый ряд разведений состоял из 9 пробирок, содержащих по 5 мл МПБ. В первом ряду пробирок концентрация энрофлоксацина в начальной пробирке составляла 4, в последней - 0,016 мкг/мл. Второй ряд разведений энрофлоксацина 1:1 с сорбентом содержал аналогичные концентрации каждого ингредиента. В третьем ряду разведений энрофлоксацина с сорбентом концентрация энрофлоксацина была такой же, как и в предыдущих рядах, а сорбента составила: 2-3 пробирки - 4 мкг/мл, в последующих - 2 мкг/мл.
В контроле использовали два ряда пробирок. Первый ряд разведений содержал только сорбент в концентрации от 4 до 0,016 мкг/мл. Во втором контрольном ряду был энрофлоксацин с сорбентом в концентрациях, аналогичных второму опытному ряду. В трёх опытных и первом контрольном рядах десятые пробирки содержали только МПБ.
После выполненных разведений в каждую пробирку (кроме второго контрольного ряда) вносили 0,1 мл суточной культуры Escherichia coli (500000 микробных клеток), что составило 100000 микробных клеток на 1 мл МПБ. Во второй контрольный ряд разведений культура кишечной палочки не вносилась, с целью проверки стерильности приготовленных разведений в МПБ.
В следующем эксперименте выяснение влияния концентрации обогащённого монтмориллонит содержащего сорбента и рН питательной среды на чувствительность Escherichia coli к энрофлоксацину и доксициклину осуществляли диско-диффузионным методом на агаре Мюллера - Хинтон (МХА). Исследования проводили в одноразовых чашках Петри диаметром 5,5 см, три ряда по одиннадцать чашек. Предварительно в чашки Петри вносили: в первую (20 мг) и вторую (10 мг) каждого ряда - стерильные навески обогащенного монтмориллонит содержащего сорбента и по 1 мл стерильного изотоническиго раствор натрия хлорида, в последующие (с 3 по 10) - по 1 мл разведений стерильного сорбента в концентрациях с 500 до 3,91 мкг/мл в изотоническом растворе натрия хлорида. Для опыта было подготовлено три флакона по 110 мл МХА. После автоклавирования и охлаждения МХА до 45-42оС, производили установку уровней рН среды: в первом флаконе до 6, во втором - до 7, в третьем - до 8. Далее в эти среды вносили суточную культуру Escherichia coli, из расчёта 1х107 КОЕ (Колониеобразующих единиц) в 1 мл МХА. Затем в каждую чашку приливали по 9 мл МХА и тщательно суспендировали с сорбентом. После уплотнения МХА на её поверхность помещали диски, содержащие энрофлоксацин (5 мкг фирмы Байер) и доксициклин (10 мкг ФГУН НИИЭМ имени Пастера, С.-Петербург). В контрольные чашки (одиннадцатые) каждого ряда вносили только 10 мл МХА, инфицированной Escherichia coli.
Пробирки и чашки с исследуемыми разведениями культивировали в течение 16-18 часов в термостате при температуре 37о С. После чего проводили учёт полученных результатов. С целью получения достоверных результатов опыты повторялись троекратно.
Определение концентрации кишечной палочки проводили с помощь прибора для определения мутности бактериальной суспензии Densi - La - Meter, принцип работы которого осно-
ван на оптической абсорбции суспензии с выдачей результата измерения в единицах по МакФарланду.
Обработку цифрового материала проводили методом вариационной статистики с применением критерия достоверности по Стьюденту, на персональном компьютере с использованием программы Excel.
Результаты исследований. На основании проведенных исследований установлена антибактериальная активность энрофлоксацина и его сочетаний с обогащённым монтмориллонит содержащим сорбентом по отношению к кишечной палочке (табл. 1).
Представленные в таблице 1 данные свидетельствуют о высокой чувствительности кишечной палочки к комплексному препарату, сочетающему 1:1 энрофлоксацин с сорбентом, где концентрация каждого препарата составляет 0,063 мкг/мл бульона. Минимальная ингибирующая концентрация энрофлоксацина, по сравнению с указанной композицией, в отношении эшерихий оказалась ниже (0,125 мкг/мл). Это сочетание, как показал эксперимент, помимо общеизвестной детоксикационной функции энтеросорбента (активное поглощение токсинов снижает как местный, так и общий токсикоз, уменьшает метаболическую нагрузку на органы детоксикации: печень, почки, иммунную систему), приводит к синергетическому усилению бак-териостатического эффекта. Также нельзя не обратить внимания на постепенное увеличение количества микробных клеток в жидкой питательной среде (с 7 по 9 пробирки), в которой содержание энрофлоксацина снижалось 2-кратными разведениями. Данный эффект не проявлялся в сочетании энрофлоксацина с сорбентом. При использовании энрофлоксацина с сорбентом количество микробных клеток (8-9 пробирки) нарастало более интенсивно, это даёт основание полагать, что энрофлоксацин частично связывается сорбентом.
Руководствуясь полученными результатами, можно вполне определённо сказать, что при сочетании энрофлоксацина с сорбентом в соответствующих концентрациях 2, 1, 0,5 мкг/мл и 4, 4, 2 мг/мл проявляется бактериостатическое действие композиционного препарата. Иначе выглядел механизм антимикробного действия изучаемого сочетания, если уровень сорбента повышался до 4-2 мг/мл питательной среды. Подтверждением сделанного вывода служат не-изменившиеся показателями денсиламетра, как до, так и после культивирования исследуемого штамма в совокупности с вышеуказанными комбинациями препаратов.
Таблица1
Чувствительность Escherichia coli к энрофлоксацину и его сочетаниям с монтмориллонит содержащим сорбентом
№ п/п Препарат Концентрация сорбента, мкг/мл. Конт- роль
4 2 1 0,5 0,25 0,125 0,063 0,031 0,016
Оптическая плотность в единицах по Мак-Фарланду, мг/мл
1 Энрофлоксацин - - - - - - + + + +
0 0 0 0 0 0 1,5 1,9 3,8 5,0
2 Энрофлоксацин + - - - - - - - + + +
Сорбент 0 0 0 0 0 0 0 2,7 4,1 5,2
3 Энрофлоксацин + - - - + + + + +
Сорбент 4 4 2 2 2 2 2 2 +
Показатели оптической мутности до культивирования
9,8 9,8 7,0 7,0 7,0 7,0 7,0 7,0
Показатели оптической мутности после культивирования
9,8 9,8 7,0 10,0 11,0 11,0 11,0 11,0 5,1
Контроль
1 Сорбент + + + + + + + + + +
4,7 4,8 4,7 4,7 4,7 4,7 5,0 5,0 4,8 4,7
2 Энрофлоксацин + - - - - - - - - -
Сорбент 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Примечание: + наличие роста кишечной палочки; - отсутствие роста кишечной палочки.
В последующих сочетаниях, с более низкими концентрациями энрофлоксацина от 0,016 до 0,25 мкг/мл, но с постоянным уровнем сорбента (2 мг/мл), отмечался рост кишечной палочки с показателем оптической плотности по Мак-Фарланду на 1-2 единицы меньше, чем в контроле. Это говорит о том, что сорбент в высоких концентрациях не связывает полностью энрофлоксацин. Также можно предположить о наличии существующей непрочной иммобилизации
энрофлоксацина сорбентом, путём образования на его поверхности специфических лигандов. В этом случае образовавшиеся лиганды достаточно легко десорбируются с поверхности сорбента, а энрофлоксацин попадает в жидкую питательную среду. В таком варианте: система сорбент-иммобилизованный фторхинолоновый препарат - обладает определенной буферной ёмкостью, то есть, работает как склад-депо, из которого по мере необходимости может выделяться определённое количество антибактериального препарата.
Помимо всего прочего иммобилизация антибактериальных комплексов на поверхности энтеросорбентов позволяет получать целый спектр новых комплексных препаратов, сочетающих в себе сорбционные свойства и качества, присущие противомикробным соединениям. Рациональное решение сложившейся проблемы подобным образом оптимизирует и минимизирует расход антибактериального средства и, в ряде случаев, повышает его удельную активность за счет перехода от объемных концентраций к поверхностным.
В бульоне контрольных пробирок, не содержащих исследуемых препаратов, наблюдался активный рост и размножение эшерихий, в которых концентрация микроорганизмов, согласно показаниям денсиламетра, колебалась в пределах 4,7-5,2 единиц. Идентичная концентрация кишечной палочки регистрировалась в контрольных пробирках с различным количеством исследуемого сорбента. Отсутствие роста микроорганизмов в пробирках второго контрольного ряда, содержащих 2-кратные разведения композиционного препарата, свидетельствует о проведении эксперимента в стерильных условиях.
Итоги исследований по выяснению влияния концентрации обогащённого монтмориллонит содержащего сорбента и рН питательной среды на чувствительность Escherichia coli к антибактериальным препаратам отличались достоверными данными (табл. 2).
Таблица 2
Чувствительность Escherichia coli к сочетаниям энрофлоксацина и доксициклина с монтмориллонит содержащим сорбентом при различных рН и концентрациях сорбента в МХА
№ п/ п Кон- цен- трация сорбен- та, мкг/мл Зона задержки роста, мм
рН питательной среды 6 рН питательной среды 7 рН питательной среды 8
опыт контроль опыт контроль опыт контроль
энрофлокса- цин доксицик- лин энрофлокса- цин доксицик- лин энрофлокса- цин доксицик- лин энрофлокса- цин доксицик- лин энрофлокса- цин доксицик- лин энрофлокса- цин доксицик- лин
1 2000 8,2±0,04 8,4±0,04 12,8±0,004 10,0±0,004 11,2±0,21 8,0±0,04 16,0±0,13 10,2±0,004 13,1±0,08 1б,1±0,08 8,0±0,04
2 1000 9,1±о,о8 10,1±0,13 12,5±о,о8 8,6±0,04 14,1±0,08
3 500 10,1±0,08 12,2±0,04 13,1±0,04 9,2±0,17 15,0±0,13
4 250 10,1±0,08 9,7±0,21 16,0±0,13 9,2±0,04 1б,1±0,04
5 125 10,1±0,08 11,3±0,13 16,0±0,13 10,0±0,00 1б,1±0,04
6 62,50 12,6±0,08 12,0±0,04 1б,2±0,17 10,0±0,17 1б,1±0,04
7 31,25 12,2±0,13 12,3±0,08 1б,1±0,04 10,3±0,17 16,2±0,13
8 15,63 12,8±0,21 13,1±0,04 16,6±0,13 10,0±0,00 16,2±0,13
9 7,81 13,0±0,42 11,4±0,33 17,0±0,42 10,0±0,17 16,5±0,13
10 3,91 13,1±0,21 12,0±0,84 17,0±0,84 10,1±0,04 1б,8±0,25
Примечание: числитель - энрофлоксацин; знаменатель - доксициклин; - отсутствие зоны задержки роста.
Информация, изложенная в рассматриваемой таблице, в полной мере иллюстрирует механизм ингибирующего и синергетического эффекта исследуемых субстанций. В результате интеграции антибактериальных препаратов и обогащённого монтмориллонит содержащего сорбента в единую систему наблюдался эффект эмерджентности. Следовательно, существенно
отличающиеся размеры зон задержки роста кишечной палочки в контрольных и опытных чашках Петри лежат в основе установленного факта.
Судя по величине диаметров образовавшихся зон в МХА контрольных чашек, проявившихся в результате бактериостатического действия энрофлоксацина и доксициклина, особого внимания заслуживает факт уровня рН питательной среды, не содержащей сорбента. Основываясь на количественом материале эксперимента, следует сделать вывод, что спектр подавления роста Escherichia coli у энрофлоксацина увеличивается по мере повышения рН (от 6 до 8) питательной среды, а у доксициклина - понижается.
Аналогичный механизм действия этих препаратов отмечался в опытных образцах МХА с 2-кратными серийными разведениями сорбента. Как установлено из прилагаемой таблицы, процесс сдерживания развития эшерихий, диффундирующим из дисков в МХА энрофлоксаци-ном, зависит не только от рН питательной среды, но и от концентрации сорбента в ней. Снижение размеров зон задержки роста кишечной палочки энрофлоксацином в кислой питательной среде (рН 6), по сравнению с контролем, регистрировалось при концентрациях сорбента от 2000 до 31,25 мкг/мл. Реализация подобных результатов фиксировалась в нейтральной (рН 7) и щелочной средах (рН 8), но с уровнем содержания сорбента в диапазоне от 2000 до 500 мкг/мл.
Руководствуясь полученными данными установлено, что сорбционная активность обогащённой монтмориллонит содержащей глины, по отношению к органическим соединениям, в кислой среде выше, чем в щелочной.
Подобная роль влияния рН питательной среды и количества сорбента в ней также сказывается на понижении бактериостатического действия доксициклина. Однако выявленная зависимость, наглядно продемонстрированная в таблице, существенно отличается от предыдущей, поскольку снижение рН питательной среды в кислую сторону при наличии сорбента в количестве 2000 мкг/мл, угнетает результативность доксициклина. В нейтральной среде при концентрации сорбента от 2000 до 250 мкг/мл показатель угнетения роста кишечной палочки доксициклином достоверно не достигал его значения в контроле. Более низкие концентрации сорбента (от 125 до 3,91 мкг/мл) в большинстве случаев только приближали ингибирующую активность доксициклина к контрольному показателю. В щелочной среде (рН 8) исследуемые концентрации сорбента полностью подавляли антимикробное действие доксициклина.
Надо полагать, что предпосылками проявления снижения антибактериальной активности энрофлоксацина и доксициклина являлась повышенная диссоциация из монтмориллонит содержащего сорбента в питательную среду ионов алюминия, железа, магния, кальция, натрия, в силу чего с данными препаратами образовывались неактивные хелатные соединения [11].
Лишь при весьма незначительных концентрациях сорбента 7,81-3,91 (рН питательной среды 6); 62,50-3,91 (рН питательной среды 7) и 31,25-3,91 мкг/мл (рН питательной среды 8) чётко фиксировался потенцирующийся эффект энрофлоксацина. Идентичная результативность отмечалась и у доксициклина, если в кислой питательной среде содержание сорбента не превышало 1000 мкг/мл.
Объяснением установленной повышенной потенцирующей эффективности препаратов, по-видимому, является процесс иммобилизации на их поверхности активных лигандов.
Заключение. Резюмируя выше приведенные материалы можно отметить, что создание новых препаратов расширяет возможности применения энтеросорбции в комплексном лечении животных, страдающих острыми кишечными заболевании инфекционной этиологии. В целом разработка отечественных композиционных антимикробных препаратов на основе обогащённого монтмориллонит содержащего сорбента позволяет шире задействовать эффективные здоровьесберегающие и независимые от импорта технологии для профилактики и лечения многих патологий. Кроме того, рациональное использование композиционных антимикробных препаратов можно применить для дозированного введения лекарственных соединений при условии их обратной десорбции.
Создание препаратов указанного направления связано, как с использованием селективных энтеросорбентов с заведомо известной химической природой их поверхности и размером пор, так и особенностями терапевтического действия в различных отделах желудочнокишечного тракта с учётом рН химуса и необходимой концентрации сорбента.
Придание энтеросорбентам специфических свойств путём иммобилизация на их поверхности лекарственных субстанций в виде активных лигандов, является перспективным направлением, позволяющим оптимизировать и минимизировать расход антибактериального средства и, в ряде случаев, повысить его удельную активность за счёт перехода от объемных концентраций к поверхностным. Решение сложившейся проблемы подобным образом снижает или даже устраняет негативное воздействие на организм химиотерапевтических субстанций. Использование такого подхода даёт возможность, на основе уже существующих препаратов, достаточно быстро получить профилактические и лечебные комплексные соединения с повышенной эффективностью.
Литература
1. Захаров П. Г. Как сохранить новорожденных телят // Практические рекомендации. СПб.: ГИОРД, 1998. - с. 12-30.
2. Vidotto M. C., Navarro H. R., Gaziri L. C. Aderence pili of patogenic strains of avian E. coli// Veter. Microbiol, vol. 59, № 1, 1997. - p. 79-87.
3. Беднягин В. Е. Атипичная форма колибактериоза поросят Автореф. Дис. на канд. вет. наук / Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина. М. -2000. - 16 с.
4. Макаров В. В. Синантропизация, ветеринарная эпидемиология и зоонозы // Ветеринарная Патология. № 4 (38), 2011. - с. 7-18.
5. Егоров Н. С. Основы учения об антибиотиках: учебное пособие для студентов биологических специальностей университетов. М.: Высшая школа. - 1979. - 456 с.
6. Тараканов Б. Г. Механизмы действия пробиотиков на микрофлору пищеварительного тракта и организм животных // Ветеринария. №1, 2000. - с. 47-54.
7. Лопаткин Н.А., Лопухин Ю.М. Эфферентные методы в медицине (теорети- ческие и клинические аспекты экстракорпоральных методов лечения). - М.: Мед. - 1989. - 352 с.
8. Бородин Ю.И., Любарский М.С., Летягин А.Ю. и др. Сорбционно-аппликационные и лимфо-тропные методы в комплексном лечении ожогов. Новосибирск: СибВО - 1995, 142 с.
9. Коптев В. Ю. Лабораторные и клинические испытания нового энтеросорбента ЭСТ-1 Электронный ресурс. / Коптев В.Ю. // Электрон, ст. Режим доступа к ст.: http: / / laboratorium.narod.ru/estl.htm.
10. Учайкин В. Ф., Новокшонов А. А., Соколова Н. В., Бережкова Т. В. Энтеросорбция - роль энтеросорбентов в комплексной терапии острой и хронической гастроэнтерологической патологии // Пособие для врачей. М. - 2008. - 24 с.
11. Доксициклин // Материал из Википедии - свободной энциклопедии // Электрон, ст. Режим доступа к ст.: http: / / ru.wikipedia.org / wiki /
INFLUENCE OF CONCENTRATION OF MONTMORILLONITE CONTAINING AN ABSORBENT AGENT AND pH OF NUTRIENT MEDIUM ON SENSITIVITY ESCHERICHIA COLI TO ANTIBACTERIAL PREPARATIONS
V.D. BUHANOV1, A.I. VEZENTSEV NGUEN HOAI CHAU2, A.A. SHAPOSHNIKOV O.N. PANKOVA3, P.V. SOKOLOVSKIY1 L.A. KOZUBOVA1, S.V. SHEREBENKO4
^Belgorod National Research University
2)Institute Environmental Technologies, Vietnam Academy of Science and Technology
3)Department of Belgorod State Scientific Institution All-Russian Research Institute of Experimental veterinary named Y.R. Kovalenko
4)Belgorod State Agricultural Academy named after VJ. Gorin
This article determines the sorption capacity of montmo-rillonite clays Lam Dong province in relation to pathogenic microorganisms Enterococcus feacalis, Escherichia coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas aerugenosa, Salmonella typhimurium, Staphylococcus Aureus and Candida albicans. The study addresses the problem of clean drinking water and wastewater Socialist Republic of Vietnam and the Russian Federation against pathogens. A high sorption activity clays studied against pathogenic microorganisms. Identify promising in terms of suppression of pathogenic microorganisms samples containing montmorillonite clay TN 5/1, TN 5/2 and HT 6, which can be used as sorption-active materials for purification of drinking water and wastewater Socialist Republic of Vietnam and the Russian Federation against pathogens and as well as effective and comprehensive antimicrobial drugs .
Keywords: water, pathogens, montmorillonite clay, purification of drinking water and wastewater.
e-mail: vesentsev@bsu.edu.ru
