CC BY
9
https://doi.org/10.33647/2074-5982-15-4-46-57
C«D]
BY 4.0
ВЛИЯНИЕ КОМБИНАЦИИ ПЕПТИДНЫХ ЭКСТРАКТОВ ЭНДОКРИННЫХ ЖЕЛЁЗ СЕВЕРНОГО ОЛЕНЯ (НАЫв!РЕН ТАНАЫйиЗ) НА ПРОЦЕССЫ КАТЕХОЛАМИНЭРГИЧЕСКОЙ РЕГУЛЯЦИИ ЭСТРАЛЬНОЙ ФУНКЦИИ КРЫС
Д.А. Абаимов1, А.Н. Осинцев2, А.В. Шарабанов2, М.С. Дуля3*, Р.А. Агельдинов3,
В.Н. Каркищенко3
1ФГБНУ «Научный центр неврологии» 125367, Российская Федерация, Москва, Волоколамское шоссе, д. 80
2ЗАО «ФЕРМЕНТ»
143985, Российская Федерация, Московская обл., Балашиха, дер. Полтево, д. 70А
3 ФГБУН «Научный центр биомедицинских технологий Федерального медико-биологического агентства России» 143442, Российская Федерация, Московская обл., Красногорский р-н, п. Светлые горы, владение 1
|В работе изучалось содержание катехоламинов в моче самок крыс в норме и при развитии возраст-зависимых изменений, связанных с нарушениями эстрального цикла, на ранней стадии развития менопаузы, а также оценивалось возможное корригирующее влияние и отложенные эффекты набора пептидных экстрактов эндокринных желёз северного оленя (Кащ1/вг Шгапс1из) на сдвиги фаз эстрального цикла у животных и на возрастные нарушения в работе системы «гипоталамус — аде-ногипофиз — гонады».
I Ключевые слова: экстракт эндокринных желез, эстральный цикл, северный олень, катехоламины, хроматография, пептиды
Конфликт интересов: авторы заявили об отсутствии конфликта интересов.
Для цитирования: Абаимов Д.А., Осинцев А.Н., Шарабанов А.В., Дуля М.С., Агельдинов Р.А., Каркищенко В.Н. Влияние комбинации пептидных экстрактов эндокринных желёз северного оленя (Кащ1/вг 1агапСт) на процессы катехоламинэргической регуляции эстральной функции крыс. Биомедицина. 2019;15(4):46-57. https://doi.org/10.33647/2074-5982-15-4-46-57
Поступила 05.08.2019
Принята после доработки 15.10.2019
Опубликована 10.12.2019
EFFECTS OF A COMBINATION OF PEPTIDE EXTRACTS FROM REINDEER ENDOCRINE GLANDS (RANGIFER TARANDUS) ON THE CATHOLAMINERGIC REGULATION OF THE ESTRAL
FUNCTION IN RATS
Denis A. Abaimov1, Alexey N. Osintsev2, Andrey V. Sharabanov2, Maxim S. Dulya3*, Ruslan A. Ageldinov3, Vladislav N. Karkischenko3
1 Research Center of Neurology 125367, Russian Federation, Moscow, Volokolamskoe highway, 80
2 FERMENT
143985, Russian Federation, Moscow region, Balashikha, Poltevo village, 70A 46 EMОМЕflMЦMНА | JOURNAL BIOMED | 2019 | TOm 15 | № 4 | 46-57
3 Scientific Center of Biomedical Technologies of the Federal Medical and Biological Agency of Russia 143442, Russian Federation, Moscow region, Krasnogorsk district, Svetlye gory village, building 1
I This study was aimed at investigating the concentration of urinary catecholamines in female rats both in the normal state and during the development of age-dependent changes associated with estrous cycle disorders at early menopause stages. In addition, we set out to assess possible corrective and delayed effects of a combination of peptide extracts from reindeer endocrine glands (Rangifer tarandus) on both phase changes in the estrous cycle and age-related disorders in the functioning of the hypothalamus — adenohypophysis — gonadal system in experimental animals.
I Keywords: endocrine gland extract, estrous cycle, reindeer, catecholamines, chromatography, peptides Conflict of interest: the authors declare no conflict of interest.
For citation: Abaimov D.A., Osintsev A.N., Sharabanov A.V., Dulya M.S., Ageldinov R.A., Karkischen-ko V.N. Effects of a Combination of Peptide Extracts from Reindeer Endocrine Glands (Rangifer Tarandus) on the Catholaminergic Regulation of the Estral Function in Rats. Journal Biomed. 2019;15(4):46-57. https://doi.org/10.33647/2074-5982-15-4-46-57
Submitted 05.08.2019 Revised 15.10.2019 Published 10.12.2019
Введение
Катехоламины — первые нейромедиато-ры, участие которых в регуляции эстраль-ного цикла было доказано еще в середине прошлого века в классических опытах Дж. Эверетта и Ч. Сойера [9].
Известно, что именно в возрасте 8-12 мес. у крыс начинают происходить изменения в эстральном цикле, наблюдается задержка во времени начала преовулятор-ного подъема [12, 14, 15].
Так, например, в исследовании [3] одним из объектов изучения стали 13-14-мес. крысы, у которых еще встречались отдельные эстральные циклы, но уже наблюдалось удлинение стадии диэструса и/или эструса. Начальные этапы угасания репродуктивной функции самок стареющих крыс сопровождаются постепенным исчезновением характерной суточной динамики содержания норадреналина, что, в свою очередь, связывается с нарушениями работы циркади-анных центров в супрахиазмальных ядрах гипоталамуса.
Существует ряд литературных данных, свидетельствующих о возраст-зависимых изменениях в сывороточном уровне ка-техоламинов. В частности, обнаружено
значительное повышение уровня катехо-ламинов в процессе развития климактерических изменений у женщин в начальный период менопаузы. Однако существующие данные носят довольно противоречивый характер. В одних статьях указывается на то, что повышается уровень всех кате-холаминов без исключения, в других — подчеркивается особенное значение повышения адреналина и норадреналина. С указанными изменениями связывают развитие особого типа кардиомиопатий (кар-диомиопатия Такоцубо) у женщин во время климакса [13]. В этой связи нам представлялось важным проанализировать уровень катехоламинов в моче лабораторных животных в зависимости от периода развития и сопутствующих возрастных изменений в работе репродуктивной системы.
Отличительной особенностью фармакологического влияния препаратов пептидной природы является эффект кратковременного воздействия и развитие фармакодинамики после применения в течение одного часа независимо от способа введения. В дальнейшем концентрация действующих веществ падает за счет метаболической трансформации пептидов и включения их в пул биохими-
ческих трансформаций [7]. В исследовании нам представлялось важным проанализировать эффект пептидных экстрактов эндокринных желез и репродуктивных органов (эпифиз, гипофиз, желтое тело, яичники) северного оленя (Rangifer tarandus), которые были получены с помощью метода мягкого лизиса. Состав указанных экстрактов представляет собой набор короткоцепочечных пептидов и олигопептидов, с молекулярными массами, лежащими преимущественно в области от 100 до 2000 Да, с незначительным включением минорных компонентов с массой от 3 до 5 кДа. Метод хронотерапии, предложенный в данной работе, предполагает возможность пролонгирования действия клеточных экстрактов пептидной природы за счёт наличия второй фазы высвобождения основного действующего вещества либо путём последовательного стимулирования фармакологических мишеней разными субстанциями. Экстракты пептидной природы (ЭММ) применяются в виде набора пептидных экстрактов (НПЭ) с последовательным их разведением и введением, с применением технологии хронотерапии. В основе действия данного препарата лежит полипептидный класс-эффект в виде регуляции центрального звена «гипоталамус — адено-гипофиз — гонады» в условиях возрастного дефицита эстрогенов.
Функционирование системы «гипоталамус — аденогипофиз — гонады» может зависеть от факторов различной этиологии. Известно, что стрессорные воздействия, развитие десинхроноза, психоэмоциональные нарушения, естественное старение организма могут вызывать сбои в деятельности системы, ответственной за репродуктивный потенциал организма [1, 8].
Относительно низкий уровень эстрогенов и прогестинов стимулирует, а высокий уровень — угнетает активность половых центров гипоталамуса. Последовательное сочетание положительной и отрицательной обратной связи определяет циклическую
активность катехоламинов, осуществляющих контроль репродуктивной функции [5].
Цель работы — изучить содержание катехоламинов в моче самок крыс в норме и при развитии возраст-зависимых изменений, связанных с нарушениями эстрального цикла, на ранней стадии развития менопаузы, а также оценить возможное корригирующее влияние и отложенные эффекты экстрактов пептидной природы на возрастные нарушения в работе системы «гипоталамус — аденогипофиз — гонады».
Задачи исследования:
• выявить изменения эстрального цикла лабораторных крыс после воздействия препаратов ЭПП в виде НПЭ;
• изучить содержание катехоламинов в моче самок крыс в предменопаузе в контроле и на фоне фармакологического воздействия при возрастных изменениях.
Материалы и методы
Для исследования выбраны самки крыс, которые принесли 5-6 потомств. Исследование проводилось в два отдельных возрастных периода. Возраст самок в первом периоде составлял 10 мес., что соответствует среднему (зрелому) возрасту половозрелой особи. Далее крысы были передержаны до 13-ти мес., что соответствует возрасту пременопаузы, когда эстральный цикл крыс становится нерегулярным.
Самки были разделены на две группы: экспериментальная и контрольная. Экстракты пептидной природы представлены в виде НПЭ, которые вводились последовательно, внутримышечно с временным промежутком (эпифиз + желтое тело в 930 ч по МСК ^ гипофиз + яичники в 1130 ч по МСК).
Экстракты пептидной природы изготовлены из мозговых придатков и половых желез внутренней секреции северного оленя методом щадящего лизиса. Северные олени относятся к животным с ярко выраженными сезонными биологическими циклами [6].
Таблица 1. Дизайн эксперимента Table 1. Design of the experiment
Параметр Опытная группа Контрольная группа
Препарат и время введения Эпифиз + желтое тело, 930 Гипофиз + яичники, 1130 Изотонический р-р, 930 Изотонический р-р, 1130
Доза 400 мкг (100 мкл) 100 мкл
Пептидные экстракты вводились последовательно в узком временном интервале между 930 и 1130 ч циркадианного времени (табл. 1). Продолжительность введения препарата составляла 21 день.
Выбор дозы был пересчитан на среднюю массу самок крыс, приведен по аналогии с препаратом Пинеамин (ООО «ГЕРОФАРМ», Россия), действующим веществом которого являются полипептиды эпифиза PPG — 10 мг, восстанавливающие нормальную функциональную плотность пинеалоцитов и стимулирующие синтез эндогенного мелатонина. После в/м введения препарата полипептиды PPG попадают в нижнюю полую вену, минуя портальную систему, затем — в правое предсердие и далее — в артериальный круг по ветвям средней и задней мозговых артерий, минуя гематоэнцефалический барьер, сразу попадая внутрь пинеалоцитов через аксовазальные синапсы, где активируют синтез мелатонина и серотонина, что в дальнейшем направлено на купирование нейровегетативных проявлений климактерического синдрома [2].
Выявление изменений эстрального цикла лабораторных крыс после воздействия экстрактами пептидной природы (ЭПП) в виде набора пептидных экстрактов
На цитологическое исследование были представлены 60 препаратов влагалищных мазков от 20-ти крыс. Мазки были окрашены азур-эозином (по Романовскому).
Исследование мазков проводили в проходящем свете под микроскопом Leica
DM2500, под увеличением ><400, с помощью установленной на этот же микроскоп цифровой камеры Leica DFC450 и программного обеспечения LASV 4.8.
Статистическую обработку данных проводили с использованием ^/-критерия Манна — Уитни. Также применяли ранговые корреляции Спирмена. Отмеченные корреляции с содержанием катехоламинов значимы на уровне p<0,05.
Метод определения катехоламинов в моче крыс
В микропробирку на 1,5 мл вносили 0,5 мл мочи крыс или градуировочного р-ра (смесь определяемых веществ в рабочих концентрациях) и добавляли 50 мкл внутреннего стандарта изопреналина в концентрации 5 мкг/мл либо вносили 1 мл фосфатного буфера для контроля. Добавляли 50 мкл 0,1%-ного р-ра метаби-сульфита калия, 500 мкл 1М трис-буфера, 25 мг адсорбента (активированного Al2O3, BASi Inc., США). Далее пробы встряхивали на вибромиксере в течение 5-ти мин. Затем образцы центрифугировали на центрифуге на скорости 3000 об./мин в течение 3-х мин, надосадочную жидкость удаляли пастеровской пипеткой и отбрасывали. Осадок адсорбента дважды промывали пипеткой по 1 мл бидистиллированной воды. Для десорбции (выделения) катехо-ламинов к промытому адсорбенту добавляли 500 мкл 0,2 М HClO4, встряхивали на вибромиксере 1 мин, центрифугировали при 2000 об./мин в течение 3-х мин. Надосадочную жидкость в объеме 20 мкл подвергали хроматографическому разделению.
Метод хроматографического разделения Содержание моноаминов и их метаболитов определяли с помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (ион-парная хроматография) с электрохимической детекцией (ВЭЖХ-ЭД) на жидкостном хроматографе System Gold (Beckman Coulter, Inc., США), оснащенном амперо-метрическим детектором RECIPE EC3000 (Германия), с инжектором Rheodyne 7125, объём вкола — 20 мкл. Изучаемые вещества разделяли на обращенно-фазной колонке Nucleodur C18 Gravity, 4,6*250 мм, диаметр пор — 5 мкм (Mashery-Nagel GmbH & Co. KG, Германия). Насос System Gold 125 (Beckman Coulter, Inc., США), скорость потока подвижной фазы — 1 мл/мин, при давлении 200 атм. Мобильная фаза: 0,1 M цитратно-фосфатный буфер, содержащий 1,1 мМ октансульфоновой кислоты, 0,1 мМ ЭДТА и 9% ацетонитрила (pH 3,0). Измерение проводили с помощью электрохимического детектора RECIPE EC 3000 (Германия), оборудованном измерительной
ячейкой ClinLab ECD-Cell, Model Sputnik, со стеклоуглеродным рабочим электродом (+0,65 В) и хлорсеребряным электродом сравнения Ag/AgCl. Регистрацию образцов и обработку хроматограмм проводили с применением аппаратно-программного комплекса «МультиХром 1,5» («Амперсенд»). Все использовавшиеся для анализа реактивы были высокой степени чистоты: о. с. ч., х. ч. или analytical grade. Для калибровки хроматографа использовали смеси рабочих стандартов определяемых веществ. Величины концентрации моноаминов в опытных образцах рассчитывали методом «внутреннего стандарта» исходя из отношений площади пиков в стандартной смеси и в образце [4, 11].
В этих условиях время удерживания составляло : 1) для норадреналина — 4,67 мин; 2) для адреналина — 5,22 мин; 3) для дофамина — 7,77 мин. Внутренний стандарт (адреномиметик изопреналин с финальной концентрацией 500 нг/мл) имел время удерживания 11,53 мин (рис. 1).
mV 500400300200100-
ch1
0 1
9 10 11 12 13
Рис. 1. Типичная хроматограмма анализируемых соединений в концентрации 250 нг/мл. Fig. 1. A typical chromatogram for the compounds under study at a concentration of250 ng/ml.
Предел количественного определения для всех трёх анализируемых катехолами-нов составил 3,13 нг/мл. Относительная ошибка метода для концентрации 3,13 нг/мл не превышала 10%. Установлено, что в диапазоне концентраций 3,13-1000 нг/мл калибровочные кривые всех трёх аналитов линейны (рис. 2).
Параметры хроматографических кривых для анализируемых соединений представлены в табл. 2.
Нулевая проба при построении кривой не учитывалась. Отклонения от номинальной концентрации для всех калибровочных
стандартов не превышали допустимых значений (20% для нижнего предела количественного определения и 15% для остальных стандартов).
Результаты и их обсуждение
Цитологическое исследование влагалищных мазков самок крыс
Результаты проведенного цитологического исследования представлены в табл. 3, 4 и позволяют сделать следующие заключения.
Цитологические исследования влагалищных мазков у 10-мес. крыс в конце
Рис. 2. Калибровочные кривые анализируемых катехоламинов. Fig. 2. Calibration curves of the catecholamines under study.
Таблица 2. Параметры градуировочных кривых анализируемых соединений Table 2. Parameters of the calibration curves of the compounds under study
Вещество Формула градуировочной зависимости Коэффициент корреляции С. К. О., %
Норадреналин Q=0,195739A 0,999462 2,949
Адреналин Q=0,215921 A 0,999927 6,430
Дофамин Q=0,17908A 0,998289 5,266
Таблица 4. Стадии эстрального цикла в группе II крыс (контрольная группа) Table 4. Estrous cycle stages in group II rats (control)
Таблица 3. Стадии эстрального цикла в группе I крыс Table 3. Estrous cycle stages in group I rats
Номер животного Стадия эструса
1 Диэструс Диэструс Эструс
2 Эструс Метаэструс Эструс
3 Не показателен Не показателен Метаэструс
4 Эструс Метаэструс Эструс
5 Не показателен Диэструс Не показателен
6 Не показателен Диэструс Метаэструс
7 Метаэструс Эструс Метаэструс
8 Не показателен Не показателен Диэструс
9 Не показателен Метаэструс Эструс
10 Не показателен Эструс Проэструс
Номер животного Стадия эструса
1 Эструс Эструс Диэструс
2 Эструс Диэструс Метаэструс
3 Метаэструс Диэструс Эструс
4 Не показателен Проэструс Диэструс
5 Эструс Эструс Диэструс
6 Не показателен Не показателен Метаэструс
7 Эструс Не показателен Метаэструс
8 Метаэструс Эструс Проэструс
9 Метаэструс Эструс Метаэструс
10 Не показателен Эструс Метаэструс
острого эксперимента выявили достоверные (p<0,05) различия в первой группе по сравнению с контролем. Наличие в мазках безъядерных клеток и слизи свидетельствует о том, что животные, получавшие препарат, находятся преимущественно в фазах эструса и метаэструса.
Отмечена корреляция (р<0,05) по содержанию катехоламинов норадренали-на (NA), адреналина (ADR) и дофамина (DA) в суточной моче 10-мес. крыс и сдвиги в фазах эстрального цикла. Цитологические исследования влагалищных мазков в конце острого эксперимента показали наличие сдвигов фаз эстраль-ного цикла, где сумма рангов в 2 раза отличалась по стимулирующему эффекту, животных, экспонированных к препарату в сравнении с контролем, а также корреляцию высокого стимулирующего действия и низкого раздражающего действия
на фазы эстрального цикла к содержанию катехоламинов в суточной моче 10-мес. самок крыс.
Содержание катехоламинов в моче самок крыс
Результаты анализов представлены в табл. 5, 6. Сбор суточной мочи в указанных группах животных производился дважды. Первый сбор производился у 10-мес. крыс после субхронического (21 день) введения экстрактов пептидной природы с целью выяснения кратковременных эффектов после подострого введения. Второй сбор суточной мочи с целью выявления отложенных эффектов указанного препарата на содержание катехоламинов производился спустя 3 мес. после последнего по-дострого введения препарата. Полученные данные представлены в табл. 5 (краткосрочный эффект подострого введения)
Таблица 5. Концентрация катехоламинов в моче 10-мес. крыс после субхронического введения набора пептидных экстрактов
Table 5. Concentrations of urinal catecholamines in 10-month-old rats after subchronic administration of peptide extracts
№ животного NA (нг/мл) ADR (нг/мл) DA (нг/мл) Объем (мл) NA (нг/сут) ADR (нг/сут) DA (нг/сут)
11 25,49 28,13 92,35 20 509,8 562,6 1847
12 69,02 32,03 150,13 8,9 614,278 285,067 1336,157
13 42,4 38,06 190,57 3,8 161,12 144,628 724,166
14 42,86 33,98 101,84 7,8 334,308 265,044 794,352
15 57,66 37,71 163,65 6,9 397,854 260,199 1129,185
16 41,55 32,78 90,66 6,6 274,23 216,348 598,356
17 60,08 36,66 79,83 10 600,8 366,6 798,3
18 82,33 27,16 162,59 9,4 773,902 255,304 1528,346
19 53,8 11,84 50,93 20 1076 236,8 1018,6
20 45,74 24,99 108,98 7,8 356,772 194,922 850,044
21 45,74 36,06 113,2 6,3 288,162 227,178 713,16
22 75,56 34,23 212,19 4,7 355,132 160,881 997,293
23 40,43 13,53 74,5 9,1 367,913 123,123 677,95
24 38,54 17,56 72,04 8,9 343,006 156,284 641,156
25 57,18 31,75 95,66 5,9 337,362 187,325 564,394
26 46,84 22,35 254,35 7,2 337,248 160,92 1831,32
27 18,64 11,34 27,49 15 279,6 170,1 412,35
28 40,75 14,59 56,64 10 407,5 145,9 566,4
29 66,37 44,18 117,14 6,9 457,953 304,842 808,266
30 52,08 25,74 96,63 6,8 354,144 175,032 657,084
Таблица 6. Концентрация катехоламинов в моче 13-мес. крыс спустя 3 мес. после финальной инъекции под-острого введения набора пептидных экстрактов Table 6. Concentrations of urinal catecholamines in 13-month-old rats 3 months after the final subacute administration of peptide extracts
№ животного NA (нг/мл) ADR (нг/мл) DA (нг/мл) Объем (мл) NA (нг/сут) ADR (нг/сут) DA (нг/сут)
11 49,1 9,74 105,28 9,8 481,18 95,452 1031,744
12 108,71 26,14 185,73 10 1087,1 261,4 1857,3
13 251,42 69,86 510,1 4,5 1131,39 314,37 2295,45
14 21,3 8,88 51,55 20 426 177,6 1031
15 200,55 35,05 408,45 4,1 822,255 143,705 1674,645
16 83,94 23,12 248,43 8 671,52 184,96 1987,44
17 141,23 21,6 244,28 5,2 734,396 112,32 1270,256
18 62,37 5,98 92,93 10,5 654,885 62,79 975,765
19 25,13 8,75 88,85 18 452,34 157,5 1599,3
20 136,78 67,89 181,4 6,6 902,748 448,074 1197,24
21 103,17 29,94 266,04 6,5 670,605 194,61 1729,26
22 92,74 6,58 173,87 8,1 751,194 53,298 1408,347
23 130,5 13,14 150,43 9,5 1239,75 124,83 1429,085
24 89,09 11,88 200,99 9 801,81 106,92 1808,91
25 229,5 58,37 341,6 3,6 826,2 210,132 1229,76
26 50,7 8,96 182,69 9 456,3 80,64 1644,21
27 22,7 15,9 67,23 18 408,6 286,2 1210,14
28 46,58 47 128,66 9,6 447,168 451,2 1235,136
29 164,86 63,05 307,36 6 989,16 378,3 1844,16
30 76,78 16,64 199,74 6,2 476,036 103,168 1238,388
и табл. 6 (отложенный эффект). Приведены значения концентрации катехоламинов (норадреналина, адреналина и дофамина), выраженные в нг/мл, объем суточной мочи и количество катехоламинов — в нг, экс-кретированных за сутки (нормированные на объем суточной мочи).
Полученные данные были статистически обработаны методом дисперсионного анализа, на основании которого показано, что субхроническое внутримышечное введение набора пептидных экстрактов вызывает кратковременный эффект на уровень катехоламинов, выражающийся в достоверном реактивном повышении уровня дофамина, адреналина и норадренали-на в суточной моче крыс в сравнении с контролем (рис. 3). Также была отмечена
тенденция к повышению уровня адреналина, что в целом может свидетельство -вать о мягком тонизирующем эффекте препарата.
Повторный сбор суточной мочи выполняли спустя 3 мес., в течение которых животные не получали препарата. Данный про-боотбор был предназначен для выявления возможных отложенных эффектов субхронического введения набора экстрактов пептидной природы на уровень катехоламинов или неуправляемых факторов, связанных с пролиферативным действием пептидов. Дисперсионный анализ при межгрупповом сравнении не выявил достоверных отличий между контрольной группой животных и группами животных, принимавших препарат (рис. 4).
1600
1400
1200
1000
800
600
400
200
Опыт
Контроль
Г"о~| НА □ АДР
Рис. 3. Влияние субхронического введения набора пептидных экстрактов на концентрацию катехоламинов в моче 10-мес. крыс.
Примечание: * — достоверное отличие от контроля, p<0,05, критерий Фишера.
Fig. 3. Effects of subchronic peptide extract administration on the concentration of urinal catecholamines in 10-month-old rats.
Note: * — significant difference from control, p <0.05, Fisher's test.
0
В то же время нужно отметить, что нами были обнаружены выраженные отличия в содержании катехоламинов во всех группах крыс по сравнению с первым пробоотбо-ром, причем для норадреналина и дофамина эти отличия были статистически значимы-
ми (р<0,05, критерий Фишера). В среднем у 13-мес. крыс наблюдается увеличение уровня катехоламинов на 40-50% по сравнению концентрацией катехоламинов, обнаруживаемой в этих группах животных в 10-мес. возрасте (табл. 7). Полученные результаты хоро-
2000 1800 1600 1400 1200 1000 800 600 400 200 0 -200
НА
Опыт
Контроль
□ АДР
Рис. 4. Влияние субхронического введения смеси пептидов на концентрацию катехоламинов в моче 13-мес. крыс. Fig. 4. Effects of subchronic administration of peptide extracts on the concentration of urinal catecholamines in 13-month-old rats.
Таблица 7. Сводные данные концентрационных значений катехоламинов, объединённые по группам и возрастам, нг/сут
Table 7. Summary data on the catecholamine concentration values, combined by groups and age, ng/day
Вещество Норадреналин(NA) Адреналин (ADR) Дофамин (DA)
Возраст самок крыс 10 мес. 13 мес. 10 мес. 13 мес. 10 мес. 13 мес.
Группа 1 509,906±85,202* 736,381±79,378# 247,212±20,601* 206,968±39,117 1062,450±126,071* 1492,014±145,152#
Группа 2 352,802±16,464 699,872±88,658# 176,045±17,204 194,109±46,491 786,937±126,022 1457,570±90,425#
Примечания: * — значимые отличия по сравнению с контролем (p<0,05); # — возрастные отличия по сравнению с предыдущими значениями внутри группы. Приp<0,05, критерий Фишера.
Notes: * — significant differences compared to the control (p <0.05); # — age differences compared to previous values within the group. For p <0.05, Fisher's test.
шо согласуются с литературными данными, согласно которым доказано: как возраст сам по себе, так и менопауза могут повышать уровень катехоламинов в крови [16], что, в свою очередь, приводит к ослаблению активности вегетативной нервной системы [10].
Выводы
1. Выявлено наличие сдвигов фаз эстраль-ного цикла лабораторных крыс после воздействия препаратов пептидной природы в виде набора пептидных экстрактов и последовательного их введения.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ | REFERENCES
1. Алексеев Б.Е., Белоус И.М. Сексуальные дисфункции у женщин с психогенными депрессиями. Обозрение психиатрии и медицинской психологии. 2013;1:22-24. [Alekseev B.E., Belous I.M. Seksu-al'nye disfunkcii u zhenshchin s psihogennymi depres-siyami [Sexual dysfunctions in women with psychogenic depressions]. Obozrenie psihiatrii i medicinskoj psihologii [Review of psychiatry and medical psychology]. 2013;1:22-24. (In Russian)].
2. Касян В.Н., Адамян Л.В. Патофизиология приливов жара. Фокус на нейрогормональную регуляцию. Проблемы репродукции. 2017; 1:115121. [Kasyan V.N., Adamyan L.V. Patofiziologiya prilivov zhara. Fokus na nejrogormonal'nuyu regulya-tsiyu [Pathophysiology of hot flashes. Focus on neurohormonal regulation]. Problemy reproduktsii [Problems of reproduction]. 2017;1:115-121. (In Russian)].
3. Кореневский А.В., Милютина Ю.П., Степанов М.Г., Керкешко Г.О., Арутюнян А.В. О взаимосвязи циркадианных и овариальных циклов в гипоталамической регуляции репродукции (экспериментальное исследование). Журн. акуш. и женск. бол. 2007;56(4):24-30. [Korenevskij A.V., Milyutina Yu.P., Stepanov M.G., Kerkeshko G.O., Arutyunyan A.V. O vzaimosvyazi tsirkadiannyh i ovarial'nyh tsiklov v gipotalamicheskoj regulyatsii reproduktsii (eksperimental'noe issledovanie) [On the relationship of circadian and ovarian cycles in the hypothalamic regulation of reproduction (experimental study)]. Zhurn. akush. i zhensk. bol. [J. of Obstetrics and Women's Diseases]. 2007;56(4):24-30. (In Russian)].
4. Кудрин В.С., Мирошниченко И.И., Раевский К.С. Различия в механизмах ауторецепторной регуляции биосинтеза и высвобождения дофамина в подкорковых структурах мозга крыс. Нейрохимия. 1988;7(1):3-8. [Kudrin V.S., Miroshnichenko I.I., Raevskij K.S. Razlichiya v mekhanizmah autoretsep-
2. Субхроническое (инъекционное) введение смеси пептидов в течение 21-го дня характеризуется достоверным повышением уровня катехоламинов в суточной моче 10-мес. крыс.
3. Сравнительный анализ суточной мочи самок крыс в возрасте 10-ти и 13-ти мес. обнаруживает достоверное возраст-зависимое повышение содержания катехоламинов.
4. Значимого отложенного влияния пептидов на содержание катехоламинов в суточной моче 13-мес. крыс не выявлено.
tornoj regulyatsii biosinteza i vysvobozhdeniya do-famina v podkorkovyh strukturah mozga krys [Differences in the mechanisms of autoreceptor regulation of biosynthesis and dopamine release in rat subcortical brain structures]. Nejrohimiya [Neurochemistry]. 1988;7(1):3-8. (In Russian)].
5. Локтаева А.В., Беляков В.И. Характеристика эстрального цикла у крыс и значение кисспепти-нергической системы в его регуляции. Вестник молодых ученых и специалистов Самарского гос. ун-та. 2016;4:32-38. [Loktaeva A.V., Belyakov V.I. Kharakteristika estral'nogo tsikla u krys i znachenie kisspeptinergicheskoj sistemy v ego regulyatsii [Characterization of the estrous cycle in rats and the importance of the kisspeptinergic system in its regulation]. Vestnik molodyh uchenyh i specialistov Samarskogo gos. un-ta [Bulletin of Young Scientists and Specialists of the Samara State University]. 2016;4:32-38. (In Russian)].
6. Осинцев Н.С., Осинцев С.Н. Целебные силы пантов. Манускрипт, 2004. 154 c. [Osincev N.S., Osin-cev S.N. Tselebnye sily pantov [The healing power of antlers]. Manuskript, 2004. 154 p. (In Russian)].
7. Пептидотерапия: клиническое применение. Рук-во / Под ред. И.С. Ролика. 2-е изд., перераб. М.: РегБи-оМед., 2010. 392 с. [Peptidoterapiya: klinicheskoe primenenie. Ruk-vo. [Peptidotherapy: clinical use. Leadership]. Ed. by I.S. Rolik. 2nd ed., revised. Moscow: RegBioMed, 2010. 392 p. (In Russian)].
8. Перехов А.Я. Депрессия и сексуальные расстройства у женщин в естественной хирургической менопаузе. Акушерство и гинекология. 2009;4:6-9. [Perekhov A.Ya. Depressiya i seksual'nye rasstrojst-va u zhenshchin v estestvennoj hirurgicheskoj meno-pauze [Depression and sexual disorders in women in natural surgical menopause]. Akusherstvo i gine-kologiya [Obstetrics and gynecology]. 2009;4:6-9. (In Russian)].
9. Everett J.W., Sawyer C.H. A 24-hour periodicity in the "LH-release apparatus" of female rat, disclosed by barbiturate sedation. Endocrinology. 1950;47(3):198-218.
10. Lee S.H., Scott S.D., Pekas E.J., Lee S., Lee S.H., Park S.Y. Taekwondo training reduces blood catecho-lamine levels and arterial stiffness in postmenopausal women with stage-2 hypertension: randomized clinical trial. Clinical and Experimental Hypertension. 2018;10:1-7.
11. Malikova L.A., Fedotova I.B., Narkevich V.B., Klodt P.M., Kudrin V.S., Poletaeva I.I., et al. Effects of the novel anticonvulsant levetiracetam on the content of monoamines and their main metabolites in the brain structures of rats of the Krushinskii-Molodkina strain. Neurochemical J. 2008;2(4):289-292.
12. Mohan Kumar P.S., Thyaga Rajan S., Quadri S.K. Correlations of catecholamine release in the medial preoptic area with proestrous surges of luteinizing hor-
mone and prolactin: effects of aging. Endocrinology. 1994;135(1):119-126.
13. Owens J.F., Stoney C.M., Matthews K.A. Menopausal status influences ambulatory blood pressure levels and blood pressure changes during mental stress. Circulation. 1993;88(6):2794-2802.
14. Wise P.M. Alterations in the proestrous pattern of median eminence LHRH, serum LH, FSH, estradiol and progesterone concentrations in middle-aged rats. Life Sci. 1982;12(2):165-173.
15. Wise P.M., Smith M.J., Dubai D.B., Wilson M.E., Rau S.W., Cashion A.B., et al. Neuroendocrine modulation and repercussions of female reproductive aging. RecentProg. Horm. Res. 2002;57:235-256.
16. Zouhal H., Jacob C., Delamarche P., Gratas-De-lamarche A. Catecholamines and the Effects of Exercise, Training and Gender. Sports Medicine. 2008;38(5):401-423.
СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ | INFORMATION ABOUT THE AUTHORS
Абаимов Денис Александрович, к.б.н., ФГБНУ «Научный центр неврологии»; e-mail: abaidenis@yandex.ru
Осинцев Алексей Николаевич,
ЗАО «ФЕРМЕНТ»
Шарабанов Андрей Вячеславович,
ЗАО «ФЕРМЕНТ»;
e-mail: avsharabanov@gmail.com
Дуля Максим Сергеевич*, ФГБУН «Научный центр биомедицинских технологий Федерального медико-биологического агентства России»; e-mail: mdulya@gmail.com
Агельдинов Руслан Андреевич, ФГБУН «Научный центр биомедицинских технологий Федерального медико-биологического агентства России»;
e-mail: ageldinov@gmail.com
Каркищенко Владислав Николаевич, д.м.н., проф., ФГБУН «Научный центр биомедицинских технологий Федерального медико-биологического агентства России»; e-mail: scbmt@yandex.ru
Denis A. Abaimov, Cand. Sci. (Biol.), Research
Center of Neurology;
e-mail: abaidenis@yandex.ru
Alexey N. Osintsev, FERMENT
Andrey V. Sharabanov, FERMENT; e-mail: avsharabanov@gmail.com
Maxim S. Dulya*, Scientific Center of Biomedical Technologies of the Federal Medical and Biological Agency of Russia; e-mail: mdulya@gmail.com
Ruslan A. Ageldinov, Scientific Center of Biomedical Technologies of the Federal Medical and Biological Agency of Russia; e-mail: ageldinov@gmail.com
Vladislav N. Karkischenko, Dr. Sci. (Med.), Prof., Scientific Center of Biomedical Technologies of the Federal Medical and Biological Agency of Russia; e-mail: scbmt@yandex.ru
* Автор, ответственный за переписку / Corresponding author
