CC BY
44
влияниеколло на жировые гяоб
УДК 57.085.2:616.001.6-089.5-032:6' Поступила 4.08.2016 г.
А.А. Певнев, аспирант кафедрь М.С. Белоус, врач-реаниматоло С.И. Чистяков, врач-реаниматолог2;
тезиологии и реаниматологии ФПКВ1;
А.Ю. Яковлев, д.м.н., доцент, куратор отделения реанимации и интенсивной терапии2
'Нижегородская государственная медицинская академия, Нижний Новгород, 603005, пл. Минина и Пожарского, 10/1;
Нижегородская областная клиническая больница им. Н.А. Семашко, Нижний Новгород, 603126, онова, 190
_,ель исследования — изучение воздействия коллоидных инфузионных растворов на размер и количество жировых глобул в ыворотке крови пациентов с жировой глобулемией in vitro.
Материалы и методы. Для исследования in vitro использовали сыворотку крови 20 пациентов с тяжелой сочетанной травмой и подтвержденной глобулемией. Забор крови производили из артерии в вакуумные пробирки BD Vacutainer под номерами 1-5 с 3,2% цитратом натрия следующим образом: в пробирку №1 — 1 мл крови + 0,5 мл 0,9% раствора NaCl; в пробирку №2 — 1 мл крови + 0,5 мл модифицированного желатина; в пробирку №3 — 1 мл крови + 0,5 мл 6% гидроксиэтилкрахмала 130/0.42, в пробирку №4 — 1 мл крови + 0,5 мл декстрана 40, в пробирку №5 — 1 мл крови + 0,5 мл декстрана 60. Вакутейнеры центрифугировали при 2 тыс. оборотов в течение 10-15 мин. Затем из самого поверхностного слоя микропипеткой забирали 5 мкл смеси и помещали ее на предметное стекло, после чего смесь окрашивали 5 мкл красителя судан IV. Сразу после окрашивания данный микропрепарат исследовали под микроскопом в луче дневного света при увеличении в 100 раз и фотографировали. Подсчитывали общее количество глобул в препарате, размер каждой глобулы, а также общую площадь глобул.
Результаты. В образцах №2 (модифицированный желатин) и №4 (декстран 40) выявлено статистически значимое снижение количества глобул (на 72 и 69% соответственно), а также общей площади глобул (на 72 и 79% соответственно) по сравнению с образцом №1. Образцы №3 (6% гидроксиэтилкрахмал 130/0.42) и №5 (декстран 60) статистически значимо не отличались от контрольного образца №1. При этом в двух случаях из 20 в образцах №5 зафиксировано увеличение количества и общей площади жировых глобул.
Ключевые слова: синдром жировой эмболии; жировая глобулемия; инфузионная терапия.
Как цитировать: Pevnev А.А., Belous M.S., Chistyakov S.I., Yakovlev A.Yu. In vitro effect of colloid infusion solutions on fat globules. Sovremennye tehnologii v medicine 2016; 8(4): 306-308.
English
In vitro Effect of Colloid Infusion Solutions on Fat Globules
А.А. Pevnev, Postgraduate, Department of Anesthesiology and Resuscitation, the Faculty of Doctors'Advanced Training1; M.S. Belous, Emergency Physician2; S.I. Chistyakov, Emergency Physician2;
A.Yu. Yakovlev, MD, DSc, Associate Professor, Advisor, Intensive Care Unit2
1Nizhny Novgorod State Medical Academy, 10/1 Minin and Pozharsky Square, Nizhny Novgorod, 603005, Russian Federation;
2Nizhny Novgorod Regional Clinical Hospital named after N.A. Semashko, 190 Rodionova St., Nizhny Novgorod, 603126, Russian Federation
The aim of the investigation was to study the effects of colloid infusion solutions on the size and quantity of fat globules in the serum of patients with fat globulemia in vitro.
Materials and Methods. The blood serum of 20 patients with severe combined injury and confirmed globulemia was used for in
Для контактов: Певнев Алексей Александрович, e-mail: alpevnev@gmail.com
/////////////////////^^^^
306 СТМ J 2016 — т0м 8, №4 A.A. Певнев, М.С. Белоус, С.И. Чистяков, А.Ю. Яковлев
vitro study. Blood samples were collected from the artery into vacuum tubes BD Vacutainer with 3.2% sodium citrate, marked as 1-5. The procedure was as follows: tube No.1 contained 1 ml of blood + 0.5 ml of 0.9% NaCl solution; tube No.2 contained 1 ml of blood + 0.5 ml of modified gelatin; in tube No.3 there was 1 ml of blood +0.5 ml of 6% hydroxyethyl starch 130/0.42; tube No.4 contained 1 ml of blood+ 0.5 ml of dextran 40; tube No.5 contained 1 ml of blood +0.5 ml of dextran 60. The vacutainers were centrifuged at 2000 rpm for 10-15 min, which was followed by taking 5 ^l of the mixture from the uppermost layer using a micropipette, and placing it on a slide plate with subsequent staining by sudan IV, 5 ^l. Immediately after staining the microslide was examined with a microscope at hundredfold magnification in the daylight and photographed. The total number of globules, the size of each globule as well as the total area of globules were assessed in the microslide.
Results. Samples No.2 (modified gelatin) and No.4 (dextran 40) were found to have significant decrease in globule count (by 72 and 69%, respectively), and total globule area (by 72% and 79%, respectively) compared to sample No.1. Samples No.3 (6% hydroxyethyl starch 130/0.42) and No.5 (dextran 60) were not significantly different from the control sample No.1. Moreover, in 2 cases out of 20 samples No.5 showed the increase in globule quantity and total area of fat globules.
Key words: fat embolism syndrome; fat globulemia; infusion therapy.
Синдром жировой эмболии является одним из серьезных осложнений тяжелой травмы [1, 2]. Несмотря на более чем вековую историю изучения данного заболевания, в настоящее время нет единой рациональной схемы его профилактики и лечения [3].
Цель исследования — оценить воздействие коллоидных инфузионных растворов на размер и количество жировых глобул в сыворотке крови пациентов с жировой глобулемией in vitro.
Материалы и методы. Проводили исследование сыворотки крови по модифицированной методике [4, 5]. Использовали сыворотку крови 20 пациентов от 17 до 78 лет (средний возраст — 54 года) с тяжелой сочетанной травмой (ISS>17) с подтвержденной гло-булемией. Производили забор крови из артерии в вакуумные пробирки BD Vacutainer (Becton Dickinson and Company, США) под номерами 1-5 с 3,2% цитратом натрия. Взятую кровь распределяли следующим образом. Контролем служила пробирка №1 (1 мл крови + 0,5 мл 0,9% раствора NaCl), пробирка №2 содержала 1 мл крови + 0,5 мл модифицированного желатина (Гелофузин; B.Braun, Германия), пробирка №3 — 1 мл крови + 0,5 мл 6% гидроксиэтилкрахмала 130/0.42 (Венофундин; B.Braun, Германия), пробирка №4 — 1 мл крови + 0,5 мл декстрана 40 (Декстран 40; «Ист-фарм», Россия), пробирка №5 — 1 мл крови + 0,5 мл декстрана 60 (Полиглюкин; «Биохимик», Россия). Вакутейнеры центрифугировали при 2 тыс. оборотов в течение 10-15 мин. Затем из самого поверхностного слоя микропипеткой забирали 5 мкл смеси и помещали ее на предметное стекло, после чего смесь
окрашивали 5 мкл красителя судан IV. Сразу после окрашивания данный микропрепарат исследовали под микроскопом в луче дневного света при увеличении в 100 раз. Для микроскопического исследования препаратов использовали микровизор медицинский проходящего света mVizo-101 («ЛОМО», Россия). Полученные цифровые микрофотографии обрабатывали с помощью компьютерной программы JMicroVision 1.2.7 (open source and free software) [6], подсчитывали общее количество глобул в препарате, размер каждой глобулы, а также общую площадь глобул.
Статистическую обработку результатов исследования осуществляли с помощью пакета прикладных программ StatSoft Statistica 6.0.
Результаты и обсуждение. Данные о влиянии исследуемых препаратов на количество и общую площадь глобул в крови in vitro представлены в таблице.
В образцах №2 (Гелофузин) и №4 (Декстран 40) выявлено статистически значимое снижение количества глобул (на 72 и 69% соответственно), а также общей площади глобул (на 72 и 79% соответственно) по сравнению с контрольным образцом №1 (NaCl 0,9%). Образцы №3 (Венофундин) и №5 (Полиглюкин) статистически значимо не отличались от контрольного образца. При этом в двух случаях из 20 в образцах №5 зафиксировано увеличение количества и общей площади жировых глобул.
Полученные данные могут быть объяснены эмульгирующим и дезэмульгирующим действием различных коллоидных инфузионных растворов на жировые глобулы. При этом вещества с молекулярной массой
Влияние коллоидных растворов на жировые глобулы in vitro (Me [0,25; 0,75])
Параметры 0,9% NaCl Гелофузин Венофундин Декстран 40 Декстран 60
Количество глобул, шт. 18,0 [13,50; 29,25] 5,0 [2,5; 13,5]* 13,50 [10,75; 22,75] 5,50 [3,25; 6,75]* 19,0 [14,25; 23,75]
Общая площадь глобул, мкм2 7644,7 [4555,9; 13 360,3] 2106,9 [651,8; 4801,0]* 5340,8 [2694,0; 11 187,1] 1533,8 [965,9; 2902,8]* 5946,9 [3854,5; 12 765,3]
* — статистически значимые различия значений с контролем по критерию Вилкоксона (p^0,05).
Влияние коллоидных инфузионных растворов на жировые глобулы in vitro СТМ J 2016 — том 8, №4 307
^40 000 Да (Гелофузин, Декстран 40), по всей видимости, способствуют эмульгации жировых глобул, тем самым снижая количество видимых в микроскоп жировых глобул и соответственно уменьшая их общую площадь. Препараты с молекулярной массой >40 000 Да (Венофундин, Полиглюкин), по-видимому, способствуют дезэмульгациии жировых глобул, увеличивая их визуализацию, площадь отдельных глобул и общую площадь.
Заключение. Наиболее выраженное дезэмульги-рующее действие in vitro обнаружено у коллоидных инфузионных растворов Венофундин и Полиглюкин. Наиболее благоприятное влияние на эмульсию жира в сыворотке in vitro оказывали Гелофузин и Декстран 40.
Финансирование исследования и конфликт интересов. Исследование не финансировалось какими-либо источниками, и конфликты интересов, связанные с данным исследованием, отсутствуют.
Литература
1. Jain S., Mittal M., Kansal A., Singh Y., Kolar P.R., Saigal R. Fat embolism syndrome. J Assoc Physicians India 2008; 56: 245-249.
2. Яковлев В.Н., Марченков Ю.В., Панова Н.С., Алексеев В.Г., Мороз В.В. Жировая эмболия. Общая реаниматология 2013; 4(9): 55-58.
3. Борисов М.Б., Гаврилин С.В. Синдром жировой эмболии при тяжелых сочетанных травмах. Вестник хирургии им. И.И. Грекова. 2006; 5: 68-71.
4. Литвиненко С.Г., Ладейщиков В.М., Попов А.В. Лабораторная диагностика жировой эмболии. Клиническая лабораторная диагностика 2012; 2: 22-24.
5. Черкасов В.А., Литвиненко С.Г., Рудаков А.Г. Способ диагностики травматической жировой эмболии. Патент №2195659 РФ.
6. Roduit N. JMicroVision: image analysis toolbox for measuring and quantifying components of high-definition images. Version 1.2.7. URL: https://www.jmicrovision.com.
/////////////////////^^^^
308 СТМ J 2016 — том 8, №4 А.А. Певнев, М.С. Белоус, С.И. Чистяков, А.Ю. Яковлев
