CC BY
35
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2016 - V. 23, № 4 - P. 88-93
УДК: 616.155.011:616.61]-092.9 DOI: 10.12737/23855
ВЛИЯНИЕ ИНТАКТНЫХ И АПОПТОЗ-ИНДУЦИРОВАННЫХ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК НА ДИНАМИКУ АПОПТОЗА В ПОЧЕЧНОЙТКАНИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ОСТРОМ ПОВРЕЖДЕНИИ ПОЧЕК
А.А. ЧЕБОТАРЁВА
Курский государственный медицинский университет улица К.Маркса 3, Курск, 305041, Россия,
e-mail: сНеЬ^агеоа_аНэа@таП.ги
Аннотация. Целью работы стало определение влияния интактных и апоптоз-индуцированных мезенхимальных стволовых клеток на динамику активности протекания апоптоза в почечной ткани при экспериментальном остром повреждении почек. Эксперименты проведены на белых беспородных крысах самцах. Острое повреждение почек воспроизводили путём двустороннего пережатия почечных ножек на 30 минут по модели ишемия-реперфузия. Мезенхимальные стволовые клетки получали из костного мозга здоровых животных, культивировали в условиях СОг-инкубатора на стандартной питательной среде и с добавлением к среде гомогената почечной ткани крыс, перенесших за 3 суток до исследования острое повреждение почек по модели ишемия-реперфузия. Культуры ме-зенхимальных стволовых клеток вводили в хвостовую вену животным через час после моделирования почечного повреждения. Исследование проводилось на 3, 7 и 14 сутки от момента экспериментального повреждения почек. Течение апоптотического процесса контролировали путем определения концентрации фрагментированной ДНК в почечной ткани с использованием дифениламинового теста и выявления уровня свободного сфингозина по методике, основанной на экстракции сфингоидных оснований диэтиловым эфиром. Исследования проводили с помощью спектрофотометрии. Установлено повышение концентрации фрагментированной ДНК и сфингозина в почечной ткани животных, перенесших острое повреждение почки на все сутки эксперимента относительно здоровых животных. Введение интактных мезенхимальных стволовых клеток приводило к достоверному снижению содержания фрагментированной ДНК и сфингозина на 7 и 14 сутки исследования относительно показателей животных, которым не вводили стволовые клетки, что говорило об угнетении активности процессов апоптоза в почечной ткани. Применение апоптоз-индуцированных мезенхимальных стволовых клеток привело к более выраженному снижению выраженности активности течения апоптотических процессов в ткани почек животных, что подтверждалось значительным снижением концентрации фрагментированной ДНК и свободного сфингозина на 7 и 14 сутки эксперимента.
Ключевые слова: апоптоз, острое почечное повреждение, мезенхимальные стволовые клетки, сфингозин, фрагментация ДНК.
EFFECTS OF INTACT AND APOPTOSIS-INDUCED MESENCHYMAL STEM CELLS ON THE DYNAMICS OF RENAL APOPTOSIS AT EXPERIMENTAL ACUTE KIDNEY INJURY
A.A. CHEBOTAREVA
Kursk БЬаЬе MedicOl University, 3 Каг1 Магх Str., Kursk, 305041, Russia, е-тай: сНеЬоЬатеоа_аИза@таП.ги
Abstract. The aim of the work was to determine the effect of intact and apoptosis-induced mesenchymal stem cells on the renal tissue apoptotic activity in experimental acute kidney injury. The experiments were conducted on white outbred male rats. Acute kidney injury was made on the model of ischemia-reperfusion by bilateral clamping of renal vessels for 30 minutes. Mesenchymal stem cells were obtained from bone marrow of healthy animals and cultured in a CO2 incubator under a standard growth medium and adding to the medium a homogenate renal tissue from rats underwent 3 days prior to study acute kidney injury by ischemia-reperfusion model. Culture of mesenchymal stem cells was injected into the tail vein one hour after the animal modeling of kidney damage. The study was conducted at 3, 7 and 14 days from the time the pilot
88
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2016 - V. 23, № 4 - P. 88-93
kidney damage. Apoptotic activity was monitored by determining the concentration of the fragmented DNA (fDNA) in the renal tissue using diphenylamine test and detecting the level of free sphingosine (SPG) by the method based on extraction sphingoid bases. Increase of fragmented DNA and free sphingosine concentrations in animals' renal tissue after acute kidney damage on all days of the experiment comparing to healthy animals has been found. Injection of intact mesenchymal stem cells led to a significant decrease in the content fDNK and SFG 7 and 14 day study on the indicators of animals not treated with the stem cells, indicating that inhibition of the activity of apoptosis in renal tissue. Application of apoptosis-induced mesenchymal stem cells led to an early reduction in the severity of current activity of apoptotic processes in the kidney tissue of animals, which was confirmed by a significant decrease in the concentration of free sphingosine and fDNK at 7 and 14 days of the experiment.
Key words: apoptosis, acute kidney damage, mesenchymal stem cells, sphingosine, DNA fragmentation.
Современная наука активно изучает течение апоптотического процесса в тканях организма в физиологических и патологических условиях. Процесс запрограммированной клеточной гибели, или апоптоз, характеризуется выраженными морфологическими изменениями и энергетически-зависимыми биохимическими механизмами [9,13]. Апоптоз считается жизненно важным компонентом различных процессов, в том числе нормальных клеточных взаимоотношений, развития и функционирования иммунной системы, гормон-зависимой атрофии, эмбрионального развития и химиче-ски-индуцированной клеточной гибели [14]. Неполноценный апоптоз, в том числе его чрезмерная или недостаточная активность, ведёт к развитию всевозможных заболеваний, таких как нейродегенеративные процессы, ишемиче-ские поражения различных органов, аутоиммунные нарушения, опухолевый рост, инфекционные процессы и бесплодие [2,11,17]. В последнее время пристальное внимание уделяется тщательному изучению ишемических поражений внутренних органов, в том числе и почек, приводящих к острому повреждению почек (ОПП). Это связано с относительно высокой частотой встречаемости данной патологии среди населения - 180-280 человек на 100 тысяч населения, трудностью своевременной диагностики и адекватной коррекции патологии, высоким риском развития инвалидизации пациентов [7]. Вследствие высокой метаболической активности почечная ткань крайне восприимчива к любым повреждениям, а основным патогенетическим механизмом развития ОПП является ишемическое или гипоксическое поражение паренхимы почки. В ходе этого нарушается синтез энергетически богатых субстратов, ба-
ланс во внутриклеточных мессенджерных системах, в том числе системе сфингоидных соединений, а также, снижение активности антиок-сидантной защиты. Это ведёт к активации сво-боднорадикального окисления, повреждению клеточных мембран эпителиоцитов и их гибели путём апоптоза или некроза. Как результат течения апоптотических процессов в клетке активируется процесс фрагментации ядерной ДНК и сморщивания цитоплазматической мембраны [12]. В зависимости от стадии острого повреждения почки скорость протекания процессов апоптоза может варьировать.
При развитии острой функциональной недостаточности почки возникает необходимость своевременной коррекции данного состояния путём поддерживающей терапии или полной замены функции поражённого органа. Длительное повреждение почечной паренхимы приводит к глубоким структурным и биохимическим дефектам, что может повлечь за собой хронизацию процесса. В этих условиях особенно важным является попытка изыскания новых методов лечения данного состояния и на передний план в последние годы выходит разработка клеточных направлений терапии. Стволовые клетки обладают рядом уникальных свойств, таких как мультипотентность, высокая пролиферативная активность и дифференци-ровочный потенциал, они способны синтезировать такие биологигически активные вещества, как интерлейкины, факторы роста, иммунносу-прессивные агенты [3,16]. Мезенхимальные стволовые клетки (МСК) сравнительно легко выделяются и культивируются в условиях лаборатории. Доказана эффективность их применения в терапии заболеваний сердечнососудистой системы, инфекционных и септических процессов,
10ШМАЬ ОБ ШШ МБЭТСАЬ ТБСНМОШСТББ - 2016 - V. 23, № 4 - Р. 88-93
аутоиммунной патологии [10,18]. Перспективным считается направление применения ме-зенхи МСК для коррекции ишемических повреждений. Однако остаётся невыясненным вопрос влияния течения апоптотических процессов на активность МСК и возможность их применения для коррекции ишемических повреждений почечной ткани.
Цель исследования - определение влияния интактных и апоптоз-индуцированных мезен-химальных стволовых клеток (аи-МСК) на динамику апоптоза в почечной ткани при экспериментальном остром повреждении почек.
Материалы и методы исследования. Исследование проводилось на 52 самцах белых беспородных крыс возрастом 14-16 недель и массой 200±50 г. Все животные содержались в стандартных условиях виварияи проходили 14-ти дневный карантин перед вступлением в эксперимент, исследования проводились в одно и то же время суток с 8 до 12 ч, с соблюдением принципов, изложенных в Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей (г. Страсбург, Франция, 1986) и согласно правилам лабораторной практики РФ (приказ МЗ РФ №267 от 19.06.2003 г.). Острое повреждение почек у лабораторных животных создавали по модели ишемия-реперфузия путём рассечения кожи и мышечного слоя в поясничной области с двух сторон в проекции почек, с последующим пережатием зажимами обеих почечных ножек на 30 минут в условиях стерильной лаборатории под эфирным наркозом [1]. МСК получали из костного мозга бедренной и боль-шеберцовой кости здоровых лабораторных крыс, путём промывания полости кости 3 мл питательной среды ИГЛА-МЕМ в стерильную пробирку. МСК отделяли от гемопоэтических с помощью ресуспензирования, фильтрования через капроновую сеточку, а также за счёт адгезии к культуральному пластику. Жизнеспособность МСК определялась по тесту с трипано-вым синим, при этом, клеточные суспензии, содержащие меньше 90% жизнеспособных клеток, не использовали. Конечную концентрацию живых МСК доводили до количества 5*104 в 1 мл среды и разливали в культуральную посуду, площадью 25 см2. Посев клеток производился на питательной среде ИГЛА-МЕМ с добавлением 10% сыворотки зародышей крупного ро-
гатого скота, антибиотика и Ь-глутамина со сменой 1\2 среды каждые 5 суток - интактные МСК (и-МСК). Создание апоптоз-индуцированного окружения достигалось путём введения в культуру мезенхимальных стволовых клеток на моменте посева гомогената ишемизированной почечной ткани, забранной у лабораторных животных на 3 сутки после перенесенного экспериментального острого почечного повреждения, далее культивирование проходило по вышеуказанному методу [8]. Культивирование проводилось в условиях СО2 инкубатора ИПБШУ с концентрацией углекислого газа 5% в стерильной лаборатории клеточных культур. Введение МСК проводилось через 1 час после моделирования ОПП в количестве 5*106 клеток в хвостовую вену крыс.
Все животные, участвовавшие в эксперименте, были поделены на 4 группы:1-я группа -интактные животные (11 крыс); 2-я - ОПП (13 животных); 3-я - ОПП и введение и-МСК (15 животных); 4-я - ОПП и введение аи-МСК (13 животных).
Забой животных проводили на 3, 7 и 14 сутки после формирования ОПП путём декапи-тации под эфирным наркозом с немедленным извлечением почек. Течение апоптотического процесса контролировали путем определения концентрации фрагментированной ДНК (фДНК) в почечной ткани с использованием дифенила-минового теста и выявления уровня свободного сфингозина (СФГ) по методике
М.И. Прохоровой, основанной на экстракции сфингоидных оснований диэтиловым эфиром [5,6]. Измерения проводили с помощью спектрофотометра СФ 46.
Полученные результаты обрабатывали с использованием статистического ¿-критерия Стьюдента с помощью программного пакета статистической обработки данных Statistica 6,0. Результаты считались достоверными при значении р=0,05.
Результаты и их обсуждение. Установлено, что уровень фрагментации ДНК в почечной ткани животных, перенесших ОПП, оказался значительно выше такового у интактных крыс. Так, содержание фДНК на 3 и 7 и 14 сутки после моделирования ОПП увеличивалось соответственно в 6,8; 5,5 и 6,7 раз, при этом достоверных различий в полученных данных на различные сроки исследования не выявлено (табл. 1).
ВЕСТНИК НОВЫХ МЕДИЦИНСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ - 2016 - Т. 23, № 4 - С. 88-93 JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2016 - V. 23, № 4 - P. 88-93
Таблица 1
Уровень фрагментации ДНК в почечной ткани после экспериментального острого повреждения почек на фоне введения мезенхимальных стволовых клеток (М±т)
Примечание: * - отмечены данные, достоверные относительно групп наблюдения; л - отмечены данные, достоверные относительно суток наблюдения (*л - р<0,05)
Таблица 2
Уровень свободного сфингозина в почечной ткани после экспериментального острого
повреждения почек на фоне введения мезенхимальных стволовых клеток (М±т)
Примечание: * - отмечены данные, достоверные относительно групп наблюдения; л - отмечены данные, достоверные относительно суток наблюдения (*л - р<0,05); 3. Уровень СФГ - нг/мг белка
После введения и-МСК, культивированных в классическом окружении животным с ОПП на
з, 7 и 14 сутки эксперимента уровень ДНК фрагментации в почечной ткани был соответственно в 6,1; 3,9 и 2,8 раз выше, чем в контроле. Но, если на 3 сутки содержание фДНК оказалось аналогичным без введения и-МСК, то на 7
и, особенно на 14 сутки, уровень данного метаболита статистически снижался по сравнению с животными с ОПП в 1,4 и 2,4 раза (табл. 1).
Наиболее эффективным оказалось применение аи-МСК, т. к. на 7 сутки, по сравнению с показателями животных с ОПП и ОПП с введе-
нием и-МСК, применение апоптоз-индуцированных мезенхимальных стволовых клеток снижало уровень ДНК фрагментации в почечной ишеминизированной ткани соответственно в 2,0 и 1,4 раза. На 14 сутки исследования данный показатель снизился в еще большей степени: в 4,1 и 1,7 раз (табл. 1).
Сходная динамика выявлена также при измерении уровня свободного сфингозина (СФГ) - второго использованного нами показателя апоптотического процесса. После формирования ОПП, содержание СФГ в почечной ткани превышало аналогичный показатель здоровых животных на 3, 7 и 14 сутки соответственно в 2,3; 2,1 и 2,2 раза. Применение и-МСК на 3 сутки индукции ОПП не влияло, а на 7 и 14 снижало содержание СФГ, по сравнению с животными без применения и-МСК, соответственно в 1,2 и 1,4 раза (табл. 2).
Введение аи-МСК животным с ОПП на 3 сутки развития последствий ишемии не влияло на содержание СФГв почечной ткани. На 7 сутки индукции острого ишемического поражения почек использование апоптоз-индуцированных МСК снижало уровень СФГ в почечной ткани, по сравнению с группой животных только с ОПП или с ишемическим поражение почек и получавших и-МСК, соответственно в 1,5 и 1,2 раза. На 14 сутки применение аи-МСК оказалось еще более эффективным, т. к. снижало содержание СФГ соответственно в 1,8 и 1,2 раза (табл. 2).
Таким образом, исходя из вышеуказанного, можно говорить об активации процессов апоп-тоза в почечной ткани на все сутки наблюдения после моделирования экспериментального почечного повреждения. На фоне введения ин-тактных МСК наблюдается снижение активности апоптотического процесса в почечной ткани животных на 7 и 14 сутки эксперимента, что подтверждается данными динамики содержания обоих выбранных нами маркеров. Анализируя значительное снижение уровня СФГ и фДНК после введения апоптоз-индуцированных МСК относительно показателей животных, которым не вводили МСК или вводили и-МСК, можно сделать вывод об эффективном угнетении активности в ткани почек
№ гр. Условия опыта Сутки наблюдения
3 сутки 7 сутки 14 сутки
1 Интактные животные 4,3±0,4% 4,3±0,4% 4,3±0,4%
2 ОПП без введения МСК 29,4±4,1%*1 23,8±3,2%*1 28,7±3,9%*1
3 ОПП с введением и-МСК 26,1±3,1%*1 16,7±2,2%*1-2 Л3 12,0±1,4%*1-2 л3-7
4 ОПП с введением аи-МСК 30,7±4,4%*1 11,9±1,8%*1-3 лз 7,0±1,2%*1-3 л3,7
№ Условия Сутки наблюдения
ГР. опыта 3 сутки 7 сутки 14 сутки
1 Интактные животные 16,3±1,4 16,3±1,4 16,3±1,4
2 ОПП без введения МСК 37,2±2,7 33,9±2,4 35,1±3,9
3 ОПП с введением и-МСК 34,5±3,1 27,9±2,1*1-2 Лз 24,6±2,1 л3
4 ОПП с введением аи-МСК 41,2±6,4 22,8±1,8 *!-3 л3 19 7±1 1 *1-З лЗ,7
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2016 - V. 23, № 4 - P. 88-93
апоптотического процесса, что наиболее выражено на 14 сутки эксперимента.
Интерпретируя полученные данные можно говорить о положительном влиянии введения интактных МСК на течение острого ишемиче-ского повреждения почки. Литературными данными подтверждается возможность вводимых и-МСК попадать в ходе хоуминга в почечную паренхиму, где, вероятнее всего, они способны дифференцироваться в клетки почечного эпителия, активируя процессы ангиогенеза, восстанавливая структуру дистальных канальцев и, как следствие, улучшая почечное функционирование. Кроме того, они способны выделять ряд биологически активных субстратов, таких как факторы роста, модулировать иммунный ответ, снижая интенсивность воспалительного процесса и активируя собственный репарационный потенциал ткани, снижая, таким образом, апоптотическую активность [4].
Введение апоптоз-индуцированных МСК, по-видимому, ускоряет процессы репарации в почечной ткани за счет скорейшей пролиферации данных клеток и их дифференцировки в почечный эндотелий, благодаря их предыдущему «обучению» на этапе культивирования в условиях введения в культуральное окружение
Литература
1. Бриндак Д.В., Фильчуков Д. А. Содержание нитрит-анионов и состояние системыантиоксидантной защиты при введении мезенхимальныхстволовых клеток на фоне экспериментальной острой почечной недостаточности // Укра'шський медичний альманах. 2012. Т. 15, № 6. С. 30-32.
2. Дорошенко В. Э. Апоптоз в эндометрии у бесплодных женщин с комплексной неатипической гиперплазией (КНГЭ) в период окна имплантации // Таврический Медико-Биологический Вестник. 2012. Т. 15, №2. Ч. 1 (58). С. 103-105.
3. Калинина Н.И., Сысоева В.Ю., Рубина К.А., Парфенова Е.В., Ткачук В.А. Мезенхимальные стволовые клетки в процессах роста и репарации тканей // Acta Naturae (русскоязычная версия). 2011. №4. С. 32-39.
4. Кирпатовский В.И., Казаченко А.В., Надточий О.Н. Перспективы использования стволовых клеток в лечении острой и хронической почечной недостаточности // Урология. 2007. № 6. C. 82-87.
почечной ткани, ишемизированной так же, как и повреждённый экспериментальный орган. Таким образом, активация процессов апоптоза в условиях введения аи-МСК менее продолжительна, за счёт сокращения длительности поражения почечной ткани. Данные результаты совпадают с исследованиями, проведенными в области апоптоз-индуцированной пролиферации и репарации в повреждённом органе [15].
Выводы:
1. При остром ишемическом повреждении почек на 3, 7 и 14 сутки с момента моделирования наблюдается значительное повышение уровня маркеров активности апоптотического процесса - свободного сфингозина и фрагмен-тированной ДНК в почечной ткани.
2. Введение интактных мезенхимальных стволовых клеток в условиях острого повреждения почек снижает активность апоптоза в ткани на 7 и 14 сутки наблюдения.
3. Апоптоз-индуцированные мезенхималь-ные стволовые клетки при ОПП более эффективно, по сравнению с интактными МСК, снижают содержание апоптотических маркеров в почечной ткани.
References
Brindak DV, Fil'chukov DA. Soderzhanie nitrit-anionov i sostoyanie sistemyantioksidantnoy zashchity pri vve-denii mezenkhimal'nykhstvolovykh kletok na fone eksperimental'noy ostroy pochechnoy nedostatochnosti [The content of nitrite anion and state sistemyantioksidantnoy protection when administered mezenhimal-nyhstvolovyh cells against a background of experimental acute renal failure]. Ukrains'kiy medichniy al'ma-nakh. 2012;15(6):30-2. Russian.
Doroshenko VE. Apoptoz v endometrii u besplodnykh zhenshchin s kompleksnoy neatipicheskoy giperplaziey (KNGE) v period okna implantatsii [Apoptosis in the endometrium of infertile women with complex hyper-plasia neatipicheskoy (KNGE) during the window of implantation]. Tavricheskiy Mediko-Biologicheskiy Vestnik. 2012;15(2. Ch. 1 (58).):103-5. Russian. Kalinina NI, Sysoeva VYu, Rubina KA, Parfenova EV, Tkachuk VA. Mezenkhimal'nye stvolovye kletki v protses-sakh rosta i reparatsii tkaney [Mesenchymal stem cells in the process of growth and tissue repair]. Acta Naturae (russkoyazychnaya versiya). 2011;4:32-9. Russian. Kirpatovskiy VI, Kazachenko AV, Nadtochiy ON. Pers-pektivy ispol'zovaniya stvolovykh kletok v lechenii ostroy i khronicheskoy pochechnoy nedostatochnosti [Prospects for the use of stem cells in the treatment of acute and
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2016 - V. 23, № 4 - P. 88-93
5. Орлова Е.А., Комаревцев В.Н. Определение фрагментации ДНК в клетках почечной ткани // Актуа-льт проблеми акушерства i пнекологЫ, клМчно!' iмунологil та медично!' генетики. 2001. №6. С. 206208.
6. Прохорова М.И. Методы биохимических исследований (липидный и энергетический обмен). Ленинград: Изд-во Ленингр. ун-та, 1982. 178 с.
7. Сигитова О.Н., Богданова А.Р. Современные подходы к диагностике, классификации и оценке тяжести острого повреждения почек // Вестник современной клинической медицины. 2015. № 1. С. 146-153.
8. Чеботарёва А.А., Демьяненко Е.В., Соловьёва И.В. Динамика изменений уровня свободных метаболитов оксида азота в культуре мезенхимальных стволовых клеток крыс, культивированных в апоптоз-индуцированном окружении // Проблемы экологической и медицинской генетики и клинической иммунологии. 2014. № 5. С. 17-22.
9. Эфендиев А.М.О., Мамедова Ф.И.К. Биохимические основы апоптоза при сердечной недостаточности // Universum: медицина и фармакология. 2014. №12. С. 4.
10. Biancone L., Bruno S., Deregibus M.C., Tetta C., Ca-mussi G. Therapeutic potential of mesenchymal stem cell-derived microvesicles // Nephrol. Dial. Transplant. 2012. Vol. 27, №8. Р. 3037-3042.
11. Cacciapaglia F., Spadaccio C., Chello M., Gigante A., Coccia R., Afeltra A., Amoroso A. Apoptotic molecular mechanisms implicated in autoimmune diseases // European Review for Medical and Pharmacological Sciences. 2009. №13. Р. 23-40.
12. Havasi A., Borkan S.C. Apoptosis and acute kidney injury // Kidney Int. 2011. Vol. 80, №1. Р. 29-40.
13. Kezban Kartla§mi§, Umut Kokba§, Levent Kayrin. Biochemistry of Apoptosis // Archives Medical Review Journal. 2016. Vol. 25, №1. Р. 52-69.
14. Portt L., Norman G., Clapp C., Greenwood M., Greenwood M.T. Anti-apoptosis and cell survival: A review // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Molecula12. r Cell Research. 2011. Vol. 1813, №1. P. 238-259.
15. Ryoo H.D., Bergmann A. The role of apoptosis-induced proliferation for regeneration and cancer // Cold Spring Harb Perspect Biol. 2012. Vol. 4, №8. Р. 1-17.
16. Xin Wei, Xue Yang, Zhi-peng Han, Fang-fang Qu, Li Shao, Yu-fang Shi Mesenchymal stem cells: a new trend for cell therapy // Acta Pharmacologica Sinica. 2013. Vol. 34. Р. 747-754.
17. Yang J., Guo X., Yang J., Ding J., Li S., Yang R., Fan Z., Yang C. RP105 protects against apoptosis in ische-mia/reperfusion-induced myocardial damage in rats by suppressing TLR4-mediated signaling pathways // Cell. Physiol. Biochem. 2015. Vol. 36, №6. Р. 2137-2148.
18. Иванов Д.В., Хадарцев А.А. Клеточные технологии в восстановительной медицине: Монография / Под ред. А.Н. Лищука. Тула: Тульский полиграфист, 2011. 180 с.
chronic renal failure]. Urologiya. 2007;6:82-7. Russian. Orlova EA, Komarevtsev VN. Opredelenie fragmentatsii DNK v kletkakh pochechnoy tkani [Determination of the DNA fragmentation in muscle cells]. Aktual'ni problemi akusherstva i ginekologii, klinichno'i imunologii ta medichno'i genetiki. 2001;6:206-8. Russian. Prokhorova MI. Metody biokhimicheskikh issledovaniy (lipidnyy i energeticheskiy obmen) [Methods of biochemical research (lipid and energy metabolism)]. Leningrad: Izd-vo Leningr. un-ta; 1982. Russian. Sigitova ON, Bogdanova AR. Current approaches to diagnosis, classification and evaluation of the severity of acute renal injury. Vestnik sovremennoy klini-cheskoy meditsiny. 2015;1:146-53. Russian. Chebotareva AA, Dem'yanenko EV, Solov'eva IV. Dynamics of changes in the level of free nitric oxide metabolites in the culture of mesenchymal stem cells of rats cultured in apoptosis-induced environment. Problemy ekologicheskoy i meditsinskoy genetiki i klinicheskoy immunologii. 2014;5:17-22. Russian.
Efendiev AMO, Mamedova FIK. Biokhimicheskie os-novy apoptoza pri serdechnoy nedostatochnosti [Biochemical basis of apoptosis in heart failure]. Universum: meditsina i farmakologiya. 2014;12:4. Russian. Biancone L, Bruno S, Deregibus MC, Tetta C, Camus-si G. Therapeutic potential of mesenchymal stem cell-derived microvesicles. Nephrol. Dial. Transplant. 2012;27(8):3037-42.
Cacciapaglia F, Spadaccio C, Chello M, Gigante A, Coc-cia R, Afeltra A, Amoroso A. Apoptotic molecular mechanisms implicated in autoimmune diseases. European Review for Medical and Pharmacological Sciences. 2009;13:23-40.
Havasi A, Borkan SC. Apoptosis and acute kidney injury. Kidney Int. 2011;80(1):29-40.
Kezban Kartla§mi§, Umut Kökba§, Levent Kayrin. Biochemistry of Apoptosis. Archives Medical Review Journal. 2016;25(1):52-69.
Portt L, Norman G, Clapp C, Greenwood M, Greenwood MT. Anti-apoptosis and cell survival: A review. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Molecula12. r Cell Research. 2011;1813(1):238-59. Ryoo HD, Bergmann A. The role of apoptosis-induced proliferation for regeneration and cancer. Cold Spring Harb Perspect Biol. 2012;4(8):1-17. Xin Wei, Xue Yang, Zhi-peng Han, Fang-fang Qu, Li Shao, Yu-fang Shi Mesenchymal stem cells: a new trend for cell therapy. Acta Pharmacologica Sinica. 2013;34:747-54.
Yang J, Guo X, Yang J, Ding J, Li S, Yang R, Fan Z, Yang C. RP105 protects against apoptosis in ische-mia/reperfusion-induced myocardial damage in rats by suppressing TLR4-mediated signaling pathways. Cell. Physiol. Biochem. 2015;36(6):2137-48. Ivanov DV, Khadartsev AA. Kletochnye tekhnologii v vosstanovitel'noy meditsine: Monografiya / Pod red. A.N. Lishchuka. Tula: Tul'skiy poligrafist; 2011. Rus-
