CC BY
40
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ХИРУРГИЯ
О.Б. ОСТРОВСКАЯ, В.И. РУСИН, С.М. СМОТРИН
ВЛИЯНИЕ ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРОВ НА УЛЬТРАСТРУКТУРНЫЕ ЭЛЕМЕНТЫ БРЮШИНЫ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
УО «Гродненский государственный медицинский университет»,
Республика Беларусь
Цель. Изучить влияние спиртовых растворов родамина, кумарина, нильского синего, хлорофил-липта на состояние ультраструктурных элементов брюшины.
Материал и методы. Исследование было проведено на белых беспородных крысах-самцах массой 150-200 г. Крысам опытных групп вводился 0,1% спиртовой раствор фотосенсибилизаторов родамина, кумарина, нильского синего, хлорофиллипта внутрибрюшинно. Животным контрольной группы внутри-брюшинно вводили 0,1% раствор этанола. Через 48 часов с помощью электронной микроскопии оценивали изменения ультраструктурных элементов брюшины.
Результаты. Спиртовые растворы фотосенсибилизаторов кумарина, нильского синего, хлорофиллипта при их внутрибрюшинном введении не вызывали существенных изменений ультраструктурных элементов брюшины крыс. Внутрибрюшинное же введение фотосенсибилизатора родамина сопровождалось развитием умеренных изменений ультраструктурных элементов брюшины лабораторных животных.
Заключение. Учитывая отсутствие существенного отрицательного влияния фотосенсибилизаторов родамина, кумарина, нильского синего, хлорофиллипта на ультраструктурные элементы брюшины, перспективно дальнейшее изучение их влияния на организм лабораторных животных, в том числе с целью дальнейшего использования данных фотосенсибилизаторов для проведения сеансов фотодинами-ческой терапии перитонита.
Ключевые слова: перитонит, фотосенсибилизаторы, ультраструктурные элементы брюшины
Objectives. To study the influence of alcohol solutions of rhodamine, coumarin, Nile blue and chlorophyllipt on the state of peritoneum ultrastructural elements.
Methods. The investigation was carried out on outbreed male white rats weighing 150-200 g 0,1 % alcohol solution of rhodamine, coumarin, Nile blue and chlorophyllipt photo sensitizers was injected intra-peritoneally to the rats of the experimental group, 0,1 % solution of ethanol was injected intraperitoneally to the rats of the control group. The changes in ultrastructural elements of peritoneum were evaluated by electron microscopy after 48 hours.
Results. Alcohol solutions of coumarin, Nile blue and chlorophyllipt photosensitizers didnt cause substantial changes of ultrastructural elements of the peritoneum in rats. And the intraperitoneum introduction of rhodamine photo sensitizer was accompanied with moderate changes of the peritoneum ultrastructural elements in laboratory animals.
Conclusions. Further research of influence of rhodamine, coumarin, Nile blue and chlorophyllipt photo sensitizers on laboratory animals' organisms is perspective in consideration of absence of substantial negative influence of these photo sensitizers on ultrastructural elements of the peritoneum, including the goal of these photo sensitizers further using for sessions conducting of the peritonitis photodynamic therapy.
Keywords: peritonitis, photo sensitizers, ultrastructural elements of peritoneum
Введение 2) фармакокинетика препарата должна обес-
печивать быстрое выведение его после сеанса Фотодинамическая терапия является одним терапии для уменьшения фототоксичности; из интенсивно развивающихся направлений ла- 3) фотосенсибилизатор должен иметь неиз-
зерной медицины [1, 2, 3, 4]. Для проведения менный состав и, желательно, состоять из од-
фотодинамической терапии используются раз- ного вещества, обладать доступностью получе-
личные фотосенсибилизаторы [5, 6, 7], однако ния или синтеза;
все они должны отвечать ряду требований: 4) желательно, чтобы сенсибилизатор имел
1) фотосенсибилизатор не должен проявлять высокий квантовый выход в триплетном состо-
или иметь крайне низкую темновую и световую янии с энергией триплета 94 кДж/моль (энергия
фототоксичность; возбуждения, необходимая для образования син-
Таблица Характеристика экспериментальных групп
№ п/п Название группы Кол-во животных Вводимые растворы, мл
1 Интактные животные З -
2 Контроль 4 0,1% р-р этанола, 2 мл
З Опытные - 1 З Хлорофиллипт, 0,1% спиртовой раствор, 2 мл
4 Опытные - 2 З Родамин, 0,1% спиртовой раствор, 2 мл
5 Опытные - З З Кумарин, 0,1% спиртовой раствор, 2 мл
6 Опытные - 4 З Нильский синий, 0,1% спиртовой раствор, 2 мл
глетного кислорода) и обеспечивал достаточный перенос энергии для образования синглет-ного кислорода;
5) препарат должен иметь выраженное поглощение в спектральном диапазоне, где биологические ткани имеют наибольшее пропускание (красный и ближний ИК-диапазоны 6601500 нм);
6) оптимум между величинами квантового выхода флюоресценции и квантового выхода интерконверсии;
7) хорошая растворимость в воде или в разрешенных для внутривенного введения жидкостях и кровезаменителях;
8) стабильность при хранении;
9) фармакологически не взаимодействовать с другими лекарственными препаратами [5, 8,
9, 10, 11, 12].
Возможности использования фотосенсибилизаторов далеко не исчерпаны и являются предметом проводимых испытаний, так как фо-тодинамическая терапия может быть альтернативой уже существующим методам и подходам в лечении хирургической патологии, в том числе острого перитонита. Применение антибактериальных препаратов при данном заболевании не гарантирует полного успеха в лечении. Показано, что эмпирически назначенная антибиотикотерапия эффективна в не более 60% случае [1З].
В литературе мы не встретили описания исследований по оценке влияния фотосенсибилизаторов на брюшину, в том числе при перитоните. Именно поэтому мы исследовали ультраструктурные изменения в брюшине при внутри-брюшинном введении фотосенсибилизаторов. Изучение их влияния на организм животных является также важным этапом доклинических исследований.
Цель исследования - изучить влияние спиртовых растворов родамина, кумарина, нильского синего, хлорофиллипта на состояние ульт-раструктурных элементов брюшины.
Материал и методы
Исследование было проведено на белых беспородных крысах-самцах массой 150-200 г, которые содержались на стандартном рационе вивария. Все оперативные вмешательства были осуществлены в условиях адекватной анестезии в соответствии с этическими нормами обращения с животными, а также требованиями мирового сообщества «Европейская конвенция по защите позвоночных, используемых для экспериментальных и иных научных целей» (Страсбург, 1986). Животным 4-х опытных групп внут-рибрюшинно вводили раствор одного из фотосенсибилизаторов; в контрольной группе вводили 0,1% р-р этанола (таблица).
Животных выводили из опыта через 48 часов после введения фотосенсибилизаторов путем декапитации сразу после введения их в эфирный наркоз. Ультраструктурные изменения брюшины определялись в участке брыжейки подвздошной кишки. Осуществляли забор брыжейки подвздошной кишки следующим образом: острым лезвием вырезали участок брыжейки площадью 3X4 мм из области, находящейся на расстоянии 1-1,5 см от впадения тонкой кишки в слепую и прилежащей к подвздошной кишке. Забирали тонкую полоску жировой прослойки, окружающей один из крупных сосудистых пучков брыжейки и прилежащую к нему прозрачную брыжейку, при этом прозрачная часть занимала не менее 2/3 площади образца. Материал фиксировали в 1% осмиевом фиксаторе в течение 2-х часов, промывали, обезвоживали, заключали в аралдит. Получали полутонкие и ультратонкие поперечные срезы прозрачной части брыжейки на ультрамикротоме МТ 7000 (ЯМС), полутонкие срезы окрашивали метиленовым синим и просматривали на световом микроскопе; ультратонкие срезы контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца (по Рейнольдсу) и изучали на электронном микроскопе JEOL-1011.
Результаты и обсуждение
У интактных животных средняя толщина брыжейки, измеренная на самых узких участках полутонких поперечных срезов органа, составила 46 мкм. На электронно-микроскопических препаратах видно, что брыжейка подвздошной кишки крысы с двух сторон покрыта мезо-телием, лежащим в один слой на базальной мембране (рис. 1). Соединительнотканная часть представлена многочисленными пучками коллагеновых волокон и тонкими эластическими пучками, расположенными параллельно плоскости брыжейки, а также клеточными элементами [14]. Большинство клеток соединительнотканного компонента брыжейки составляли фиб-робласты, отростки которых располагались в промежутках между волокнами, часто встречались макрофаги. Иногда встречались лимфоциты, единичные тучные клетки. Нередко в срез попадали капилляры, мелкие венулы, иногда ар-териолы. При этом частота встречаемости элементов сосудистого русла возрастала по мере приближения к брыжеечному краю кишки или к жировым прослойкам, окружающим крупные сосуды брыжейки.
Мезотелиоциты лежали на базальной мембране и имели различную толщину на протяжении отдельно взятой клетки; наибольшую толщину имела часть клетки, содержащая ядро. Ядро на поперечных срезах брыжейки обычно располагалось параллельно плоскости листка, имело неправильную форму с многочисленными инвагинациями и выпячиваниями кариолем-мы, содержало 1, редко 2 ядрышка. В цитоплазме встречались многочисленные митохондрии, короткие цистерны гранулярного эндоплазмати-ческого ретикулума (ГрЭР), лизосомоподобные образования, мелкие жировые капли. Комплекс Гольджи представлен одной-двумя стопками цистерн и системой канальцев и везикул. Изредка в срез попадали центриоли. Как на базальной поверхности, так и на поверхности, обращенной в брюшную полость, плазмолемма мезотелио-цита образовывала многочисленные эндоцитоз-ные везикулы. Кроме того, апикальная плазмо-лемма имела различной формы выпячивания и инвагинации, а также многочисленные микроворсинки. На стыках соседних мезотелиоцитов в апикальной части их соединения располагались десмосомы. Фибробласты, составляющие большинство клеток соединительнотканного компонента брыжейки, на срезе обычно имели
крупные вытянутые ядра с 1 (редко 2) ядрышками и узкий ободок цитоплазмы с длинными отростками. В цитоплазме встречались немногочисленные митохондрии, немногочисленные канальцы гранулярного эндоплазматического ре-тикулума, комплекс Гольджи в виде 1-й стопки цистерн и канальцев, мелкие липидные капли, единичные лизосомоподобные включения, иногда в срез попадали центриоли. В целом крупные ядра с деконденсированным хроматином, слабое развитие органелл (в частности, ГрЭР) и наличие центриолей в данных клетках свидетельствовало об их невысокой функциональной активности. Макрофаги соединительной ткани брыжейки часто располагались в непосредственном контакте с мезотелиоцитами, фиброблас-тами или тучными клетками и обычно имели крупное бобовидное или слабо вытянутое ядро (иногда с инвагинациями кариолеммы), широкий ободок цитоплазмы с инвагинациями плазма-леммы. В цитоплазме определялись митохондрии, многочисленные микровезикулы, умеренно развитый комплекс Гольджи, лизосомы и умеренное количество различных включений. Тучные клетки брыжейки наполнены специфичными гранулами и не имели признаков дегрануляции.
Ультраструктура брыжейки подвздошной кишки у крыс контрольной группы мало отличалась от таковой у интактных животных. Мезо-телиоциты на апикальной поверхности имели многочисленные микроворсинки. Строение фиб-робластов идентично строению этих клеток у интактных животных. Тучные клетки не имели признаков дегрануляции. Макрофаги брыжейки животных контрольной группы в отличие от ин-тактных часто имели неправильную форму ядра с инвагинациями кариолеммы, в их цитоплазме содержалось большее количество лизосомоподобных телец и различных включений, иногда встречались фагосомы. Цитоплазма макрофагов, как правило, образовывала несколько псевдоподий. Данная ультраструктурная организация характерна для активированных макрофагов. Наряду с этим, в брыжейке животных данной группы встречались единичные эозинофильные лейкоциты.
В целом, ультраструктура мезотелия, а также основного вещества и клеточных элементов соединительной ткани брыжейки подвздошной кишки у крыс контрольной группы была сходной с таковой у интактных животных. Однако наличие активированных макрофагов и единич-
Рис. 1. Вид брыжейки в электронный микроскоп. Поперечный срез брыжейки подвздошной кишки крысы. МК - мезотелиальная клетка, Фб -
фибробласт, ОФб - отросток фибробласта, Мф -макрофаг, КВ - коллагеновые волокна. Ув. 5 тыс.
ных эозинофильных лейкоцитов свидетельствовало о некоторой активации иммунных процессов в брыжейке в ответ на введение растворителя.
У животных 3-й группы на некоторых участках брыжейки в мезотелиальных клетках (МК) наблюдалось увеличение размеров и количества эндоцитозных везикул. При этом апикальная плазмолемма МК образовывала многочисленные выступы и инвагинации причудливой формы, микроворсинки оставались сохранными (рис. 2). Наряду с участками измененного ме-зотелия в образцах обнаруживались и неизмененные участки мезотелиального покрова. Ультраструктура эндотелия сосудов была сходной с таковой в контрольной группе. Макрофаги обычно имели многочисленные инвагинации ядерной мембраны, характеризовались наличием значительного количества лизосом и иных включений, образовывали множество псевдоподий. Данные характеристики соответствовали таковым в контрольной группе. Встречались единичные тучные клетки с частичной дегрануляцией. Также в соединительной ткани брыжейки встречались единичные эозинофильные лейкоциты.
Основные отличия в ультраструктуре брыжейки у животных данной группы в сравнении с контрольной касались морфологии мезотелиаль-ных клеток и заключались в увеличении размеров и количества эндоцитозных везикул и повышении количества выступов и инвагинаций апикальной мембраны. Последние образования, по-видимому, соответствовали так называемым «ворсинам» и «аркадам», выявляемым при рас-
Рис. 2. Участок мезотелиальной клетки брыжейки крысы. МК - мезотелиальная клетка, ЭВ -эндоцитозные везикулы, Мв - микроворсинки,
БМ - базальная мембрана, КВ - коллагеновые волокна, ЭВ - эластические волокна. Ув. 25 тыс.
тровой электронной микроскопии поверхности мезотелиальных клеток. Данные реактивные структуры мезотелия, по мнению некоторых авторов, способствуют повышению всасывательной способности брюшины [15]. Однако, описанные изменения можно рассматривать и как результат нарушения транспорта жидкости в мезотелии в результате раздражающего действия вводимого агента. Последнее косвенно подтверждалось наличием частично дегранули-рованных тучных клеток. Таким образом, у животных через 48 часов после внутрибрюшинно-го введения хлорофиллипта в указанной дозе в брыжейке подвздошной кишки наблюдались умеренно выраженные очаговые реактивные изменения ультраструктуры мезотелия, которые, по-видимому, носили функциональный характер.
У животных 4-й группы на большинстве исследованных участков мезотелиального покрова брыжейки наблюдалось уменьшение количества и длины микроворсинок на апикальной поверхности клеток, часто отмечались признаки повреждения, отека и разрушения микроворсинок (рис. 3). Апикальная поверхность ме-зотелиоцитов на многих участках срезов имела большое число инвагинаций и выступов. Макрофаги соединительной ткани брыжейки имели множество лизосом и различных включений, часто в их цитоплазме встречались фагосомы, которые иногда содержали фрагменты цитоплазмы эозинофила (рис. 4). В цитоплазме фиброб-ластных клеток брыжейки почти во всех случаях можно было найти небольшие липидные капли, чего почти не наблюдалось в контроле. Нередко встречались тучные клетки, имеющие
Рис. 3. Мезотелиальная клетка брыжейки крысы. Разрушение, отек и отторжение микроворсинок. КВ -коллагеновые волокна, МК - мезотелиальная, Мв -микроворсинкиклетка. Ув. 15 тыс.
признаки частичной дегрануляции. Эндотелий капилляров характеризовался повышенной изре-занностью контура апикальной мембраны (рис. 5). В отличии от контрольной группы как в просвете мелких сосудов, так и в соединительной ткани брыжейки часто встречались эозинофильные лейкоциты.
Таким образом, у животных данной группы через 48 часов после внутрибрюшинного введения родамина в указанной дозе в брыжейке подвздошной кишки наблюдались существенные изменения ультраструктуры, которые затрагивали как мезотелиальный слой, так и эндотелий сосудов, а также клеточные элементы соединительной ткани. Так, происходило повреждение микроворсинок мезотелиоцитов с изменением транспорта жидкости через мезотели-альный слой и эндотелий сосудов, нарушением метаболизма в фибробластных клетках и накоплением в них жировых капель. Частичная дегрануляция тучных клеток, накопление в соединительной ткани брыжейки эозинофилов, а также их фагоцитоз активированными макрофагами, надо полагать, являются свидетельством развития аллергической реакции на введение препарата.
Ультраструктура брыжейки подвздошной кишки у крыс 5-й группы мало отличалась от таковой у контрольных животных. Мезотелио-циты на апикальной поверхности имели многочисленные микроворсинки. Строение фибробла-стов и эндотелиоцитов было идентичным строению этих клеток у контрольных животных. Макрофаги брыжейки часто имели большое количество лизосом, лизосомоподобных телец и
Рис. 4. Макрофаг брыжейки крысы. В цитоплазме массивная фагосома, содержащая остатки гранул эозинофила (на рисунке слева вверху). Я - ядро,
Лс - лизосома, Фс - фагосома, ЭВ - эластические волокна, КВ - коллагеновые волокна. Ув. 10 тыс.
различных включений, иногда встречались фа-госомы. Цитоплазма макрофагов, как правило, образовывала несколько псевдоподий. Тучные клетки имели признаки частичной дегрануляции. В брыжейке животных данной группы встречались единичные эозинофильные лейкоциты.
В целом, ультраструктура мезотелия, а также основного вещества и клеточных элементов соединительной ткани брыжейки подвздошной кишки у крыс через 48 часов после внутрибрю-шинного введения кумарина (в указанной дозе) была сходной с таковой у контрольных животных.
У животных 6-й группы мезотелиоциты на апикальной поверхности имели многочисленные микроворсинки. В мезотелиоцитах нередко встречался развитый комплекс Гольджи. Фиб-робласты нередко содержали липидные капли в цитоплазме. В макрофагах брыжейки часто определялись фагосомы, нередко встречались клетки с развитым комплексом Гольджи при умеренном количестве лизосом и включений (рис. 6). Строение эндотелиоцитов было идентичным таковому у контрольных животных. Встречались единичные тучные клетки, которые в большинстве случаев имели признаки дегрануляции. В брыжейке животных данной группы встречались единичные эозинофильные лейкоциты.
Через 48 часов после внутрибрюшинного введения нильского синего (в указанной дозе) не наблюдалось существенного нарушения ультраструктуры мезотелия, а также соединительнотканных компонентов брыжейки. Однако наблюдаемая умеренная гипертрофия комплекса
> . •- Г и\х. шям
Рис. 5. Краевое стояние эозинофила в мелкой венуле брыжейки. Повышенная изрезанность
контура апикальной мембраны эндотелиоцитов.
Э - эозинофил, ЭК - эндотелиальная клетка,
Эр - эритроцит в просвете сосуда. Ув. 10 тыс.
Гольджи в мезотелиоцитах и макрофагах брыжейки может свидетельствовать об активации метаболизма, обеспечивающих синтетические процессы в данных клетках и детоксикацион-ные функции в ответ на воздействие препарата.
Выводы
1. Спиртовые растворы фотосенсибилизаторов кумарина, нильского синего, хлорофиллип-та при их внутрибрюшинном введении не вызывают существенных изменений ультраструктур-ных элементов брюшины крыс.
2. Внутрибрюшинное введение фотосенсибилизатора родамина сопровождается развитием умеренных изменений ультраструктурных элементов брюшины лабораторных животных.
3. Учитывая отсутствие существенного отрицательного влияния фотосенсибилизаторов родамина, кумарина, нильского синего, хлоро-филлипта на ультраструктурные элементы брюшины, перспективно дальнейшее изучение их влияния на организм лабораторных животных, в том числе с целью дальнейшего использования данных фотосенсибилизаторов для проведения сеансов фотодинамической терапии перитонита. ЛИТЕРАТУРА
1. Возможности антибактериальной фотодинами-ческой терапии в комплексном лечении пациентов с хроническими язвами венозной этиологии / Е. В. Баранов [и др.] // Современные аспекты лечения декубитальных язв у пациентов со спинальной травмой: сб. науч. ст. Респ. науч.-практ. конф.
Рис. 6. Макрофаг брыжейки крысы. В цитоплазме массивная фагосома. Хорошо развит комплекс Гольджи. Я - ядро, Фс - фагосома,
Мх - митохондрии, КГ - комплекс Гольджи.
Ув. 15 тыс.
с междунар. участием, Гомель, 25 марта 2011 г. / ГомГМУ; редкол.: А. Н. Лызиков [и др.]. - Гомель, 2011. - C. 5-7.
2. Экспериментальное обоснование (in vitro) эффективности фотодинамической терапии на типовые и госпитальные штаммы микроорганизмов / Е. В. Баранов [и др.] // Современные аспекты лечения декубитальных язв у пациентов со спинальной травмой: сб. науч. ст. Респ. науч.-практ. конф. с междунар. участием, Гомель, 25 марта 2011 г. / ГомГМУ; редкол.: А. Н. Лызиков [и др.]. - Гомель, 2011. - C. 3-5.
3. Буйлин, В. А. Низкоинтенсивные лазеры в хирургии: реальность и перспективы / В. А. Буйлин, Е. И. Брехов, В. И. Брыков // Анналы хирургии. - 2003. - N°
2. - С. 8-10.
4. Миронов, А. Ф. Фотодинамическая терапия рака -новый эффективный метод диагностики и лечения злокачественных опухолей / А. Ф. Миронов // СОЖ. -1996. - № 8. - С. 32-40.
5. Основные направления фотодинамической терапии в медицине / Р М. Салмин [и др.] // Новости хирургии. - 2008. - № 3. - С. 155-162.
6. Фотодинамическая терапия: перспективы применения в офтальмологии / С. Э. Аветисов [и др.] // Вестн. офтальмологии. - 2005. - № 5. - С. 3-6.
7. Оценка биологических свойств новых фотосенсибилизаторов хлоринового ряда: лекции [Электронный ресурс] / Центр лазерной медицины «Волшебный луч». - Москва, 2007. - Режим доступа: http:// oncologic.narod.ru/Lekcii/fdt/l-fdt-5.html. - Дата доступа: 19.06.2011.
8. Ищук, А. В. Фотодинамическая терапия: история развития метода и его практическое применение в лечении гнойных ран и трофических язв нижних конечностей // Мед. журн. [Электронный ресурс]. -2007. - № 4. - Режим доступа: http://www.bsmu.by/ index.php?option=om_content&task=view&id=85&
Itemid=52. - Дата доступа: 19.06.2011.
9. Попова, Н. А. Фотодинамическая терапия - подходы к повышению эффективности / Н. А. Попова, А. В. Волотовская. - Медицина, 2007. - N° 4. - C. S-12.
10. Преимущества фотодинамической терапии: лекции [Электронный ресурс] / Центр лазерной медицины «Волшебный луч». - Москва, 2007. - Режим доступа: http://oncologic.narod.ru/Lekcii/fdt/l-fdt-1.html. -Дата доступа: 19.06.2011.
11. Оценка биологических свойств новых фотосенсибилизаторов хлоринового ряда: лекции [Электронный ресурс] / Центр лазерной медицины «Волшебный луч». - Москва, 2007. - Режим доступа: http:// oncologic.narod.ru/Lekcii/fdt/l-fdt-5.html. - Дата доступа: 19.06.2011.
12. Основные требования к фотосенсибилизаторам [Электронный ресурс] / Лазерные хирургические технологии: Межвузовский мед.-физ. центр. - Челябинск, 2004. - Режим доступа: http: //www.medphys.csu.ru/ load.php?p=1252. - Дата доступа: 19.06.2011.
13. Курицын, А. Н. Огнестрельный перитонит / А. Н. Курицын, А. К. Раевский. - М.: ОАО Изд-во «Медици-
на», 2007. - 240 с.
14. Иванова, В. Ф. Строение париетальной и висцеральной брюшины белых мышей / В. Ф. Иванова // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии / редкол.: А. Г. Кнорре (гл. ред.) [и др.]. - Ленинград: «Медицина», 1970. - Т. LIX. - Вып. 9. - С. 44-52.
15. Котляров, В. С. Формирование реактивных структур брюшины под влиянием низкочастотного ультразвука / В. С. Котляров // Врачеб. дело. - 1988. - № 7. -С. 56-57.
Адрес для корреспонденции
230009, Республика Беларусь, г. Гродно, ул. Горького 80,
Гродненский государственный медицинский университет, кафедра хирургических болезней № 2, тел. моб.: +375 29 781-95-47, e-mail: rw_2006@mail.ru,
Русин В.И.
Поступила 20.05.2011 г.
