CC BY
6
Научная статья УДК 619:616.955.122
https://doi.org/10.31016/1998-8435-2022-16-4-411-420
Влияние экстрактов Trichinella spiralis и Echinococcus multilocularis при однократном и многократном введении на митоз, гематологические и биохимические показатели у мышей
Тамара Самуиловна Новик 1, Елена Ивановна Ковешникова 2, Светлана Ивановна Чукина 3, Людмила Александровна Написанова 4, Олег Николаевич Андреянов 5, Иван Алексеевич Архипов 6, Каринэ Гегамовна Курочкина 7
1-7 Всероссийский научно-исследовательский институт фундаментальной и прикладной паразитологии животных и растений - филиал Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Федеральный научный центр - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К. И. Скрябина и Я. Р. Коваленко Российской академии наук», Москва, Россия
1 novik.tamara@mail.ru, https://orcid.org/0000-0001-9317-2052
2 koveshnikova.e.i@yandex.ru, https://orcid.org/0000-0002-4512-7772
3 feruza7491@mail.ru, https://orcid.org/0000-0002-7507-4165
4 napisanova2015@yandex.ru, https://orcid.org/0000-0003-0894-827X
5 1980oleg@mail.ru, https://orcid.org/0000-0003-3357-9322
6 arkhipovhelm@mail.ru, https://orcid.org/0000-0001-5165-0706
7 kar.kur.49@yandex.ru, https://orcid.org/0000-0003-2738-8853
Цель исследований - изучение особенностей влияния экстрактов Trichinella spiralis и Echinococcus multilocularis на митоз в популяции клеток костного мозга, а также гематологические и биохимические показатели крови у мышей при однократном и многократном внутрибрюшинном введении.
Материалы и методы. Опыт проводили на беспородных мышах-самцах. Экстракты T. spiralis и E. multilocularis вводили однократно или многократно ежедневно в течение 10 сут внутрибрюшинно в дозе 80 мкг/мышь. Выделение клеток костного мозга, приготовление микроскопических препаратов, определение митотического индекса и отдельных стадий проводили, как описано в литературе (Ford C. E., Hamerton J. L., 1956). Основные показатели периферической крови мышей определяли на гематологическом анализаторе «MicroCC-20 Plus», лейкоцитарную формулу - общепринятым методом. Биохимические показатели крови мышей определяли на анализаторе «Clima MC-15». Результаты и обсуждение. Экстракты T. spiralis и E. multilocularis при однократном внутрибрюшинном введении в дозе 80 мкг/мышь оказывали выраженное негативное действие на митоз клеток костного мозга мышей с остановкой клеточного деления в метафазе и снижением доли других стадий митоза. Выявлены особенности воздействия экстрактов T. spiralis и E. multilocularis на митоз клеток костного мозга мышей при многократном введении в течение 10 сут. В режиме повторных введений испытуемых экстрактов мышам гематологические и биохимические показатели не изменялись.
Ключевые слова: Trichinella spiralis, Echinococcus multilocularis, однократное и многократное введение, митоз, гематологические показатели, биохимические показатели, мыши
Прозрачность финансовой деятельности: в представленных материалах или методах авторы не имеют финансовой заинтересованности. Конфликт интересов отсутствует
Аннотация
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License. The content is available under Creative Commons Attribution 4.0 License.
Для цитирования: Новик Т. С., Ковешникова Е. И., Чукина С. И., НаписановаЛ. А., Андреянов О. Н., Архипов И. А., Курочки-на К. Г. Влияние экстрактов Trichinella spiralis и Echinococcus multilocularis при однократном и многократном введении на митоз, гематологические и биохимические показатели у мышей // Российский паразитологический журнал. 2022. Т. 16. № 4. С. 411-420.
https://doi.org/10.31016/1998-8435-2022-16-4-411-420
© Новик Т. С., Ковешникова Е. И., Чукина С. И., Написанова Л. А., Андреянов О. Н., Архипов И. А., Курочкина К. Г., 2022
Original article
Effects of Trichinella spiralis and Echinococcus multilocularis extracts after single and multiple injections on mitosis and hematological and biochemical parameters of mice
Tamara S. Novik 1, Elena I. Koveshnikova 2, Svetlana I. Chukina 3, Lyudmila A. Napisanova 4, Oleg N. Andreyanov 5, Ivan A. Arkhipov 6, Karine G. Kurochkina 7
1-7 All-Russian Scientific Research Institute for Fundamental and Applied Parasitology of Animals and Plant - a branch of the Federal State Budget Scientific Institution "Federal Scientific Centre VIEV", Moscow, Russia
1 novik.tamara@mail.ru, https://orcid.org/0000-0001-9317-2052
2 koveshnikova.e.i@yandex.ru, https://orcid.org/0000-0002-4512-7772
3 feruza7491@mail.ru, https://orcid.org/0000-0002-7507-4165
4 napisanova2015@yandex.ru, https://orcid.org/0000-0003-0894-827X
5 1980oleg@mail.ru, https://orcid.org/0000-0003-3357-9322
6 arkhipovhelm@mail.ru, https://orcid.org/0000-0001-5165-0706
7 kar.kur.49@yandex.ru, https://orcid.org/0000-0003-2738-8853
Abstract
The purpose of the research is to study effects of Trichinella spiralis and Echinococcus multilocularis extracts on mitosis in a bone marrow cell population, and on hematological and biochemical blood parameters of mice after single and multiple intraperitoneal injections.
Materials and methods. The experiment was conducted on outbred male mice. The T. spiralis and E. multilocularis extracts were administered intraperitoneally once or multiple times daily for 10 days at a dose of 80 |g/mouse. Bone marrow cell isolation, microscopic preparations, mitotic index and individual stage determination were made as described in the literature (Ford C. E., Hamerton J. L., 1956). The mouse main peripheral blood parameters were determined with a MicroCC-20 Plus hematological analyzer, and the leucogram was determined by a conventional method. Biochemical blood parameters of the mice were determined with a Clima MC-15 analyzer.
Results and discussion. The T. spiralis and E. multilocularis extracts after a single intraperitoneal injection at a dose of 80 |g/ mouse had a pronounced negative effect on the mouse bone marrow cell mitosis with the cell division terminated in the metaphase and a decreased proportion of other mitosis stages. Characteristics were detected of the effects made by the T. spiralis and E. multilocularis extracts on the mouse bone marrow cell mitosis after multiple administration for 10 days. In the reinjection mode of the test extracts to the mice, hematological and biochemical parameters did not change.
Keywords: Trichinella spiralis, Echinococcus multilocularis, single and multiple injection, mitosis, hematological parameters, biochemical parameters, mice
Financial transparency: none of the authors has financial interest in the submitted materials or methods. There is no conflict of interests
For citation: Novik T. S., Koveshnikova E. I., Chukina S. I., Napisanova L. A., Andreyanov O. N., Arkhipov I. A., Kurochkina K. G. Effects of Trichinella spiralis and Echinococcus multilocularis extracts after single and multiple injections on mitosis and hematological and biochemical parameters of mice. Rossiyskiy parazitologicheskiy zhurnal = Russian Journal of Parasitology. 2022;16(4):411-420. (In Russ.).
https://doi.org/10.31016/1998-8435-2022-16-4-411-420
© Novik T. S., Koveshnikova E. I., Chukina S. I., Napisanova L. A., Andreyanov O. N.,
Arkhipov I. A., Kurochkina K. G., 2022
Введение
Возбудители практически всех паразитарных болезней индуцируют различные морфологические и функциональные изменения в органах и системах организма хозяев. В литературе имеются сообщения об отрицательном влиянии гельминтов и продуктов их метаболизма на клеточное деление соматических и половых клеток млекопитающих [1-3, 7]. При этом следует отметить, что степень выраженности проявляемых негативных эффектов может зависеть, среди прочего, от продолжительности воздействия таких агентов на организм хозяина. Ранее исследовали влияние экстрактов Trichinella spiralis и Echinococcus multilocularis на проявление кариопатическо-го действия, а также общую переносимость у мышей при однократном введении [2].
Целью нашей работы было сравнительное исследование особенностей влияния экстрактов T. spiralis и E. multilocularis при однократном и многократном введении на митоз в популяции клеток костного мозга, а также гематологические и биохимические показатели крови у мышей.
Материалы и методы
Исследования проводили во Всероссийском научно-исследовательском институте фундаментальной и прикладной паразитологии животных и растений - филиале Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный научный центр - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К. И. Скрябина и Я. Р. Коваленко Российской Академии Наук» (ВНИИП - филиал ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН) и Научно-образовательном Центре молекулярной биотехнологии Московской сельскохозяйственной академии им. К. А. Тимирязева.
Эксперименты на животных проводили в соответствии с правилами, принятыми Европейской Конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей [8]. Мышей содержали в виварии согласно санитарным правилам и на стандартном рационе в соответствии с нормативными документами, действующими в период выполнения настоящих экспериментов [4-6].
Животные были разведены специально и ранее не участвовали в опытах. Производитель животных предоставил данные последнего контроля состояния здоровья животных. Вновь прибывшие животные находились на карантине в течение 3 сут в клетках в отдельном помещении. Во время карантинного периода у животных контролировали клинические показатели состояния здоровья.
Животных кормили сухим брикетированным кормом ПК-120 (ГОСТ Р 51849-2011 Р.5), поили водопроводной водой ad libitum из стандартных поилок.
Животных содержали в контролируемых условиях при температуре воздуха 20-22 °С и относительной влажности воздуха 60-70%.
Температуру и влажность воздуха контролировали в каждом помещении ежедневно и показания документировали. Освещение -естественно-искусст-венное (12 ч свет/12 ч темнота).
Однократное введение экстрактов. Мышам-самцам массой 18-22 г внутрибрюшинно вводили по 80 мкг экстракта T. spiralis или экстракта E. multilocularis. Контрольной группе животных внутрибрюшинно вводили по 0,1 мл физиологического раствора. Животных подвергали эвтаназии дислокацией шейных позвонков через 3, 6 и 24 ч после введения экстрактов и в эти сроки у опытных живот -
ных отбирали образцы костного мозга для приготовления микроскопических препаратов в целях оценки митотической активности в данной популяции клеток.
Многократное введение экстрактов. Экстракт T. spiralis или экстракт E. multilocularis вводили внутрибрюшинно ежедневно в течение 10 сут мышам-самцам массой 18-22 г ежедневно в дозе 80 мкг/животное. Контрольной группе мышей внутрибрюшинно вводили по 0,1 мл физиологического раствора по указанной схеме. Мышей подвергали эвтаназии дислокацией шейных позвонков через 24 ч после последнего введения экстрактов. У опытных и контрольных животных отбирали образцы костного мозга для приготовления микроскопических препаратов в целях оценки митоти-ческой активности в данной клеточной популяции. Также, в варианте с многократным введением у мышей отбирали пробы крови для определения гематологических и биохимических показателей.
При однократном и многократном введении выделение клеток костного мозга и приготовление препаратов проводили, как описано в литературе [9]. На каждом микроскопическом препарате определяли относительное число различных стадий митоза (профаз, метафаз, анафаз и телофаз) и мито-тический индекс (%). Учитывали наличие патологических фигур митоза.
Препараты исследовали с помощью микроскопа Zeiss Axio Imager, оснащённого цифровой камерой Axio Cam MRm.
Основные показатели периферической крови крыс определяли на гематологическом анализаторе «Abacus JuniorVet» («Diatron» (Австрия) с использованием реактивов ООО «Клиникал Диагностик Солюшнз» (Россия)), лейкоцитарную формулу - общепринятым методом.
Биохимические показатели крови определяли на анализаторе A-15/25 (BioSystems S.A., (Испания)) с использованием реактивов производства ЗАО «Диакон-ДС» (Россия).
Статистическую обработку данных осуществляли методом вариационной статистики с помощью простого сравнения средних по двухстороннему t-критерию Стьюдента. Различия определяли при 0,05 уровне значимости.
Результаты и обсуждение
Однократное введение экстрактов. Через 3 ч после введения экстракта T. spiralis значение митотического индекса не отличалось от контрольного показателя и составило 1,20±0,36% в сравнении с 1,33±0,38% в контроле (табл. 1). Однако, уже через 6 и 24 ч значение митотического индекса резко снизилось соответственно до 0,77±0,29 и 0,45±0,22% против контрольного показателя 1,33±0,38%. Причем, если на 6 ч тенденция к снижению не была статистически достоверной, то на 24 ч изменение носило значимый характер.
При определении процентного содержания отдельных стадий митоза спустя 3 ч после введения испытуемого экстракта отмечали снижение числа метафаз (43,33±1,65% против 62,50±1,61% в контроле) и резкое увеличение числа анафаз (31,67±1,55% по сравнению с контролем 12,50±1,10%).
Через 6 и 24 ч имело место увеличение числа метафаз (соответственно 82,61 ±1,26% и 88,89±1,05% по сравнению с контрольным показателем 62,50±1,61%) с одновременным отсутствием анафаз и телофаз (по сравнению с соответствующими контрольными значениями 12,50±1,10% и 12,50±1,10%).
В таблице 2 приведены результаты по оценке влияния однократного введения экстракта E. multilocularis на митоз клеток костного мозга мышей.
В данном случае в отношении митотиче-ского индекса наблюдали аналогичный характер изменений, отмеченных выше для экстракта трихинелл. Через 3 ч после введения экстракта E. multilocularis значение митоти-ческого индекса достоверно не отличалось от контрольного значения и составило соответственно 2,08±0,48% против 1,33±0,38% в контроле. Спустя 6 и 24 ч значение митотического индекса резко снизилось соответственно до 0,65±0,27% и 0,45±0,22% против контрольного показателя 1,33±0,38%; в последнем случае изменения были статистически значимыми.
Введение эхинококкового экстракта оказало выраженное влияние на долю отдельных стадий митоза. Как и в случае с экстрактом трихинелл, через 3 ч имело место достоверное снижение числа метафаз (50,00±1,67% против 62,50± 1,61% в контроле) и увеличение числа профаз и анафаз. Спустя 6 ч была выявлена тенденция к повышению числа метафаз, а че-
Таблица 1 [Table 1]
Влияние экстракта T. spiralis на митоз клеток костного мозга мышей через 3, 6 и 24 ч после однократного введения (n = 3, Р > 0,05) [Effect of T. spiralis extract on mouse bone marrow cell mitosis at 3, 6 and 24 hours after a single injection (n = 3, Р > 0.05)]
Вариант опыта [Experience variant] Митотический индекс, % [Mitotic index, %] Процентное соотношение стадий митоза [Percentage of stages of mitosis]
профазы [prophase] метафазы [metaphase] анафазы [anaphase] телофазы [telophase]
3 ч 1,20±0,36 t = 0,25 15,00±1,19 t = 0,95 43,33±1,65* t = 8,33 31,67±1,55* t = 10,09 10,00±1,00 t = 1,68
6 ч 0,77±0,29 t = 1,19 17,39±1,26* t = 2,93 82,61±1,26* t = 9,86 0* t = 11,36 0* t = 11,36
24 ч 0,45±0,22* t = 2,00 11,11±1,05 t = 0,91 88,89±1,05* t = 13,74 0* t = 11,36 0* t = 11,36
Контроль (физиологический раствор) [Control (saline)] 1,33±0,38 12,50±1,10 62,50±1,61 12,50±1,10 12,50±1,10
Примечание [Note]. * P < 0,05 (различие по данному показателю статистически достоверно между опытной и контрольной группами)
[(the difference in this indicator is statistically significant between the experimental and control groups)]
Таблица 2 [Table 2]
Влияние экстракта E. multilocularis на митоз клеток костного мозга мышей через 3, 6 и 24 ч после однократного введения (n = 3, Р > 0,05) [Effect of E. multilocularis extract on mouse bone marrow cell mitosis 3, 6, and 24 hours after a single injection (n = 3, P > 0.05)]
Вариант опыта [Experience variant] Митотический индекс, % [Mitotic index, %] Процентное соотношение стадий митоза [Percentage of stages of mitosis]
профазы [prophase] метафазы [metaphase] анафазы [anaphase] телофазы [telophase]
3 ч 2,08±0,83 t = 0,71 19,23±2,28* t = 2,27 50,00±2,89* t = 3,10 20,19±2,32* t = 2,55 10,58±1,78 t = 0,74
6 ч 0,65±0,76 t = 0,84 30,77±2,67* t = 5,57 69,23±2,67 t = 1,74 0* t = 6,54 0* t = 6,54
24 ч 0,45±0,39 t = 0,14 0* t = 6,54 81,82±2,23* t = 5,40 18,18±2,23 t = 1,93 0* t = 6,54
Контроль (физиологический раствор) [Control (saline)] 1,33±0,66 12,50±1,91 62,50±2,80 12,50±1,91 12,50±1,91
Примечание [Note]. * P < 0,05 (различие по данному показателю статистически достоверно между опытной и контрольной группами)
[(the difference in this indicator is statistically significant between the experimental and control groups)]
рез 24 ч после введения экстракта отмечали преобладание метафаз (81,82±1,29% против 62,50±1,61% в контроле) и отсутствие профаз и телофаз (см. табл. 2).
Таким образом, нами установлено, что экстракты T. spiralis и E. multilocularis при однократном внутрибрюшинном введении мышам оказывают выраженное антимитотическое действие в клетках костного мозга хозяина с характером проявления, сходным с цитоста-тиками (остановка клеточного деления в ме-тафазе со снижением митотического индекса, падение относительного числа других стадий митоза и т. п.).
Многократное введение экстрактов. В
таблице 3 приведены результаты оценки влияния многократного внутрибрюшинного введения экстрактов T. spiralis и E. multilocularis на митоз у мышей.
Как следует из приведенных данных, при многократном введении оба испытуемых экстракта оказали влияние на митоз у мышей.
В связи с этим, нами рассмотрены особенности проявления этих эффектов при однократной и многократной схеме введения на общую временную точку - 24 ч. Так, при повторных введениях митотический индекс после последнего введения Т. spiralis и E. multilocularis не из-
Таблица 3 [Table 3]
Влияние экстрактов T. spiralis и E. multilocularis на митоз клеток костного мозга мышей через 24 ч после последнего внутрибрюшинного введения курсом 10 сут (n = 4, Р > 0,05) [Effect of extracts of T. spiralis and E. multilocularis on mitosis of bone marrow cells in mice 24 hours after the last intraperitoneal injection for 10 days (n = 4, Р > 0.05)]
Вариант опыта [Experience variant] Митотический индекс, % [Mitotic index, %] Процентное соотношение стадий митоза [Percentage of stages of mitosis]
профазы [prophase] метафазы [metaphase] анафазы [anaphase] телофазы [telophase]
Экстракт T. Spiralis [T. spiralis extract] 1,53±0,35 t = 0,46 8,70±0,81* t = 6,13 58,70±1,42* t = 1,97 17,39±1,09 t = 0,94 15,22±1,04* t = 4,33
Экстракт E. Multilocularis [E. multilocularis extract] 1,40±0,34 t = 0,73 11,90±0,94* t = 3,55 59,52±1,42* t = 2,37 11,90±0,94* t = 4,74 16,67±1,08* t = 5,29
Контроль (физиологический раствор) [Control (saline)] 1,77±0,38 16,98±1,08 54,72±1,44 18,87±1,13 9,43±0,84
P < 0,05
менялся по сравнению с контролем и равнялся соответственно 1,53±0,35% и 1,40±0,34% по сравнению с 1,77±0,38% в контроле. При однократном введении обоих экстрактов на данную временную точку митотический индекс был достоверно ниже за счет выраженного антими-тотического эффекта и остановки клеточного деления на стадии метафазы (табл. 1 и 2).
При многократном введении изменилось относительное число отдельных стадий митоза (табл. 3). Так, после введения экстракта Т. spiralis отмечали снижение числа профаз (8,70±0,81% против 16,98±1,08% в контроле) с одновременным незначительным, но статистически достоверным повышением доли метафаз (58,70±1,42% против 54,72±1,44% в контроле). Имело место повышение относительного числа телофаз (15,22±1,04% против 9,43±0,84% в контроле). При однократном введении экстракта трихинелл также наблюдали повышенное число метафаз, хотя и в существенно более выраженной степени (табл. 1).
На 24 ч после окончания многократного введения экстракта E. multilocularis можно отметить снижение числа профаз и анафаз (соответственно 11,90±0,94% и 11,90±0,94% против 16,98±1,08% и 18,87±1,13% в контроле); на 24 ч после однократного введения экстракта альвеококков профазы вообще отсутствовали (табл. 3). Также, при повторных введениях отмечали увеличение числа телофаз (16,67±1,08% против 9,43±0,84% в контроле). Напротив, при однократном введении экстракта E. multilocularis клеток на стадии тело-фазы не обнаруживали (табл. 2).
Таким образом, при многократном введении экстрактов двух гельминтов было установлено их влияние на митоз клеток костного мозга мышей, но характер и степень проявления большинства эффектов отличались от таковых при однократном введении. В частности, в случае однократного введения экстрактов имел место эффект, типичный для цитостатиков, что выражалось в накоплении метафаз, снижении доли других стадий митоза, снижении митотического индекса. Несмотря на то, что при многократном введении обоих экстрактов также можно было отметить накопление метафаз, оно не носило такой выраженный характер. При повторных введениях испытуемых экстрактов отмечали изменение относительного числа других стадий, но выраженность этих эффектов была ниже и в некоторых случаях носила противоположный характер, чем при однократном введении.
Гематологические показатели. В табл. 4 приведены наиболее информативные гематологические показатели у мышей, которым внутри-брюшинно вводили экстракты Т. spiralis или E. multilocularis. Было определено 13 показателей.
После введения экстрактов ни один гематологический показатель не подвергся статистически значимым изменениям. Также, длительное введение экстрактов трихинелл и альвеококков не привело к изменению лейкоцитарной формулы.
Биохимические показатели. Ни один из тестированных биохимических показателей не подвергся статистически значимым изменениям (табл. 5).
Таблица 4 [Table 4]
Гематологические показатели у мышей через 24 ч после последнего внутрибрюшинного введения экстрактов T. spiralis и E. multilocularis курсом 10 сут (n = 4; Р > 0,05) [Hematological parameters in mice 24 hours after the last intraperitoneal injection of extracts of T. spiralis and E. multilocularis for 10 days (n = 4; P > 0.05)]
№ Параметр Значение параметра у мышей после введения экстрактов [The value of the parameter in mice after the introduction of extracts]
п/п [Parameter] T. spiralis E. multilocularis Контрольфизиологический раствор) [Control (saline)]
1 Гематокрит, % [Hematocrit, %] 34,91±2,28 t = 0,26 34,85±4,79 t = 0,20 36,28±3,86
2 Гемоглобин, г/л [Hemoglobin, g/l] 106,00±8,07 t = 0,32 112,25±12,62 t = 0,02 111,75±1,14
3 Эритроциты, 1012/л [Erythrocytes, 1012/l] 6,21±0,53 t = 0,40 6,52±0,83 t = 0,07 6,61±0,67
4 Средняя концентрация гемоглобина в эритроците, г/л [Average concentration of hemoglobin in erythrocyte, g/l] 302,94±8,89 t = 0,33 325,64±8,88 t = 1,23 307,72±9,01
5 Средний объем эритроцита, мкм3 [Average erythrocyte volume, |im3] 57,96±2,34 t = 1,10 53,24±0,56 t = 1,09 54,72±1,04
6 Ширина распределения эритроцитов по объему СКВ, фл [Distribution width of erythrocytes by SLE volume, fl] 58,51±1,52 t = 0,59 60,50±0,33 t = 1,08 59,63±0,61
7 Лейкоциты, 109/л [White blood cells, 109/l] 6,21±0,74 t = 0,11 6,88±0,54 t = 0,61 6,32±0,57
8 Тромбоциты, 109/л [Platelets, 109/l] 906,00±33,91 t = 0,11 972,50±149,04 t = 0,27 918,50±90,32
Лейкограмма, % [Leukog ram, %]
9 Палочкоядерные нейтрофилы [Rod-shaped neutrophils] 0,75 ±0,75 t = 0,66 1,25±0,48 t = 0,27 1,50±0,65
10 Сегментоядерные нейтрофилы [Segmented neutrophils] 21,50±1,85 t = 0,21 19,75±2,17 t = 0,26 20,75±2,53
11 Эозинофилы [Eosinophils] 0,75±0,48 t = 0,25 1,25±0,63 t = 0,23 1,00±0,71
12 Моноциты [Monocytes] 21,75±0,63 t = 0,49 1,00±0,71 t = 0,23 1,25±0,63
13 Лимфоциты [Lymphocytes] 75,25±2,32 t = 0,05 76,75±2,46 t = 0,26 75,50±3,28
Р < 0,05 при t = 2,45
' r критическом '
Таким образом, можно сделать заключение, что при однократном введении обоих экстрактов негативное влияние на митоз было более выраженным, чем при многократном введении, как в отношении митотического индекса, так и отдельных стадий митоза.
При однократном введении экстрактов Т. spiralis и E. multilocularis наблюдали изменение лейкоцитарной формулы и повышение числа лейкоцитов, что, скорее всего, явилось результатом проявления кариопатического действия экстрактов [2]. При многократном введении обоих экстрактов изменения гематологических показателей, включая лейкоцитарную формулу, отсутствовали (табл. 4).
При однократном введении экстрактов трихинелл и альвеококков также было выявлено снижение активности «печеночных» ферментов АСТ и АЛТ [2]. В данном случае изменения активности указанных ферментов, а также всех других биохимических показателей отсутствовали (табл. 5).
Основываясь на вышеуказанном, создается представление о более «сглаженных» и «слабых» эффектах испытуемых экстрактов при многократном введении, чем при однократном. Возникает ситуация, при которой, с одной стороны, многократное введение, представляющее собой более продолжительное воздействие, может привести к более силь-
Таблица 5 [Table 5]
Биохимические показатели у мышей через 24 ч после последнего внутрибрюшинного введения белковых экстрактов T. spiralis и E. multilocularis курсом 10 сут (n = 4; Р > 0,05) [Biochemical parameters in mice 24 hours after the last intraperitoneal injection of protein extracts of T. spiralis and E. multilocularis for 10 days (n = 4; P > 0.05)]
№ п/п Параметр Значение параметра у мышей после введения экстрактов [The value of the parameter in mice after the introduction of extracts]
[Parameter] T. spiralis E. multilocularis Контрольфизиологический раствор) [Control (saline)]
1 АСТ, Ед/л [AST, U/l] 307,50±13,17 t = 0,01 296,25±15,85 t = 0,18 308,25±56,85
2 АЛТ, Ед/л [ALT, U/l] 104,75±6,42 t = 0,48 108,00±11,81 t = 0,36 120,25±26,99
3 Коэффициент Ритиса [Ritis coefficient] 2,98±0,20 t = 0,63 2,78±0,16 t = 0,25 2,65±0,40
4 Мочевина, ммоль/л [Urea, mmol/l] 8,13±0,50 t = 0,46 7,10±0,56 t = 1,28 8,67±0,90
5 Белок общий, г/л [Total protein, g/l] 68,25±3,12 t = 0,90 70,25±4,80 t = 0,49 74,00±4,56
6 Альбумин/глобулин, г/л [Albumin/globulin, g/l] 1,28±0,09 t = 0,74 1,23±0,06 t = 1,51 1,35±0,03
Р < 0,05 при t = 2,45
' r критическом '
ным негативным эффектам по исследованным показателям по сравнению с однократным введением, с другой, сразу же после введения любого чужеродного агента в организме млекопитающих запускается процесс его де-токсикации и выделения. Трудно предположить, что исследуемые экстракты трихинелл и альвеококков в этом отношении являются исключением. По своей природе экстракты представляют собой смесь водорастворимых белков, представляющих собой антигены, на которые продуцируются антитела. При каждом последующем введении экстрактов процесс нейтрализации белков антителами усиливается и активируется, одновременно нейтрализуя и их негативные эффекты, оценка которых была целью нашего исследования.
Заключение
Экстракты T. spiralis и E. multilocularis при однократном внутрибрюшинном введении в дозе 80 мкг/мышь оказывали выраженное негативное действие на митоз клеток костного мозга мышей с остановкой клеточного деления в метафазе и снижением доли других стадий митоза.
Выявлены особенности воздействия экстрактов T. spiralis и E. multilocularis на митоз клеток костного мозга мышей при многократном введении в течение 10 сут. В режиме по-
вторных введений испытуемых экстрактов
мышам гематологические и биохимические
показатели не изменялись.
Список источников
1. Бекиш В. Я., Бекиш О.-Я. Л. Состояние генома хозяина при гельминтозах. Витебск, 2004. 217 с.
2. КовешниковаЕ. И., Новик Т. С., НаписановаЛ. А., Чукина С. И., Руднева О. В. Оценка кариопа-тического действия и общей переносимости экстрактов Trichinella spiralis и E. multilocularis у мышей // Российский паразитологиче-ский журнал. 2020. Т. 14. № 4. С. 90-98. doi: 10.31016/1998-8435-2020-14-3-90-98
3. Максименко С. Н. Влияние инвазии Trichinella spiralis и Trichinella pseudospiralis на митоз клеток костного мозга у мышей и проявление антимитотического действия албендазола // Труды Всерос. ин-та гельминтологии им. К. И. Скрябина. 2007. Т. 43. С. 166-175.
4. Приказ МЗ СССР № 1045-73 от 6.04.73 г. «Санитарные правила по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев)».
5. Приказ МЗ СССР № 755 от 12.08.77 г. «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных».
6. Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации № 708н от 23.08.2010. «Правила лабораторной практики».
7. Сивкова Т. Н. Кариопатическое действие продуктов личинок анизакид на соматические и половые клетки лабораторных крыс при пе-роральном введении // Сб. науч. ст. по матер. докл. научн. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». М., 2009. Вып. 10. С. 366-370.
8. European Convention for Protection of Vertebrate Animals Used for Experimental and other Scientific Purposes (ETS 123). Strasbourg, 1986.
9. Ford C. E., Hamerton J. L. A colchicines, hypotonic citrate squach sequence for mammalian chromosomes. Stain Technol. 1956; 31 (6): 247251.
Статья поступила в редакцию 19.03.2022; принята к публикации 10.10.2022
Об авторах:
Новик Тамара Самуиловна, ВНИИП - фил. ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН (117218, Москва, ул. Б. Черемушкинская, 28), Москва, Россия, ОРСЮ 10: 0000-0001-9317-2052, novik.tamara@mail.ru
Ковешникова Елена Ивановна, ВНИИП - фил. ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН (117218, Москва, ул. Б. Черемушкинская, 28), Москва, Россия, кандидат биологических наук, ОРСЮ 10: 0000-0002-4512-7772, koveshnikova.e.i@yandex.ru Чукина Светлана Ивановна, ВНИИП - фил. ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН (117218, Москва, ул. Б. Черемушкинская, 28), Москва, Россия, кандидат биологических наук, ОРСЮ 10: 0000-0002-7507-4165, feruza7491@mail.ru Написанова Людмила Александровна, ВНИИП - фил. ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН (117218, г. Москва, ул. Б. Черемушкинская, 28), Москва, Россия, кандидат биологических наук, ОРСЮ 10: 0000-0003-0894-827Х, napisanova2015@yandex.ru Андреянов Олег Николаевич, ВНИИП - фил. ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН (117218, Москва, ул. Б. Черемушкинская, 28), Москва, Россия, доктор ветеринарных наук, ОРСЮ 10: 0000-0003-3357-9322, 1980oleg@mail.ru Архипов Иван Алексеевич, ВНИИП - фил. ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН (117218, Москва, ул. Б. Черемушкинская, 28), Москва, Россия, доктор ветеринарных наук, профессор, ОРСЮ 10: 0000-0001-5165-0706, arkhipovhelm@mail.ru Курочкина Каринэ Гегамовна, ВНИИП - фил. ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН (117218, Москва, ул. Б. Черемушкинская, 28), Москва, Россия, доктор ветеринарных наук, ОРСЮ 10: 0000-0003-2738-8853, kar.kur.49@yandex.ru
Вклад соавторов:
Новик Тамара Самуиловна - научное руководство, проведение исследований, анализ и интерпретация полученных данных, критический анализ материала, подготовка статьи.
Ковешникова Елена Ивановна - проведение исследований, анализ и интерпретация полученных данных, критический анализ материала, подготовка статьи.
Чукина Светлана Ивановна - проведение исследований, критический анализ материала. Написанова Людмила Александровна - приготовление экстракта для проведения исследований. Андреянов Олег Николаевич - обзор публикаций по теме статьи, анализ полученных результатов. Архипов Иван Алексеевич - анализ полученных результатов. Курочкина Каринэ Гегамовна - анализ полученных результатов.
Авторы прочитали и одобрили окончательный вариант рукописи.
References
1. Bekish V. Ya., Bekish O.-Ya. L. The host genome status in helminth infections. Vitebsk, 2004; 217. (In Russ.)
2. Koveshnikova E. I., Novik T. S., Napisanova L. A., Chukina S. I., Rudneva O. V. Evaluation of karyopathic effects and general safety of Trichinella spiralis and Echinococcus multilocularis extracts in mice. Rossiyskiy parazitologicheskiy zhurnal = Russian Journal of Parasitology. 2020; 14 (4): 90-98. (In Russ.). doi:10.31016/1998-8435-2020-14-4-90-98
3. Maksimenko S. N. Effects of Trichinella spiralis and Trichinella pseudospiralis infection on mouse
bone marrow cell mitosis and manifestation of the albendazole antimitotic effect. Proceedings of the All-Russian Institute of Helminthology named after K. I. Skryabin. 2007; 43. 166-175. (In Russ.)
4. Order by the USSR Ministry of Health No. 104573 dated April 6, 1973 on Sanitary Rules for Arrangement, Equipment and Maintenance of Experimental Biological Clinics (Vivariums)".
5. Order by the USSR Ministry of Health No. 755 dated 12/08/1977 on Guidelines for Work Using Experimental Animals.
6. Order by the Russian Federation Ministry of Health No. 708n dated 23/08/2010 on Laboratory Practice Rules.
7. Sivkova T. N. Caryopathic effects of Anisakis larvae products on somatic and germ cells of laboratory rats after oral administration. Mate rials of the Scientific Conference "Theory and practice of parasitic disease control". M., 2009; 10: 366-370. (In Russ.)
8. European Convention for Protection of Vertebrate Animals Used for Experimental and other Scientific Purposes (ETS 123). Strasbourg, 1986.
9. Ford C. E., Hamerton J. L. A colchicines, hypotonic citrate squach sequence for mammalian chromosomes. Stain Technol. 1956; 31 (6): 247-251.
The article was submitted 19.03.2022; accepted for publication 10.10.2022
About the authors:
Novik Tamara S., VNIIP - FSC VIEV (28, Bolshaya Cheremushkinskaya st., Moscow, 117218), Moscow, Russian Federation, ORCID ID: 0000-0001-9317-2052, novik.tamara@mail.ru
Koveshnikova Elena I., VNIIP - FSC VIEV (28, Bolshaya Cheremushkinskaya st., Moscow, 117218), Moscow, Russian Federation, Cand. Sc. Biol., ORCID ID: 0000-0002-4512-7772, koveshnikova.e.i@yandex.ru
Chukina Svetlana I., VNIIP - FSC VIEV (28, Bolshaya Cheremushkinskaya st., Moscow, 117218), Moscow, Russian Federation, Cand. Sc. Biol., ORCID ID: 0000-0002-7507-4165, feruza7491@mail.ru
Napisanova Lyudmila A., VNIIP - FSC VIEV (28, Bolshaya Cheremushkinskaya st., Moscow, 117218), Moscow, Russian Federation, Cand. Sc. Biol., ORCID ID: 0000-0003-0894-827X, napisanova2015@yandex.ru
Andreyanov Oleg N., VNIIP - FSC VIEV (28, Bolshaya Cheremushkinskaya st., Moscow, 117218), Moscow, Russian Federation, Dr. Sc. Vet., ORCID ID: 0000-0003-3357-9322, 1980oleg@mail.ru
Arkhipov Ivan A., VNIIP - FSC VIEV (28, Bolshaya Cheremushkinskaya st., Moscow, 117218), Moscow, Russian Federation, Dr. Sc. Vet., Professor, ORCID ID: 0000-0001-5165-0706, arkhipovhelm@mail.ru
Kurochkina Karine G., VNIIP - FSC VIEV (28, Bolshaya Cheremushkinskaya st., Moscow, 117218), Moscow, Russian Federation, Dr. Sc. Vet., ORCID ID: 0000-0003-2738-8853, kar.kur.49@yandex.ru
Contribution of co-authors:
Novik Tamara S. - academic supervision, research, obtained data analysis and interpretation, critical analysis of the material, article preparation.
Koveshnikova Elena I. - research, obtained data analysis and interpretation, critical analysis of the material, article preparation.
Chukina Svetlana I. - research, critical analysis of the material. Napisanova Lyudmila A. - extract preparation for research.
Andreyanov Oleg N. - publications review on the theme of the article, analysis of the results. Arkhipov Ivan A. - analysis of the results. Kurochkina Karine G. - analysis of the results.
All authors have read and approved the final manuscript.
