Научная статья на тему 'Влияние экстракта зубчатки обыкновенной на течение раневых повреждений кожи'

Влияние экстракта зубчатки обыкновенной на течение раневых повреждений кожи Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

CC BY
106
23
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Алексеев П. В., Убашеев И. О., Алексеева Е. В.

Экспериментальным путем установлено, что экстрактом зубчатки обыкновенной обладает явно выраженным противовоспалительным, разнозаживляющим действием; основанным на мембраностабилизирующем эффекте.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

THE INFLUENCE OF THE RED BARTSIA EXTRACT ON THE WOUND INJURIES OF SKIN

By the experimental it is by established, that the extract red bartsia possesses obviously expressed anti-inflammatory, wound healing; based on membranestabilizing effect.

Текст научной работы на тему «Влияние экстракта зубчатки обыкновенной на течение раневых повреждений кожи»

VI. ФИЗИОЛОГИЯ И ЭКОЛОГИЯ ЧЕЛОВЕКА

П.В. Алексеев, И.О. Убашеев, Е.В. Алексеева1

БФ СОРАН Институт Общей и экспериментальной биологии : ' 'Бурятский государственный университет

ВЛИЯНИЕ ЭКСТРАКТА ЗУБЧАТКИ ОБЫКНОВЕННОЙ НА ТЕЧЕНИЕ РАНЕВЫХ ПОВРЕЖДЕНИЙ КОЖИ

Экспериментальным путем установлено, что экстрактом зубчатки обыкновенной обладает явно выраженным противовоспалительным, разнозаживляющим действием; основанным на мембран оставил тирующем эффекте.

P. V. Alekseev, 10, Ubasheev, E. V, Alekseeva THE INFLUENCE OF THE RED BARTSIA EXTRACT ON THE WOUND INJURIES OF SKIN

By the experimental it is by established, that the extract red bartsia possesses obviously expressed anti-inflammatory, wound healing; based on membranestabilizing effect. -

Проблема местного медикаментозного лечения ран становится все более сложной и актуальной. Остаются значительными травмы в быту, техногенные травмы на производстве, в военных конфликтах, и лечение таких ранений является актуальной задачей современной фармакологии и хирургии.

Для лечения гнойных ран практической медициной используется большое количество лекарственных препаратов, главным образом, синтетического происхождения, которые нередко оказывают побочное действие, Вместе с тем, в настоящее время все большее внимание привлекают растительные средства, обладающие малой токсичностью и отсутствием отрицательных побочных эффектов при длительном применении.

В этом отношении перспективным является изучение опыта тибетской медицины. В частности, согласно трактату «Лхантаб», для лечения ран применяется 211 видов растений, которые использовались, как правило, в составе сложных смесей. Одной из них является зубчатка обыкновенная odontites vulgaris.

Целесообразность применения данного растения в народной и традиционной медицине подтверждена экспериментально (Николаев и соавт., 1983; 1988; Убашеев, 1998). Сотрудниками отдела биологически активных веществ Института общей и эксперименталь-

ной биологии СО РАН был разработан способ получения сухого экстракта из травы зубчатки обыкновенной, на который получен патент РФ № 2160598 от 20.12,2000 г., и в продолжение исследований нами разработана мягкая лекарственная форма на основе сухого экстракта зубчатки обыкновенной в виде мази.

Целью настоящего исследования явилось определение фармакологической активности сухого экстракта зубчатки обыкновенной и фармакотерапевтической эффективности его мягкой лекарственной формы при раневых повреждениях кожи.

Необходимо было определить спектр фармакологической активности сухого экстракта зубчатки обыкновенной; оценить фармакоте-рапевтическую эффективность мягкой лекарственной формы на основе экстракта зубчатки обыкновенной при раневых повреждениях кожи; выявить возможные механизмы рано-заживляющего действия мази на основе экстракта зубчатки обыкновенной.

Нами было проведено систематическое исследование нового лекарственного средства-мази на основе экстракта зубчатки обыкновенной, которая использовалась при раневых повреждениях кожи. В ходе исследований выявлен широкий спектр фармакологической активности экстракта зубчатки обыкновенной; испытуемое средство обладает противо-

208

воспалительной, капилляроукрепляющей, антибактериальной, калиллярообразующей, мембраностабилизирующей, антиоксидантной и регенераторной активностью, Показано, что лекарственная форма - мазь на основе экстракта зубчатки обыкновенной - обладает выраженной фармакотерапевтической эффективностью при раневых повреждениях, способствуя заживлению раневого дефекта в более ранние сроки, благодаря ингибнрованию процессов перекисного окисления липидов, стабилизации клеточных и субклеточных мембран. Также показано, что в основе регенераторной активности экстракта зубчатки обыкновенной лежит стимуляция синтеза нуклеиновых кислот в тканях, лежащих в основе стимуляции митотической активности клеток.

В ходе исследований разработана новая мягкая лекарственная форма экстракта зубчатки обыкновенной, обладающая выраженным ранозаживляющим действием. ; -

Материалы и методики

С целью определения фармакологической активности и фармакотерапевтической эффективности экстракта зубчатки обыкновенной и его мягкой лекарственной формы были использованы наиболее адекватные модели и современные информативные методики, позволяющие объективно оценить ранозажив-ляющее действие. Препаратами сравнения в виде экстракта являлись калефлон и его мягкая лекарственная форма - мазь «Календула».

Экспериментальная работа выполнена на 305 беспородных белых крысах обоего пола массой 160-180 г., на базе лаборатории БАВ ИОЭБ СО РАН. В качестве объектов исследования были использованы культуры тканей. Суспензию эритроцитов готовили из свежей эритроцитарной массы донорской крови путем трехкратного отмывания в физиологическом растворе в центрифуге, суспензию липо-сом получали из свежего куриного яичного желтка путем суспендирования с фосфатным буфером.

Учитывая основные патогенетические факторы развития раневых повреждений, были использованы модели плоскостной кожно-мышечной, линейной ран и модель химического ожога кожи

Плоскостную кожно-мышечную рану воспроизводили под гексеналовым, наркозом (70мг/кг) путем иссечения в области спины животных кожно-фасциального лоскута площадью 400 мм2 на предварительно выстри-

женных участках. Линейные кожные раны получали следующим образом: под наркозом у крыс в области спины наносили рану до собственной фасции длиной 5см, На равном расстоянии накладывали три шва, сближающих края полученной раны. Химический ожог в области спины вызывали подкожным введением 0,5 мл 9%-ной уксусной кислоты под гексеналовым наркозом (70мг/кг) на предварительно выстриженных участках кожи. Обращали внимание на стандартность получаемых ран, размеры последних не превышали 380 мм2. Динамику изменения раневых процессов определяли посредством планиметрического, биохимического и гистологического методов исследования.

Для определения противовоспалительной активности экстракта зубчатки обыкновенной (ЭЗО) исследовали его влияние на основные стадии реакции воспаления. Антиэкссудатив-ную активность испытуемого фитоэкстракта определяли на модели асептического воспаления, индуцированного однократным суб-плантарным введением в заднюю конечность белых крыс 0,1 мл 3% раствора формалина (Стрельников, 1960). Влияние фитоэкстракта зубчатки обыкновенной на альтерацию тканей определяли при остром воспалении, вызываемым введением 0,5 мл 9% уксусной кислоты (Шимкевич, 1965). Оценку влияния фитоэкстракта на образование фиброзно-грануляционной ткани осуществляли путем имплантации стерильных ватных шариков. На модели острого перитонита, вызванный внут-рибрюшинным введением нитрата серебра, определяли объем экссудата в брюшной полости и количество дегранулированных тучных клеток в 100 окнах полей зрения. Влияние фитоэкстракта на сосудистую проницаемость определяли на модели острого перитонита, вызванного внутрибрюшинным введением 5,0 мл 0,05% уксусной кислоты и внутривенным введением 0,5 мл 1% раствора ме-тиленового синего. Через 1 час животных де-капитировали, собирали перитонеальный экссудат, центрифугировали его и определяли интенсивность окраски перитонеального экссудата фотометрическим методом при длине волны 540 нм. Оценку мембраностабилизирующей активности фитоэкстракта осуществляли по степени гемолиза эритроцитов, вызываемого реактивом Фентона (перекисный гемолиз), а также добавлением дистиллированной воды (осмотический гемолиз) по методике Ковалева. Степень гемолиза измеряли че-

209

рез 24 часа по поглощению длины волны при 420 нм. Для оценки антиоксидантных свойств экстракта зубчатки обыкновенной определяли концентрацию малонового диальдегида спек-трофотометрическим методом по степени образования окрашенного комплекса с 2- тио-барбитуровой кислотой в сыворотке крови и в гомогенате грануляционной ткани (Шимкевич и соав., 1978). Активность каталазы сыворотки крови определяли спектрофотометриче-ским методом. Содержание вН-групп в сыворотке крови определяли по методу Ф-П. Фо-ломеева. Содержание нуклеиновых кислот в гомогенате грануляционно-фиброзной ткани определяли по методике Трудолюбовой. Исследования по определению собственной антиокислительной активности фитоэкстракта проводили на приборе «Хемилюминометр РХЬ - 01» по общепринятому методу. Для оценки влияния испытуемого средства на кинетику Ре2+-индуцированной хемилюминес-ценции (ХЛ) определяли скорость изменения интенсивности ХЛ на начальной экспоненциальной стадии медленной вспышки, определяемой как тангенс угла наклона кинетической кривой вспышки. Расчет антиокислительной активности фитоэкстракта осуществляли с использованием показателя 5 угла а). Митотическую активность клеток определяли в гепатоцитах общепринятым гистологическим методом. Количество митозов подсчитывали под иммерсией при увеличении

(10x90) в 20 полях зрения на 1000 клеток. Ми-тотичеекий индекс выражали в промиллях.

Для патоморфологического исследования участки раны с прилегающими неповрежденными тканями фиксировали в 10% растворе формалина, брыжейку толстой кишки - в растворе Карнуа. Депарафинированные гистологические срезы, полученные на санном микротоме, окрашивали гематоксилин-эозином, а с целью подсчета дегранулированных тучных клеток - окрашивали толуидиновым синим. Фотографирование микропрепаратов кожи осуществляли на микроскопе МБИ-15.

Полученные в ходе экспериментов данные статистически обработаны общепринятыми методами для малой выборки с определением средней величины (М) и средней арифметической ошибки (ш), критерий Уилкоксона -Манна - Уитни. Различие считали достоверным при вероятности 95% (Р<0,05).

Результаты исследований н их обсуждение

Исследования фармакологической активности экстракта зубчатки обыкновенной включали: определение противовоспалительной и антибактериальной активности, а также оценку влияния на дегрануляцик» тучных клеток, проницаемость кровеносных сосудов, гемолиз эритроцитов и кинетику железо - индуцированной хемшномннесценции.

Результаты исследования противовоспалительной активности представлены1 в таблице 1.

г Таблица 1

■■ 'сад.1'

Влияние экстракта зубчатки обыкновенной на экссудативную стадию воспаления

(М±т)

Группы животных Дозы, мг/кг Объем отека, мл Угнетение отека, %

Контрольная, п=6 - 0,80±0,081 -

Экстракт зубчатки обыкновенной, п=6 50 0,64±0,050 20

100 0,53±0,051* 34

200 0,57±0,062* 29

Калефлон, п=6 100 0,58±0,040* 27

Примечание, * - здесь и далее значения достоверны по сравнению с контролем при Р<0,05; п - количество животных в каждой группе.

Установлено, что экстракт зубчатки во всех исследованных дозах оказывает антиэкс-судативное действие. При этом выраженность его эффекта зависит от используемой дозы: если при введении экстракта зубчатки обыкновенной в дозе 50 мг/кг обнаруживалась лишь тенденция к уменьшению отека, то вве-

дение его в дозах 100 и 200 мг/кг угнетало развитие отека соответственно на 34 и 29% по сравнению с данными у животных контрольной группы. При этом препарат сравнения калефлон оказывал аналогичное антиэкссуда-тивное действие.

210

Изучение влияния на альтерацию экстракта зубчатки показало, что курсовое введение экстракта зубчатки в дозе 100 мг/кг оказывает противовоспалительное действие, снижая степень деструкции тканей при альтерации уксусной кислотой и способствуя ускоренной регенерации поврежденной ткани. При этом тестирование на 21 сутки выявило достоверное снижение этого показателя соответственно па 43 %, по сравнению с аналогичными данными у крыс контрольной группы. При

введении препарата сравнения установлена аналогичная тенденция к уменьшению степе-ми деструкции тканей. При исследовании влияния экстракта зубчатки обыкновенной на стадию пролиферации установлено, что указанное средство обладает умеренной проли-феративной активностью.

При создании модели острого перитонита определялись количество перитониалького экссудата и число деграиулиро ванн lex тучных клеток. Данные представлены в таблице 2,

Таблица 2

Влияние экстракта зубчатки обыкновенной на экссудацию и дегрануляцию тучных клеток

при остром перитоните у белых крыс (М±т)

Группы животных Объем впугрибрю-шинной жидкости, мл Дегрануляция тучных клеток, %

Контрольная. п=5 1,8±0,12 83,3±2,43

Экстракт зубчатки обыкновенной, п=5 0,7±0:05* 30,2±3,36*

Калефлон, п=5 0,9^0,09* 48,3±5,76*

На фоне введения экстракта зубчатки в дозе 100 мг/кг объем внутрибрютинной жидкости уменьшался в 2,5 раза по сравнению с данными крыс контрольной группы, что свидетельствует о наличии у испытуемого экстракта выраженной антиэкссудативной и со-судоукрепляюшей активности. Вместе с этим у животных опытной группы внутрибрющйН-ная жидкость имела лишь опалеецмрующий оттенок, что свидетельствует о значительном снижении в ней числа эритроцитов. Введение экстракта зубчатки сопровождалось также существенным снижением дегрануляиии тучных клеток: так, количество их в процентном отношении уменьшилось на 62% по сравненню с таковым у животных контрольной группы.

При исследовании влияния экстракта зубчатки обыкновенной на сосудистую проницаемость установлено, что испытуемый фито-экстракт в дозе 100 мг/кг оказывает выраженное соеудоукрепляющее действие, о чем свидетельствует уменьшение интенсивности окраски перитонеальпого экссудата у крыс опытной группы на 36,6% по сравнению с данными животных контрольной группы.

Влияние экстракта зубчатки обыкновенной на устойчивость мембран эритроцитов при

гемолизе определяли с использованием 1 % суспензии отмытых эритроцитов крови человека. Установлено, что экстракт зубчатки обыкновенной оказывает выраженное мем-браноетабилизирующее действие во всех исследованных концентрациях (0,1 и 0,3 мг/мл), о чем свидетельствует уменьшение перекис-ного гемолиза на 40 и 25% и осмотического гемолиза на 35 и 30% соответственно по сравнению с контролем.

Определение антнокислительной активности экстракта зубчатки обыкновенной на кинетику Ре*+-индуцнрованной хемилюминес-ценции проведено с использованием а качестве субстрата окисления суспензии липосом из яичного желтка. Конечная концентрация экстракта зубчатки в инкубационной системе составляла 0,01; 0,025;0,05 и 0,1 мг/мл. Результаты проведенных опытов показали, что экстракт зубчатки в исследованных концентрациях оказывает существенное ингибирующее влияние на кинетику Ре "н - индуцированной хемилюминесценции в тестируемой системе, о чем свидетельствует уменьшение амплитуды «медленной вспышки», а также снижение скорости возрастания ХЛ. Л нтн о к целительный эффект исследуемого фитоэкстракта про-

211

является в концентрации 0,01 мг/мл и возрастает с увеличением концентрации, что позволяет отнести экстракт зубчатки обыкновенной к растительным средствам, обладающим ан-тиоксидантными свойствами.

Влияние экстракта зубчатки обыкновенной на митотическую активность определяли на 3 сутки эксперимента. Через 60 часов после резекции печени проводили ее гистологическое исследование. У животных, получавших испытуемый фитоэкстракт, интенсивность ми-тотического деления гепатоцитов более чем в 2 раза превышала значение этого показателя у крыс контрольной группы.

Оценку антибактериальной активности экстракта зубчатки обыкновенной проводили методом двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде. Установлено, что экстракт зубчатки обыкновенной обладает антимикробной активностью по отношению к изученным тест-бактериям. При этом наиболее выраженное бактериостатическое действие проявлялось по отношению к Escherihia coli и Staphylococcus aureus (в концентрации фитоэкстракта 0,78 мг/мл). Умеренное бактериостатическое действие наблюдалось по отношению к Proteus vulgaris и Pseudomonas aeruginosa (в концентрации 1,56 мг/мл). Менее выраженное бактериостатическое действие проявлялось по отношению к Streptococcus faecalis (в концентрации 6,25 мг/мл).

Таким образом, результаты проведенного исследования свидетельствуют о том, что экстракт зубчатки обладает выраженной противовоспалительной, антибактериальной, ка-пилляроукрепляющей, мембраностабилизи-рующей, антиоксидантной и регенераторной активностью. -

Оценка фармакотераиевтаческой эффективности мазн из экстракта зубчатки обыкновенной осуществлялась на моделях плоскостной кожно-мышечной и линейной ран, а также модели химического ожога кожи.

Исследования влияния мази из экстракта зубчатки обыкновенной на заживление плоскостных кожно-мышечных ран проведены в зсептических условиях по общепринятому методу. Животным опытной группы сразу после операции и затем на протяжении всего эксперимента на поверхность раны наносили мазь, содержащую 2, 5 и 10 % экстракта зубчатки обыкновенной. У крыс контрольной группы раневая поверхность оставалась открытой в течение всего периода наблюдения. В качестве препарата сравнения использовали мазь «Календула» аналогичным образом, С целью оценки динамики заживления ран на 3, 7, 14 и 21 сутки определяли площадь раневой поверхности планиметрическим методом, а также определяли индекс капиллярной асимметрии. Полученные данные приведены в таблицах 3 и 4.

.;. .,. ■ :■■■ /..-■..:..■■- • ■..-..'■■ ' . Таблица3

Влияние мази экстракта зубчатки обыкновенной (ЭЗО) на динамику изменения площади плоскостных кожно-мышечных ран у белых крыс (М±ш)

Сроки, сутки Площадь ран, мм1

Контрольная, п=9 Мазь ЭЗО 2%, п=9 Мазь ЭЗО 5%, п=9 Мазь ЭЗО 10%, п=9 Мазь «Календулы», п=9

3 310,5 ±12,60 301,4+5,04 297,2±5,32 298,7+ 7,06 299±1,01

7 167,б± 8,62 138,3± 116^8,01 * 117,2±6,15* 128,2±8,2 0*

14 102,7± 8,53 71,4± 3,85* 62,2± 4,13* 61,2± 2,75* 68,2±3,52 А

21 66,7± 0,58 38,6± 0,49* 27,1± 0,15* 26,0± 0,08* 29,1 ±0,15 *

Как следует из данных, приведенных в концентрациях оказывает ранозаживляющее таблице 3, мазь ЭЗО во всех исследованных действие, о чем свидетельствует достоверное

212

уменьшение площади раневой поверхности у крыс опытных групп по сравнению с аналогичными показателями у животных контрольных групп. При этом наиболее выраженный фармакотерапевтический эффект установлен при использовании 5 и 10% мази ЭЗО. Так, на 3,7,14 и 21 сутки установление уменьшение раневого дефекта на 3,6 и 3,8%; 30,4 и 30,7%; 39,4 и 40%; 59,0 и 61,0 % соответственно. При обработке 2%-й мазью ЭЗО и «Календулой» раневые дефекты по размерам практически не отличались в первые сроки друг от друга; на 14 и 21 сутки наблюдали уменьшение раневой поверхности при применении мази «Календула» на 4,4 и 24% соответственно. На фоне лечения мазью «Календула» в сравнении с данными животных контрольной группы в такие же сроки находили уменьшение раневых дефектов соответственно на 3,7; 23,0; 33,0; 56,0 %. Раневые дефекты при лечении мазью «Календула» оставались больше в размерах в отличие от таковых при лечении 10 % мазью ЭЗО почти на 0,1; 8,5; 10,2 и 10,3 %. На 28 сутки исследования на фоне применения 5 и 10% мази ЭЗО отмечалось полное закрытие раневых дефектов кожи, тогда как у животных контрольной группы, а также у крыс при использовании 2% мази ЭЗО и мази «Календула» оставались еще незажившие раневые поверхности.

При гистологическом исследовании выявлено, что у животных контрольной группы на 21 сутки не происходит полной эпителизации раневого дефекта. Дефект кожи заполнен новообразованной соединительной тканью, которая состоит из коллагеновых волокон, фиб-робластов, а также отмечаются клетки гематогенного происхождения, главным образом полиморфно-ядерные лейкоциты. В грануляционной ткани обнаруживали несколько расширенные капилляры и кровеносные сосуды. При наружном применении 2% мази ЭЗО на 21 сутки размеры ран сократились до 10 мм. В грануляционной ткани преобладала волокнистая структура, эпителнзация дефекта происходила за счет роста неравномерно утолщенного эпителия с краев раны и путем разрастания эпителия волосяных фолликул. При использовании 5 и 10% мази ЭЗО на 21 сутки отмечались признаки активного заживления

ран, выражавшиеся в формировании довольно зрелой грануляционной ткани и нарастании эпителия от краев к центру раны. Грануляционная ткань состояла из коллагеновых волокон, между которыми находились фибробла-сты, много вновь образованных кровеносных сосудов, значительно меньше круглоклеточ-ных элементов, чем в контроле. При применении препарата сравнения мази «Календула» также на 21 сутки отмечается зрелая грануляционная ткань, встречаются участки регенерирующей ткани, где коллагеновые волокна располагаются параллельными переплетающимися пучками, между фибробластами. Эпителий «идет» с краев раны, а также путем разрастания эпителия волосяных фолликулов. Новообразованный эпидермис неравномерной толщины.

Таким образом, анализ макро - и микроскопических изменений в ране у животных исследуемых групп свидетельствует о том, что во всех случаях заживление дефекта кожи происходит путем вторичного натяжения с образованием рубца. Непременным условием роста эпителия с краев раны являлось достижение грануляционной тканью определенной степени дифференцировки, выражающейся в наличии коллагеновых волокон. Скорость эпителизации раневого дефекта, а также сроки наступления конечной стадии заживления раны были различными в зависимости от применяемых для лечения лекарственных средств. Результаты планиметрических исследований плоскостных ран при наружном применении исследуемых лекарственных средств подтверждали данные макро - и микроскопического изучения изменений в ране. Из испытуемых средств более выраженным ранозаживляющим действием обладали 5 и 10 % мазь ЭЗО, при использовании которых происходило ускорение формирования зрелой грануляционной ткани и превращение ее в рубцовую ткань, а также процессов эпителизации раневой поверхности.

Метод определения индекса, капиллярной асимметрии (ИКА) выполнен по Ю.Г. Шапошникову (1982). На 7 сутки животных под гексеналовым наркозом декапитировали, раневые дефекты брали для определения ИКА. Результаты опыта представлены в таблице 4.

213

Таблица 4

ИКА в плоскостных кожно-мышечных ранах у крыс в динамике (М±ш)

Группы животных Сроки исследования, сутки

7 14 21

1 .Интактный контроль, п=3 0,96±0,011 0,96±0,015 0,96±0,010

2. Контроль, п=7 0,4±0,01 0,54±0,011 0,63±0,010

3. Мазь 10% ЭЗО, п=7 0,63±0,020* 0,71 ±0,012* 0,78±0,011*

4. Мазь «Календула», п=7 0,53±0,014* 0,62±0,013* 0,67±0,011*

Результаты, приведенные в таблице 4, свидетельствуют о том, что наиболее благоприятное течение репаративных процессов наблюдалось у животных, получавших мазь из экстракта зубчатки обыкновенной. Во все сроки исследований ИКА у животных этой группы по сравнению с таковым в других группах наиболее приближался к показателю интактных животных (0,96±0,01).

При исследовании влияния мази ЭЗО на заживление линейных кожных ран животным сразу после операции раневую поверхность

обрабатывали 10%-ной мазью ЭЗО в течение всего эксперимента один раз в сутки. В качестве препарата сравнения в другой группе животных использовалась мазь «Календула» по аналогичной схеме. У животных контрольной группы наблюдали процессы естественного заживления. На 8-е сутки после операции определяли прочность рубца методом ра-нотензиометрии и проводили гистологическое исследование рубцовой ткани. Полученные данные приведены в таблице 5.

...,,..■ Таблица 5

Влияние мази экстракта зубчатки обыкновенной на прочность рубца у белых крыс (М±ш)

Группы животных Прочность рубца, кг

Контрольная, п=5 0,52±0,021

Мазь 10%-ная ЭЗО, п=5 0,82±0,034*

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Мазь «Календула», п=5 0,72±0,033*

Установлено, что при использовании мази на основе экстракта зубчатки обыкновенной прочность рубца на 8-е сутки эксперимента была на 35-40% больше по сравнению с аналогичным показателем у крыс контрольной группы. При этом препарат сравнения оказывал менее выраженное ранозаживляющее действие.

При гистологическом исследовании состояния рубца на 8-е сутки у животных контрольной группы отмечено преобладание юных фибробластов и капилляров в незрелой грануляционной ткани; сохранялась воспалительная реакция ткани, новообразованная ткань имела рыхлую структуру, у крыс опытной группы рубец состоит из плотной фиброзной ткани, коллагеновые волокна правильно ориентированы и плотно расположе-

ны, что свидетельствует о зрелости новообразованной ткани. Гистологическая картина рубцовой ткани животных группы сравнения: коллагеновые волокна расположены более рыхло, находили зрелые фибробласты и фиброциты, новообразованная ткань выглядела более зрелой, чем в контроле.

При исследовании влияния 10%-ноЙ мази на основе ЭЗО на заживление ран, вызванных химическим ожогом, животным опытной группы вводили внутрижелудочно исследуемое средство в дозе 100 мг/кг до введения флогогенного агента и в течение всего эксперимента, начиная с момента операции. На 3-е сутки раневого процесса проводили некроэк-томию поврежденной кожи, после чего крысам опытной группы на образовавшийся кож-

214

ный дефект накладывали мазь ЭЗО один раз в сутки в течение всего эксперимента, препаратом сравнения мазью «Календула» обрабатывали раны животных другой группы также один раз в сутки. Животным контрольной группы вводили дистиллированную воду в эквиобъемном количестве и наблюдали процессы естественного заживления ран. Данные представлены в таблице 6,

На 7-е сутки определяли содержание общего белка и нуклеиновых кислот в гомогена-те грануляционной ткани, а также содержание малонового диальдегида в сыворотке крови, 8Н группы и активность каталазы у крыс опытной и контрольной групп. Полученные данные представлены в таблицах 7 и 8,

Таблица 6

Влияние мази экстракта зубчатки обыкновенной на заживление раневого дефекта, вызванного химическим ожогом кожи (М±т)

Группа Площадь некротизированной ткани, мм2

животных 3-е сутки 7-е сутки 14-е сутки 21 -е сутки 28-е сутки

Контрольная, п=24 206,1 ±8,11 189,7±8,21 143,0± 10,51 82,8±8,01 39,21±7,00!

ЭЗО+мазьЮ% ЭЗО, п=24 180,1±5,20* 153,2±7,13* 106,2±7,30* 45,8±5,44*-

Мазь «Календула», п=12 177,3±13,62* 166,4±6,54* 111,0±10,23* 50,8±6,01* 10±3,22*

Как следует из данных, приведенных в таблице 6, на фоне применения 10%-ной мази на основе экстракта зубчатки обыкновенной отмечалось ускорение динамики заживления химического ожога, о чем свидетельствует уменьшение площади раневой поверхности у крыс опытной группы на 7, 14 и 21 сутки соответственно на 19, 25 и 44 % по сравнению с таковой у крыс в контрольной группе. Препарат сравнения оказывал достаточно выражен-

ный ранозаживляющий эффект, лишь на 2-9% площадь раневого дефекта была больше таковой у животных опытной группы. На 28-е сутки эксперимента у животных опытной группы раны были полностью эпителизированы, тогда как у крыс контрольной группы к указанному сроку наблюдения эпителизация ран была частичной, а полное заживление происходило на 34-36 сутки опыта.

Таблица 7

Влияние экстракта зубчатки обыкновенной и его мази на содержание общего белка и нуклеиновых кислот в гомогенате грануляционной ткани белых крыс (М±т)

Показатели Группы животных

Контрольная, п=9 ЭЗО + мазь 10% ЭЗО, п=9

Общий белок, мкг/мг ткани 1,55± 0,123 2,1 ± 0,150*

РНК, мкг/мг ткани 0,35 ± 0,030 0,53 ± 0,054*

ДНК, мкг/мг ткани 0,38 ±0,041 0,51 ±0,042*

Х-'Ш^Мо'

Как следует из данных, приведенных в таблице 7, на фоне комплексного применения испытуемой мази 10% ЭЗО и экстракта зубчатки обыкновенной отмечалось достоверное повышение содержания общего белка и нуклеиновых кислот в гомогенате грануляцион-

ной ткани. Так, концентрация общего белка повышалась на 35%, а содержания РНК и ДНК-соответственно, на 51 и 34% по сравнению с аналогичными показателями у крыс контрольной группы.

215

Таблица 8

Влияние экстракта зубчатки обыкновенной и его мази на содержание малонового диальдегцда в сыворотке крови и гомогенате грануляционной ткани, содержание сульфгидрильных групп и активность катал азы в сыворотке крови белых крыс (М±ш)

Показатели Группы животных

Контрольная, п=6 ЭЗО + мазь] 0% ЭЗО, п=б

МДА в крови, нмоль/чл 2,72 ±0,051 1,75 ± 0,114*

МДА в гомогенате, нмоль/г ткани 4,35 ± 0,022 3,34 ±0,022*

SH-группы, мкмоль/л 1,5! ±0,025 1,91± 0,130*

Катал аз а, мкат/л 1,2± 0,050 2,02 ±0,023*

Из данных, приведенных в таблице 8, у животных опытной группы на фоне комплексного применения экстракта зубчатки обыкновенной и мази 10% ЭЗО отмечалось существенное снижение концентрации МДА в сыворотке крови и гомогенате грануляционной ткани соответственно на 35 и 23% по сравнению с данными животных контрольной группы. Наряду с этим в сыворотке крови крыс опытной группы наблюдалось увеличение концентрации сульфгидрильных групп на 26% и повышение активности каталазы на 68% по сравнению с аналогичными показателями у животных контрольной группы.

Полученные в работе данные свидетельствуют о том, что мазь ЭЗО обладает выраженной фармакотерапевтической эффективностью при раневых повреждениях кожи. Об этом свидетельствует заживление ран в ранние сроки, а также более полноценная организация новообразованной ткани по сравнению с контролем, чю подтверждается результатами тензиометрии: под влиянием испытуемого средства отмечалось повышение прочности рубцовой ткани, что в первую очередь связано с активной пролиферацией соединительнотканных элементов.

Исследование влияния экстракта зубчатки на динамику накопления продуктов перекис-ного окисления липвдов (ПОЛ) при химическом ожоге позволило выявить молекулярно-клеточные механизмы его ранозаживляющего действия, заключающиеся в способности ин-гнбировать процессы свободнорадикального окисления и стабилизировать мембранные структуры клеток. Так, курсовое введение данного экстракта при химическом ожоге сопровождалось, с одной стороны, существенным снижением содержания малонового ди-альдегида в сыворотке крови и в гомогенате

грануляционной ткани, а с другой стороны, повышением активности системы антиокислительной защиты организма животных, в частности повышением концентрации сульфгидрильных групп и активности каталазы в сыворотке крови, свидетельствующих об активации эндогенной антиоксидантной системы организма.

О наличии у экстракта зубчатки выраженного антиокислительного действия свидетельствуют также результаты исследования его влияния на кинетику Ре^ - индуцированной хемилюминесценции (ХЛ). Установлено, что экстракт зубчатки оказывает ингибирующее действие на процессы свободнорадикального окисления, существенно снижая скорость Ре2+ - индуцированной ХЛ, что свидетельствует об ингибирующем влиянии испытуемого средства на стадию разветвления цепных реакций и суммарный выход перекисных радикалов в цепных реакциях окисления липидов.

Установленная нами радикалперехваты-вающая активность испытуемого фитоэкс-тракта является чрезвычайно важной для объяснения молекулярных механизмов ранозаживляющего действия, поскольку известно, что в основе патогенеза раневых повреждений лежит образование активных форм кислорода и индукция под их влиянием свободноради-кальных реакций, являющихся основным молекулярным механизмом деструкции мембранных структур клеток.

Можно полагать, что повыщенная устойчивость эритроцитарных мембран при пере-кисном гемолизе эритроцитов, вызываемым реактивом Фектона, обусловлена связыванием гидроксильных радикалов фенольными соединениями, благодаря чему уменьшается выраженность процессов перекисного окисления липидов биологических мембран.

216

Капилляроукрепляюшая активность экстракта зубчатки связана с наличием в ней флавоноидных соединений, обладающих Р-витаминной активностью. Важным фактором заживления ран являются процессы репара-тивной регенерации, связанные с активацией процессов синтеза нуклеиновых кислот и пролиферации в тканях. Так, установлено, что применение экстракта зубчатки на фоне раневого процесса способствует существенному повышению содержания нуклеиновых кислот, общего белка и ми готической активности клеток в тканях. Безусловно, что характер ре-паративных процессов в ранах во многом зависит от состояния микроциркуляции, которая тесно связана с обменом веществ в тканях. С этой целью был проведен подсчет капилляров во вновь образованных тканях. Установлено, что индекс капиллярной асимметрии у животных, которых обрабатывали мазью зубчатки, был выше такового у животных контрольных групп, что свидетельствует о новообразовании капилляров в поврежденных тканях под влиянием испытуемого средства.

Наличие у экстракта зубчатки выраженной антибактериальной активности по отношению ко всем исследованным условно-патогенным тест-бактериям, наиболее часто индуцирующим развитие гнойных процессов в ранах, также вносит вклад в его ранзаживляющее действие выявленная фармакотерапевтиче-ская ранозаживляющая активность экстракта зубчатки и его мягкой лекарственной формы, очевидно, связана с наличием в ее сосгаве значительного количества биологически активных веществ, в частности фенольных соединений, а также кумаринов, алкалоидов, иридои-дов, дубильных и смолистьк соединений, аскорбиновой кислоты, витаминов, обладающих широким спектром фармакологической активности. стимулирующих регенерацию тканей.

Заключение

Полученные данные свидетельствуют о том, что сухой экстракт зубчатки обыкновенной оказывает противовоспалительное, ка-пилляроукрешшощее, мембраностабилизи-рующее, антибактериальное, антиоксидантное и стимулирующее регенерацию действие. Исследование фармакотерапевтической эффективности экстракта зубчатки обыкновенной

свидетельствует, что его новая лекарственная форма - мазь - оказывает выраженное рано-заживляющее действие при раневых повреждениях кожн (кожно-мышечные, линейные, ожоговые раны), предотвращая инфицирование ран и способствуя их заживлению в более ранние сроки. Мазь экстракта зубчатки обыкновенной не уступает по ранозаживляющему действию средству - мази «Календула».

Установлено, что одним из молекулярно-клеточных механизмов ранозаживлякнцего действия мази из экстракта зубчатки обыкновенной является ее способность ингибировать процессы перекисного окисления липидов и стабилизировать мембранные структуры клеток благодаря высокому содержанию в ней веществ фенольной природы, обладающих антиокислительным действием. На этом фоне ускоряются процессы регенерации с увеличением синтеза нуклеиновых кислот.

Полученные данные позволяют рекомендовать применение мази экстракта зубчатки обыкновенной в клинической практике в качестве средства, предупреждающего инфицирование и ускоряющего заживление ран.

Литература

1. Дзерид Санжай Чжамсо. Лхаятаб (коммсит. к «Чжуд-ши»): пер. стиб, Б. К. Батуева. - Агинское издание XIX в.- Гл.! 18-122,

2. Николаев A.B., Мамедов Л.В. Профилактика и лечение гной и о-воспалительных осложнений послеоперационных ран композицией на основе коллагена // Вестник хирургии. 1988. - №11. С.58-59.

3. Николаев С.М. О мембран остабилизируюшем действии растительных фенольных соединений // Бюл. СО АМН СССР. - 1983. - №6. - С.66-69. .

4. Убашсев И.О. Природные лекарственные средства при повреждениях органов и тканей: авторсф, дне. ... д-ра биол. наук. - Улан-Удэ, 1997. - 64 с.

5. Убашеев И.О., Лоншакова К.С., ] 1азаров-Рыгдылон В.Э. Влияние биологически активных веществ на заживление ран в эксперименте // Биологическое действие веществ природного происхождения. -Улан-Удэ, 1983. - С. 177-181.

6. Шапошников Ю.Г.Диагностика и лечение ранений. - М., 1984. —344 с.

7. Шимкевич Л.Л. Амирослапов Ю.А., Титова М.К., Розенфсльд М,А. Изучение состояния гемокоагу-ляции у больных с локальной гнойной инфекцией .методом м и крякало риметр ин и спсктрофотомстрии // Клиническая медицина, 1978. №11. С. 107-111.

8. Шимкевич Л.Л. Гисгохическое изучение соединительной ткани в очаге асептического воспаления: дис. ... кайл. мел. наук, М, 1965,

217

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.