CC BY
32
© Коллектив авторов, 2010 УДК 575:591.85:599.323.4
ВЛИЯНИЕ БИОНАНОСТРУКТУР - ЛИПОСОМ, СОДЕРЖАЩИХ ЛЕКАРСТВЕННЫЕ ПРЕПАРАТЫ,
НА СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫЕ ПРОЦЕССЫ В КРОВИ БЕЛЫХ МЫШЕЙ
ПРИ ИНТОКСИКАЦИИ ЧЕТЫРЕХХЛОРИСТЫМ УГЛЕРОДОМ
Л.В. Романова, В.И. Ефременко, Г.М. Кремнева, И.Л. Литвиненко, А.А. Ефременко, Н.Н. Килинкарова, Т.В. Николенко Ставропольская государственная медицинская академия
Нарушение обменных процессов в печени наблюдается при различных заболеваниях. Вследствие патологических процессов могут развиваться массивный некроз печеночных клеток и острая печеночная недостаточность (ОПН), проявляющаяся внезапным тяжелым нарушением функции печени. Одной из причин возникновения ОПН является отравление гепа-тотропными ядами, в частности, четыреххлористым углеродом (сС|4).
В связи с особенностями молекулярных механизмов действия СС14 на субклеточные мембраны ге-патоцитов (микросомальная активация, перекисное окисление липидов (ПОЛ) как механизмы нарушения каталитических свойств мембраносвязанных ферментов) изучение биологического действия гепато-тропного яда представляет интерес в качестве модели молекулярной патологии мембранных структур [4, 11]. Вследствие этого детальное изучение молекулярных основ химического поражения гепатоцитов приобретает общебиологическое и медицинское значение.
Для коррекции обменных процессов в печени используют различные лекарственные препараты, способствующие стабилизации клеточных мембран, снижению процессов перекисного окисления липидов. В ряде случаев эффективность их использования оказывается низкой из-за неспособности эффективно преодолевать анатомические и клеточные барьеры, токсичности некоторых препаратов, кратковременного пребывания в организме вследствие быстрого метаболизма и выведения.
Романова Людмила Викторовна, кандидат биологических наук, старший преподаватель кафедры биологической химии СтГМА, тел.: 603-371; e-mail: alkilin @ Yandex.ru.
Ефременко Виталий Иванович, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой биологической химии СтГМА, Заслуженный деятель науки РФ, тел.: 402-261.
Кремнева Галина Михайловна, кандидат медицинских наук, доцент кафедры биологической химии СтГМА, тел.: (8652) 32-95-07.
Литвиненко Ирина Леонидовна, кандидат медицинских наук, доцент кафедры биологической химии СтГМА, тел.: (8652) 94-56-97.
Ефременко Анна Александровна, кандидат медицинских наук, ассистент кафедры биологической химии СтГМА, тел.: (8652) 24-08-89.
Килинкарова Нина Николаевна, кандидат биологических наук, ассистент кафедры биологической химии СтГМА, тел.: (8652) 35-56-44.
Николенко Татьяна Владимировна, ассистент кафедры биологической химии СтГМА, тел.: 89187612756; tatyana-stv78 @ bk.ru.
В последнее время появляются сообщения о широком применении липосом в качестве транспортеров лекарственных препаратов [16, 13, 1, 14]. Используя липосомальные формы лекарственных средств, удается преодолеть недостатки их обычных лекарственных форм. Широкие возможности применения липосом в терапии различных заболеваний обусловлены совокупностью биологических свойств: химической инертностью, биосовместимостью, биодеградируемостью, отсутствием токсических и антигенных свойств. Липо-сомы обладают возможностью направлять заключенные в них вещества в определенные органы и ткани, что позволяет заметно снижать дозу препарата, сохраняя эффективность биологического действия. Кроме того, липидные везикулы способны предохранять заключенные в них лекарственные вещества от действия ряда факторов, обеспечивая пролонгированный эффект препаратов [6, 15, 17].
В литературе практически отсутствуют данные о влиянии липосомальных лекарственных препаратов, введенных разными путями, на свободнорадикальные процессы организма при ОПН. В связи с этим исследование показателей ПОЛ у экспериментальных животных с ОПН, вызванной введением СС14, является актуальным.
Целью настоящей работы явилось конструирование липосомальных лекарственных препаратов и изучение их метаболических эффектов в регуляции гомеостаза у животных при ОПН, вызванной отравлением СС14.
Материал и методы. Исследования проводили на базе ФГУЗ «Ставропольский научноисследовательский противочумный институт Роспотребнадзора». Эксперимент проводили в течение 30 суток на 500 белых беспородных мышах обоего пола весом 18-20 г с соблюдением правил, предусмотренных Европейской комиссией по надзору за проведением лабораторных и других опытов с участием экспериментальных животных разных видов. Мыши находились в стандартных условиях с естественной сменой освещения и соблюдением стандартного рациона. У всех животных был свободный доступ к пище и воде.
Среди экспериментальных животных формировали следующие группы:
1 - контрольная (20 мышей) - данной группе живот-
ных СС14 не вводили;
2 - группа животных (120 мышей), которым вводи-
ли внутрибрюшинно однократно СС14 в дозе 0,2 мл 50% масляного раствора (0,25 ЛД50);
3 - группа животных (120 мышей), которым про-
водили коррекцию обменных процессов, нарушенных воздействием СС14, и осуществляли
лечение лекарственными средствами в виде растворов (разовые дозы определяли в соответствии с фармакопейными данными из расчета на массу тела животного) - аскорбиновая кислота (2,0 мг), АТФ (1,0 мг), а-токоферол (0,5 мкг), селенит натрия (0,00017 мг), эссенциале (2,5 мг). Препараты вводили однократно вну-трибрюшинно ежедневно в течение 6 дней, начиная через сутки после введения токсина [18];
4 - группа животных (120 мышей), которым прово-
дили лечение липосомальными препаратами аскорбиновой кислоты, АТФ, а-токоферола, селенита натрия, эссенциале, вводимыми вну-трибрюшинно на 2, 5, 8, 11, 14, 17 сутки в тех же дозах;
5 - группа животных (120 мышей), которым прово-
дили лечение липосомальными лекарствами, вводимыми перорально на 2, 5, 8, 11, 14, 17 сутки в тех же дозах.
Различные схемы лечения связаны с пролонгированным действием липосомальных препаратов.
Липосомы получали из фосфолипидов, выделенных из головного мозга свиньи методом «выпаривания и обращения фаз». При этом жирорастворимый а-токоферол включался в структуру мембран липосом, а иммобилизацию водорастворимых лекарственных препаратов проводили методом шестикратного «замораживания - оттаивания» липосом в жидком азоте с последующим оттаиванием в водяной бане при температуре 400С. Количество иммобилизируемых во внутренний объем водорастворимых лекарственных средств оценивали косвенным методом по включению глюкозы, процент включения составлял 72,2±2,1.
Животных декапитировали и определяли в крови на
3, 10, 20, 30 сутки продукты ПОЛ и активность ферментов антиоксидантной защиты: содержание малонового диальдегида (МДА) по методу В. Б. Гаврилова, 1987; активность каталазы по методу С. И. Крайнева [7]; суммарную пероксидазную активность (СПА) в плазме крови по методу [12].
Статистическая обработка результатов исследования проводилась согласно общепринятым методам с определением средней арифметической ошибки. Результаты исследования обрабатывались на персональном компьютере IBM PC 486 DX4-100 с применением компьютерной программы Microsoft Excel 97. Достоверность различий между исследуемыми группами определяли с помощью t-критерия Стьюдента. Статистически достоверными считали отличия, соответствующие величине ошибки достоверности р<0,05.
Результаты и обсуждение. Интенсивность процессов свободнорадикального окисления зависит от состояния антиоксидантных систем, которое может быть изменено в результате действия в том числе СС14. Продукты расщепления СС14 - свободные радикалы (СС14^001+3 + Cl'), которые непосредственно действуют на функци ональные группы микросомных ферментов и ускоряют перекисное окисление липидов в мембранах [3,2]. Образующиеся при этом перекиси вызывают необратимые изменения в клетках печени [10]. Обезвреживание перекиси водорода осуществляется с помощью гемсодержащих ферментов - ка-талазы и пероксидазы.
В данной работе было проведено изучение этих показателей, а также осуществлялась их коррекция растворами лекарственных средств, обладающими антиоксидантными свойствами и липосомальными лекарственными препаратами [8].
В группе животных, которым вводили СС14, на 3
сутки наблюдалось достоверное повышение содержания МДА в 1,8 раза. На 10 и 20 сутки содержание МДА снизилось по сравнению с началом эксперимента, но на 30 сутки этот показатель оставался выше нормы на 41,7%. В начале эксперимента отмечалось повышение активности СПА в 4,4 раза. На 10 и 20 сутки активность СПА увеличилась по сравнению с 3 сутками. На 30 сутки этот показатель достоверно снизился, но остался выше нормы в 8 раз. В начале опыта наблюдалось достоверное уменьшение активности каталазы в 2,7 раза. Активность каталазы на 10-30 сутки стала повышаться, однако исследуемый показатель оставался ниже нормы на 47,5%.
Увеличение МДА в сыворотке крови, на наш взгляд, может быть обусловлено специфичностью процессов ПОЛ в эритроцитах. Полагают, что причиной интенсификации ПОЛ являются активированные фагоциты, продуцирующие активные формы кислорода [9]. У животных при ОПН наблюдалась низкая активность каталазы, «расходуемой» на разрушение возрастающих концентраций перекиси водорода. СПА включает в себя внеэритроцитарный гемоглобин и МПО нейтро-филов, которые высвобождаются при повреждении мембран эритроцитов и нейтрофилов крови [5].
Таким образом, проведенное исследование показало, что отравление экспериментальных животных СС14 приводит к интенсификации ПОЛ и смещению антиоксидантного - прооксидантного равновесия в сторону прооксидантной системы (табл.).
В группе животных, которая получала растворы лекарственных средств, на 3 сутки уровень МДА достоверно повышался (в 1,7 раза). В последующие сроки этот показатель снижался, но к концу эксперимента оставался выше нормы на 16,7%. В сравнении с группой животных, которым вводили СС14 и не проводили лечения, уровень МДА снижался на 17,7%. В начале исследования активность СПА достоверно возрастала в 4,8 раза. Активность СПА на 10 сутки не изменилась, на 20-30 сутки незначительно увеличилась по сравнению с 10 сутками. К концу эксперимента этот показатель превышал контрольную величину в 8,4 раза. В сравнении с группой животных, которым вводили СС14, активность СПА была выше на 4,8%. В начале эксперимента активность каталазы достоверно понижалась в 2,9 раза, на 10-20 сутки достоверно возрастала, на 30 сутки наблюдалось увеличение её активности, которая все же оставалась ниже нормы на 29,6%. В сравнении с группой животных, которым вводили СС14, активность каталазы увеличилась на 25%. Лечение растворами лекарственных средств приводило к снижению изучаемых показателей за исключением СПА, которая наиболее чувствительна к воздействию СС14 (табл.).
В группе животных, которым вводили липосомаль-ные лекарственные препараты внутрибрюшинно, на
3 сутки уровень МДА повышался в 1,4 раза. На протяжении всего эксперимента наблюдалась тенденция к снижению этого показателя. К концу эксперимента уровень МДА достоверно снизился, оставаясь выше нормы на 11,1%. В начале исследования отмечалось повышение активности СПА в 4 раза. В ходе эксперимента наблюдалась тенденция к увеличению СПА. Уровень СПА на 30 сутки хотя и снизился, но оставался выше нормы в 5,4 раза. В начале опыта активность каталазы достоверно снизилась (в 2,3 раза). На протяжении всего эксперимента наблюдалась тенденция к увеличению активности каталазы. К концу эксперимента активность каталазы достоверно повышалась, но все же оставалась ниже нормы на 16,3%. Липосомальные лекарственные препараты, введенные внутрибрюшинно, более эффективно приводили
Таблица
Динамика перекисного окисления липидов (МДА), каталазы и СПА в крови животных с острой печеночной недостаточностью на фоне введения липосомальных лекарственных препаратов внутрибрюшинно и перорально
Иссле- дуемый показа- Контроль- ное значение Сроки наблюдения (сутки)
Метод введения 3 10 20 30
тель показателя после введения СС14
6,60±0,43* 5,80±0,19* 5,30±0,20* 5,10±0,44*
после лечения растворами лекарственных средств
МДА, 3,60±0,06 Внутри- брюшин- ный 6,10±0,06* ** 5,10±0,07* 4,70±0,06* ** 4,20±0,08* **
мкмоль/л после лечения липосомальными препаратами
5,4±0,09* ** 5,0±0,06* 4,3±0,07* ** 4,0±0,05* **
Перораль- ный 4,9±0,07* *** 4,1±0,08* *** 3,7±0,06 *** 3,5±0,07 ***
после введения ССІ4
9,00±0,83* 9,80±0,92* 11,30±2,81* 12,60±0,77*
Внутри- после лечения растворами лекарственных средств
Катала- за, ммоль/ мл/мин 24,00± 0,23 брюшин- ный 8,25±0,37* ** 10,4±0,28* ** 13,20±0,24* ** 16,90±0,36* **
после лечения липосомальными препаратами
10,6±0,31* ** 12,3±0,28* ** 16,7±0,35* ** 20,1±0,27* **
Перораль- ный 12,5±0,32* *** 14,9±0,37* *** 18,2±0,41* *** 22,3±0,23* ***
после введения СС14
0,550±0,040* 1,000±0,038* 1,375±0,092* 1,000±0,082*
Внутри- брюшин- ный после лечения растворами лекарственных средств
СПА, ед.опт. плот/мл 0,125± 0,600±0,031* 0,600±0,012* 1,050±0,070* ** 1,050±0,076* **
0,013 после лечения липосомальными препаратами
0,5±0,072* 0,75±0,087* 0,875±0,014* ** 0,675±0,012* **
Перораль- ный 0,625±0,024* 0,5±0,016* *** 1,0±0,059* 0,675±0,083*
Примечание. * - р<0,05 по сравнению с контрольными значениями; ** - р<0,05 при внутрибрюшинном введении растворов лекарственных средств и липосомальных лекарственных форм; * ** - р<0,05 при внутрибрюшинном и пероральном введении липосомальных лекарственных форм.
к восстановлению показателей ПОЛ по сравнению с растворами лекарств. Уровень МДА уменьшался, активность каталазы возрастала на 18,9%, а СПА уменьшалась на 55% (табл.).
При введении белым мышам липосомальных лекарственных препаратов перорально на 3 сутки отмечалось повышение уровня МДА в 1,4 раза, а на 10-20 сутки наблюдалось его снижение. К концу эксперимента уровень МДА достиг нормы.
В начале эксперимента наблюдалось повышение активности СПА в 5 раз, на 10 сутки отмечалось незначительное снижение этого показателя с последующим двукратным увеличением на 20 сутки. К 30 суткам эксперимента уровень СПА снижался, сохраняясь повы-
шенным в 4,4 раза. Показатель активности каталазы на 3 сутки был ниже нормы в 2 раза, на 10-20 сутки наблюдалось его увеличение, а к концу эксперимента активность каталазы повышалась по сравнению с 3 сутками, но оставалась ниже нормы на 7,1%. Ли-посомальные лекарственные препараты, введенные перорально, быстрее восстанавливали данные показатели, чем липосомальные лекарственные средства, введенные внутрибрюшинно. Уровень МДА снижался на 12,5%, активность каталазы увеличивалась на 9,8%, СПА не изменялась.
Можно сделать вывод о том, что применение липосомальных лекарственных препаратов дает более быстрый корригирующий эффект, причем наиболее
эффективным оказалось в данном случае его перо-ральное введение.
Заключение. Внутрибрюшинное введение СС14 в дозе 0,2 мл 50% раствора (0,25 ЛД50 ) приводит к выраженному изменению интенсивности свободнорадикальных процессов, которые не нормализуются в течение эксперимента (30 дней). Использование для лечения лекарственных препаратов в виде растворов не обеспечивает эффективного лечения животных, что удается достичь, применяя эти же средства в ли-посомальной форме. Более быстрым корригирующим эффектом обладают липосомальные лекарственные препараты,введенные перорально.
Литература
1. Абрамов, К.С. Некоторые аспекты направленного транспорта лекарств в организм с помощью полимерных наночастиц/ К.С. Абрамов, И.Н. Скидан, А.Е. Гуляев // Клинич. исслед. лекарствен. средств в России. - 2001.-№ 2. -С. 18-21.
2. Алматов, К. Т. Механизмы развития повреждений мембран митохондрий и роль липоли-тической системы: автореф. дис.... д-ра биол. наук. - Ташкент, 1989. - 38 с.
3. Владимиров, Ю.А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах / Ю. А. Владимиров, А.И. Арчаков. - М., 1972. -252 с.
4. Губский, Ю.И. Коррекция химического поражения печени/ Ю.И. Губский. - Киев, 1989. - С. 11-
14.
5. Козинец, Г.И. Кровь и инфекция / Г.И. Козинец. В.В. Высоцкий, В.М. Погорелов. - М., 2001. -456 с.
6. Крейнес, В.М. Противовоспалительные эффекты липосом / В.М. Крейнес, В.М. Мельникова, Я.М. Марголин // Вестн. АМН СССР - 1990. -№6. - С. 44-47.
7. Кушманова, О.Д. Руководство к практическим занятиям по биологической химии / О.Д. Кушманова, Г.М.Ивченко. - М, 1974. - 424 с.
8. Мазгутов, В.З. Влияние селенита натрия и витамина Е на некоторые показатели липидного обмена в эксперименте / В.З. Мазгутов, И.В. Зуев // Мед. журн. - Узбекистана,1979. -№4. - С. 59-62.
9. Маянский, А.Н. Фагоцитоз: проблемы и перспективы / А.Н. Маянский // Вестн. Рос. АМН. -1993. - №4. - С. 52-55.
10. Мелихов, В.И. Влияние сальмонеллезного энтеротоксина на процессы ПОЛ и активность каталазы. Молекулярные механизмы развития инфекционного заболевания: тез. докл. всесо-юз. конф. - Звенигород, 1990. - С. 65-66.
11. Подымова, С.Д. Болезни печени/ С.Д. Подымо-ва. - М., 1993. - 544 с.
12. Покровский, А.А. Биохимические методы исследования в клинике / А.А. Покровский. - М., 1977. - 168 с.
13. Севастьянов, В.И. Биосовместимость / В.И. Севастьянов. - М., 1999. - 368 с.
14. Хворостов, И.Н. Экспериментальное фармакологическое и токсикологическое изучение липосомальных форм антибиотиков группы аминогликозидов: автореф. дис. ... канд. мед. наук. - Волгоград, 2001. - 18 с.
15. Allen, T.M. Liver pathology accompanying chronic liposome administration in mouse / T.M. Allen, E.A. Smucker // Res. Commun. Chem. Pathol. and Pharmacol. - 1985. - Vol. 50, №2. - P 281-290.
16. Dijstra, J. A procedure for the efficiend incorporation on wild - type lipopolisaccharide into liposomes for ise in immunological studies / J.A. Dijstra, J.L. Ryan, F.C. Szoka // J. Immunol. Meth. - 1988. - Vol. 114, №1-2. - P 197-205.
17. Gregoriadis, G. Liposomes in therapeutic and preventive medicine: Zhe development of the drug -carrier concept / G. Gregoriadis // Ann. Acad. Sci. - 1978. - Vol. 308. - P 343-370.
18. Maclin, L.T. Handbook of Vitamins: Nutritional, Biochemical and clinical aspects / L.T. Maclin. - New York, 1984. - 145 p.
ВЛИЯНИЕ БИОНАНОСТРУКТУР - ЛИПОСОМ, СОДЕРЖАЩИХ ЛЕКАРСТВЕННЫЕ ПРЕПАРАТЫ, НА СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫЕ ПРОЦЕССЫ В КРОВИ БЕЛЫХ МЫШЕЙ ПРИ ИНТОКСИКАЦИИ ЧЕТЫРЕХХЛОРИСТЫМ УГЛЕРОДОМ
Л.В. РОМАНОВА, В.И. ЕФРЕМЕНКО,
Г.М. КРЕМНЕВА, И.Л. ЛИТВИНЕНКО,
А.А. ЕФРЕМЕНКО, Н.Н. КИЛИНКАРОВА,
Т.В. НИКОЛЕНКО
Для моделирования острой печеночной недостаточности (ОПН) белым мышам вводили внутрибрюшинно однократно четыреххлористый углерод (СС14) в дозе 0,25 ЛД50. Лечение животных осуществляли аскорбиновой кислотой, АТФ, а-токоферолом, селенитом натрия, эссенциале, которые инъецировали однократно внутрибрюшинно ежедневно в течение 6 дней в виде растворов. Эти же лекарственные средства,
иммобилизованные в липосомы, вводили однократно внутрибрюшинно и перорально на 2, 5, 8, 11, 14, 17 сутки в тех же дозах, что и интактные. Отравление экспериментальных животных СС14 приводило к интенсификации перекисного окисления липидов и смещению антиоксидантного-прооксидантного равновесия в сторону прооксидантной системы. Лечение животных лекарственными средствами приводило к снижению содержания малонового диальдегида и активности фермента каталазы за исключением уровня суммарной пероксидазной активности, которая наиболее чувствительна к воздействию СС14 Наиболее быстрый корригирующий лечебный эффект. оказывали липосомальные препараты при пероральном введении.
Ключевые слова: четыреххлористый углерод, ли-посомальные лекарственные препараты, острая печеночная недостаточность, свободнорадикальное окисление
THE INFLUENCE OF BIONANOSTRUCTURES -LIPOSOMES CONTAINING DRUGS - ON FREE-RADICAL OXIDATION PROCESSES IN BLOOD OF WHITE MICE IN THE CASE OF CARBON TETRACHLORIDE INTOXICATION
ROMANOVA L.V., EFREMENKO V.I.,
KREMNEVA G.M., LITVINENKO I.L.,
EFREMENKO A.A., KILINKAROVA N.N.,
NIKOLENKO T.V.
Acute liver failure (ALF) is caused by influence of he-patotropic poison like carbon tetrachloride (CCl4). The method for forming ALF was the intraperitoneal injection of carbon tetrachloride in dose 0,25 LD50. The experimen-
tal animals were treated intraperitoneally during 6 days by: ascorbic acid, ATP, a-tocopherol, sodium selenite, Essenciale. The other experimental animals were intraperitoneally injected with liposomal drugs once and per os on the 2, 5, 8, 11, 14, 17 days of the ALF. The result was that the CCL4 poisoning of experimental animals increased the activity of lipid peroxidation and prooxidative systems. The treatment with drugs decreased the level of malondi-aldehyde and catalase except the total peroxidase activity. Results showed that the application of liposomal drugs, especially used per os, demonstrated quick corrective effect in the case of ALF.
Key words: carbon tetrachloride, liposomal drugs, free-radical oxidation, acute liver failure
© Коллектив авторов, 2010 УДК 612.826
АНТИСТРЕССОРНЫЕ ВОЗМОЖНОСТИ ЭПИФИЗАРНОГО ГОРМОНА МЕЛАТОНИНА В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МОДЕЛИ И ВЫРАЖЕННОСТИ СТРЕССА
Э.В. Бейер, А.С. Булгакова, А.А. Скорняков, Э.Б. Арушанян Ставропольская государственная медицинская академия
Небольшая мозговая железа эпифиз является уникальным адаптогенным органом, обеспечивающим приспособление сложно устроенных организмов к меняющимся условиям внешней и внутренней среды. В том числе с помощью своего основного гормона - мелатонина эпифиз обеспечивает защиту от неблагоприятных последствий стрессорного воздействия. Это положение было постулировано и подробно аргументировано нами прежде [1, 3, 4]. В настоящей работе на основе собственного опыта предпринята попытка определить надёжность антистрессорных протек-тивных свойств гормона при использовании его в стандартной и достаточно низкой дозе при стрессе разной выраженности и при оценке различных физиологических показателей.
Материал и методы. Опыты выполнены на белых нелинейных крысах самцах массой 200-250 г, содержавшихся в условиях вивария при фиксированном
Бейер Эдуард Владимирович, доктор медицинских наук, профессор кафедры фармакологии СтГМА, тел.: 8(8652) 35-48-81.
Булгакова Александра Сергеевна, соискатель кафедры фармакологии СтГМА, врач МУЗ ДП №2, тел.: 8(8652) 23-47-75.
Скорняков Антон Александрович, соискатель кафедры фармакологии СтГМА, врач ГУЗ СККПЦ, тел.: 8(8652) 32-23-93.
Арушанян Эдуард Бениаминович, доктор медицинских наук, профессор, Заслуженный деятель науки РФ, заведующий кафедрой фармакологии СтГМА, тел.: 8(8652) 35-34-29, e-mail: arushanyan@inbox.ru.
световом режиме (свет-темнота 12:12) и свободном доступе к воде и пище. Для оценки поведения и адаптационных способностей животных использовали несколько методических подходов.
Спонтанную локомоцию и поисковую активность крыс регистрировали методом «открытого поля». Оно представляло собой круглую арену (диаметром 2 м), разделённую на 16 периферических и 8 центральных сегментов. У помещённого в один из периферических сегментов животного в течение 5 минут учитывали число пересеченных сегментов обоего типа и количество вертикальных стоек. Многопараметрическая методика [12] позволяла судить о тревожно-фобическом состоянии крыс. С этой целью в специальной камере им последовательно предъявляли 8 тестов, включая такие как спуск с высоты, прохождение через отверстие, выход из тёмного бокса, реакция на руку экспериментатора, вокализация и т.п. Ответ на каждый тест оценивали от 0 до 3 баллов. Чем выше был суммарный балл, тем значительнее оказывался тревожно-фобический статус животного. Приподнятый крестообразный лабиринт, также позволяющий судить о степени тревожности обследованной особи, состоял из 4 перпендикулярных рукавов (по два открытых и закрытых), приподнятых над полом. Регистрировали число посещений обоих рукавов, длительность пребывания в них, количество вертикальных стоек и све-шиваний с горизонтальной платформы. Последние два параметра характеризуют исследовательскую активность крыс. Для оценки вариативности сердечного ритма использовали метод кардиоинтерва-лографии [9]. У предварительно адаптированных к
