CC BY
27
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Экспериментальные модели Experimental models
Заключение. Признанной стратегией фармакотерапии при пневмофиброзе является коррекция локальных проявлений оксидативного стресса (Walters D.M., Cho H.Y, 2014). Полученные нами результаты согласуются с данной стратегией, расширяя возможности для создания на основе Эхинохрома А официнального препарата для патогенетической и сопроводительной терапии в детской пульмонологической и онкологической практике.
ВЛИЯНИЕ БАКТЕРИАЛЬНОЙ БИОПЛЕНКИ НА ФОРМИРОВАНИЕ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ВНЕКЛЕТОЧНЫХ ЛОВУШЕК
Долгушин И.И., Шишкова Ю.С., Колесников О.Л., Пичугов С.М., Галагудин И.В.
ФГБОУ ВО «Южно-Уральский государственный медицинский университет», Челябинск, Россия
Введение. Первой линией защиты от микроорганизмов выступает врожденная противоинфекционная система макроорганизма, самыми многочисленными клетками которой являются нейтрофилы. Нейтрофилы, выходя из периферической крови в ткани и на поверхность слизистых оболочек, участвуют в антимикробных и воспалительных реакциях. Известно, что бактерии сосуществуют в виде биопленки, обладая повышенной по сравнению с планктонными культурами устойчивостью к экстремальным физико-химическим условиям среды и биологическим факторам (неблагоприятной температуре, рН, концентрации соли, антимикробным веществам, фагоцитозу). Несмотря на многочисленные исследования антибиопленочных реакций врожденного иммунитета роль внеклеточного матрикса в формировании нейтро-фильных внеклеточных ловушек остается невыясненной.
Цель. Определить влияние бактериальной биопленки на формирование нейтрофильных внеклеточных ловушек.
Задачи. 1) Оценить in vitro влияние планктонной культуры E. coli и ее биопленки на формирование нейтрофиль-ных внеклеточных ловушек. 2) Определить in vivo способность нейтрофильных гранулоцитов к формированию нейтрофильных внеклеточных ловушек до и после хирургической обработки инфицированной ожоговой раны.
Материалы и методы. Для решения первой задачи использовали взвесь суточной и 3-суточной культуры E. coli и нейтрофилы, выделенные из периферической крови условно-здоровых доноров на двойном градиенте фиколла-верографина. Исследование проводили в 5 повторах. Результаты взаимодействия изучали с помощью люминесцентной микроскопии при окраске акридиновым оранжевым. Для решения второй задачи было проведено цитологическое исследование препаратов раневого отделяемого, окрашенных по Романовскому—Гимзе, до и после выполнения хирургической обработки ожоговых ран 15 пациентов с помощью аэрозольной струи 0,05% раствора хлоргексидина биглюконата под давлением воздушного потока. В цитологических препаратах изучали содержание нейтрофильных гранулоцитов в поле зрения и определяли процентное содержание нейтрофильных внеклеточных ловушек от 100 просмотренных морфологических форм нейтрофилов с помощью световой микроскопии при увеличении 100x10x2. Полученные результаты были подвергнуты статистической обработке.
Результаты. В результате проведенных исследований установили, что после 3-минутного взаимодействия су-
точной культуры E. coli со взвесью донорских нейтро-филов происходило формирование нейтрофильных внеклеточных ловушек, через 30 минут совместного культивирования in vitro 95% нейтрофильных гранулоцитов экстрагировали свою ДНК. Иначе выглядела морфология нейтрофильных гранулоцитов при взаимодействии с 3-суточной культурой E. coli. В препаратах микроорганизмы были представлены плотно упакованными клетками, напоминающими кукурузные початки, а нейтрофилы сохраняли морфологию сегментоядерных гранулоцитов в течение 40 минут наблюдения и не формировали ней-трофильные внеклеточные ловушки.
При изучении цитологических препаратов раневого отделяемого до проведения хирургической обработки в поле зрения визуализировалось 9,01±1,38 нейтрофилов, после обработки 4,94±0,88 (р = 0,04). Процентное содержание нейтрофильных внеклеточных ловушек до обработки составляло 40,94±5,55%, а после - 59,91±5,70% (р = 0,01)
Заключение. Таким образом, при взаимодействии биопленки E. coli и нейтрофильных гранулоцитов в эксперименте in vitro показано отсутствие формирования нейтрофильных внеклеточных ловушек. В то же время на примере использования хирургической обработки инфицированной ожоговой раны, при которой происходит механическое разрушение биопленки аэрозольной струей, высвобождение планктонных форм микроорганизмов и представление незащищенных бактериальных клеток тканевым нейтрофилам, было обнаружено интенсивное формирование нейтрофильных внеклеточных ловушек.
ВЛИЯНИЕ САПОЗИНА D НА ФОРМИРОВАНИЕ ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНОГО ИММУНИТЕТА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ТУБЕРКУЛЕЗНОЙ ИНФЕКЦИИ
Евстифеев В.В., Шепелькова Г.С., Еремеев В.В.
ФГБНУ «Центральный научно-исследовательский институт туберкулеза», Москва, Россия
Сапозины (Sap) — подгруппа гликопротеинов большого семейства сапозин-подобных белков. Сапозины A, B, C и D образуются в кислых эндосомах путем расщепления просапозина (pSap). Сапозины участвуют в процессе презентации антигенов микобактерий на молекулах CD1. Ранее было показано, что макрофаги, полученные от мышей-нокаутов по гену pSAP, подавляли рост M. tuberculosis слабее, чем макрофаги мышей дикого типа. При добавлении к культуре клеток реком-бининтного человеческого сапозина D (Sap-D) наблюдалось полное восстановление функций макрофагов. При инкубации M. tuberculosis с рекомбинантными Sap наблюдалось подавление метаболизма бактерий, причем наибольшей активностью обладал Sap-D. Методами флуоресцентного мечения и электронной микроскопии было обнаружено повреждающее действие Sap-D на мембрану M. tuberculosis. Результаты экспериментов, проведенных в лаборатории, позволяют сделать вывод, что Sap-D является важным компонентом в формировании иммунного ответа к туберкулезу (ТБ). Однако неясно как влияет дефицит Sap-D на формирование противотуберкулезного иммунного ответа in vivo у мышей при экспериментальной туберкулезной инфекции.
Мышей C57BL/6 (B6) и B6.Sap-D-/- аэрозольно инфицировали вирулентным штаммом M. tuberculosis H37Rv. Через 3 и 5 недель после инфицирования исследовали степень поражения легочной ткани и рост микобактерий в легком.
