CC BY
35
УДК 602.9:611.018:616-006:636.028
Кладницька Л.В., к.вет.н., доцент, Мазуркевич А.И., д.вет.н., професор, Гарманччук Л.В., д.б.н., професор, Величко C.B., к.б.н., Ковпак В.В., к.вет.н., ст.викл. Нацюналънийутверситет ôiopecypcie i природокористування Украти
ВПЛИВ АЛОГЕННИХ МЕЗЕНХ1МАЛЬНИХ СТОВБУРОВИХ КЛ1ТИН
НА ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНИЙ ПУХЛИННИЙ PICT I ПРОЦЕСИ МЕТАСТАЗУВАННЯ У МИШЕЙ C57B1/6 3 ТРАНСПЛАНТОВАНОЮ МЕТАСТАТИЧНОЮ КАРЦИНОМОЮ ЛЕГЕНЬ ЛЬЮ1С
Мета досл1дження - вивчення впливу алогеннних мезенх1малъних стовбурових клтин на пухлинний picm та pieenb метастазування в мышей C57BL/6 з перещепленою метастатичною карциномою легенъ Лъюгс.
Дослгди проводили на самцях мишеи C57BI/6 2-3-мжячного ежу, вагою 2022 г. Алогенш мезенх1малът cmoeôypoei клтини отримували кулътивуванням первинного матер1алу, що буе видыении з тсткового мозку мишеи C57BL/6. Кулътивування клтин проводили за 37°С, 100 % вологост1 i 5 % С02 у середовищ1 DMEM гз додаванням 20 % феталъног сироватки телят та 1 % антиб1отика-антимжотика. Мишам внутршнъом'язово шокулювали клтинну суспензт метастатичног карциноми легенъ Льюгс (LLC) у концентрацИ' 1х106/0,1 мл розчина Хенкса. Шсля токуляцп пухлинних клтин мишг були роздтеш на контролъну i дослгдну групи по 8 тварин у кожшй. Мишам досл1дног групи на 8-й день теля токуляцп пухлинних клтин вводили внутргшньовенно алогенш МСК 4-го пасажу в кглькостг 1,25x104. На 20-ту добу доелгду визначали масу первинног пухлини, pieenb метастазування, кглъкгстъ, po3Mipu та загалъний об'ем Memacmasie. Розвиток пухлинного nvouecv V meavuH контюолъног i доелгдног гтп cvmmeeo в1дп1знялися. Застосування алогенних МСК еппияло збыьшенню ваги пепвинног пухлини на 29% , v<0.05. Ппи иъому пухлинний nvouec пепеходитъ v васкуляпт стадт швидше. шо 3aceid4ve показник позмШв Memacmasie 0,5-2,0 мм. Загалъний об'ем Memacmasie за впливу алогенних МСК у 2,9 раза бшъший шж у тварин контролъноггрупир<0,05.
Ключовг слова: алогенш мезенх1малът cmoeôypoei клтини, миш1, карцинома легенъ Лъю1с, первинна пухлина, метастази, загалъний об 'ем Memacmasie.
УДК 602.9:611.018:616-006:636.028
Кладницкая Л.В., к.вет.н., доцент, Мазуркевич А.Й., д.вет.н., професор, Гарманччук Л.В., д.б.н., професор, Величко C.B., к.б.н., Ковпак В.В., к.вет.н., ст.преп.
ВЛИЯНИЕ АЛЛОГЕННЫХ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК НА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЙ ОПУХОЛЕВЫЙ РОСТ И ПРОЦЕССЫ МЕТАСТАЗИРОВАНИЯ У МЫШЕЙ C57B1/6 С ТРАНСПЛАНТИРОВАННОЙ МЕТАСТАТИЧЕСКОЙ КАРЦИНОМОЙ
ЛЕГКИХ ЛЬЮИС
Пель исследования - изучение влияния алогеннных мезенхималъных стволовых клеток на опухолевый voem и уюовенъ метастазипования v мышей C57BL/ 6 с трансплантированой метастатической карциномой легких Льюис.
138
Опыты проводили на самиах мышей C57BL/6 2-3-месячного возраста, весом 20-22 г. Аллогенные мезенхимальные стволовые клетки получали культивированием первичного материала, который был выделен из костного мозга мышей C57BL/6. Культивирование клеток проводили при 37°С, 100% влажности и 5% С02 в среде DMEM с добавлением 20 % феталъной сыворотки телят и 1% антибиотика-антимикотика. Мышам внутримышечно инокулировали клеточную суспензию метастатической карциномы легких Льюис (LLC) в концентрации 1x106 / 0,1 мл раствора Хэнкса. После инокуляции опухолевых клеток мыши были разделены на контрольную и опытную группы по 8 животных в каждой. Мышам опытной группы на 8-й день после инокуляции опухолевых клеток вводили внутривенно аллогенные МСК 4-го пассажа в количестве 1,25x104. На 20-е сутки опыта определяли массу первичной опухоли, уровень метастазирования, количество, размеры и обший объем метастазов. Развитие опухолевого процесса у животных контрольной и опытной групп сушественно отличались. Применение аллогенных МСК способствовало увеличению массы первичной опухоли на 29%, р <0,05. При этом опухолевый процесс переходит в васкулярную стадию быстрее, что соотносится с показателем размеров метастазов 0,5-2,0 мм. Обший объем метастазов при воздействии аллогенных МСК в 2,9 раза больше, чем у животных контрольной группы р <0,05.
Ключевые слова: аллогенные мезенхимальные стволовые клетки, мыши, карцинома легких Льюис, первичная опухоль, метастазы, общий объем метастазов.
УДК 602.9:611.018:616-006:636.028
Kladnytska L.V., c.vet.sc., Associate Professor, Mazurkiewich A.Y., d.vet.sc., Professor Harmanchchuk L.V., d.biol.sc. Professor
Velichko S.V., c.biol.sc., Kovpak V.V., c.vet.sc., Associate Professor
INFLUENCE ALLOGENIC MESENCHIMAL STEM CELLS ON EXPERIMENTAL TUMOR GROWTH AND THE METASTASIS IN MICE
C57Bl/6 WITH TRANSPLANTANT METASTATIC LEWIS LUNG
CARCINOMA
The aim - to study MSCs effect on tumor growth and metastasis rate in mice C57BL/6 with transplant metastatic Lewis lung carcinoma.
Experiments were performed on three-week-old male C57BL/6 mice, weighing 20-22 g. Allogeneic mesenchymal stem cells obtained by cultivation of primary material that was isolated from the bone marrow of mice C57BL/6. Cell culture was performed at 37 ° C, 100% humidity and 5% CO 2 in DMEM with addition of 20% fetal bovine serum (FBS) and 1% antibiotic-antimycotics. Mice were intramuscularly inoculated cell suspension metastatic Lewis lung carcinoma (LLC) in concentrations 1x106 / 0,1 ml Hanks solution. After tumor cell inoculation mice were divided into control and experimental groups of 8 animals each. Mice experimental group on day 8 after inoculation of tumor cells injected intravenously allogeneic MSCs 4th passage in the number 1,25x104. On the 20th day of the experiment determined the primary
139
tumor weight, metastasis rate, the number, size and total volume of metastases. The development of tumor in animals of the control and experimental groups were significantly different. The use of allogeneic MSCs contributed to an increase in weight of the primary tumor in 29%, p <0.05. This process goes on tumor vascular stage rather confirming indicator of the size of metastases 0.5-2.0 mm. Overall, capacity for metastasis impact of allogeneic MSCs 2.9 times greater than in animals of the control group p <0.05.
Key words: allogeneic mesenchymal stem cells, mouse, Lewis lung carcinoma, primary tumor, metastasis, total volume of metastases
В останш роки багато дослщжень присвячено стовбуровим кл1тинам, зокрема змшам, як1 вщбуваються в системах, органах i цшсному оргашзм1 за ix впливу. Мета цих дослщжень - вивчення бюлопчно! функцп мезенх1мальних стовбурових кл1тин з метою застосування для корекци функцш систем i оргашв, або як допом1жно! ланки при терапевтичних заходах при усуненш патолопчних процеав.
Мезенх1мальш стовбуров1 кл1тини (МСК) вщом1 як стромальш кл1тини-попередники, що знаходяться в юстковому мозку, здатш до самооновлення i можуть диференцшватися в мезодермальний кл1тинний клон, в тому числ1 кл1тини кютки, хряща, строми, жирово! тканини, сполучно! тканини, м'яз1в i сухожилюв [1-3]. Сприятлив1 ефекти МСК переважно викликаш безл1ччю б1оактивних молекул, як1 вони видшяють. МСК волод1ють природженим троп!змом до м1сць травми, запалення. В1домо, що пухлинш кл1тини секретують i видшяють у мжрооточення фактори, под1бн1 до тих, яю вид1ляються при запальних реакц1ях, що е пусковим мехашзмом для Mirpan;ii МСК в пухлинну тканину [4-7].
Значна к1льк1сть дослщнимв отримали дан1 щодо впливу МСК на патогенез тапрогресшпухлини [8-11].
В екпериментах на тваринах було виявлено, що застосування ксеногенних МСК, отриманих з жирово! тканини людини, у щур1в з експериментальною моделлю карциноми Герена призвело до значного збшьшення % виживаност1, а на 21-у добу експерименту було в1дм1чено шпбування росту пухлини на 40 % [12]. Даш шших дослщниюв св1дчать про те, що алогенш МСК ефективно ¿нг1бують picT саркоми Kanomi в людини [13].
У л1тератур1 описано, що МСК секретують ангюгенш чинники, фактори росту, цитокши, як1 впливають на ендотел1альш кл1тини in vitro i шдукують анг1огенез in vivo [14]. 1снують дан1, що анг1огенез, васкуляризац1я пухлини i розвиток пухлинного процесу т1сно пов'язан1 м1ж собою. Зокрема деяю автори вважають, що застосування МСК людини у мишей системно або безпосередньо у контакт! з пухлиною за штучно ¿ндукованого пухлинного процесу зменшуе picT пухлини. При цьому ж доведено, що МСК людини у мишей з трансплантованою саркомою шдукують ангюгенез, але не мшяють загального патолог1чного анг1огенезу пухлини [15]. МСК здатш шдукувати неоанг1огенез в npo6ipn;i [16,17] i в природних умовах [18-20], кр1м того, вони можуть диференцшватися в ендотел1альш кл1тини [21,22] або перицити [23]. В деяких
140
моделях пухлин уведення МСК викликало проангюгенний ефект [24] i збшьшення росту пухлини [25]. На противагу цьому, в шшш модел1 пухлин, МСК шпбували ангюгенез [26].
Взаемод1я МСК i пухлинних кл1тин, вплив МСК на мжросередовище само! пухлпнн, а також на бюлопчш властивост1 пухлинних кл1тин е складним процесом, остаточно не з'ясованим, i тому актуальшсть цього питания не викликае сумшву.
Матер1али i методи. Дослщження проводили на самцях мишей C57BL /6 вагою 20-22г вжом 2-3 мюящ. Bei дослщження на тваринах були проведен! вщповщно до Правил належно! лабораторно! практики щодо використання експериментальних тварин [27] та з дотриманням Закону Укра!ни «Про захист тварин вщ жорстокого поводження» (вщ 21.02.2006 р.) та принцитв «М1жнародно! Свропейсько! конвенци по захисту хребетних тварин, яю використовуються з експериментальною та шшою науковою метою» (Страсбург, 1986).
Як модель метастазування використали епщермощну карциному легень Льюю (LLC). Кл1тини LLC культивували за стандартних умов у середовищ1 DMEM i3 додаванням 10 % фетально! сироватки телят (FBS) та 1 % антибютика-антимшотика (Sigma, USA) за 37°С, 100 % вологост1 i 5 % С02.
Самцям мишей C57B1/6 2-3-мюячного в1ку, вагою 20-22 г внутршньом'язово шокулювали кл1тинну суспензш метастатично! карциноми легень Лью!с у концентраци 1х106/0,1 мл розчину Хенкса. Шсля шокуляци пухлинних кл1тин миш1 були роздшеш на контрольну i дослщну групи по 8 тварин у кожнш. Мишам дослщно! групи на 8-й день теля шокуляци пухлинних кл1тин вводили внутршньовенно алогенш МСК 4-го пасажу в концентраци 1,25x104 натварину.
Алогенш МСК отримували культивуванням первинного матер1алу, що був видшений з KicTKOBoro мозку мишей C57BL/6 [28]. Культивування кл1тин проводили за стандартних умов у середовищ1 DMEM i3 додаванням 20 % фетально! сироватки телят (FBS) та 1 % антибютика-антимжотика (Sigma, USA) за 37°С, 100 % вологост11 5 % СО2 (рис.1).
На 20-ту добу дослщу визначали вплив алогенних МСК на масу первинно! пухлини, р1вень метастазування, розм1ри метастаз1в. Для цього мишей пщдавали евтанази, вилучали задш кшщвки, видаляли пухлину, зважували, препарували легеш. Легеш фшеували у розчиш Буена, витримували 24 години. Пот1м легеш розр1зали на лопат1 i в1зуально рахували кшькють метастаз1в розм1ром 0,5 - 3,5 мм з кроком 0,5 мм. Об'ем метастазу розраховували за формулою V=0,524 x D3, де V - об'ем метастазу (мм3), D -д1аметр метастазу (мм) [29].
Результати дослщжень. Шк метастазування епщермощно! карциноми легень Льюю припадае на 18-24 добу. Тому саме у цей перюд ми дослщжували вплив алогенних МСК на бюлопчш властивост1 первинно! пухлини та процес метастазування.
141
Показник маси первинно! пухлини ткно пов'язаний ¿з кшькктю вщдалених метастаз1в, !х розм1рами ¿, як наслщок, р1внем злояюсност! пухлинного процесу. За введения алогенних МСК мишам з трансплантованою карциномою легень Льюк ми отримали, що маса первинно! пухлини на 29 % (р<0,05) бшьше у тварин досл!дно! групи пор!вняно з контролем (табл. 1).
Таблиця 1
Показники маси первинно*! пухлини та об'ему метастаз1в у мишей C57BL/6
з трансплантовано*! карциномою легень J ью1с, M+m, п=8
LLC (контроль) LLC (МСК)
Маса пухлини , г 1,83±0,08 2,57±0,21*
Об'ем метастаз1в 10,28±0,85 29,62±6,50*
Примака. * - р<0,05 ввдносно тварин контрольно! групи
За дисперсшним анал!зом ц! дан! пщтверджуються високою силою впливу ц\= 0,74 при р<0,05 ! ми можемо стверджувати, що застосування МСК за перебку пухлинного процесу чинить сильний вплив на зб!льшення показника маси первинно! пухлини. На нашу думку, це можна пояснити наступним. В!домо, що строма пухлини складаеться з позакл!тинного матриксу ! р!зних тип!в мезенх!мальних кл!тин, включаючи макрофаги, ендотел!альш кл!тини, л!мфоцити, перицити, ф!бробласти ! м!оф!бробласти. Ц! кл!тини строми взаемод!ють з пухлинними кл!тинами ! при безпосередньому контакт! ! через паракринш сигнальн! механ!зми, що опосередковаш секрец!ею розчинних фактор!в, в тому числ! циток!н!в, хемок!н!в ! фактор!в росту. Взаемод!я м!ж пухлинними ! стромальними кл!тинами регулюе р!ст пухлини, метастази, анг!огенез. МСК також мкрують в пухлинну тканину, де вони включаються до пухлинно! строми [4] ! через вищевказан! механ!зми стимулюють прол!ферац!ю кл!тин пухлини, що пщтверджуеться нашими даними.
Розм!р, загальний об'ем вщдалених метастаз!в та !х кшьюсть засв!дчуе р!вень злояк!сност! процесу пухлиноутворення, а також дае можлив!сть прогнозу протшання останнього. Встановлено, що показник загального об'ему метастаз!в у тварин дослщно! групи суттево п!двищений, а саме у 2,9 раза (р<0,05) пор!вняно з контролем (див.табл. 1). Це пщтверджуе ! дисперс!йний анал!з. Застосування МСК у мишей з трансплантовано! карциномою легень Лью!с чинить сильний вплив на збшьшення показника загального об'ему метастаз!в ц\= 0,74, р<0,05.
Р!ст пухлин залежить вщ ступеня розвитку в них судинно! с!тки. В новоутвореннях д!аметром менше 1 мм поживн! речовини ! кисень надходять ¿з тканинно! рщини шляхом дифуз!!. Для живлення бшьш крупних новоутворень необх!дна васкуляризац!я !х тканини. Треба зауважити, що у тварин дослщно! групи за впливу МСК зареестровано появу метастаз!в розм!ром 0,5 - 2 мм, тод! як у контрол! розм!р метастаз!в не перевищував 1 мм. Таким чином, можна сказати, що за впливу МСК пухлинний процес швидше переходить у васкулярну стад!ю, тобто можна говорити про п!двищення р!вня злояк!сност! останнього.
142
Висновки:
1. Таким чином, застосування алогенних МСК чинить вплив на nepeöir пухлинного процесу у мишей з трансплантовано! карциномою легень Льюк.
2. Застосування алогенних МСК сприяе збшьшенню показника ваги первинно! пухлини на 29% (р<0,05).
3. За впливу алогенних МСК пухлинний процес переходить у васкулярну стадш швидше, що засвщчуе бшьший розм1р метастаз1в 0,5 - 2 мм.
4. Показник загального об'ему метастаз1в за впливу алогенних МСК у 2,9 раза бшьший шж у тварин контрольно! групи (р<0,05).
5.Застосування МСК у мишей з трансплантовано! карциномою легень Льюк чинить сильний вплив на збшьшення показника загального об'ему метастаз!в (ц,2х= 0,74, р<0,05) та маси первинно! пухлини (д2х= 0,74, р<0,05).
Л1тература
1. Prockop DJ: Marrow stromal cells as stem cells for nonhematopoietic tissues. Science 1997, 276:71-74.
2. Pittenger MF, Mackay AM, Beck SC, Jaiswal RK, Douglas R, Mosca JD, Moorman MA, Simonetti DW, Craig S, Marshak DR: Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells. Science 1999, 284:143-147.
3. Deans RJ, Moseley AB: Mesenchymal stem cells: biology and potential clinical uses. Exp Hematol 2000, 28:875-884.
4. Spaeth E, Klopp A, Dembinski J, Andreeff M, Marini F: Inflammation and tumor microenvironments: defining the migratory itinerary of mesenchymal stem cells. Gene Ther 2008, 15:730-738
5. Dvorak HF: Tumors: wounds that do not heal. Similarities between tumor troma generation and wound healing. N Engl J Med 1986, 315:1650-1659.]
6. Sun Z, Wang S, Zhao R. The roles of mesenchymal stem cells in tumor inflammatory microenvironment. J.Hematol Oncol, 2014, Feb 6;7(1): 14. doi: 10.1186/1756-8722-7-14 (in English)
7. Klopp AH, et al. Tumor irradiation increases the recruitment of circulating mesenchymal stem cells into the tumor microenvironment. Cancer Res. 2007;67:11687-95
8. Qiao L, Xu Z, Zhao T, Zhao Z, Shi M, Zhao RC, Ye L, Zhang X: Suppression of tumorigenesis by human mesenchymal stem cells in a hepatoma model. Cell Res
2008, 18:500-507.
9. Li L, Tian H, Chen Z, Yue W, Li S, Li W: Inhibition of lung cancer cell proliferation mediated by human mesenchymal stem cells. Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai) 2011, 43:143-148.
10. Karnoub AE, Dash AB, Vo AP, Sullivan A, Brooks MW, Bell GW, Richardson AL, Polyak K, Tubo R, Weinberg RA: Mesenchymal stem cells within tumour stroma promote breast cancer metastasis. Nature 2007, 449:557-563.
11. Spaeth EL, Dembinski JL, Sasser AK, Watson K, Klopp A, Hall B, Andreeff M, Marini F: Mesenchymal stem cell transition to tumor-associated fibroblasts contributes to fibrovascular network expansion and tumor progression. PLoS One
2009, 4:e4992. ]
143
12. Cherkashyna D.V., Lebedinskii A.S., Buchanan J.A., Shtemenko N.I, Petrenko A.U. Guerin carcinoma growth inhibition in rats after administration mesenchymal stromal cells of human adipose tissue and bio-regulators of stem and progenitor cells. J. A.Med.Sc. of Ukraine 2010;16(3):492-506.
13. Khakoo A.Y. Human mesenchymal stem cells exert potent antitumorigenic effects in a model of Kaposi's sarcoma. J Exp Med. 2006;203:1235-47.
14. Bronckaers A., Hilkens P., Martens W., Struys T., Lambrichts, I Mesenchymal stem/stromal cells as a pharmacological and therapeutic approach to accelerate angiogenesis. Pharmacology and Therapeutics August 2014, Volume 143, Issue 2, Pages 181-196
15. Keramidas et al. The dual effect of mscs on tumour growth and tumour angiogenesis. Stem Cell Research & Therapy 2013, 4:41
16. Gruber R, Kandler B, Holzmann P, Vogele-Kadletz M, Losert U, Fischer MB, Watzek G: Bone marrow stromal cells can provide a local environment that favors migration and formation of tubular structures of endothelial cells. Tissue Eng 2005, 11:896-903.
17. Wu Y, Chen L, Scott PG, Tredget EE: Mesenchymal stem cells enhance wound healing through differentiation and angiogenesis. Stem Cells 2007, 25:26482659.
18. Al-Khaldi A, Eliopoulos N, Martineau D, Lejeune L, Lachapelle K, Galipeau J: Postnatal bone marrow stromal cells elicit a potent VEGF-dependent neoangiogenic response in vivo. Gene Ther 2003, 10:621-629.
19. Ghajar CM, Kachgal S, Kniazeva E, Mori H, Costes SV, George SC, Putnam AJ: Mesenchymal cells stimulate capillary morphogenesis via distinct proteolytic mechanisms. Exp Cell Res 2010, 316:813-825.
20. Oswald J, Boxberger S, Jorgensen B, Feldmann S, Ehninger G, Bornhauser M, Werner C: Mesenchymal stem cells can be differentiated into endothelial cells in vitro. Stem Cells 2004, 22:377-384.
21. Zhang G, Drinnan CT, Geuss LR, Suggs LJ: Vascular differentiation of bone marrow stem cells is directed by a tunable three-dimensional matrix. Acta Biomater 2010, 6:3395-3403.
22. Bexell D, Gunnarsson S, Tormin A, Darabi A, Gisselsson D, Roybon L, Scheding S, Bengzon J: Bone marrow multipotent mesenchymal stroma cells act as pericyte-like migratory vehicles in experimental gliomas. Mol Ther 2009, 17:183190.
21. Beckermann BM, Kallifatidis G, Groth A, Frommhold D, Apel A, Mattern J, Salnikov AV, Moldenhauer G, Wagner W, Diehlmann A, Saffrich R, Schubert M, Ho AD, Giese N, Buchler MW, Friess H, Buchler P, Herr I: VEGF expression by mesenchymal stem cells contributes to angiogenesis in pancreatic carcinoma. Br J Cancer 2008, 99:622-631.
22. Suzuki K, Sun R, Origuchi M, Kanehira M, Takahata T, Itoh J, Umezawa A, Kijima H, Fukuda S, Saijo Y: Mesenchymal stromal cells promote tumor growth through the enhancement of neovascularization. Mol Med 2011, 17:579-587.
144
23. Otsu K, Das S, Houser SD, Quadri SK, Bhattacharya S, Bhattacharya J: Concentration-dependent inhibition of angiogenesis by mesenchymal stem cells. Blood 2009, 113:4197-4205.
24. Nanni P, de Giovanni C, Lollini PL, Nicoletti G, Prodi G: TS/A: a new metastasizing cell line from a BALB/c spontaneous mammary adenocarcinoma. Clin Exp Metastasis 1983, 1:373-380.
25. Moriscot C, de Fraipont F, Richard MJ, Marchand M, Savatier P, Bosco D, Favrot M, Benhamou PY: Human bone marrow mesenchymal stem cells can express insulin and key transcription factors of the endocrine pancreas developmental pathway upon genetic and/or microenvironmental manipulation in vitro. Stem Cells 2005, 23:594-603.
25. Meazza R, Lollini PL, Nanni P, De Giovanni C, Gaggero A, Comes A, Cilli M, Di Carlo E, Ferrini S, Musiani P: Gene transfer of a secretable form of IL-15 in murine adenocarcinoma cells: effects on tumorigenicity, metastatic potential and immune response. Int J Cancer 2000, 87:574-581.
26. Andrade SP, Machado RD, Teixeira AS, Belo AV, Tarso AM, Beraldo WT: Sponge-induced angiogenesis in mice and the pharmacological reactivity of the neovasculature quantitated by a fluorimetric method. Microvasc Res 1997, 54:253261.
27. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. - Washington, D.C., National Academy of Press, 1996. - 140 p.
28. Mazurkevich A.Y., Kladnytska L.V., Kovpak V.V. Features conditions selection and cultivation mouse bone marrow adhesive fraction mononuclear cells// Bulletin of Taras Shevchenko National University of Kyiv / Vestnik; 2013, Vol. 64 Issue 2, p41-43
29. БалицкийК.П., Воронцова А.Л., Лисняк И.А. Метастазирование опухолей: патогенетические аспекты. Киев: АН УССР, Наук. Думка,1991.- 244 с
Рецензент - д.вет.н., в.о. професора Тибшка А.М.
145
