CC BY
37
НАУЧНЫЕ ВЕДОМОСТИ
Серия Медицина. Фармация. 2015. № 22 (219). Выпуск 32
115
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ НАУКИ
УДК 6i6-001.17-08:6i5.322.035.4]-092.6
ВЛИЯНИЕ 5% ГЕЛЯ ПЕКТИНА В КОМПЛЕКСЕ С АМИНОФТАЛГИДРАЗИДОМ НА ЗАЖИВЛЕНИЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ОЖОГОВЫХ РАН
INFLUENCE OF 5% GEL PECTIN COMPLEX WITH AMINOPHTALGIDRAZIDOM ON THE HEALING OF EXPERIMENTAL BURN WOUNDS
А.А. Хуранов1, А.А. Евглевский1, С.Г. Павленко2 A.A. Huranov1, А-A. Evglevsky1, S.G. Pavlenko2
1)Кубанский государственный медицинский университет Россия, 350000, г. Краснодар, ул. Седина, 4 2)Кубанский медицинский институт Россия, 350015, г. Краснодар, ул. Буденного, 198
1)Kuban state medical university Russia, 35000, Krasnodar, Sedina Str., 4 2)Kuban medical Institution Russia, 350015, Krasnodar, Budennogo Str., 198
E-mail: [email protected], [email protected]
Ключевые слова: крысы, экспериментальная ожоговая рана, 5% гель пектина, аминофталгидразид, цитология.
Key words: rats, experimental burn wound, 5% pectin gel, aminoftalgidrazid, cytology.
Аннотация. У 20 самцов крыс линии «Вистар» весом 180-200г, оценивали влияние 5%геля пектина с аминоф-талгидразидом на заживление экспериментальной модели ожоговой раны. Анализу подверглись мазки-отпечатки с раны в сроки на 1-е, 3-и, 7-е и 10-е сутки после отторжения ожогового струпа. Доказана эффективность влияния 5% геля пектина с иммуномодулятором аминофталгидразидом на заживление ран в основной группе, выражающаяся в переходе из воспалительно-регенераторной фазы к регенераторно-воспалительной уже на 3-и сутки после отторжения ожогового струпа, что быстрее по сравнению с контролем.
Resume. In 20 male "Wistar" rats, weighing i80-200 g, we evaluated the effect of 5% pectin gel aminophtalgidrazid on the healing of experimental model burn wounds. We analyzed smears from the wound on the 1st, 3rd, 7th and 10th day after the rejection of burn eschar. The efficiency of the impact of a 5% gel pectin immunomodulator aminophtalgidrazid on wound healing in the study group, as expressed in the transition from the inflammatory phase to the regenerative regenerative-inflammatory, already on the third day after the rejection of burn eschar, which is faster than in the control.
Введение
Лечение ожоговых ран подразумевает использование комплексной терапии, ведущее значение в которой принадлежит воздействию на местный раневой процесс. Наличие большого выбора перевязочных средств говорит о том, что продолжаются поиски раневых покрытий и препаратов, отвечающих требованиям лечебного воздействия на рану в соответствие с фазой процесса. Защита раны, атравматичность, антимикробное воздействие, и положительное влияние на регенерацию - основные требования к раневым покрытиям и препаратам. В лечении ожоговых и гнойных ран хорошо зарекомендовали себя пектины [Донченко, 2000; Лазарева и соавт., 2002; Чумаков, 2006; Хубутия и соавт., 2012], показавшие высокую антимикробную активность в отношении музейных и клинических штаммов кишечной палочки, протея, синегнойной палочки [Павленко и соавт., 2008; Беретарь и соавт., 2009; Шевчук и соавт. 2013], а также патогенных представителей кишечной микрофлоры [Поти-евский и соавт.,1994]. Немаловажное значение приобретает использование иммунных препаратов для местного лечения ожоговых ран [Паничев и соавт., 2004; Крюкова, 2005].
Доступным и малозатратным способом мониторинга раны является оценка мазков-отпечатков [Покровский, Макаров, 1942], позволяющая по количественному и качественному кле-
116
НАУЧНЫЕ ВЕДОМОСТИ
Серия Медицина. Фармация. 2015. № 22 (219). Выпуск 32
точному составу не только определить состояние раны, но и прогнозировать направленность вектора течения раневого процесса [Нестерова, 1996; Widgerow et al., 2015].
Материалы и методы
Материалом для нашего исследования послужили мазки-отпечатки раневого экссудата, полученные от 20 самцов крыс линии «Вистар» весом 180-200г, у которых в области спины создавалась модель ожоговой раны глубиной ША степени. Моделирование ожоговой раны осуществляли с помощью разработанного приспособления, на которое получен патент на полезную модель №151026, 2015 г.
Лечение раны после отторжения ожогового струпа проводилось 5% гелем свекловичного пектина с аминофталгидразидом. Группу сравнения составили также 20 самцов крыс линии «Вистар» весом 180-200г, подвергнутых лечению мазью левомеколь. Окраску мазков-отпечатков выполняли методом Май-Грюнвальда. Учет результатов в каждом мазке-отпечатке осуществляли путем визуального дифференцированного подсчета клеточных форм в 10 полях зрения при общем увеличении светового микроскопа 700х с последующим расчетом средних величин. Забор материала выполняли на 1-е, 3-и, 7-е и 10-е сутки после отторжения ожогового струпа. Результаты обрабатывали методами вариационной статистики на ЭВМ с помощью программы «Статистика 6». Результаты представлены на рисунках 1-7 и таблице 1.
Результаты
Исследование мазков экссудата, полученных с поверхности ран через 1-е сутки после отторжения ожогового струпа в экспериментальной ране крыс и окрашенных по Май-Грюнвальду показало, что в его составе присутствует большое количество полинуклеаров, которые, по всей видимости, являются сегментоядерными нейтрофильными лейкоцитами, мононуклеаров было меньше приблизительно в 2-2.5 раза. Среди мононуклеаров преобладают типичные лимфоциты. Встречаются макрофаги, эпителиоидные клетки, плазмоциты и единичные фибробласто-подобные клетки. Следует отметить, наличие в ряде мазков значительного количества типичных эозинофилов. Экссудат был богат эритроцитами, в том числе и "выщелоченными". Большинство клеток гистиогенного происхождения имели явные признаки дегенерации (кариопикноз, кариорексис, вакуолизацию цитоплазмы). Визуальных различий в картине мазков экссудата, полученного от различных групп экспериментальных животных обнаружено не было.
А Б
Рис. 1. Цитологическая картина раневого отделяемого экспериментальных ожоговых ран на 1-е сутки после отторжения ожогового струпа (А - группа контроля, Б - экспериментальная группа.
Окраска по Май-Грюнвальду. Ув. 1000х)
Fig. 1. Cytologic picture wound separated experimental burn wounds for the 1st days after rejection of a burn scab
(A - group of control, B - experimental group)
При подсчете количества клеточных форм в полях зрения микроскопа были установлены некоторые различия между животными контрольной и экспериментальной групп (лечение раны с использованием 5% гельпектина в комплексе с аминофталгидразидом) (см. рис. 1), свидетельствующие об увеличении доли полинуклеаров в составе клеток экссудата, полученного от животных, у которых в качестве лечебного средства использовали 5% гельпектин в комплексе с аминофталгидразидом, однако это увеличение не было статистически достоверным (Р>0.05). Прирост количества мононукле-аров также не был статистически значим. Следует отметить, что общее количество клеток (не считая эритроцитов) в мазке экссудата из ран, леченных с применением 5% гельпектина было в среднем на 20% больше, чем в контроле (P<0.05).
На 3-и сутки после отторжения ожогового струпа и начала лечения визуальная цитологическая картина мазка экссудата практически осталась прежней по отношению к наблюдаемой на предыдущем сроке исследования, однако количественные показатели претерпели существенные изменения.
НАУЧНЫЕ ВЕДОМОСТИ
Серия Медицина. Фармация. 2015. № 22 (219). Выпуск 32
117
А Б
Рис. 2. Цитологическая картина раневого отделяемого экспериментальных ожоговых ран на 3-и сутки после отторжения ожогового струпа (А - группа контроля, Б экспериментальная группа.
Окраска по Май-Грюнвальду. Ув. 700х).
Fig. 2. Cytologic picture separated experimental burn wounds for the 3rd days after rejection of a wound burn scab
A - group of control, B experimental group)
В контрольной группе среднее число клеток в поле зрения снизилось на 13% по отношении к их количеству, зарегистрированному на 1-е сутки, количество полинуклеаров и мононуклеаров также упало на 5 и 37% соответственно.
При использовании в качестве лечебного средства 5% гельпектина в комплексе с аминофтал-гидразидом в экссудате были обнаружены существенные отличия как по сравнению с аналогичными данными характерными для забора материала на момент отторжения ожогового струпа, так и по сравнению с контролем в пределах данного забора материала. Так, по сравнению с предыдущим сроком исследования количество полинуклеаров увеличилось на 4%,содержание мононуклеаров стало меньше на 6%, общее число клеток снизилось на 5%. По сравнению с контролем различия были также весьма существенны и статистически значимы (см. рис. 2). Так, количество полинуклеаров увеличилось на 26%, число мононуклеаров возросло на 66%, общее число клеток в поле зрения микроскопа стало больше в среднем на 31%.
На 7-е сутки после начала эксперимента цитологическая картина мазка экссудата претерпела серьезные изменения по сравнению с выявленной на предыдущем сроке исследования. В мазках, полученных от всех исследованных групп животных, отмечено резкое снижение общего числа клеток, как гематогенного, так и гистиогенного происхождения. Так в контроле общее число клеток упало на 68%, количество мононуклеаров уменьшилось на 40%.
А
Б
Рис. 3. Цитологическая картина раневого отделяемого экспериментальных ожоговых ран на 7-е сутки после отторжения ожогового струпа (А - группа контроля, Б - экспериментальная группа) Окраска по Май-Грюнвальду. Ув. 700х).
Fig. 3. Cytologic picture separated experimental burn wounds for the 7th days after rejection of a wound burn scab (A - group of control, B - experimental group)
Аналогичные и еще более явные изменения претерпела цитологическая картина экссудата ран, подвергшихся терапии с применением 5% гельпектина в комплексе с аминофталгидразидом. Изученные цитологические показатели в этих экспериментальных группах сильно отличались как от
118
НАУЧНЫЕ ВЕДОМОСТИ
Серия Медицина. Фармация. 2015. № 22 (219). Выпуск 32
аналогичных данных характерных для предыдущего срока исследования, так и от контроля. Эти отличия были статистически значимы (Р<0.001). Следует отметить, что в мазках экссудата практически исчезли эозинофилы, фибробластоподобные клетки, гистиоциты и плазматические клетки.
На 10-е сутки эксперимента визуальная цитологическая картина в мазках раневого отделяемого животных контрольной группы характеризовалась бедностью клеточных форм. Наблюдаемые клетки отличались сильными дегенеративными изменениями, касающимися их морфологической структуры. Многие клетки имели нарушения целостности внешней оболочки, ядра многих из них были сильно фрагментированы, цитоплазма вакуолизирована. В основном в экссудате присутствовали клетки гематогенного происхождения - поли- и мононуклеары.
А Б
Цитологическая картина раневого отделяемого экспериментальных ожоговых ран на 10-е сутки после отторжения ожогового струпа (А - группа контроля, Б - экспериментальная группа).
Окраска по Май-Грюнвальду. Ув. 700х
Cytologic picture separated experimental burn wounds for the 10th days after rejection of a wound burn scab
(A - group of control, B - experimental group)
Следует отметить, что морфологическая идентификация клеток была сильно затруднена в виду их дегенеративных изменений. Общее количество клеток, определяемых в мазках, было незначительно. В мазках раневого отделяемого животных леченных с использованием 5% гельпектина в комплексе с аминофталгидразидом встречались лишь единичные клетки. Их число было недостаточно для проведения статистической обработки.
На рис. 5 отображена динамика содержания полинуклеаров в составе экссудата ожоговой раны. На рис. 6 отражена динамика содержания (в расчете на одно поле зрения) мононуклеаров в составе экссудата ожоговых ран крыс. На рис. 7 отражена динамика общего количества клеток (в расчете на одно поле зрения) в составе экссудата ожоговых ран крыс.
В таблице 1 представлены данные о некоторых цитологических показателях раневого экссудата в условиях применения 5% гельпектина в комплексе с аминофталгидразидом.
Рис. 4. Fig. 4.
Рис. 5. Динамика содержания (в расчете на одно поле зрения) полинуклеаров в составе
экссудата ожоговых ран крыс
Fig. 5. Dynamics of the contents (counting on one field of vision) polinuklear as a part of exudate burn wounds of rats
НАУЧНЫЕ ВЕДОМОСТИ
Серия Медицина. Фармация. 2015. № 22 (219). Выпуск 32
119
Рис. 6. Динамика содержания (в расчете на одно поле зрения) мононуклеаров в составе
экссудата ожоговых ран крыс
Fig. 6. Dynamics of the contents (counting on one field of vision) mononuklear as a part of exudate
of the burn wounds of rats
Рис. 7. Динамика общего количества клеток (в расчете на одно поле зрения) в составе экссудата
ожоговых ран крыс
Fig. 7. Dynamics of total of cages (counting on one field of vision) as a part of exudate burn wounds of rats
Таблица 1 Table.1
Некоторые цитологические показатели раневого экссудата в условиях применения 5% гельпектина в комплексе с аминофталгидразидом Some cytologic indicators of wound exudate in the conditions of application of 5% of a gelpektin in a complex with the aminoftalgidrazidy
Сроки исследования Количество полинуклеаров Количество мононуклеаров Суммарное количество клеток в экссудате
Первые сутки Контроль 1.35+11 56+5 220+12
после отторжения Лечение 5% гелем пектина с 158+12 62+6 265+11
ожогового струпа аминофтал-гидразидом P>0.05 P>0.05 P<0.05
Третьи сутки Контроль 129+12 35+6 191+18
после начала Лечение 5% гелем пектина с 165+11 58+6 251+12
эксперимента аминофтал-гидразидом P<0.05 P<0.05 P<0.01
Седьмые сутки Контроль 14+2 21+4 61+6
после начала экс- Лечение 5% гелем пектина с 4+2 8+1 29+3
перимента аминофтал-гидразидом p<0.001 P<0.01 P<0.001
Десятые сутки Контроль 2+0,3 5+2 21+2
после начала эксперимента Лечение 5% гелем пектина с аминофтал-гидразидом Клеток недостаточно для статистической обработки
Примечания:
1. Р - достоверность отличия от контроля.
2. Суммарное количество клеточных форм экссудата включает в себя мононуклеары, полинуклеары, а также другие клетки (эозинофилы, моноциты, макрофаги и т.п.) обнаруженные в нем.
120
НАУЧНЫЕ ВЕДОМОСТИ
Серия Медицина. Фармация. 2015. № 22 (219). Выпуск 32
Выводы
Таким образом, анализ результатов цитологического исследования показал, что в ожоговых ранах исследованных групп лабораторных животных, как в контроле, так и с применением 5% гель-пектина в комплексе с аминофталгидразидом, наблюдается положительная динамика, характеризующаяся переходом воспалительно-регенераторной тканевой реакции к регенераторной. Однако, с применением 5% гельпектина в комплексе с аминофталгидразидом динамика процесса предпочтительней, так как уже на 3-и сутки отмечается переход процесса из воспалительно-регенераторной фазы к регенераторно-воспалительной. Следует отметить, что у 2-х животных основной группы на 3-и сутки наблюдался переход процесса даже в регенераторную стадию, что не отмечалось ни у одного лабораторного животного контрольной группы.
Использование 5% гельпектина в комплексе с аминофталгидразидом для лечения ожоговых ран является целесообразным также и при клинических испытаниях.
Список литературы References
Беретарь С.Т. 2009. Антибактериальные свойства свекловичного пектина. Материалы международной научнопрактической конференции «Функциональные продукты питания: ресурсосберегающие технологии переработки сельскохозяйственного сырья, гигиенические аспекты и безопасность». КубГАУ. Краснодар.:58-63.
Beretar' S.T. 2009. Antibakterial'nye svojstva sveklovichnogo pektina. Materialy mezhdunarodnoj nauchno-prakticheskoj konferencii «Funkcional'nye produkty pitanija: resursosberegajushhie tehnologii pererabotki sel'skohozja-jstvennogo syr'ja, gigienicheskie aspekty i bezopasnost'». KubGAU. Krasnodar.:58-63 (in Russian).
Донченко Л.В. 2000. Технология пектина и пектинопродуктов. М., ДеЛи, 11-16.
Donchenko L.V. 2000. Tehnologija pektina i pektinoproduktov. M., DeLi, 11-16 (in Russian).
Крюкова В.В. 2005. Патогенетическое обоснование cорбционно-аппликационной терапии гнойных ран. Дис. канд... мед. наук. Чита, 151 с.
Krjukova V.V. 2005. Patogeneticheskoe obosnovanie corbcionno-applikacionnoj terapii gnojnyh ran. Dis. kand... med. nauk. Chita, 151 s (in Russian).
Лазарева Е.Б. 2002. Эффективность местного применения пектинов в лечении ожоговых ран. Антибиотики и химиотерапия, (9): 9-13.
Lazareva E.B. 2002. Jeffektivnost' mestnogo primenenija pektinov v lechenii ozhogovyh ran. Antibiotiki i himioterapija, (9): 9-13 (in Russian).
Нестерова И.В. 1996. Комплексное трехуровневое исследование системы нейтрофильных гранулоцитов с возможной диагностикой ИДС при различной патологии. Метод. рекомендации. - Краснодар, 49 с.
Nesterova I.V. 1996. Kompleksnoe trehurovnevoe issledovanie sistemy nejtrofil'nyh gra-nulocitov s vozmozhnoj diagnostikoj IDS pri razlichnoj patologii. Metod. rekomendacii. - Kras-nodar, 49 s(in Russian).
Паничев А.М. 2004. Цеолиты в хирургии. Владивосток, изд-во ДВГТУ, 120 с.
Panichev A.M. 2004. Ceolity v hirurgii. Vladivostok, izd-vo DVGTU, 120 s (in Russian).
Павленко С.Г. 2008. Пектиновая пленка при лечении гнойных ран и трофических язв. Фундаментальные исследования, М.,(1): 150-151.
Pavlenko S.G. 2008. Pektinovaja plenka pri lechenii gnojnyh ran i troficheskih jazv. Funda-mental'nye issledo-vanija, M.,(1): 150-151 (in Russian).
Хубутия М.Ш. 2012. Способ лечения инфицированных ожоговых ран IIIA степени. Патент на изобретение РФ №2455997.
Hubutija M.Sh. 2012. Sposob lechenija inficirovannyh ozhogovyh ran IIIA stepeni. Patent na izobretenie RF №2455997 (in Russian).
Потиевский Э.Г. 1994. Экспериментальное и клиническое изучение влияния пектина на возбудителей острых кишечных инфекций. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. Приложение: 106-109.
Potievskij Je.G. 1994. Jeksperimental'noe i klinicheskoe izuchenie vlijanija pektina na vozbuditelej ostryh kishechnyh infekcij. Zhurnal mikrobiologii, jepidemiologii i immunobiologii. Prilozhenie: 106-109.
Чумаков П.А. 2006. Применение препаратов пектина в комплексном лечении гнойных заболеваний мягких тканей. Дис. канд. мед. наук. Омск, 120с.
Chumakov P.A. 2006. Primenenie preparatov pektina v kompleksnom lechenii gnojnyh zabo-levanij mjagkih tkanej. Dis. kand. med. nauk. Omsk, 120s (in Russian).
Шевчук В.Ю. 2013. Влияние 5% свекловичного пектинового геля на госпитальную микрофлору. Кубанский научный медицинский вестник. 1(136): 195-197.
Shevchuk V.Ju. 2013. Vlijanie 5% sveklovichnogo pektinovogo gelja na gospital'nuju mikroflo-ru. Kubanskij nauchnyj medicinskij vestnik. 1(136): 195-197 (in Russian).
Widgerow A.D. 2015. The burn wound exudate-An under-utilized resource. Burns. 41(1): 11-7.
