CC BY
40
динамике течения экспериментального сахарного диабета. Для достижения цели нами были использованы следующие морфологические методики: препарирование языка крыс, моделирование стрептозотоцин индуцированного сахарного диабета, инъекция сосудистого русла языка крысы, изготовление и просветление препаратов языка, морфометрия структур сосудистого русла, статистическая обработка морфометрических параметров и биохимическое исследование периферической крови. Получены новые данные о перестройке гемомикроциркуляторного русла языка белых крыс в динамике течения экспериментального сахарного диабета.
Ключевые слова: гемомикроциркуляторное русло, язык белой крысы, сахарный дiабет.
Стаття надшшла 13.03 2016 р.
norm and in the dynamics of the flow of experimental diabetes. To achieve the goal we have the following morphological techniques were used: preparation of the rats tongue, modeling of streptozotocin-induced diabetes, vascular injection of rat's tongue vessels, manufacturing and bleaching of tongues preparations, morphometry of vascular structures, statistical processing of morphometric parameters and biochemical study of peripheral blood. New data on the restructuring tongue's hemomicrocirculatory bed of white rats in the dynamics of the flow of experimental diabetes/
Key words: hemomicrocirculator bed, white rat tongue, diabetes mellitus.
Рецензент Бшаш С.М.
УДК 613.632.2:615.211
ВИВЧЕННЯ ГОНАДОТОКСИЧНО1 ДН ЕТИЛОВОГО ЕФ1РА А-БРОМ1ЗОВАЛЕР1АНОВО1 КИСЛОТИ
В експериментальних умовах вивчалися змши органометричних napaMeTpiB ам'яниюв та функцюнальних показниюв сперматазовдв у статевозрших щурiв тд дieю етилового ефiру a-бромiзовалерiановоI кислоти при внутршньошлунковому надходженш в дозах 32,8 мг/кг та 6,56 мг/кг. Змш показниюв, що дослщжувались, не виявлено, за виключенням значного збшьшення вщносно! ваги Ым'яниюв. Даний факт може трактуватись як потенцшна гонадотоксичшсть сполуки. Отримаш даш е тдставою для проведення подальших дослщжень стану морфолопчних показниюв сперматогенного ештелто.
Ключовi слова: гонадотоксична дiя, етиловий ефiр a-бромiзовалерiановоI кислоти, лабораторнi щурi
Доктшчш випробування лшарських препарапв передбачають вивчення !х репродуктивно! токсичност [11], також цей аспект впливу лшарських субстанцш дослщжуеться { при оцшщ !х потенцшно! негативно! дп на пращвниюв фармацевтичних тдприемств в умовах виробництва [7]. Але не дивлячись на юнуючи науков1 напрацювання щодо проблеми гонадотоксичност лшарських засоб1в, багато з них, як т1, що вже використовуються, так { т1, що знаходяться на еташ розробки, потребують вивчення !х безпеки стосовно репродуктивно! функцп чоловшв [4]. Це набувае особливо! актуальност в св1тш даних про р1зке зниження р1вня фертильност сучасно! чолов1чо! популяцп [10]. Низка автор1в [1, 13] вказуе на те, що внесок лшарських препарапв в процес зниження репродуктивност населення е досить значним. При цьому, чим ширше д1апазон бюлопчно! дп лшарського засобу, тим вище ризик втручання в процеси розмноження [2]. Ситуащю попршуе 1 розширення спектра показ1в препарапв та використання !х здоровими людьми [12]. До групи речовин !з широким спектром бюлопчно! активност може бути вщнесений { етиловий еф1р а-бром1зовалер1аново! кислоти, якш е основною за кшьюсними характеристиками складовою препарапв барвалол, корвалол (валокордин, корвалтаб) тощо. Етиловий еф1р а-бром1зовалер1аново! кислоти виявляе рефлекторну седативну (под1бно ефекту валер1ани) { спазмол1тичну д1ю, яка зумовлена подразненням переважно рецептор1в порожнини рота та носоглотки, зниженням рефлекторного збудження у центральних вщдшах нервово! системи та посиленням гальмування у нейронах кори та шдкоркових структур головного мозку, а також зниженням активност центральних судинорухових центр1в та безпосередньою мюцевою спазмол1тичною д1ею на гладку мускулатуру. Вш е антисептичним засобом. При наружному використанш виявляе протимшробну д1ю. Проявляе актившсть по вщношенню до грампозитивних та грамнегативних бактерш та в1рус1в, денатуруе бшки м1крооргашзм1в. Для знезаражування шюри використовують 70% розчин, який проникае у бшьш глибоки шари ешдермюу, виявляе дубильну д1ю на шюру { слизов1 оболонки. При системному використанш виявляе здатшсть викликати анальгез1ю та загальну анестез1ю [8]. Препарати ¡з вмютом етилового еф1ру а-бром1зовалер1аново! кислоти е безрецептурними формами. Оскшьки у доступнш л1тератури вщомост про можливу гонадотоксичну д1ю препарату не знайдено, доцшьним е дослщити даний аспект вливу ще! субстанцп.
Метою роботи було вивчення змш органометричних показниюв шм'яниюв та функцюнальних параметр1в сперматазоадв у статевозрших щур1в тд д1ею етилового еф1ру а-
брoмiзoвaлерiaнoвol кислоти при внутршньошлунковому надходженш. Отримаш даш будуть використанi при обгрунтуваннi нормативу допустимого вмюту препарату у noB^i робочо! зони.
Матерiал та методи дослщження. Експериментальна робота проведена на 30 бших безпородних щурах-самцях. Тварини утримувались на стандартному харчовому та питному режимах. Вс щурi були у активному половозршому станi.
У хoдi експерименту дотримувались вимог лабораторного тваринництва [3]. Щурi пoдiлялись на три групи - контрольна та двi експериментальнi. Контрольним тваринам вводили розчинник - дистильовану воду. Експериментальним тварин вводили розчин етилового ефiру а-брoмiзoвaлерiaнoвol кислоти i3 розрахунку доз, яю не викликають загальнотоксичного ефекту. Середньосмертельна доза (DL50) для бших щурiв-сaмцiв складае 1640 (1261-2132) мг/кг). Вводили 1/50 DL50 (32,8 мг/кг) та 1/250 DL50 (6,56 мг/кг) ддачо! речовини
Через 71 добу шсля початку дослщу щурi зважувались та виводились з експерименту шляхом декаштаци пiд ефiрним наркозом. У вибoрi термiнiв експерименту керувались необхщшстю завершения хоча б одного циклу сперматогенезу. Повний цикл розвитку сперматозоида щурiв вiдбувaеться за 48 дiб, час проходження сперматазо1дав через канали придaткiв сiм'яникiв тривае близько 4 тижшв [9].
Внутршш органи статево! системи вилучали единим органокомплексом i ретельно препарували. Проводився aнaлiз абсолютно! та вщносно! ваги шм'яниюв у сaмцiв бiлих щурiв. Вага сiм'яникiв визначалась на вагах AD-1000 третього класу точность
S=
m
M
100
Вiдносну масу шм'яниюв обраховували за формулою:
де m - маса органа, М - маса тварини. До органометричних параметрiв, що вивчались, KpiM ваги шм'яниюв, були включенi !х лшшш розмiри (довжина, ширина).
Функцiональний стан сперматазоадв вивчали за такими показниками: характер та тривалють рухливостi, визначення вщносно! кiлькостi живих сперматозоадв, шдрахунок вщносно! кiлькостi патологiчних форм, визначали життeздатнiсть сперматазоiдiв по вiдношенню до хiмiчних розчинiв, що вiдповiдають фiзiологiчним умовам (кислотна та осмотична резистентшсть) [6].
Аналiз i обробку результат дослiдження здiйснювали за допомогою комп'ютерно! системи Microsoft Exel 7.0. Достовiрнiсть розбiжностей середнiх значень для вибiрок iз нормальним розподiлом оцiнювали з використанням критерiю Ст'юдента. При порiвняннi показникiв, розподiл яких не вщповщав закону нормальностi, у двох незалежних групах використано критерiй Манна-Уiтнi-Вiлкоксона. Критичний рiвень значущостi при перевiрцi статистичних гшотез був прийнятий р<0,05.
Результати дослщження та Тх обговорення. Абсолютна маса, а також розмiри шм'яниюв щурiв усiх дослiдних груп не виходили за межi контрольних величин. Однак вщносна вага сiм'яникiв в шддослщних групах достовiрно збiльшилась у середньому на 85% (табл.1). Зазначасться, що найбшьш чутливим показником, що вщображае морфофункцiональний стан органа е саме вiдносна масса [5]. Ймовiрно змiни вщносно! ваги гонад обумовлеш можливими негативним процесами на кттинному рiвнi. Тому, хоча пiд впливом етилового ефiру а-бромiзовaлерiaновоl кислоти змши зазнав лише один з вивчаемих показниюв, небхiдно визнати потенцшну небезпеку сполуки викликати негaтивнi змши у гонадах особин чоловiчоl стать
Таблиця 1
Макрометричш показники бiлих щурiв тд впливом етилового ефiру а- бромiзовaлерiaновот
Показники Контроль Експериментальш групи, дози
1/50 DL50 (32,8 мг/кг) 1/250 DL50 (6,56 мг/кг)
Маса тварини, г 285±23,8 280±20,6 1емп = 1,1 275±31,0 1емп = 1,8
Абсолютна маса ам'яниюв, г 5,6±0,24 5,5±0,53 1емп = 0 5,5±0,35 1емп = 0,1
Вщносна маса ам'яниюв, % 1,0±0,05 1,97±0,27 1емп = 11,9* 1,9±0,43 1емп = 8,2*
Довжина ам'яниюв, мм 21,0±1,07 22,0±1,35 1емп = 1,6 21,0±0,83 1емп = 1,5
Ширина ам'яниюв, мм 13,0±1,23 13,0±1,00 1емп = 0,3 12,0±0,88 1емп = 0,5
Дослiдженi показники, якi опосередковано свщчать про енергетичнi можливостi сперматозо!дав (характер рухово! активностi, тривалiсть руху) та !хню стiйкiсть до змш оточуючого середовища - осмо- та кислотну резистентнiсть (табл. 2).
Загальний час рухово! активност статевих кл^ин шсля введения етилового ефiру а-бромiзовaлерiaновоl кислоти статистично не змiнювaвся у дослщних групах порiвияно iз контрольною групою. 1хня життездaтнiсть, що визначаеться за показниками осмотично! та кислотно! резистентносп, також не зазнала достовiрних змiн. Результати дослiджения епiдидимaльно! суспензп показали, що етиловий ефiр а-бромiзовaлерiaново! кислоти не викликае статистично значимих змш у продукцi! статевих кл^ин сiм'яникaми.
Таблиця 2
Функцiонaльнi показники сперматогенезу бших щурiв пiд впливом етилового ефiру
а- бромiзовaлерiaновот кислоти, (M±m, tKp=2,1)
Показники Контроль Експериментальш групи, дози
1/50 DL50 (32,8 мг/кг) 1/250 DL50 (6,56 мг/кг)
Кислотна резистентшсть, рН 4,0±0,37 3,75±0,5 tемп.= 0,31 4,0±0,67 tемп.= 0,24
Осмотична резистентшсть, % р-ов NaCl 2,8±0,3 2,60±0,3 tемп.= 0,51 2,8±0,17 tемп.= 0,35
Юльюсть сперматозовдв, млн. 56,0±7,4 53,52±3,9 tемп= 0,30 55,60±3,6 tемп.= 0,05
Рухливють сперматозовдв, хв. 83,8 ± 4,2 82,7 ± 2,1 tемп.= 0,23 78,6 ± 1,0 tемп.= 1,2
Кшьюсть мертвих сперматозовдв,% 16,5±2,9 15,22±1,6 tемп.= 0,39 14,64±2,0 tемп.= 0,53
Патолопчш форми (на 200 сперм) 0,2 ± 0,1 0,3 ± 0,1 tемп.= 0,86 0,3 ± 0,2 tемп.= 0,48
Мiкроскопiчний aнaлiз морфолопчних особливостей спермaтaзо!дiв виявив поряд з нормальними клiтинaми поодинокi пaтологiчнi форми, яю з однаковою частотою зустрiчaлись у щурiв дослiдно! та контрольних груп.
Введення per os щурам самцям етилового ефiру а-бромiзовaлерiaново! кислоти в дозах (32,8 мг/кг) та (6,56 мг/кг) не викликало змш показниюв, що дослщжувались, за виключенням збшьшення вiдносно! ваги сiм'яникiв, що може трактуватись як потенцшна гонадотоксичшсть сполуки. Отримaнi дaнi е шдставою для проведення подальших дослiджень стану морфолопчних показниюв сперматогенного епiтелiю.
1. Галимов Ш. Н. «Кризис сперматозоида» и техногенное загрязнение окружающей среды: факты и гипотезы / Ш. Н. Галимов, З. К. Амирова, Э. Ф. Галимова. // Проблемы репродукции. - 2005. - №2. - С. 19-22.
2. Журавлева М. В. Методы мониторинга безопасности лекарственных средств: вчера, сегодня и завтра / М. В. Журавлева, Е. А. Овчинникова, К. Е. Назимкин // Антибиотики и химиотерапия. - 2007. - №7. - С. 51-52.
3. Кожем'яюн Ю. М. Науково-практичш рекомендацп з утримання лабораторних тварин та роботи з ними / Ю. М. Кожем'яюн, О. С. Хромов, М. А. Фшоненко [и др.] - К: Авщенна, - 2002. - 156 с.
4. Курило Л. Ф. Система тестирования факторов повреждающих женские и мужские гаметы и гонады / Л. Ф. Курило // Гигиена и санитария. - 2011. - №5. - С. 72-78.
5. Мина М. В. Рост животных: анализ на уровне организма / М. В. Мина, Г. А. Клевезаль // - М: Наука, - 1976.- 291 с.
6. Методы экспериментального исследования по установлению порогов действия промышленных ядов на генеративную функцию с целью гигиенического нормирования: МУ № 1741-77 [Утв. МЗ СССР 10.07.77]. М., - 1977. - 20 с.
7. МВ по обгрунтуванню гранично допустимих концентрацш лкарських заа^в у повiтрi робочо! зони i атмосферному повiтрi населених мюць. [затв. МОЗ Укра'ши 21.10.2005, № 544]. - К., -2005. - 19 с.
8. Омельченко И. А. Аспекты медицинского применения корвалола. В форме капель и таблеток / И. А.Омельченко, Т. Г. Ярных, М. И. Борщевская [и др.] // Укра'шський бюфармацевтичний журнал. - 2015. - №3. - С. 23-27.
9. Рузен - Ранге Э. Сперматогенез у животных / Э. Рузен - Ранге // - М: Мир, - 1980. - 272 с.
10. Рыжаков Д. И. Мужское бесплодие: реальность и перспективы: Актовая речь / Д. И. Рыжаков // - Н. Новгород: НГМА, - 2013. - 22 с.
11. Стефанов О. В. Докйшчш дослщження лжарських засобiв. - Методичш рекомендацп. / О. В. Стефанов // - К: Авщена, -2001. - 528 с
12. Сивочалова О. В. Репродуктивные нарушения при воздействии вредных факторов / О. В. Сивочалова, М. А. Фесенко, Г. В. Голованева. // Медицина труда и промышленная экология. - 2008. - №6. - С. 65-69.
13. Сюбаев Р. Д. Доклиническая оценка безопасности препаратов, содержащих комбинации известных лекарственных средств / Р. Д. Сюбаев, И. Н. Немкова, Г. Н. Енгалычева [та ш.] // Токсикологический вестник. - 2014. - №5. - С. 2-7.
ИЗУЧЕНИЯ ГОНАДОТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ЭТИЛОВЫЙ ЭФИР А- БРОМИЗОВАЛЕРИАНОВОЙ КИСЛОТЫ Туркина В. А.
В эксперименте изучались изменения
органометрических параметров семенников и
STUDY GONADOTOXIC ACTION ETHYL ESTER A- BROMIZOVALERIANOVOY ACID Turkin V.A.
The purpose of conducted studies was to find out changes in organometric parameters of testicles and
функциональных показателей сперматазоидов у половозрелых крыс под действием этилового эфира а-бромизовалериановой кислоты при внутрижелудочном введении в дозах 32,8 мг/кг и 6,56 мг/кг. Изменений исследованных показателей не выявлено, за исключением значительного увеличения относительной массы семенников. Данный факт может трактоваться как потенциальная гонадотоксичность соединения. Полученные данные являются основанием для проведения дальнейших исследований состояния морфологических показателей сперматогенного эпителия.
Ключевые слова: гонадотоксическое действие, этиловый эфир а-бромизовалериановой кислоты, лабораторные крысы
Стаття надшшла 3.03.2016 р. УДК 616.61-008.64-036.11-08-092.9
functional values of spermatozoa in adult rats which received 32.8 mg / kg and 6.56 mg / kg of ethyl a-bromo-isovalerate directly to stomach. The only changes to be observed was a significant increase of relative weight of the testicles. Such an effect could be considered as an eventual gonadotoxicity of the compound. Received data can be used in further studies in order to better understand the changes of morphological values of seminiferous epithelium in rats.
Key words: gonadotoxic effect, ethyl ester of a-bromoisovaleric acid, laboratory rats
ВПЛИВ АПОПТОЗ-1НДУКОВАНИХ МЕЗЕНХ1МАЛЬНИХ СТОВБУРОВИХ КЛ1ТИН НА ФУНКЦ1Ю НИРОК ЗА УМОВ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНО! ГОСТРО1 НИРКОВО1
НЕДОСТАТНОСТ1
В статт приведет дослщження рiвня продуктов азотистого обмшу в кровi лабораторних тварин - щурiв, що перенесли експериментальну гостру ниркову недостатшсть i змши цих показниюв на фош введення суспензп мезенхiмальних стовбурових клтн, яю були культивоваш в апоптоз-шдукованому середовищi. Стовбуровi клiтини отримували з юсткового мозку здорових щурiв i культивували !х з додаванням до стандартного середовища гомогената нирково! тканини тварин, якi перенесли гостру ниркову недостатшсть за три доби до експерименту, таким чином створюючи апоптоз-шдуковаш умови. Отримаш даш свщчать про рiзке збiльшення в кровi тварин, якi перенесли гостру ниркову недостатшсть продук™ азотистого обмiну, як маркерiв ураження нирково! функцi!. Внутршньовенне введення тваринам суспензi! мезенхiмальних стовбурових клтн значно покращувало бiохiмiчнi показники лабораторних щурiв.
Ключовi слова: гостра ниркова недостатшсть, мезенхiмальнi стовбуровi кйтини, апоптоз, креатинiн, сечовина.
Робота е фрагментом НДР «Мехашзми апоптозу в культурах клтин i репарацшш процеси в тканинах» (№ державно!реестраци 011Ш001159).
Медична наука останшх роюв прид1ляе велику увагу вивченню питання проблеми шем!чних ниркових захворювань, що пов'язано з постшним зростанням кшькост хворих на цю патолопю 1 високим вщсотком смертност вщ не! [1]. Труднощ! складае 1 своечасна д1агностнка ниркових хвороб 1 адекватна !х корекщя, що зумовлено швидким розвитком вторинних полюрганних уражень [7].
Одним з найбшьш загрозливих 1шем1чних стан1в нирково! тканини е гостра ниркова недостатшсть (ГНН) - патолопя, зростання яко! в останш роки зумовлена несприятливими иобутово-соц1альними умовами, безконтрольним використанням л1карських засоб1в, маючих нефротоксичний ефект та попршенням якосп питно! води [9, 10].
Гостра ниркова недостатшсть - це тяжкий патолопчний стан, який може супроводжувати хрошчш захвор1ння сечовив1дно! системи, що важко и1ддаеться корекцй медикаментозними засобами. Важливу роль у розвитку цього патолопчного стану вщнрае апоптоз - процес запрограмовано! кл1тинно! загибел1, що може бути розглянутий як захисна реакщя оргашзму на процес ураження [2].
За умов постшного пошуку нових, бшьш ефективних засоб1в фармакотерапй 1шем1чних уражень р1зних оргашв { систем, велику увагу придшяють розробц1 альтернативних метод1в л1кування, таких як застосування кл1тинних технолог1й. На сьогодш кл1н1чно 1 експериментально доведено ефектившсть застосування терапй стовбуровими кл1тинами таких патолог1чних стан1в як шем!чш ураження серцево-судинно! системи { м'язово! тканини, оп1кова хвороба, генерал1зован1 запальш процеси [3, 5, 6].
Наведен! даш, шдтверджуюч! доц1льн1сть використання мезенх1мальних стовбурових кл1тин (МСК), в лшуванш гострих { хрон1чних уражень нирок [11, 12]. Для вивчення глибини порушення нирково! функцп { !! в1дновлення, за умов застосування лшарських засоб1в, зазвичай оц1нюють концентрац1ю в кров! продукпв азотистого обм!ну - креатишну ! сечовини, як! в норм! екскретуються з оргашзму з сечею [4].
Метою роботи було встановити змши у функцп нирок в умовах моделювання експериментально! гостро! нирково! недостатност! на тш застосування мезенх!мальних
