CC BY
111
ВИРУЛИЦИДНОЕ ДЕЙСТВИЕ ПРЕПАРАТА «БИ-ДЕЗТМ» НА ВИРУС БОЛЕЗНИ АУЕСКИ
О.И. Шкромада
Аннотация. Приведены результаты исследования вирулицидной активности дезинфектанта «Би-дез™» относительно вируса болезни Ауески. В результате проведенных испытаний была установлена робочая концентрация препарата «Би-дез™» для уничтожения вируса на поверхности объектов и в суспензиях.
Ключевые слова: вирус, вирулицидное действие, де-зинфектант, культура клеток, тест-объекты, экспозиция.
С целью определения эффективной вирулицидной концентрации «Би-дез ™» относительно вируса болезни Ауески (псевдобешенства - Pseudorabies or Aujeszky' Disease virus) производственный штамм «УНДИЕВ 18В» на уровне 10-25 пассажей в культуре чувствительной клеточной линии СПЕВ, патогенной для восприимчивых сельскохозяйственных животных и непатогенный для человека.
Вирус болезни Ауески должен вызывать заболевание и смерть кроликов при подкожном заражении, с характерными клиническими признаками болезни Ауе-ски и расчесыванием в месте введения вируса.
Для определения эффективности вирулицидной концентрации «Би-дез ™» по отношению к вирусу болезни Ауески (производственный штамм «УНДИЕВ 18В») использовали суспензию вируссодержащего материала, который получали после размножения вируса на культурах клеток СПЕВ. Для опыта использовали по 6 матрацев.
Вируссодержащую жидкость смешивали с равным объемом раствора дезинфектанта «Би-дез тм», выдерживали 15, 30, 60 мин. При этом использовали 0,1%, 0,25%, 0,5% и 1% растворы дезпрепарата.
Эффективность обеззараживания поверхностей тест-объектов от вируса болезни Ауески дезинфектантом проверяли в следующем порядке: на простерилизиро-ванную поверхность тест-объектов наносили стерильной пипеткой 1 - 2 см3 суспензии вируса Ауески производственный штамм «УНДИЕВ 18В». Контаминирова-ные тест-объекты оставляли в кюветах горизонтально и вертикально, подсушивали 1-2 часа, с помощью опрыскивателя увлажняли поверхность исследуемым дезинфицирующим раствором с учетом концентрации, экспозиции и количества использованного дезинфектанта. При этом использовали такие концентрации дезинфектанта «Би-дез тм» 0,1 % 0,25 %, 0,5 % и 1,0 %.
В качестве контроля для обработки тест-объектов использовали стерильную воду. Через определенное время с поверхности тест-объектов делали смывы стерильной марлевой салфеткой с контрольных и опытных проб.
К пробе жидкости (10 - 50 см3) добавляли 0,05 М трис-буфер (pH 9,0) в объеме 1 - 2 см3 и встряхивали на протяжении 5 мин. Смесь центрифугировали при 1500 об/мин. 15 - 20 мин., надосадочную жидкость использовали для определения остаточной инфекционности. Надосадочную жидкость и питательную среду (на основе инактивированной сыворотки крови крупного рогатого скота) вносили для определения цитопатического действия в монослой культуры клеток СПЕВ. Проявление цитопатического действия (ЦПД) в монослое культуры клеток СПЕВ будет проявляться в виде округления клеток, образования симпластов, многоядерных клеток и появления зернистости. Степень дегенерации клеток оценивали по 4-бальной шкалой в крестах: ++++ - деструкция всех клеток (клетки отделяются от стекла и плавают в среде); +++ - рядом с полной дегенерацией встречаются отдельные неповрежденные клетки; ++ -деструкция половины клеток; + - дегенерация меньше
половины клеток. Отсутствие дегенерации - клетки культуры не отличаются от контрольной (не зараженной вирусом) культуры. Для подтверждения цитопатического эффекта использовали РН (реакцию нейтрализации) (таблица 1).
Таблица 1 - Эффективность инактивации вируса болезни Ауески (псевдобешенства - Pseudorabies or Aujeszky' Disease virus) производственный штамм «УНДИЕВ 18В»с помощью дезинфектанта «Би-дез тм»
Експозиция (мин.) Концентрация дезпрепа рата, %
0,1 0,25 0,5 1,0
15 45,36 % ± 0,16 98,30 % ± 0,2** 100 % 100 %
30 90,07 % ± 1,04 100 % 100 % 100 %
60 95,00 % ± 0,54* 100 % 100 % 100 %
Примечание. Вероятность разницы: *Р<0,05; **Р<0,01.
Определение эффективности уничтожения вируса болезни Ауески дезинфектантом проводили методом обеззараживания тест-объектов и суспензионным методом согласно рекомендаций [2, 3].
Необходимо указать, что в результате проведенных исследований изменений в культуре клеток СПЕВ не выявлено. Это свидетельствует об эффективности дезинфекционного средства на вирус, который находился на поверхности тест-объекта.
Результаты проведенных исследований приведены в таблице 1. Из таблицы 1 видно, что «Би-дез тм» в 0,1% концентрации через 15 мин. не полностью инактивирует вирус, а только на 45,36 %; через 30 мин. дезинфектант уничтожает вирус на 90,07 %, а через 1 час - на 95 %.
При обработке тест-объектов 0,25% раствором дез-препарата через 15 мин. Наблюдалась гибель вируса на 98,30 %, а через 30 мин. и 1 час - вирус болезни Ауески уничтоженный на 100 %.
При обработке поверхностей 0,5 % и 1 % раствором «Би-дез ™» уже через 15 мин осуществлялась полная инактивация вируса. После заражения смывами, которые были взяты через 30 мин. и 1 год с обработанных 0,5 % и 1 % раствором поверхностей изменений в тест-системах (культурах клеток СПЕВ) не выявлено.
При проведении исследований суспензионным методом ставили цель определить эффективную вирули-цидную концентрацию дезинфекционного средства «Би-дез ™» для инактивации вируса болезни Ауески. Исследования проводили согласно существующей методики [3].
В исследованиях определения вирулицидной активности дезинфектанта «Бьдез ™» использовали такие концентрации: 0,1% 0,25 %, 0,5 % и 1,0 %.
Также в качестве тест-вируса использовали клетки СПЕВ, в которых происходило размножение вируса болезни Ауески. Вируссодержащую жидкость смешивали с равным объемом раствора «Би-дез ™», выдерживали 15, 30, 60 мин.
После указанной экспозиции пробы разводили 10-ти кратно в физиологическом растворе и вносили для определения цитопатического действия в монослой культуры клеток СПЕВ. Проявление цитопатического действия (ЦПД) в монослое культуры клеток СПЕВ будет проявляться в виде округления клеток, образования симпла-стов, многоядерных клеток и появления зернистости. Для подтверждения цитопатического эффекта использовали РН (реакцию нейтрализации). Результаты проведенных исследований даны в таблице 2.
Таблица 2 - Инактивация вируса болезни Ауески
при воздействии дезинфектанта «Би-дез ™», М±т, n = 6
Експозиция (мин) Концентрация «Би-дез тм», %
0,1 0,25 0,5 1
15 JQ9,25±0,15 44,28±0,37* JQ5,8±0,45 99,79±0,65** 0 100 0 100
30 jq8,56±Ö,39 90,00±0,42** 0 100 0 100 0 100
60 |Q6,4±0,65 97,00±0,53** 0 100 0 100 0 100
Примечание.
Вероятность разницы: *Р<0,05; **Р<0,01;
выходной титр вируса болезни Ауески 109,5ЕiД50/см3;
в числителе указанная остаточная инфекционность вируса в lg ЕЩ^/см3;
в знаменателе - эффективность инактивации вируса, %.
Исходя из данных таблицы 2 можно сделать вывод, что 0,1 раствор дезинфектанта «Би-дез ™» через 15 мин. инактивирует не полностью, а только на 44,28 % вирусные частицы; через 30 мин. в этой же концентрации «Би-дез ™» инактивирует вирус на 90 %, а через 1 час. -на 97 %. При действии 0,25 % раствора «Би-дез™» через 15 мин. уничтожается 99,79 % вирусных частиц болезни Ауески, а через 30 мин. и 1 час. препарат в той же концентрации полностью проходит инактивация вируса.
Следует указать, что в концентрации 0,5 % и 1,0 % «Би-дез™» имеет выраженную вирулицидную активность и способен на протяжении 15, 30 и 60 мин полностью инактивировать вирус болезни Ауески.
Таким образом, проанализировав данные, полученные по двум различным методикам, можно утверждать, что 0,1 % раствор дезинфектанта «Би-дез ™» недостаточно эффективен для уничтожения вируса. Однако 0,25 % раствор дезинфектанта «Би-дез ™» полностью убивает вирус болезни Ауески через 30 мин., а начиная с 0,5 % концентрации - уже через 15 мин (таблицы 1, 2).
Список использованных источников
1 Бiрта Г.О. Ветеринарно-саштарш заходи у господар-ствах по виробництву продукци свинарства // Ефективне тва-ринництво - 2008. - № 2. - С. 34-36.
2 Методические указания о порядке испытания новых дезинфицирующих средств для ветеринарной практики. Утв. ГУВ Госагропрома СССР. - М., 1987. - С. 158.
3 Методичш рекомендацп щодо визначення вiрусоцидноl активном! дезшфектанпв вдаосно вiрусiв ньюкаслсько! хвороби птищ / I.I. Бойко, О.М. Якубчак, В.1. Хоменко та ш. - Кшв, 2006.- 12 с.
4 Фотша Г.А., Березовський А.В. Визначення бакте-рицидних властивостей дезшфжуючого препарату «Бровадез-плюс» // Проблеми зоошженерп та ветеринарно! медицини: Зб. наук. пр. Харювсько! ДЗВА. - Харкв, 2007. - Вип.15 (40), Ч.2, Т.1. - С. 91-95.
Информация об авторе
Шкромада Оксана Ивановна, кандидат ветеринарных наук, доцент кафедры терапии, фармакологии и клинической диагностики Сумского национального аграрного университета, Украина, e-mail: skromadaO@yandex.ru, тел. 0999190657.
