CC BY
24ВГС-подобные вирусы животных
Гордейчук И.В.
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов имени МЛ. Чумакова» Российской академии медицинских наук, Москва
Резюме. Гепатит С (ГС) является одним из наиболее значимых инфекционных заболеваний, поражающих человека. Разработка новых терапевтических препаратов, а также профилактической вакцины против ГС серьезно осложнена отсутствием адекватной животной модели ВГС-инфекции. Кроме того, до недавнего времени неясными оставались эволюционные источники ВГС. В данном обзоре систематизированы данные опубликованных за последние годы работ, направленных на решение этих двух проблем.
Ключевые слова: вирус гепатита С, эволюционные источники, моделирование инфекции.
Nonhuman HCV-like viruses
Gordeychuk I.V.
«Chumakov Institute of Poliomyelitis and Viral Encephalitides» of Russian Academy of Medical Sciences, Moscow
Abstract. Hepatitis С is one of the most important infectious diseases of humans. The development of new therapeutic drugs and prophylactic vaccines is hampered by the lack of adequate animal models of HCV-infection. Until recently the evolutionary origins of HCV also remained obscure. The data from recent studies focused on these two problems are systemized in this review.
Key words: hepatitis С virus, evolutionary origins, animal model.
Введение
Вирус гепатита С (ВГС) является одной из важнейших причин заболеваемости и смертности у людей вследствие вызываемого им гепатита, цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы [1,2]. В развитых странах гепатит С (ГС) является ведущей причиной трансплантации печени и наносит существенный экономический вред [3]. Эффективность лечения ГС в последние годы значительно повысилась в результате оптимизации схем лечения с применением новых противовирусных препаратов [4]. В то же время стоимость излечения ВГС-инфекции для пациентов во многих случаях является недоступно высокой, что не позволяет на настоящем этапе говорить о возможности контроля резервуара инфекции.
Наиболее эффективным средством для предотвращения новых случаев инфицирования
ВГС была бы профилактическая вакцина, однако ее разработка и ранние стадии испытаний требуют наличия удобной экспериментальной модели инфекции. К сожалению, единственным животным на котором возможно адекватное моделирование человеческого ГС является шимпанзе [5]. Мыши не поддерживают ВГС-инфекцию в естественных условиях; однако были предложены методы ее искусственного воспроизведения путем пересадки мышам клеток человеческой гепатомы, а также получения трансгенных мышей, экспрессировавших СБ81 и другие ко-рецепторы ВГС [6]. В экспериментах по поиску нейтрализующих ВГС антител мыши, иммунизированные рекомбинантными белками ВГС Е2 и НУШ, вырабатывали антитела, связывавшиеся с вирионами ВГС [7]. Также были получены варианты ВГС, адаптированные к мышам [8]. Однако все эти модели весьма дороги и
сложны в работе, тогда как их применение ограничено изучением лишь некоторых этапов патогенеза и цикла репликации вируса.
Суррогатные модели, в которых используются вирусы, схожие с инфицирующими человека, но имеющие другого естественного хозяина, доступны и с успехом используются в изучении многих других социально значимых инфекций. К таковым относятся вирус иммунодефицита обезьян, поксвирусы животных, герпесвирусы, норовирус мышей и вирус гепатита сурков. Кроме того, наличие филогенетически близких вирусов у других животных позволяет изучать изменчивость вируса при межвидовой передаче и процессы его адаптации.
В настоящее время установлено, что нынешняя пандемия ВГС началась в регионах Центральной и Западной части Африки, южнее Сахары и Южной и Юго-Восточной Азии, где генетически различные варианты ВГС циркулировали, по-видимому, сотни лет. Несмотря на соблазн сравнения пандемии ВГС с пандемией ВИЧ, где источником вируса определенно являются цен-тральноафриканские шимпанзе, до настоящего момента не опубликовано данных, подтверждающих присутствие ВГС-подобных вирусов у высших обезьян и обезьян Старого Света, хотя за время поиска были обследованы буквально сотни тысяч образцов плазмы крови [9].
Таким образом, несмотря на то, что ВГС был открыт более 20 лет назад, долгое время у животных не удавалось обнаружить гомологичных вирусов, а источник происхождения ВГС по-прежнему оставался неясным [10].
Поиск суррогатной модели ВГС
Первым схожим с ВГС вирусом стал СВУ-В, обнаруженный при лабораторном пассировании на тамаринах плазмы крови пациента с гепатитом неуточненной этиологии и вызывавший гепатит у обезьян Нового Света при экспериментальном заражении [11]. ОВУ-В относится к роду пегивирусов, который, как и род гепацивиру-сов, относится к семейству Ят/п/шс/ае. Использование ОВУ-В, вызывающего гепатит у игрун-ковых обезьян, в качестве суррогатной модели ВГС внесло значимую роль в изучение патогенеза гепатита [12]. Тем не менее, эволюционные различия между родами гепацивирусов и пегивирусов настолько велики, что их объяснение непосредственным межвидовым переходом от
обезьян Нового Света к человеку было бы несостоятельным.
Первым обнаруженным представителем рода гепацивирусов помимо ВГС стал CHV (canine hepacivirus — гепацивирус собак), обнаруженный Кароог и соавт. в 2011 г. [13] при исследовании образцов соскобов с носовой полости 33 собак, вовлеченных в 5 различных вспышек респираторных заболеваний в США. В результате обогащения геномного материала, рэндом-амплификации и секвенирования авторами были получены геномные последовательности первого неприматного гепацивиру-са. Секвенирование участков гена NS3 (хелика-зы) вируса показало 99,2% сходства выделенных последовательностей между собой с заменами только в синонимических позициях. В контрольной группе из 60 здоровых собак геномные последовательности СНУобнаружены не были. Также были обследованы образцы ткани печени и легких 19 собак, умерших от неустановленных заболеваний желудочно-кишечного тракта, при этом в 5 случаях были обнаружены последовательности генома CHV, a in-situ гибридизация показала присутствие вирусной РНК в цитоплазме гепатоцитов. Попытки накопления вируса на культурах клеток собак оказались безуспешными.
Доступные в настоящее время технологии секвенирования помогли идентифицировать множество генетических последовательностей вирусов человека и животных, однако сама по себе детекция вирусных нуклеиновых кислот, в особенности в фекалиях или дыхательных путях, скорее характеризует содержимое соответственно пищи и воздуха и недостаточна для подтверждения присутствия инфекции, не говоря уже об ассоциации с теми или иными заболеваниями [14]. Первичная идентификация последовательностей РНК нового вируса требовала подтверждения с использованием серологических, а в лучшем случае — культуральных методик.
Вслед за первичным обнаружением вируса, Burbelo и соавт. в 2012 г. [14] с помощью системы люциферазной иммунопреципитации провели скрининг сывороток крови 80 собак, 81 оленя, 84 коров, 103 лошадей и 14 кроликов на наличие антител иммуноглобулинов класса G (IgG) к хеликазному белку CHV. При первичном выборе животных для исследования в него были вклю-
чены лошади, поскольку известно, что эти животные восприимчивы к инфицированию другими флавивирусами, включая вирусы лихорадки Западного Нила, Японского энцефалита, лихорадки Денге и лихорадки Сент-Луис. В результате антитела были выявлены у 36 (35%) лошадей, при этом в 8 (22%)образцах также была выявлена вирусная РНК. Кроме того слабо положительным был один образец, взятый от коровы. Несмотря на то, что первоначально CHV был обнаружен у собак [13], все сыворотки крови собак в исследовании дали отрицательный результат.
Выявление практически идентичных последовательностей гепацивирусов у собак и лошадей является весьма удивительным. Сами авторы объясняют эти различия тем, что основным хозяином CHV являются лошади, тогда как первоначально описанный случай обнаружения его у собак скорее следствие случайной межвидовой передачи вируса. По результатам данного исследования авторами было принято решение о переименовании CHV в NPHV (non-primate hepacivirus).
Среди гепацивирусов, открытых к настоящему времени, NHPV является филогенетически ближайшим к ВГС. Белок Е2 ВГС, один из наиболее вариабельных участков генома, имеет значительное сходство с таковым у NHPV [13]; тем не менее, исследование полных геномов 8 образцов РНК NPHV, полученных от лошадей, показало, что в отличие от других гепацивирусов на их З'-концах вместо Х-области находился поли(А) тяж разной длины. Кроме того, были обнаружены значительные отличия генома вируса от ВГС на 5'-конце, включая блокировку первого сайта связывания с miRNA-122, необходимого для репликации ВГС.
Lyons и соавт. в 2012 г. [15] с целью исследования эпидемиологии распространения NPHV исследовали образцы тканей, взятые от собак, кошек, ослов, грызунов, лошадей, свиней и обнаружили геномные последовательности этого вируса только у 3 (2%) из 142 лошадей. Ни у одной из лошадей, в тканях которых были обнаружены последовательность NPHV, не было выявлено симптомов гепатита, за исключением небольшого подъема уровня гаммаглютамилтранспеп-тидазы (ГГТП) в одном случае. Вирусная нагрузка в сыворотках крови лошадей находилась на уровне 104-107 копий/мл. Наблюдение за одной из лошадей в течение 5 месяцев показало сохранение виремии и отсутствие клинических и яв-
ных биохимических признаков гепатита. Детекция NPHV РНК у лошади в двух повторных исследованиях с перерывом в 5 месяцев свидетельствует о возможности персистирующей инфекции [15], что отличает данный вирус от GBV-В, который, будучи явно гепатотропным, не вызывает хронической инфекции у тамаринов [12], хотя более поздние исследования показали длительное присутствие вируса в крови экспериментально инфицированных мармозет [16].
Таким образом, в 2011-2012 гг. неприматные гепацивирусы были обнаружены у лошадей и, возможно, собак, однако лошади неприемлемы в качестве лабораторных животных, тогда как в сыворотке крови собак не было обнаружено антител к вирусу, что делает их непригодными для моделирования иммунизации, не говоря уже о том, что в повторных исследованиях у собак вирус найден не был. Несмотря на достигнутые успехи в идентификации неприматных гепацивирусов, проблема поиска удобной и недорогой модели для лабораторного суррогатного моделирования ВГС-инфекции оставалась нерешенной.
В 2013 г. с перерывом всего в 2 месяца вышли две статьи, в которых описывалось выявление гепацивирусов у мелких грызунов. Кароог и соавт. в апреле 2013 [17] представили данные об обнаружении гепацивирусов и пегивирусов в нескольких видах мышей (Chaetodipushispidus, Peromyscusmaniculatus, Neotomalepida и Neotomaalbigula). Несмотря на значительное генетическое разнообразие, все новые вирусы грызунов филогенетически относились к группам гепацивирусов и пегивирусов, что поддержало первоначальное их отнесение к семейству Flaviviridae.
Drexler и соавт. [18] обследовали коллекции тканей и сывороток крови 4770 грызунов, отловленных в разных частях света (41 вид) и сыворотки крови 2939 летучих мышей (51 вид). Геномные последовательности гепацивирусов, формирующие три отдельные таксономические группы, были выявлены у 27 (1,8%) из 1465 рыжих полевок (Myodesglareolus) из Центральной Европы и у 10 (1,9%) из 518 полосатых полевых мышей из Южной Африки. Сыворотки крови летучих мышей давали положительные результаты в иммуноблоте с анти-ВГС, однако геномные последовательности вирусов не были обнаружены. На рисунке 1 представлено сравнение последовательностей генома нового гепацивируса
грызунов с другими представителями семейства Flaviviridae [18].
Также был обследован биологический материал, полученный от 210 лошадей и 858 кошек и собак. У лошадей были выявлены геномные последовательности, сходные с обнаруженными у лошадей/собак ранее [13], в то время как у кошек и собак гепацивирусов выявлено не было. Все три группы геномных последовательностей гепацивирусов грызунов имели равные филогенетические дистанции относительно ВГС, превышавшие таковые для гепацивирусов лошадей/собак. Максимальные различия аминокислотных последовательностей ЫБ5В между таксонами при включении в анализ мышиных гепацивирусов достигали 66,1%, что превышает
таковые для известных ранее представителей рода Flavivirus (55,8%). Максимальные различия в пределах родов Pegivirus (52,9%) и Pestivirus (42,0%) еще ниже, что свидетельствует об особенно большом разнообразии данной группы гепацивирусов и возможности их выделения (вместе с GBV-B) в отдельный род [18].
Данные количественной ОТ-ПЦР, in situ-гибридизации РНК и гистопатологии свидетельствовали о гепатотропности обнаруженных вирусов и наличии воспаления печени, схожего с таковым при гепатите С, однако антитела, выявленные в сыворотках крови рыжих полевок, не проявляли кросс-реактивности ни с ВГС, ни с гетерологическими гепацивирусами грызунов. Обнаружение предполагаемого
Рис 1. Сравнение нового гепацивируса грызунов с другими представителями семейства Flaviviridae. Байесово филогенетическое дерево последовательностей гена NS5B представителей всех родов семейства Flaviviridae, а также пяти последовательностей нового гепацивируса, для которых получена полная последовательность полипротеина. Анализ выполнен в программе MrBayes. Использована модель замен WAG. В глубоких узлах дерева отмечена Байесова апостериорная вероятность и статистическая поддержка групп в бутстрэп-анализе по алгоритму ML с 1000 псевдорепликатов. Масштаб соответствует генетической дистанции. В качестве аутгруппы использован томбсовирус (NC 007983) [18].
Hepacivirus
GBV-B Rodent hepacivirus
Hepatitis С virus
Pegivirus
Canine I Equine hepacivirus
0.85 [100]
1 / чК
0.75 [100Î
[1001ft Canine I Equine ——^ hepacivirus
^ г iiepduivirub
[100]. с- t
jCT" Ж Hepatitis
iLrfe1 ACvirus
|100] _,M.g/aclade2-~
Outgroup
02
Lisianthus necrosis virus
1
[98.1]
M. gli GBV-B -4 R- pum clad
■ M. gla clade
0.2
Flavivirus
Mosquito-borne
Tick-borne
Tamaña -1 unknown bat virus Arthropod- у^д,. specific
-Ê
45
-¡am«
I
1L-г
Bangladesh
Cameroon
DR Congo
Guatemala
Kenya
Mexico
Nigeria
:-
I—WW
-<ж\ и
KJMX И»-«'«
юь.**
ЫУ .. !&^i4?e PRB-57S
PCÊ-5Îλ «12*
J «РйВ- Ж
I_f«* Й-;
-
PM CD
- ■
ff IM
0 3
ЯШ
—гаме
"-сййГ
I
Hipposidendae
CladeA CladeB
CladfC MooBsiûae
Clade □ «M Hippcsideroae
Clade E
Clade F
Clade G
Clade H
Clade I Clade J
Clade К
Emballorund№ Hoiossidae Ptiyllostomidae Vespsriilionidae
Ptiyllostomidae Ptefûpodidae
HI
A
EmballorundaB Hippcsideriflae Molosslûae Pteicpodidas
Рис. 2. Географическое распространение новых гепацивирусов среди летучих мышей. Байесово филогенетическое дерево последовательностей гена РНК-зависимой РНК-полимеразы длиной 300 нт., полученных от летучих мышей и представителей родов НерасМгиБ и Ре^униз. Страны-источники последовательностей выделены цветом ветвей, предполагаемые естественные хозяева вирусов отображены справа. Байесова апостериорная вероятность обозначена только в узлах с достаточной поддержкой (>0,7). Масштаб отражает среднее количество нуклеотидных замен на сайт [19].
источника гепацивирусов
Летучие мыши являются естественным резервуаром многих значимых зоонозных инфекций, вызывающих тяжелые заболевания у человека: лиссавирусов, БАИБ-подобных коронавирусов, филовирусов, хенипавирусов и других парамик-совирусов. Эти млекопитающие обладают уникальными характеристиками, делающими их важным резервуаром вирусных инфекций: высокой продолжительностью жизни, широким
видовым разнообразием, высокой мобильностью и плотностью популяций.
Возможным путем передачи вирусов летучих мышей другим животным является поедание последними трупов летучих мышей, а также контаминация продуктов питания фекалиями и кровью. Эти механизмы были описаны для вируса Нипа — человек заражался при контакте с инфицированными свиньями, поедавшими плоды, контаминированные фекалиями.
В 2013 г. Quan и Firth [19] обследовали в общей сложности 1673 образца сывороток крови 58 видов летучих мышей, собранных по всему миру (рис. 2). При этом 78 образцов сывороок/ плазмы крови содержали геномные последовательности, филогенетически группировавшиеся с гепацивирусами и пегивирусами. Распространенность представителей семейства Flaviviridae в данной группе составила около 5%. Все летучие мыши, в сыворотке которых были обнаружены гепацивирусы и пегивирусы, были внешне здоровы, несмотря на высокие уровни вире-мии, что свидетельствует об их возможной не-патогенности для хозяина. Эволюционный анализ полученных последовательностей и их сравнение с ранее идентифицированными последовательностями вирусов человека и животных показал, что все известные гепацивирусы и пегивирусы распределяются в филогенетическом разнообразии последовательностей, выделенных от летучих мышей. На основании этих наблюдений можно сделать предварительный вывод о том, что летучие мыши являются древним источником гепацивирусов и пегивирусов человека и животных.
Заключение
Развернувшаяся в мире пандемия ГС требует стремительных действий. В данном обзоре описаны важнейшие исследования последних лет, направленные на решение двух важнейших задач: поиск лабораторной модели для изучения ВГС-инфекции, а также идентификация эволюционных предшественников ВГС.
Последовательное открытие вируса GBV-B, неприматных гепацивирусов, инфицирующих лошадей и, возможно, собак, а затем — гепацивирусов грызунов расширило возможности моделирования молекулярных механизмов формирования инфекции и фаз иммунного ответа организма. Адекватность мышиной модели подтверждается гепатотропностью гепацивирусов грызунов in vivo с наличием признаков гепатита, повышенной концентрацией РНК в ткани печени и присутствием репликации геномов в гепатоцитах [18]. Несколько сниженный уровень воспаления в сравнении с ВГС может объясняться меньшей продолжительностью жизни рыжей полевки на воле (1-2 года), а также более высокой эффективностью восстановления ткани печени. Тем не менее, отсутствие реактивно-
сти мышиных антител как с мышиными гепацивирусами, так и с ВГС требует дальнейшей адаптации данной модели.
Обнаружение широкого филогенетического разнообразия гепацивирусов и пегивирусов у нескольких различных семейств летучих мышей, а также их широкая распространенность свидетельствуют о более древней ассоциации этих вирусов с летучими мышами, чем с любым другим известным хозяином и свидетельствуют о том, что летучие мыши являются крупнейшим природным резервуаром гепацивирусов и пегивирусов. Направлением дальнейших исследований в области эволюции гепацивирусов и пегивирусов станет поиск представителей данных родов у других видов млекопитающих, исследование их разнообразия и географии распространения, а также изучение изменчивости при межвидовой передаче.
Литература
1. Poynard Т. Viral hepatitis С// Lancet. - 2003. - Vol. 362 (9401).
- P. 2095-2100.
2. Perz J., Armstrong G., Farrington L., Hutin Y., Bell B. The contributions of hepatitis В virus and hepatitis С virus infections to cirrhosis and primary liver cancer worldwide // J. Hepatol.
- 2006,-Vol.45 (4).- P. 529-538.
3. Brown R.S. Hepatitis С and liver transplantation // Nature. -2005.-Vol.436 (7053).- P.973-978.
4. Pawlotsky J.-M. New hepatitis С therapies: the toolbox, strategies, and challenges// Gastroenterol. - 2014.-Vol. 146 (5).- P. 1176-1192.
5. Bukh J. A critical role for the chimpanzee model in the study of hepatitis С // Hepatol. -2004. - Vol. 39 (0270-9139)- P. 1469-1475.
6. Ploss A., Rice C.M.Towards a small animal model for hepatitis С // EMBO Rep. - 2009,-Vol. 10 (11). - P. 1220-1227.
7. Esumi M.Ahmed M.,Zhou Y.,Takahashi H.,Shikata T. Murine antibodies against E2 and hypervariable region 1 cross-reactively capture hepatitis С virus.//Virology.- 1998.-Vol. 251 (1).- P. 158-164.
8. Dorner M., Horwitz J., Robbins J., Barry W., Feng Q., Mu K., Jones C., Schoggins J., Catanese M., Burton D., Law M., Rice C., Ploss A. A genetically humanized mouse model for hepatitis С virus infection // Nature. - 2011. - Vol. 474 (7350).
- P. 208-211.
9. Makuwa M.,Souquière S.,Telfer S., Leroy E., Bourry 0., Rouquet P., Clifford S., Wickings E., Roques P., Simon F. Occurence of hepatitis viruses in wild-born non-human primates: A 3 year (1998-2001) epidemiological survey in Gabon // J. Med. Prima-tol.- 2003.-Vol. 32 (6).- P. 307-314.
10. Simmonds P. Genetic diversity and evolution of hepatitis С virus - 15 years on // J. Gen. Virol. - 2004. - Vol. 85(11). - P. 3173-3188.
11. Bukh J.,Apgar C., Govindarajan S., Purcell R. Host range studies of GB virus-B hepatitis agent, the closest relative of hepatitis С virus, in new world monkeys and chimpanzees //J. Med. Virol. -2001.-Vol. 65 (4).- P. 694-697.
12. Beames B., Chavez D., Lanford R.E. GB virus B as a model for hepatitis C virus// ILAR J.- 2001,-Vol.42 (2).- P. 152-160.
13. Kapoor A.,Simmonds P.,Gerold L.,Ouaisar N.,Jainn K., Henriques J., Firth C., Hirschberg D., Rice C., Shields S., Lipkin W.I. Characterization of a canine homolog of hepatitis C virus // Proc. Natl. Acad.Sci.U.S.A.- 2011.-Vol. 108 (28).- P. 11608-11613.
14. Burbelo P., Dubovi E., Simmonds P., Medina J., Henriques J., Mishra N., Wagner J., Tokars R., Cullen J., ladarola M., Rice C., Lipkin W.I., Kapoor A.Serology-enabled discovery of genetically diverse hepacivi ruses in a new host //J.Virol. - 2012.- Vol. 86 (11).- P. 6171-6178.
15. Lyons S., Kapoor A., Sharp C., Shneider B., Wolfe N., Culshaw G., Corcoran B., McGorum B., Simmonds P. Nonprimate hepacivi-ruses in domestic horses, United kingdom // Emerg. Infect. Dis. - 2012,-Vol.18 (12).- P. 1976-1982.
16. Iwasaki Y., Mori K., Ishii K., Maki N., lijima S., Yoshida T., Ok-abayashi S., Katakai Y., Lee Y., Saito A., Fukai H., Kimura N., Ageyama N., Yoshizaki S., Suzuki T., Yasutomi Y., Miyamura T.,
Kannagi M.,Akari H. Long-term persistent GBV-B infection and development of a chronic and progressive hepatitis C-like disease in marmosets// Front.Microbiol.- 2011.-Vol.2.-A.240.
17. Kapoor A., Simmonds P., Scheel T. identification of rodent homologs of hepatitis C virus and pegiviruses // MBio. - 2013. -Vol. 4 (2).- P. e00216-13.
18. Drexler J.F.,Corman V., Müller M., LukashevA., GmylA.,Coutard B., Adam A., Ritz D., Leijten L., van Riel D., Kallies R., Klose S., Gloza-Rausch F., Binger T., Annan A., Adu-Sarkodie Y., Oppong S., Bourgarel M., Rupp D., Hoffmann B., Schlegel M., Kümmerer B., Krüger D., Sch m idt-Cha nasit J., Setien A., Cottontail V., Hema-chudha T.,Wacharapluesadee S., Osterrieder K., Bartenschlager R., Matthee S., Beer M., Kuiken T., Reusken C., Leroy E., Ulrich R., Drosten C. Evidence for novel hepaciviruses in rodents // PLoS Pathog. - 2013. - Vol. 9 (6). - P. el003438.
19. Ouan P., Firth C. Bats are a major natural reservoir for hepaciviruses and pegiviruses//Proc. Natl.Acad. Sei. U. S.A. - 2013. - Vol. 110 (20). - P. 8194-8199.
Контактная информация
Гордейчук Илья Владимирович - кандидат медицинских наук, заведующий лабораторией патогенеза вирусных гепатитов Федерального государственного бюджетного учреждения «Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов имени М.П. Чумакова» Российской академии медицинских наук. Контактная информация: lab.gord@gmail.com; 142782, Москва, поселение Московский, посёлок Института полиомиелита, 27 км Киевского шоссе.
Gordeychuk Ilya Vladimirovich - PhD, head of the Laboratory of pathogenesis of hepatitis withexperimentalclinic of Callitri-chidae of Federal State Budgetary Institution «Chumakov Institute of Poliomyelitis and Viral Encephalitides» of Russian Academy of Medical Sciences. Contact information: lab.gord@gmail. com; 142 782, Moscow, settlement Moskovskiy, community of the Institute of Poliomyelitis, 27 km Kievskoe shosse.
