CC BY
74
УДК 636.2:591.469:591.146
Скляр О.1., канд. вет. наук, доцент © ^Ыуг 19-56 @ 1иа)
Сумський НА У
ВДОСКОНАЛЕННЯ СПОСОБУ ФАРБУВАННЯ МАЗК1В МОЛОКА
(СЕКРЕТУ) ВИМЕН1 КОР1В ДЛЯ ВИЗНАЧЕННЯ К1ЛЬКОСТ1 СОМАТИЧНХ КЛ1ТИН ПРИ СУБКЛ1Н1ЧНОМУ МАСТИТ1
У дангй статт1 розглянуте питання з удосконалення метод1е фтсацп та фарбуеання мазте молока (секрету) еим 'я корге при субклтгчному мастит для тдрахунку соматичних клтин мжроскотчним методом Прескотта-Бр1да. Визначений найбыьш ефектиений, зручний у еикористанш та економ\чно еиггдний реактие- 82%-ний денатуроеаний етанол. Розглянут1 недолгки ранше запропоноеаних хгмгчних реактие1е для фшсуеання та фарбуеання мазте молока(секрету) еим 'я корге.
Ключовi слова: соматичш клтини, денатуроеаний етанол 82%, етилоеий спирт, метилоеий спирт, етилоеий еф1р, електронний л\чильник, димастин, мастидин, кал1форншський тест.
Вступ. Соматичш кл^ини молока - це показник, який дае змогу визначити субклшчний мастит в корiв, домшок анормального молока в загальному надо! вщ групи корiв. Крiм того, дослщження кшькосп соматичних кл^ин в загальному надо! з ферми в розвинених кра!нах використовуеться як ефективний зааб для керування маститною ситуащею в стадi та для прогнозування молочно! продуктивност корiв.
Встановлено, що при збшьшенш кшькосп соматичних клпин в секрет вим'я корiв зменшуеться продукування молока. 1снують вiдповiднi розрахунки для використання кшькосп соматичних клiтин для обчислення зменшення молочно! продуктивностi корiв[3].
Таким чином кiлькiсть соматичних клпин е важливим показником в молочнш галузi i цей показник активно використовуеться в програмах покращення якост молока в кра!нах СС та СОТ.
В Укра!ш також соматичш клпини е обов'язковими щодо визначення в збiрному сирому молоцi корiв пiд час його здавання на молокоприймальш пункти та молокопереробнi тдприемства. Так, при здачi - прийманш сирого молока згiдно з ДСТУ3626-97 «Молоко коров'яче - сировина. Техшчш умови» Кiлькiсть соматичних клiтин в молощ гатунку «Екстра»та «Вищий» повинно бути не бшьше 400000сом.кл./см3, а для другого гатунку ця кшьккть повинна бути не бшьше за 600000сом. кл/см3 [5].
Соматичнi клпини молока корiв складаються в основному з епiтелiальних клiтин та лейкоципв[4].За кiлькiстю соматичних клiтин контролюють молоко з метою недопущення для харчових цшей продукци вiд маститних корiв. Санiтарний контроль якостi молока забезпечуе щоденне достовiрне тестування
© Скляр О.1., 2010
283
стану здоров'я вим'я окремих стад в цшому без проведення в товарних стадах достатньо трудомютких ветеринарних заходiв. З ycix змш, що вщбуваються в молощ при запальних процесах у молочнш залозi найбiльш загальною постiйною i значною змiною е збiльшення кшькост соматичних клiтин. 1х кiлькiсть залежить вiд здатностi хвороботворних бактерiй до росту та розмноження в молочнш залоз^ розмiрiв пошкодження тканини вим'я, захисно! функци органiзму[2].
Для тдрахунку соматичних клiтин використовуються наступнi методи:
- використання електронних лiчильникiв;
- використання швидких маститних тестiв таких, як мастидин, димастин, 4%р-н NaOH, калiфорнiйський маститний тест та шшц
- мiкроскопiчний метод пiдрахунку соматичних кл^ин в мазку молока (секретГ) вим'я.
З усiх вищеперерахованих методiв останнiй метод вважаеться найбiльш точним i надiйним, вiн використовуеться як арб^ражний. На жаль, в Укра!ш вiн маловiдомий i майже не використовуеться, хоча, за мiжнародними вимогами, його використання в певних випадках е обов'язковим.
Основним мжроскотчним методом тдрахунку соматичних кл^ин е метод Прескотта-Брща.
Сутнiсть даного методу полягае у прямому тдрахунку соматичних кл^ини у мазку секрету вим'я корiв тсля !х фарбування пiд мжроскопом.
Вiдомi способи фарбування мазкiв молока (секрету) вим'я корiв при субклмчному маститi для пiдрахунку кiлькостi соматичних кл^ин ISO 133661:2008, але цей метод ще не е чинним в Укра!ш, оскiльки на даний час на його основi розроблено тшьки проект ДСТУ.
В зазначених методиках використовуеться фжсащя мазюв молока (секрету) вим'я рiзними реактивами.
Недолжами вiдомих способiв фарбування мазку молока (секрету) вимет корiв е те, що:
1. Для фжсаци та фарбування мазюв застосовуються токсичт речовини, при яких необхiдно строго дотримуватися правил техшки безпеки та саштарного стану.
2. Не досягаеться сто вiдсотковi гаранти отримання яккного мазку.
3. Досить часто, навт при використаннi нових предметних скелець, яю пiдготовленi за стандартною методикою[1]. Не вдаеться провести надiйну фжсацш мазкiв i при зануреннi !х у барвник велика кiлькiсть мазюв зповзае iз скельця i ефектившсть фжсаци мазкiв складае 75 - 85 вщсотюв.
4. Для предметних скельцями, яю були у використанш необхiдно досить багато часу i хiмiчних реактивiв для !х знежирення, але також не вiдмiчаеться 100% результату.
5. При використанш запропонованих хiмiчних речовин для фжсаци мазюв молока (секрету) вименi корiв при зануренш мазка в реактиви
284
останш випаровуються розчиняють позначки та тдписи, яю зроблеш маркером на предметному склi для щентифшацп.
6. Маточний розчин барвника етидiум бромiд може зберiгатися не довше нiж протягом двох мкящв при температурi 20С ±20С, в темнота
В цих методах в якост фiксатора використовуеться етанол 95% та тетрахлоретан (отруйний) якi входять до складу барвника. Приготування барвника необхщно здшснювати у витяжнiй шаф1 Для захисту шкiри рук необхщно користуватися рукавичками.
Матер1али та методи дослщження. Вдосконалення способу фiксування та фарбування мазюв молока (секрету) вим'я корiв для дослiдження кiлькостi соматичних кл^ин мiкроскопiчним методом.
Матер1али та методи дослщження. Матерiалом для дослщження було молоко (секрет) вим'я корiв при субклiнiчному маститi. Методом дослщження було фжсащя та фарбування мазку молока (секрету) вим'я корiв при дослщженш кiлькостi соматичних клiтин методом Прескотта-Брща. Предметнi скельця на яких робилися мазки готовили за загальноприйнятою методикою. Перед роботою скельця доставали тнцетом iз сумiшi для збер^ання скелець (спирт ефiр в рiвних кiлькостях) висушували та робили мазки молока (секрету) вим'я. Для приготування мазку на попередньо розмiчене предметне скло площею 1см2 наносили дослщжуване молоко (секрет) вим'я, поим голкою рiвномiрно розтирали по всш площi квадрату. Мазки висушували на повiтрi при кiмнатнiй температурi. Шсля висушування мазки фiксували в денатурованому етанолi 82%. концентраци (Скляр О.1. та iншi). Мазки фарбували за Романовським-Пмзою.
Результати досл1дження. Нами опрацьована велика кшькють науково! лiтератури щодо фарбування та фшсацп мазкiв молока (секрету) вим'я корiв, де пропонуються рiзнi методи та реактиви[1]. Також ми проводили фарбування мазюв молока (секрету) рiзними способами як стандартними, так i новiтнiми (Ньюмана-Ламперта), порiвняли !х ефективнiсть оцiнювали зручнiсть у використанш (табл.1)
Таблиця 1
Результат використання |мзнн\ реактив1в для ф1ксащ1 та фарбування
№ Реактиви для фжсацп К-ть мазюв К-ть мазюв придатних для тдрахунку сом. клггин тсля фарбування %
1 Етиловий спирт 100 73 73
2 Етиловий спирт + Етиловий еф1р пор1вну 100 79 79
3 Метиловий спирт 100 81 81
4 Денатурований етанол 82% 100 100 100
Як видно iз таблицi 1, найкращим реактивом для фжсаци мазюв виявився денатурований етанол 82%. Так, при використовуванш денатурованого 82% етанолу ефектившсть фiксування склало 100%. Поряд з 100% ефектившстю для фжсаци денатурований 82% етанол е малотоксичною речовиною, що дае
285
можливкть практично працювати без застережень. При потраплянш денатурованого етанолу 82%-ного на шюру i навiть на слизовi оболонки для його нейтр^заци достатньо промити мкце потрапляння проточною водою. Незалежно вщ того предметнi скельця були у використанш чи нi, достатньо !х пiдготувати за загальноприйнятою методикою i вони придатнi для використання. При використанш мазюв денатурований 82% р-н етанолу не пошкоджуе позначки на скельцях, яю зробленi для !х щентифжаци. Час фiксування мазкiв при юмнатнш температурi складае 20-25 хвилин. В одному об'емi 82% р-ну етанолу можна фжсувати до 50-70 мазюв, що е економiчно вигщним. Нижче наведеш приклади фарбування мазьав р1зними реактивами.
ч +¡1/ 1® +1
* т
т • т
ш >
Рис. 1 Мазки зафжсоваш етиловим спиртом.
К га
7
ч\ *
г (и
Рис. 2 Мазки зафжсоваш метиловим спиртом
ГТ7
Рис. 3 Мазки зафжсоваш етиловий спирт плюс етиловий ефнр пор1вну.
ь 3 г \
ш V а л ш ■ •
ш ■ ■ ш • ■
л 1 ■ « т ■ 1 ■
Рис. 4 Мазки зафiксованi в денатурованому етанолi 82%.-но1 концентращ'ь
Як видно з (рис.1 - 3), де мазки зафжсоваш етиловим спиртом, спирт ефiром порiвну або метиловим спиртом вiдмiчаеться зповзання мазюв повнiстю або частково.
Мазки для ефективного тдрахунку кiлькостi соматичних клiтин повиннi бути розподшеш рiвномiрним шаром по всш поверхнi квадрату та добре зафжсоваш (рис.4). Мазок повинен просвiчуватися в прохщному свiтлi мiкроскопа - тобто колiр повинен бути свiтло-синiй (блакитний), належна
286
фшсацш та фарбування мазюв у бшьшосп випадюв вiдмiчаeться при використанш реактиву, запропонованого Скляр О.1. та шшими.
Висновки.
1. Використовування 82%-ного розчину денатурованого етанолу дае можливiсть отримати ефективнiсть фшсацп та фарбування мазюв молока (секрету) вимеш корiв при субклiнiчному маститi в 100% випадках.
2. Денатурований етанол 82% виявився найбшьш економiчно вигiдним порiвняно з другими реактивами, оскiльки варткть його найнижча.
3. Використаний для фжсаци мазкiв денатурований етанол 82% е бшьш безпечний з точки зору техшки безпеки та саштари. При робой з ним можна обходитися загальноприйнятими ппешчними нормами.
Л1тература
1.Практикум по клинической диагностике с рентгенологией. / [Беляков И.М., Дугин Л.Г., Кондратьев В.С., Ленец А.И.]. - Москва «Колос»,1992.-286
2.Гончаренко I. Саштарна яюсть молока залежно вiд хiмiчного складу / Гончаренко I. - Ветеринарна медицина Украши. 2002-№10 С.32-33.
3.Машкiн M.I. Технологiя виробництва молока i молочних продуктiв / МХМашюн, Н.М.Париш. -Кшв «Вища освiта» - 2006 - 351с.
4.Скляр O.I. Цитологiчний аналiз молока здорових корiв та секрету вименi при захворюванш на субклiнiчний мастит / O.I. Скляр, I.O. Скляр. - Збiрник наукових праць ХДЗВА Випуск 20, частина 2, том 2. Ветеринарш науки. С.132-136.
5. Держстандарт Украши - 2007 (ISO 13366-1:2008)
Summary Sklyar O.I. (Sklyr 19-56 @ and.ua) Sumskiy NAU т. Sumy PERFECTION OF METHOD OF PAINTING OF STROKES OF MILK
(TO THE SECRET) OF UDDER OF COWS FOR DETERMINING THE AMOUNT OF SOMATICHNKH OF CAGES AT SUBCLINICAL
VENERABLE
In this article a question is considered for the improvement of methods offixing and painting of strokes of milk (to the secret) udder of cows at subclinical mastitis for the count of somatic cages by the microscopic method of Preskotta-brida. The most effective is certain, comfortable in the use and economic advantageous реактив-82%-ний is denaturized ethanol. Failings are consideredранше the offered chemical reagents for jigging and painting of strokes of milk(to the secret) udder of cows.
Стаття надшшла до редакцИ 6.03.2010
287
