CC BY
28
ВАСКУЛОГЕННАЯ МИМИКРИЯ ПРИ МЕЛАНОМЕ: МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ И КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
Д.Л. Ротин1, К.С. Титов2, А.М. Казаков3
'Государственная Израильская больница «Шиба» (Тель ха-Шомер); Израиль, 52621 Рамат-Ган, Дорога Шиба, 2; 2ГБУЗ «Московский клинический научный центр им. А. С. Логинова» Департамента здравоохранения г. Москвы;
Россия, 111123 Москва, ш. Энтузиастов, 86; 3ФГБУ «НМИЦонкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России; Россия, 115478 Москва, Каширское ш, 24
Контакты: Алексей Михайлович Казаков hordavii@yandex.ru
Концепция васкулогенной мимикрии (ВМ) была введена для описания уникальной способности высокоагрессивных опухолевых клеток формировать капиллярно-подобные структуры и богатую матрицами структурированную сеть в трехмерной культуре, которая имитирует эмбриональную васкулогенную сеть. Сообщалось о ВМ в нескольких агрессивных опухолях, включая рак яичников, молочной железы, печени, легких, саркому, глиобластому. Следует отметить, что ВМ в меланоцитарных опухолях наиболее распространена и является наиболее изученной. Хотя большое внимание уделялось факторам, которые стимулируют или подавляют образование сосудистых каналов опухолевыми клетками, молекулярные механизмы, лежащие в основе этого явления, остаются загадочными. Этот обзор будет посвящен молекулярным детерминантам и ключевым сигнальным путям, участвующим в опухолевой ВМ. Исследование лекарственных препаратов, нацеленных на молекулярные сигнальные пути в ВМ, является областью проблем и надежд. Исследования на ВМ увеличат наши знания о молекулярных событиях, дающих агрессивным опухолевым клеткам пластичность, что приводит к их способности имитировать сосудистую систему. На сегодняшний день существует мало функциональных данных, которые показывают, как каналы, связанные с опухолевыми клетками, способствуют общей выживаемости опухоли. Однако даже среди исследователей, которые поставили под сомнение концепцию ВМ как важнейшей системы кровообращения, в целом существует консенсус о том, что прогностическое значение PAS-положительных паттернов важно.
Ключевые слова: васкулогенная мимикрия, меланома, прогностическая роль
DOI: 10.17 650/1726-9784-2019-18-1-16-24
VASCULOGENIC MIMICRY IN MELANOMA: MOLECULAR MECHANISMS AND CLINICAL SIGNIFICANCE
D. L. Rotin1, K. S. Titov2, A. M. Kazakov3
1Sheba State Hospital of Israel (Tel HaShomer); 2 Derech Sheba, Ramat Gan 52621, Israel;
2A.S. Loginov Moscow Clinical and Scientific Center, Moscow Healthcare Department; 86 Shosse Entuziastov, Moscow 111123, Russia;
3N.N. Blokhin National Medical Research Center of Oncology of the Ministry of Health of the Russian Federation;
24 Kashyrskoe Shosse, Moscow 115478, Russia
The concept of vasculogenic mimicry (VM) was introduced to describe the unique ability of highly aggressive tumor cells to form capillary-like structures and matrix-rich patterned network in three-dimensional culture that mimic embryonic vasculogenic network. VM has been reported in several aggressive tumors including ovaries, breast, liver, lung cancer, sarcoma, glioblastoma. It is worth to note, that VM in melanocyte-originated tumors is the most studied. Although much attention has been focused on factors that stimulate or suppress vascular channel formation by tumor cells, the molecular mechanisms underlying this phenomenon remain enigmatic. This review will focus on molecular determinants and key signaling pathways involved in tumor VM. The exploration of drugs targeted at molecular signaling pathways in VM is a field of challenges and hopes. The research on VM will increase our knowledge of the molecular events causing aggressive tumor cells to gain plasticity resulting in their ability to mimic vasculature. To date, little functional data exist that show how tumor cell-lined channels contribute to the overall survival of the tumor. However, even among researches who have questioned the concept of VM as a crucial circulatory system, there is generally a consensus that the prognostic significance of PAS-positive patterns is valid.
Key words: vasculogenic mimicry, melanoma, prognostic
Васкулогенная мимикрия и другие типы альтернативного неоангиогенеза
Феномен васкулогенной мимикрии (ВМ) заключается в формировании капиллярно-подобных структур в некоторых опухолях, в том числе в меланоме, и является одним из факторов, делающих опухоль более агрессивной [1—3]. Ангиогенез (от греч. «ан-гио» — сосуд, «генезис» — рождение) — физиологический процесс формирования новых сосудов на основе эндотелиальных клеток посткапиллярных венул. Васкулогенез — процесс формирования in situ новых микрососудов из ангиобластов, клеток-предшественниц эндотелиальных клеток. Образование сосудов путем ангиогенеза — важный жизненный компонент многих физиологических и некоторых патологических процессов [4]. Неоваскуляризация необходима для роста, выживания и метастазирования злокачественных солидных опухолей. Работы по изучению опухолевого ангиогенеза посвящены преимущественно злокачественным новообразованиям, хотя имеются отдельные исследования и в доброкачественных опухолях [5]. Следует понимать, что некоторые из этих «доброкачественных» вариантов могут представлять собой «предзлокачественные» процессы, например аденоматозный колоректальный полип. Для роста доброкачественных пролиферативных процессов также требуется наличие новообразованных сосудов. Долгие годы существовало мнение, что единственным механизмом неоваскуляризации является развитие сосудов из прорастающих эндотелио-цитов. Данный процесс служит главным ангиоген-ным механизмом при нормальном росте и развитии, а также при заживлении ран и ожогов. На сегодняшний день выявлено 5 моделей опухолевого неоангио-генеза:
1) прямое прорастание эндотелия;
2) «сосудистая непроходимость» (сосудистое расщепление);
3) вариант с предсуществующей васкуляризацией;
4) постнатальный васкулогенез из предшественников эндотелиоцитов;
5) ВМ [6].
Для удобства термин «ангиогенез» используется для обозначения всех вышеперечисленных типов образования кровеносных сосудов в опухоли. Тем не менее минимум 2 из этих 5 типов в действительности представляют собой васкулогенез.
Васкулогенная мимикрия. Определение
ВМ — формирование васкулярных каналов de novo, осуществляется высокоагрессивными или метастатическими опухолевыми клетками. Строго говоря, ВМ не считается «васкулогенным процессом», ведущим к формированию de novo кровеносных сосудов, выстланных эндотелием. Впервые данный феномен
был описан в 1999 г. A.J. Maniotis и соавт. Этими же авторами был предложен и термин «ВМ» для сформированных de novo сосудистых структур, отличных от истинного васкулогенеза [7]. При ВМ на гистологических срезах первичной и метастатической уве-альной меланомы человека наблюдались солидные и полые ШИК (ШИК-реакция, выявление в тканях гликопротеидов, мукополисахаридов, гликолипидов) — позитивные элементы микроваскулярной (микро-циркуляторной) сети, соединенные между собой петлями внеклеточного матрикса [7]. Отмечено, что до 45 % кровоснабжения увеальных меланом осуществляется через каналы ВМ. С использованием световой, электронной микроскопии и иммуноги-стохимии (меланоцитарные и эндотелиальные маркеры) обнаружено, что похожие на капилляры структуры (сети ВМ) состоят из внеклеточного матрикса, а снаружи выстланы клетками меланомы. В то же время эндотелиальные клетки отсутствуют в сети ВМ, хотя в просветах полостей обнаруживаются эритроциты. Внутренний слой микроваскулярных структур, выстланных снаружи клетками меланомы, состоит из белков внеклеточного матрикса, как то: ламинин, коллаген IV и VI типов, протеогликан гепарин-сульфат. Клетки агрессивной увеальной и кожной мела-номы способны воспроизвести солидные и полые матриксные каналы in vitro при отсутствии эндотелиальных клеток, фибробластов или растворимых факторов роста в 3-мерных культурах, содержащих Matrigel или растворимый коллаген I типа [7—10].
«Золотым стандартом» для характеристики и изучения клеток ВМ стала гистохимическая окраска ШИК, а также отсутствие экспрессии CD31 и CD34 по данным иммуногистохимии. CD31 — молекула адгезии эндотелиоцитов и тромбоцитов (PECAM1). Каналы ВМ позитивны по окраске ШИК, но негативны для CD31 (и CD34). Сеть ВМ определяется примерно в 34 % случаев первичных увеальной и кожной меланом [7, 11]. Можно выделить 4 главных характеристики сети при ВМ:
1) сосудистая сеть, выстланная опухолевыми клетками;
2) экспрессия примитивного фенотипа опухолевых клеток с преобладанием маркеров эндотелиаль-ных и стволовых клеток;
3) функциональная связь ВМ-сети с сосудами, выстланными эндотелием;
4) существование противотромботических агентов, которые содействуют кровотоку сквозь данную сеть, делая ее функциональной и важной для снабжения опухоли кислородом и другими питательными веществами.
На сегодняшний день ВМ обнаружена и изучена в целом ряде различных злокачественных опухолей, но меланома (увеальная и кожная) — преобладающий
тип опухоли в большинстве работ. В связи с этим мы приводим обзор исследований ВМ в меланоме и доброкачественных меланоцитарных опухолях.
Функциональная важность васкулогенной мимикрии
Ведутся дискуссии о том, является ли сеть при ВМ функционирующей или представляет собой артефакт из опухолевых клеток, помещенных рядом с кровеносными сосудами, или же это вообще процесс замещения эндотелиоцитов опухолевыми клетками, инвазирующими кровеносные сосуды.
В колоректальном раке обнаружены мозаичные сосуды, выстланные 2 типами клеток — эндотелием и опухолевыми. Предполагают, что опухолевые клетки выстилают просвет, наползая и замещая эндотелий, либо эндотелиальные клетки просто теряют способность к экспрессии CD31 [12, 13]. Концепция мозаичных сосудов не противоречит существованию ВМ. Наличие 2 типов сосудов — выстланных эндоте-лиальными и опухолевыми клетками, возможно, представляет 2 крайности, между которыми данные типы клеток присутствуют в сосудистой выстилке в различных процентных соотношениях. Вероятно, ВМ преобладает в ранней фазе опухоли, сосуды с эндотелием — в период, когда опухоль быстро увеличивается в размерах, а мозаичные сосуды — на промежуточной стадии опухолевого роста. На самой ранней стадии роста опухоли (<2 мм) васкуляризация не нужна, а питательные вещества и кислород проникают в нее из окружающей нормальной ткани путем простой диффузии [14].
Показана возможность переноса жидкости в культурах агрессивной увеальной меланомы in vivo [7, 15] и в мышиной модели человеческой меланомы кожи [9, 16] сетью ВМ. Также показано, что ВМ у пациентов с увеальной меланомой способна к переносу и циркуляции индоцианового зеленого in vivo [10, 17]. Это доказывает, что ВМ-сеть является функциональной, представляя собой альтернативный путь для питания опухоли. Допплеровское ультразвуковое исследование in vivo на мышиной модели человеческой меланомы кожи показывает функциональную связь и перфузию крови между мышиными сосудами с эндотелием и участками ВМ в меланоме человека [18].
Модели исследования васкулогенной мимикрии
Феномен ВМ был впервые обнаружен M.J. Hen-drix и соавт., которые внесли большой вклад в изучение сигнальных путей, контролирующих этот процесс. Множество исследований ВМ проведено in vitro. В in vitro моделях ВМ часто используется культивирование клеток в 3D-культуре на коллагене I типа (в качестве субстрата) [19]. Реже применяется трехмерный гель Matrigel [7]. Самыми частыми клеточными линиями для изучения ВМ являются челове-
ческие линии меланомы кожи C8161 (агрессивная) и C81—61 (низкоагрессивная) и человеческие линии увеальной меланомы MUM-2B, C918 (обе агрессивные) и MUM-2C (низкоагрессивная). Также применяются экспериментальные модели — для исследования ВМ у иммунодефицитных мышей NOD/SCID, иммунокомпетентных мышей C57BL/6 и мышей-альбиносов BALB/c. На этих животных используют обычно алло- и ксенотрансплантаты. Для модели с аллотрансплантатом используют клетки мышиной меланомы B16F10, а для моделей с ксенотрансплан-татом — вышеперечисленные клеточные линии меланомы человека [3, 7, 10, 15].
Характеристика клеток васкулогенной мимикрии меланомы
Существуют 2 главные теории онтогенеза сети при ВМ. Первая теория утверждает, что каналы выстланы опухолевыми клетками, подвергшимися дедифференцировке, т. е. клетками примитивного типа, с характеристиками разных типов клеток (эндотелий, опухолевые, стволовые и т. п.). Вторая теория говорит, что формирование сети ВМ происходит из стволовых опухолевых клеток [20—22].
Клетки каналов ВМ при меланоме напоминают недифференцированные примитивные стволовые клетки эмбрионального типа со схожей экспрессией генов и молекулярными механизмами [20]. Характерной чертой в этом случае является экспрессия генов множества клеточных линий (эндотелиальные, эпителиальные и гемопоэтические клетки, а также нейроны и миоциты) [23]. Более того, они экспрес-сируют некоторые гены эмбриональных стволовых клеток, например NODAL [24, 25]. Клетки меланомы с экспрессией АТФ-связывающего белка ABCB5 предположительно являются «стволовыми клетками меланомы» или «злокачественными инициирующими меланому клетками», они также склонны к формированию ВМ [26, 27]. Суперсемейство ABC состоит из активных мембранных транспортеров, экспресси-рующихся на стволовых / примитивных клетках. С ними связана мультилекарственная резистентность. CD133 (human prominin 1), трансмембранный глико-протеин, обнаружен в стволовых клетках вместе с ABCB5 и васкулярным эндотелиальным кадхери-ном (синонимы: кадхерин-5, CD144) [28]. Клетки увеальной меланомы, способные к формированию каналов ВМ, экспрессируют другой маркер стволовых клеток — CD271 (синонимы: фактор роста нервов (NGFR), p75NTR). Клетки увеальной меланомы, не участвующие в формировании ВМ-каналов, не экс-прессируют CD271 [29].
Молекулярный анализ более 30 клеточных линий человеческих меланом кожи выявил, что ряд генов, включенных в ангиогенез/васкулогенез, кодирующих
VE-кадхерин, тирозинкиназу с доменами 1 EGFR и фибронектин-1, и множество эпителий-ассоции-рованных генов, например рецептор 2 эфрина тип А (EphA2), экспрессируются в клетках агрессивных меланом при сравнении с менее агрессивными клетками [23]. Более того, обнаружено, что гены, связанные с ангиогенезом, EphA и VEGF, имеют уровень экспрессии выше в очагах сети ВМ по сравнению с другими участками культур клеток агрессивной кожной и увеальной меланомы [30].
Молекулярные изменения в васкулогенной мимикрии меланомы и экспериментальные попытки ее ингибирования
EphA2/VE-кадхерин/FAK (фокальная киназа адгезии). Сосудистые сигнальные пути преобладают в образовании ВМ-сети. Среди молекул, вовлеченных в эти пути, — EphA2 и VE-кадхерин, определяющие некоторые свойства ВМ. Рецепторы эфрина представляют собой большое семейство тирозинки-наз — мембранных протеинов, участвующих в эмбриональном васкулогенезе и взрослом ангиогенезе. Клетки агрессивной меланомы экспрессируют различные эфриновые рецепторы и лиганды, включая EphA2 и его лиганд — Ephrin-A1 [23, 30, 31]. EphA2 экспрессируется эпителиальными клетками и важен для ангиогенеза взрослых и неоваскуляризации опухоли [32]. Он гиперэкспрессируется и фосфорилиру-ется в агрессивных ВМ-формирующих опухолевых клетках увеальной меланомы in vitro, нарушение его регуляции предотвращает образование ВМ [19]. Ин-гибирование EphA2 в агрессивных клетках меланомы in vitro ведет к нарушению их способности формировать ВМ [33].
VE-кадхерин — трансмембранный протеин, молекула адгезии, специфичная для эндотелиоцитов и важная для эмбрионального васкулогенеза. Он гиперэкспрессируется in vitro в ВМ-формирующих клетках кожных и увеальных меланом, а его нокаут предотвращает формирование ВМ [34]. Генистеин — растительный эстроген, ингибитор ВМ в клетках увеальной меланомы in vitro и в мышиной ксеномо-дели увеальной меланомы (нарушает регуляцию VE-кадхерина) [35]. Подобно этому, ликорина гидрохлорид, активный компонент традиционной китайской медицины (Lycoris radiata), ингибирует формирование ВМ в культурах клеток кожной меланомы человека на примере мышиной ксеномодели, нарушая регуляцию экспрессии VE-кадхерина [36].
Оба фактора — EphA2 и VE-кадхерин — обнаруживаются в межклеточных контактах в культурах кожной и увеальной меланомы человека, а также на срезах ткани увеальной меланомы. Нокаут экспрессии VE-кадхерина ведет к перераспределению EphA2 на мембране и потере EphA2 из межклеточных
контактов с одновременным появлением его в цитоплазме [37]. Напротив, нокаут гена EphA2 не меняет локализации VE-кадхерина.
Действие EphA2 и VE-кадхерина опосредуется цитоплазматическими ферментами — FAK и фосфо-инозитид-3-киназой (PI3K). Эти киназы подвергаются фосфорилированию в культурах клеток агрессивных меланом, а в клетках менее агрессивных меланом и нормальных меланоцитах — нет. Фермент FRNK прерывает сигнальный путь FAK, ингибирует развитие ВМ в агрессивной меланоме in vitro, нарушая регуляцию экстрацеллюлярных сигнал-ре-гулирующих киназ 1 и 2 (ERK1/2) и урокиназную активность. При этом FRNK не воздействует на ма-триксные металлопротеазы (MT1-MMP и MMP2). Прямое ингибирование ERK1/2 приводит к снижению активности MT1-MMP и MMP2, указывая на существование альтернативных сигнальных путей, не зависящих от FAK, например сигнальный путь MAPK/ERK [38, 39]. Этот сигнальный путь связан с действием форсколина — ингибитора ВМ в клетках агрессивных меланом in vitro [40]. Форсколин продуцируется растением Indian Coleus и ингибирует ВМ за счет воздействия на PI3K. Также форсколин может активироваться протеином Epac/Rap1 [40]. Курку-мин — природный фенол, ингибирует ВМ в мышиной алломодели через нарушение регуляции EphA2, PI3K и MMP2 [41].
Внеклеточный матрикс и металлопротеазы. Нарушение регуляции EphA2 и VE-кадхерина изменяет активность металлопротеаз и ведет к расщеплению ламинина с перестройкой специфического опухолевого микроокружения. Ламинины — гликопротеины базальной мембраны.
Компоненты внеклеточного матрикса, связанные с клеточной мембраной через рецепторы инте-гринов, способны модулировать клеточную адгезию и дифференцировку. Часто наблюдается и обратный эффект. Например, клетки слабоагрессивной мела-номы кожи, выращенные на матриксе из коллагена I типа, обработанном агрессивными (формирующими ВМ) клетками, экспрессируют панели генов, характерные для агрессивных клеток [42, 43]. Матриксные металлопротеазы — Zn-зависимые эндопептидазы, участвующие в деградации белков внеклеточного матрикса, и как результат этого вовлеченные во множество других функций: клеточную миграцию, пролиферацию, дифференцировку.
Обнаружено, что содержание MT1-MMP (синоним — MMP14), MMP2 и у2-цепей ламинина 5 повышено в клетках агрессивных кожных и увеальных меланом in vitro, и эти протеины локализуются в зонах ВМ, в то время как в клетках слабоагрессивных кожных и увеальных меланом их экспрессия снижена. Ингибирование MT1-MMP, MMP2 или у2-цепей
ламинина 5 препятствует развитию ВМ [42]. Было показано, что ингибирование PI3K ведет к снижению активности MT1-MMP (а также MMP2) и блокирует расщепление у2-цепей ламинина 5, т. е. блокирует становление ВМ в меланоме [44]. Талидомид ингибирует ВМ в мышиной алломодели in vivo, нарушая регуляцию MMP2 и VEGF [45]. Доксициллин также снижает экспрессию MMP2, предотвращая развитие ВМ в мышиной алломодели меланомы [46]. Тетрациклин-3 (синонимы: CMT-3, COL-3) ингибирует экспрессию MMP2 и VE-кадхерина in vitro в клетках агрессивной меланомы, блокируя ВМ [47]. Вадимезан (синонимы: DMXAA, AS1404), разрывающая сосуды молекула, ингибирует экспрессию ММР2 в культурах клеток агрессивной меланомы, однако последующее добавление SB203 580 (селективного ингибитора p38 MAPK) восстанавливает ВМ без влияния на экспрессию MMP2 [48].
Эмбриональные молекулы стволовых клеток. Как отмечалось выше, в опухолевых клетках, участвующих в ВМ, гиперэкспрессированы некоторые маркеры стволовых клеток. Наиважнейшие из этих молекул — Nodal и Notch. Nodal — регулятор стволовых клеток, экспрессируется в эмбриогенезе и принадлежит к семейству трансформирующего фактора роста бета (TGFß). Семейство рецептора Notch также важно для эмбриональных стволовых клеток, в нем выделяют 4 трансмембранных рецептора (Notch1—4) и 5 связанных с мембраной лигандов. Notch4 экс-прессируется в эндотелиальных клетках, участвуя в развитии и перестройке сосудов, включая опухолевый ангиогенез. В клетках агрессивной меланомы экспрессируется только Notch4. Нарушение регуляции Notch4 снижает экспрессию Nodal в клеточных линиях агрессивной меланомы и нарушает формирование ВМ в клетках агрессивной меланомы. Добавление экзогенного Nodal к этим клеткам восстанавливает ВМ, а также экспрессию Nodal и VE-кад-херина. Очевидно, Notch4 запускает ВМ и способствует ей через нарушения регуляции экспрессии протеина Nodal [24, 49]. Воздействие на клетки агрессивной меланомы кожи человека антителами к Nodal ведет к снижению способности формировать ВМ [50].
Гипоксия, индуцирующий гипоксию фактор 1 альфа (HIF1a), реактивные виды кислорода (ROS) и VEGF. Гипоксия тканей играет важную роль в формировании сети ВМ в опухоли. Гипоксия стабилизирует фактор HIFla, который активирует экспрессию ряда генов (VEGF и др.), запуская процесс выживания при низком содержании кислорода. Гипоксия индуцирует экспрессию HIFla, MMP2 и VEGF, содействуя формированию ВМ in vivo. При инокуляции мышиных меланомных клеток в ишемизированные конечности мыши при неишемизированном контроле развиваются меланомы примерно равных разме-
ров в обоих типах конечностей, хотя начальный рост существенно быстрее при ишемии конечностей [51].
Онкоген BCL2 также участвует в индукции ВМ при гипоксии в культурах клеток меланомы [52]. В агрессивной меланоме при гипоксии повышается уровень ROS и HIF1a, что усиливает способность клеток к формированию сети ВМ, в то время как ингибирование HIF1a нарушает образование ВМ-сети in vitro и in vivo в алломодели. Также ингибирование ROS блокирует развитие сети ВМ в мышиной алломодели [53]. Все это частично объясняет низкую эффективность (нередко — метастатический эффект) антиангиогенной терапии, которая индуцирует гипоксию опухоли [54—56]. Антиоксиданты снижают уровень ROS, VEGF, VEGFR1, VEGFR2, нарушая формирование ВМ в клетках кожной меланомы in vitro и в мышиной алломодели [57].
Ингибиторы ангиогенеза — ангинекс, TNP-470 и эндостатин — не препятствуют формированию ВМ в клеточных культурах меланомы [58].
Внутриклеточный домен трансмембранного рецептора VEGFR-A — VEGFR1 обладает тирозинкиназной активностью и играет важную роль в физиологическом ангиогенезе. VEGFR1 гиперэкспрессируется в субпопуляции АВСВ5-позитивных меланома-иници-ирующих клеток, связанных с ВМ. Нокдаун VEGFR1 ингибирует ВМ в мышиной ксеномодели [26]. Трансмембранный рецептор VEGFR-C и VEGFR-D VEGFR3 также обладает тирозин-протеинкиназной активностью, играя важную роль в лимфангиогенезе. VEGFR3 участвует в формировании сети ВМ in vitro в культуре меланомы кожи [59]. Эндотелиновый рецептор В принимает участие во взаимодействии клеток меланомы и ее стромы, обеспечивая рост опухоли, неоваскуляризацию, лимфангиогенез и мета-стазирование. Существуют перекрестные связи между эндотелиновым рецептором В и VEGFR3 [59]. Эндо-телин-1 в комбинации с VEGFC усиливает развитие сети ВМ по сравнению с их одиночным воздействием [59]. Отметим, что увеальные меланомы метаста-зируют гематогенным путем, а для диссеминации меланомы кожи важна также лимфатическая система.
Другие молекулы и сигнальные пути трансдук-ции. Облегчение кровотока для функционирования ВМ-каналов частично достигается нарушением свертывания крови. Регуляция тканевого фактора (TF), ингибиторов 1 и 2 TF-пути (TFPI1 и TFPI2) нарушена в агрессивных кожной и увеальной меланомах in vitro по сравнению с менее агрессивными. TF — поверхностный рецептор в каскаде коагуляции (внешний путь коагуляции), кофактор для фактора VIIa. Его активность в клетках меланомы регулируется TFPI1, облегчая циркуляцию жидкости в сети ВМ. Формирование ВМ может идти и альтернативным путем — через TFPI2 (коагуляция-независимый механизм).
Выключение TFPI2 подавляет активность MMP2, полностью блокируя формирование сети ВМ в агрессивных меланомах in vitro [18].
Дополнительные молекулы включают экстрацел-люлярные секретирующиеся протеины, например пигментный эпителиальный фактор, костный мор-фогенетический протеин 4, и интрацеллюлярные молекулы, например ингибитор связывания ДНК/ дифференцировки протеин 2 и каспаза-3; все они, по современным литературным данным, принимают участие в формировании ВМ-каналов.
Пигментный эпителиальный фактор — глико-протеин суперсемейства ингибиторов сериновых протеаз. Он связывается с поверхностными рецепторами, его нокдаун в кожной меланоме тормозит ВМ in vitro [60].
Другой внеклеточный белок — BMP4 — запускает образование сети ВМ. BMP4 — секретирующийся фактор роста суперсемейства TGFp. Он контролирует пролиферацию, дифференцировку, хемотаксис, подвижность и клеточную гибель. Соответственно, он связан с прогрессированием опухоли. Ингибиро-вание BMP4 приводит к нарушению регуляции EphA2 и экспрессии VE-кадхерина — нарушает развитие ВМ в кожной меланоме in vitro [61, 62].
Каспаза-3 — еще один внутриклеточный белок, связанный с построением ВМ-сети. Каспазы — семейство цистеиновых протеаз, участвующих в апо-птозе и ряде других процессов (пролиферация, дифференцировка, миграция). Высокий уровень каспазы-3 определяется в клетках сетей ВМ мелано-мы in situ по сравнению с другими клетками опухоли. Каспаза-3 способствует развитию ВМ за счет расщепления про-ММР2 с продукцией MMP2 [63]. Активная каспаза-3 запускает формирование сети ВМ Апоптотический индекс всегда выше в агрессивных ВМ-формирующих меланомах in vitro, чем в слабоагрессивных, не формирующих ВМ [57]. Блокирование активности каспазы-3 разными ингибиторами блокирует и формирование сети ВМ [64].
Галектин-3 — р-галактозид-связывающий протеин семейства лектинов, участвующий в прогрес-сировании опухоли и метастазировании. Нокаут галектина-3 снижает экспрессию VE-кадхерина и фибронектина, блокирует формирование ВМ в агрессивной меланоме кожи in vitro и снижает
экспрессию VE-кадхерина и ММР2 в мышиной ксеномодели [65].
Перспективы терапевтического воздействия на васкулогенную мимикрию
Становление ВМ — сложный биологический процесс, в котором задействовано несколько сигнальных путей. Тот факт, что ВМ встречается в различных типах агрессивных опухолей (при раке молочной железы, простаты, яичника, легкого, почки, саркоме мягких тканей), свидетельствует о том, что мы имеем дело с новой характеристикой агрессивной опухоли. Накапливается все больше экспериментальных данных, указывающих на высокую статистическую корреляцию между способностью опухоли к ВМ и частотой метастазирования. Так, у пациентов с кожной и увеальной меланомой с участками ВМ прогноз хуже, чем у пациентов без ВМ в опухоли [9, 11, 66—69]. Возможно, это положение также справедливо и для других злокачественных новообразований [69].
К сожалению, в доброкачественных опухолях ангиогенез недостаточно изучен. Часто в качестве индекса для оценки распространенности ангиогене-за в опухолях используется микрососудистая плотность. Этот показатель выше в меланоме коже по сравнению с невусами [70], что указывает на меньшую неоваскуляризацию доброкачественных образований. «Псевдоваскулярные пространства», выстланные меланоцитами, отмечены в 3 пигментных невусах [71] и в 3 меланоцитарных [72]. Кроме того, показано, что инъекция анестетика не вызывает развитие сосудистых пространств, что доказывает, что это не артефакт от инъекции [73]. Необходимы дальнейшие исследования невусов, особенно диспласти-ческих, чтобы выяснить связь между ВМ и риском малигнизации [74]. Идентификация ВМ в опухоли в перспективе поможет контролировать течение болезни в кожной и увеальной меланомах, а также и в других типах опухолей [75—77].
Очевидно, необходимы дальнейшие исследования ВМ, ее молекулярных детерминант и сигнальных путей. Обнаружение лекарственных препаратов, эффективно блокирующих ВМ, позволит обосновать новый подход к лечению агрессивной опухоли, что в итоге должно улучшить эффективность современных методов лечения злокачественных новообразований.
22 Обзоры литературы
ЛИТЕРАТУРА / REFERENCES
1. Jain R.K., Carmeliet P. SnapShot: Tumor angiogenesis. Cell 2012;149(6):1408-1408.e1. DOI: 10.1016/j.cell.2012.05.025. PMID: 22682256.
2. Hilen F., Griffioen A.W. Tumour vascularization: sprouting angiogenesis and beyond. Cancer Metastasis Rev 2007;26(3-4):489-502.
DOI: 10.1007/s10555-007-9094-7. PMID: 17717633.
3. Seftor R.E., Hess A.R., Seftor E.A. et al. Tumor cell vasculogenic mimicry: from controversy to therapeutic promise. Am J Pathol 2012;181(4):1115-25.
DOI: 10.1016/j.ajpath.2012.07.013. PMID: 22944600.
4. Kirschmann D.A., Seftor E.A., Hardy K.M. et al. Molecular pathways: vasculogenic mimicry in tumor cells: diagnostic and therapeutic implications. Clin Cancer Res 2012;18(10):2726-32. DOI: 10.1158/1078-0432.CCR-11-3237. PMID: 22474319.
5. Qiao L., Liang N., Zhang J. et al. Advanced research on vasculogenic mimicry in cancer. J Cell Mol Med 2015;19(2):315-26.
DOI: 10.1111/jcmm.12496. PMID: 25598425.
6. Chung H.J., Mahalingam M. Angiogenesis, vasculogenic mimicry and vascular invasion in cutaneous malignant melanoma - implications for therapeutic strategies and targeted therapies. Expert Rev Anticancer Ther 2014;14(5):621-39. DOI: 10.1586/14737140.2014.883281. PMID: 24506089.
7. Maniotis A.J., Folberg R., Hess A. et al. Vascular channel formation by human melanoma cells in vivo and in vitro: vasculogenic mimicry. Am J Pathol 1999;155(3):739-52.
DOI: 10.1016/S0002-9440(10)65173-5. PMID: 10487832.
8. Folberg R., Hendrix M.J., Maniotis A.J. Vasculogenic mimicry and tumor angiogenesis. Am J Pathol 2000;156(2):361-81.
DOI: 10.1016/S0002-9440(10)64739-6. PMID: 10666364.
9. Clarijs R., van Dijk M., Ruiter D.J., de Waal R.M. Functional and morphologic analysis of the fluid-conducting meshwork in xenografted cutaneous and primary uveal melanoma. Invest Ophthalmol Vis Sci 2015;46(9):3013-20. DOI: 10.1167/iovs.04-0876.
PMID: 16123395. 10. Frenkel S., Barzel I., Levy J. et al. Demonstrating circulation in vasculogenic mimicry patterns of uveal melanoma by confocal indocyanine
green angiography. Eye (Lond) 2008;22(7):948-52. DOI: 10.1038/sj.eye.6702783. PMID: 17363922.
11. van Beurden A., Schmitz R.F.,
van Dijk C.M., Baeten C.I. Periodic acid Schiff loops and blood lakes associated with metastasis in cutaneous melanoma. Melanoma Res 2012;22(6):424-9. DOI: 10.1097/CMR.0b013e328358b355. PMID: 23010821.
12. Chang Y.S., di Tomaso E., McDonald D.M. et al. Mosaic blood vessels in tumors: frequency of cancer cells in contact with flowing blood. Proc Natl Acad Sci USA 2000;97(26):14608-13.
DOI: 10.1073/pnas.97.26.14608. PMID: 11121063.
13. di Tomaso E., Capen D., Haskell A. et al. Mosaic tumor vessels: cellular basis and ultrastructure of focal regions lacking endothelial cell markers. Cancer Res 2005;65(13):5740-9.
DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-04-4552. PMID: 15994949.
14. Chen L., Zhang S., Li X. et al. A pilot study of vasculogenic mimicry immunohistochemical expression in intraocular melanoma model. Oncol Rep 2009;21(4):989-99. PMID: 19287998.
15. Maniotis A.J., Chen X., Garcia C. et al. Control of melanoma morphogenesis, endothelial survival, and perfusion by extracellular matrix. Lab Invest 2012;82(8):1031-43. PMID: 12177242.
16. Clarijs R., Otte-Holler I., Ruiter D.J., de Waal R.M. Presence of a fluid-conducting meshwork in xenografted cutaneous and primary human uveal melanoma. Invest Ophthalmol Vis Sci 2002;43(4):912-8. PMID: 11923228.
17. Mueller A.J., Bartsch D.U., Folberg R. et al. Imaging the microvasculature
of choroidal melanomas with confocal indocyanine green scanning laser ophthalmoscopy. Arch Ophthalmol 1998;116(1):31 —9. PMID: 9445206.
18. Ruf W., Seftor E.A., Petrovan R.J. et al. Differential role of tissue factor pathway inhibitors 1 and 2 in melanoma vasculogenic mimicry. Cancer Res 2003;63(17):5381-9. PMID: 14500372.
19. Hess A.R., Seftor E.A., Gardner L.M. et al. Molecular regulation of tumor cell vasculogenic mimicry by tyrosine phosphorylation: role of epithelial cell kinase (Eck/EphA2). Cancer Res 2001;61(8):3250-5. PMID: 11309274.
20. Girouard S.D., Murphy G.F. Melanoma stem cells: not rare, but well done. Lab Invest 2011;91(5):647-64.
DOI: 10.1038/labinvest.2011.50. PMID: 21445060.
21. Sajithlal G.B., McGuire T.F., Lu J. et al. Endothelial-like cells derived directly from human tumor xenografts.
Int J Cancer 2010;127(10):2268-78. DOI: 10.1002/ijc.25251. PMID: 20162569.
22. Dunleavey J.M., Dudley A.C. Vascular mimicry: concepts and implications for anti-angiogenic therapy. Curr Angiogenes 2012;1(2):133-8.
DOI: 10.2174/2211552811201020133. PMID: 24729954.
23. Seftor E.A., Meltzer P.S., Schatteman G.C. et al. Expression of multiple molecular phenotypes
by aggressive melanoma tumor cells: role in vasculogenic mimicry. Crit Rev Oncol Hematol 2002;44(1):17-27. PMID: 12398997.
24. McAllister J.C., Zhan Q., Weishaupt C. et al. The embryonic morphogen, Nodal, is associated with channel-like structures in human malignant melanoma xenografts. J Cutan Pathol 2010;37(Suppl 1):19-25.
DOI: 10.1111/j.1600-0560.2010.01503.x. PMID: 20482672.
25. Khalkhali-Ellis Z., Kirschmann D.A., Seftor E.A. et al. Divergence(s) in Nodal signaling between aggressive melanoma and embryonic stem cells.
Int J Cancer 2015;136(5):E242-51. DOI: 10.1002/ijc.29198. PMID: 25204799.
26. Frank N.Y., Schatton T., Kim S. et al. VEGFR-1 expressed by malignant melanoma-initiating cells is required for tumor growth. Cancer Res 2011;71(4):1474-85.
DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-10-1660. PMID: 21212411.
27. Murphy G.F., Wilson B.J., Girouard S.D. et al. Stem cells and targeted approaches to melanoma cure. Mol Aspects Med 2014;39:33-49. DOI: 10.1016/j.mam.2013.10.003. PMID: 24145241.
28. Lai C.Y., Schwartz B.E., Hsu M.Y. CD133+ melanoma subpopulations contribute to perivascular niche morphogenesis and tumorigenicity through vasculogenic mimicry. Cancer Res 2012;72(19):5111-8.
DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-12-0624. PMID: 22865455.
29. Valyi-Nagy K., Kormos B., Ali M. et al. Stem cell marker CD271 is expressed by vasculogenic mimicry-forming uveal melanoma cells in three-dimensional cultures. Mol Vis 2012;18:588-92. PMID: 22419851.
30. Demou Z.N., Hendrix M.J. Microgenomics profile the endogenous
angiogenic phenotype in subpopulations of aggressive melanoma. J Cell Biochem 2008;105(2):562-73. DOI: 10.1002/ jcb.21855. PMID: 18655191.
31. Bittner M., Meltzer P., Chen Y. et al. Molecular classification of cutaneous malignant melanoma by gene expression profiling. Nature 2000;406(6795): 536-40. DOI: 10.1038/35020115. PMID: 10952317.
32. Hess A.R., Margaryan N.V., Seftor E.A., Hendrix M.J. Deciphering the signaling events that promote melanoma tumor cell vasculogenic mimicry and their link to embryonic vasculogenesis:
role of the Eph receptors. Dev Dyn 2007;236(12):3283-96. DOI: 10.1002/dvdy.21190. PMID: 17557303.
33. Margaryan N.V., Strizzi L., Abbott D.E. et al. EphA2 as a promoter of melanoma tumorigenicity. Cancer Biol Ther 2009;8(3):279-88. PMID: 19223760.
34. Hendrix M.J., Seftor E.A., Meltzer P.S. et al. Expression and functional significance of VE-cadherin in aggressive human melanoma cells: role in vasculogenic mimicry. Proc Natl Acad Sci USA 2001;98(14):8018-23.
DOI: 10.1073/pnas.131209798. PMID: 11416160.
35. Cong R., Sun Q., Yang L. et al. Effect of Genistein on vasculogenic mimicry formation by human uveal melanoma cells. J Exp Clin Cancer Res 2009;28:124. DOI: 10.1186/1756-996628-124. PMID: 19735546.
36. Liu R., Cao Z., Tu J. et al. Lycorine hydrochloride inhibits metastatic melanoma cell-dominant vasculogenic mimicry. Pigment Cell Melanoma Res 2012;25(5):630-8. DOI: 10.1111/ j.1755-148X.2012.01036.x.
PMID: 22781316.
37. Hess A.R., Seftor E.A., Gruman L.M. et al. VE-cadherin regulates EphA2 in aggressive melanoma cells through a novel signaling pathway: implications. Cancer Biol Ther 2006;5(2):228-33. PMID: 16481735.
38. Hess A.R., Postovit L.M., Margaryan N.V. et al. Focal adhesion kinase promotes the aggressive melanoma phenotype. Cancer Res 2005;65(21):9851-60.
DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-05-2172. PMID: 16267008.
39. Hess A.R., Hendrix M.J. Focal adhesion kinase signaling and the aggressive melanoma phenotype. Cell Cycle 2006;5(5):478-80.
DOI: 10.4161/cc.5.5.2518. PMID: 16552181.
40. Lissitzky J.C., Parriaux D., Ristorcelli E. et al. Cyclic AMP signaling as a mediator of vasculogenic mimicry in aggressive
human melanoma cells in vitro. Cancer Res 2009;69(3):802-9. DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-08-2391. PMID: 19176384.
41. Chen L.X., He Y.J., Zhao S.Z. et al. Inhibition of tumor growth and vasculogenic mimicry by curcumin through down-regulation of the EphA2/ PI3K/MMP pathway in a murine choroidal melanoma model. Cancer Biol Ther 2011;11(2):229-35.
PMID: 21084858.
42. Seftor R.E., Seftor E.A., Koshikawa N. et al. Cooperative interactions of laminin 5 y2 chain, matrix metalloproteinase-2, and membrane type-1-matrix/ metalloproteinase are required for mimicry of embryonic vasculogenesis by aggressive melanoma. Cancer Res 2011;61(17):6322-7.
PMID: 11522618.
43. Seftor E.A., Meltzer P.S., Kirschmann D.A. et al. The epigenetic reprogramming of poorly aggressive melanoma cells by a metastatic microenvironment. J Cell Mol Med 2006;10(1):174-96. PMID: 16563230.
44. Hess A.R., Seftor E.A., Seftor R.E., Hendrix M.J. Phosphoinositide 3-kinase regulates membrane type 1-matrix metalloproteinase (MMP) and MMP-2 activity during melanoma cell vasculogenic mimicry. Cancer Res 2003;63(16):4757-62. PMID: 12941789.
45. Zhang S., Li M., Gu Y. et al. Thalidomide influences growth and vasculogenic mimicry channel formation in melanoma. J Exp Clin Cancer Res 2008;27:60. DOI: 10.1186/1756-996627-60. PMID: 18983651.
46. Zhang S., Zhang D., Sun B. Vasculogenic mimicry: current status and future prospects. Cancer Lett 2007;254(2):157-64.
DOI: 10.1016/j.canlet.2006.12.036. PMID: 17306454.
47. Seftor R.E., Seftor E.A.,
Kirschman D.A., Hendrix M.J. Targeting the tumor microenvironment with chemically modified tetracyclines: inhibition of laminin 5 y2 chain promigratory fragments and vasculogenic mimicry. Mol Cancer Ther 2002;1(13): 1173-9. PMID: 12479698.
48. Zhao L., Marshall E.S., Kelland L.R., Baguley B.C. Evidence for the involvement of p38 MAP kinase in the action of the vascular disrupting agent 5,6-dimethylxanthenone-4-acetic acid (DMXAA). Invest New Drugs 2007;25(3):271-6.
DOI: 10.1007/s10637-006-9029-0. PMID: 17203401.
49. Hardy K.M., Kirschmann D.A., Seftor E.A. et al. Regulation of the embryonic morphogen Nodal by Notch4
facilitates manifestation of the aggressive melanoma phenotype. Cancer Res 2010;70(24):10340-50. DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-10-0705. PMID: 21159651.
50. Strizzi L., Postovit L.M., Margaryan N.V. et al. Nodal as a biomarker for melanoma progression and a new therapeutic target for clinical intervention. Expert Rev Dermatol 2009;4(1):67-78.
DOI: 10.1586/17469872.4.1.67. PMID: 19885369.
51. Sun B., Zhang D., Zhang S. et al. Hypoxia influences vasculogenic mimicry channel formation and tumor invasion-related protein expression
in melanoma. Cancer Lett 2007;249(2):188-97. DOI: 10.1016/j.canlet.2006.08.016. PMID: 16997457.
52. Zhao N., Sun B.C., Sun T. et al. Hypoxia-induced vasculogenic mimicry formation via VE-cadherin regulation by Bcl-2. Med Oncol 2012;29(5):3599-607. DOI: 10.1007/s12032-012-0245-5. PMID: 22562824.
53. Comito G., Calvani M., Giannoni E. et al. HIF-1a stabilization by mitochondrial ROS promotes MET-depen-dent invasive growth and vasculogenic mimicry in melanoma cells. Free Radic Biol Med 2011;51(4):893-904.
DOI: 10.1016/j.freeradbiomed. 2011.05.042. PMID: 21703345.
54. Wu S., Singh R.K. Resistance to chemotherapy and molecularly targeted therapies: rationale for combination therapy in malignant melanoma. Curr Mol Med 2011;11(7):553-63. PMID: 21707515.
55. Benazzi C., Al-Dissi A., Chau C.H. et al. Angiogenesis in spontaneous tumors and implications for comparative tumor biology. Scientific World Journal 2014;2014:919570.
DOI: 10.1155/2014/919570. PMID: 24563633.
56. Schnegg C.I., Yang M.H., Ghosh S.K., Hsu M.Y. Induction of vasculogenic mimicry overrides VEGF-A silencing and enriches stem-like cancer
cells in melanoma. Cancer Res 2015;75(8):1682-90. DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-1855. PMID: 25769726.
57. Vartanian A.A., Burova O.S., Stepanova E.V. et al. Melanoma vasculogenic mimicry is strongly related to reactive oxygen species level. Melanoma Res 2007;17(6):370-9. DOI: 10.1097/CMR.0b013e3282f1d2ec. PMID: 17992120.
58. van der Schaft D.W., Seftor R.E., Seftor E.A. et al. Effects of angiogenesis inhibitors on vascular network formation
by human endothelial and melanoma cells. J Natl Cancer Inst 2004;96(19):1473-7. DOI: 10.1093/jnci/ djh267. PMID: 15467037.
59. Spinella F., Caprara V., Di Castro V. et al. Endothelin-1 induces the transactivation of vascular endothelial growth factor receptor-3 and modulates cell migration and vasculogenic mimicry in melanoma cells. J Mol Med (Berl) 2013;91(3):395-405.
DOI: 10.1007/s00109-012-0956-2. PMID: 22965194.
60. Orgaz J.L., Ladhani O., Hoek K.S. et al. Loss of pigment epithelium derived factor enables migration, invasion and metastatic spread of human melanoma. Oncogene 2008;28(47):4147-61. DOI: 10.1038/onc.2009.284.
PMID: 19767774.
61. Rothhammer T., Bataille F., Spruss T. et al. Functional implication of BMP4 expression on angiogenesis in malignant melanoma. Oncogene 2007;26(28):4158-70. DOI: 10.1038/sj.onc.1210182.
PMID: 17173062.
62. Su F., Li B., Wang J. et al. Molecular regulation of vasculogenic mimicry in human uveal melanoma cells: role of helix-loop-helix ID2. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol 2009;247(3):411-9. DOI: 10.1007/s00417-008-1008-z. PMID: 19043732.
63. Liu Y.R., Sun B., Zhao X.L. et al. Basal caspase-3 activity promotes migration, invasion, and vasculogenic mimicry formation of melanoma cells. Melanoma Res 2013;23(4):243-53.
DOI: 10.1097/CMR.0b013e3283625498. PMID: 23695439.
64. Vartanian A.A., Burova O.S., Stepanova E.V., Baryshnikov A.Y. The
involvement of apoptosis in melanoma vasculogenic mimicry. Melanoma Res 2007;17(1):1-8. DOI: 10.1097/ CMR.0b013e3280112b76. PMID: 17235236.
65. Mourad-Zeidan A.A., Melnikova V.O., Wang H. et al. Expression profiling
of galectin-3-depleted melanoma cells reveals its major role in melanoma cell plasticity and vasculogenic mimicry. Am J Pathol 2008;173(6):1839-52. DOI: 10.2353/ajpath.2008.080380. PMID: 18988806.
66. Makitie T., Summanen P., Tarkkanen A., Kivela T. Microvascular loops and networks as prognostic indicators in choroidal and ciliary body melanomas.
J Natl Cancer Inst 1999;91(4):359-67. PMID: 10050870.
67. Folberg R., Rummelt V., Parys-Van Ginderdeuren R. et al. The prognostic value of tumor blood vessel morphology in primary uveal melanoma. Ophthalmology 1993;100(9):1389-98. PMID: 8371929.
68. Warso M.A., Maniotis A.J., Chen X.
et al. Prognostic significance of periodic acid-Schiff-positive patterns in primary cutaneous melanoma. Clin Cancer Res 2001;7(3):473-7. PMID: 11297236.
69. Cao Z., Bao M., Miele L. et al. Tumour vasculogenic mimicry is associated with poor prognosis of human cancer patients: a systemic review and meta-analysis. Eur J Cancer 2013;49(18):3914-23.
DOI: 10.1016/j.ejca.2013.07.148. PMID: 23992642.
70. Einspahr J.G., Thomas T.L., Saboda K. et al. Expression of vascular endothelial growth factor in early cutaneous melanocytic lesion progression. Cancer 2007;110(11):2519-27.
DOI: 10.1002/cncr.23076. PMID: 17932890.
71. Modlin R.L., Gottlieb B., Taylor C., Rea T.H. Identification of cells lining pseudovascular spaces of benign pigmented nevi. Am J Dermatopathol 1984;6 Suppl:25-9. PMID: 6084957.
72. Lee K.H., Han Y.W., Park C.J. Three cases of melanocytic nevi with pseudovascular spaces. Korean
J Dermatol 2007;45(1):90-3.
73. Demitsu T., Kakurai M., Yamada T. et al. The vascular space-like structure in melanocytic nevus is not an injection artifact: report of a case and an experimental study. J Dermatol 1998;25(3):143-9. PMID: 9575674.
74. Goldstein A.M., Tucker M.A. Dysplastic nevi and melanoma. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2013;22(4):528-32. DOI: 10.1158/1055-9965.EPI-12-1346. PMID: 23549396.
75. Coupland S.E., Lake S.L., Zeschnigk M., Damato B.E. Molecular pathology of uveal melanoma. Eye 2013;27(2):230-42. DOI: 10.1038/eye.2012.255.
PMID: 23222563.
76. Chang S.H., Worley L.A., Onken M.D., Harbour J.W. Prognostic biomarkers in uveal melanoma: evidence for a stem cell-like phenotype associated with metastasis. Melanoma Res 2008;18(3):191-200. DOI: 10.1097/ CMR.0b013e3283005270.
PMID: 18477893.
77. Gould Rothberg B.E., Bracken M.B., Rimm D.L. Tissue biomarkers for prognosis in cutaneous melanoma:
a systematic review and meta-analysis. J Natl Cancer Inst 2009;101(7):452-74. DOI: 10.1093/jnci/djp038. PMID: 19318635.
ORCID авторов/ORCID of authors
А.М. Казаков/A.M. Kazakov: https://orcid.org/0000-0002-9534-2729
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
