CC BY
6ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ НАУКИ
ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММЫ ФЛАВОНОИ-
ДОВ В ТРАВЕ МАНЖЕТКИ ТВЕРДОЙ (ALCHEMILLA DURA BUSER.)
Бабаян Мария Саркисовна,
Преподаватель кафедры фармакогнозии Пятигорского медико-фармацевтического института филиала ГБОУ
ВПО ВолгГМУ Минздрава России, г. Пятигорск, Россия Леонова Виктория Нодарьевна,
Преподаватель кафедры аналитической химии, кандидат фармацевтических наук Пятигорского медико-фармацевтического института филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России, г. Пятигорск, Россия
Айрапетян Эмма Эдуардовна
Студентка III курса Пятигорского медико-фармацевтического института филиал аГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава
России, г. Пятигорск, Россия
VALIDATION OF METHOD FOR QUANTITY ESTIMATION OF TOTAL FLAVONOIDS IN HERBA OF ALCHEMILLA DURA (ALCHEMILLA DURA BUSER.)
Babayan Mariya Sarkisovna, Leonova Victoriya Nodarevna, Airapetyan Emma Eduardovna ABSTRACT
Lecturer Department of pharmacognosy Pyatigorsk medical-pharmaceutical Institute, branch state budget EDUCATIONAL institution of higher professional education Volgograd state medical University Ministry of health of Russia, Pyatigorsk, Russia Lecturer of analytical chemistry, candidate of pharmaceutical Sciences Pyatigorsk medical-pharmaceutical Institute, branch state budget EDUCATIONAL institution of higher professional education Volgograd state medical University Ministry of health of Russia, Pyatigorsk, Russia
Third year student of Pyatigorsk medical-pharmaceutical Institute-branch of agbo of higher professional education Volgograd state medical University Ministry of health of Russia, Pyatigorsk, Russia АННОТАЦИЯ
Проведена валидационная оценка методики спектрофотометрического определения содержания суммы флавоноидов в траве манжетки твердой. Валидация проведена по следующим показателям: специфичность, линейность и прецизионность. Статистическая обработка полученных результатов показала, что все исследуемые валидационные параметры находятся в пределах критериев приемлемости.
The spectrophotometric method for estimation of total flavonoids in herba of Alchemilla dura has been validated. The method was validated to ensure linearity, repeatability and accuracy. Statistical calculations proved the validation parameters to be within the boundaries of acceptance criteria.
Ключевые слова: валидация; дифференциальная спектрофотометрия; специфичность; линейность; прецизионность; трава манжетки твердой; флавоноиды.
Keys words: validation; differential spectrophotometry; linearity; repeatability; accuracy; herbs of Alchemilla dura; flavonoids.
Согласно исследованиям ученого А.И. Галушко во флоре Северного Кавказа распространены 24 вида рода Alchemilla (манжетка), в том числе и A. dura Bus. - манжетка твердая. По данным литературы род Alchemilla (манжетка) содержит множество различных биологически активных веществ (БАВ), среди которых преобладают полифенольные соединения []. Поэтому оценку качества травы манжетки твердой целесообразно проводить по содержанию флавоноидов.
Ранее для определения этой группы БАВ было получено спиртовое извлечение (70%) травы манжетки твердой, а также предложена методика дифференциальной спектрофотометрии, основанная на реакции комплексо-образования флавоноидов с хлоридом алюминия.
Целью настоящей работы явилась валидационная оценка методики количественного определения флавоноидов в траве манжетки твердой.
Материалы и методы
Объектом исследования явилась методика количественного определения содержания суммы флавоноидов в траве манжетки твердой.
Измерение оптических плотностей проводили на спектрофотометре СФ-2000 (Россия). Валидацию методики проводили в соответствии с установленными требованиями на образце сырья манжетки твердой. В ходе работы исследовались такие валидационные характеристики, как специфичность, линейность, прецизионность (повторяемость) и правильность в соответствии с правилами и рекомендациями [2,с 28, 3, с 294]. Эксперимен-
тальные данные статистически обрабатывали с применением программы Microsoft Office Excel 2010.
Методика количественного определения
0,5 г сырья (точная навеска), измельченного до размера частиц 2 мм, помещали в термостойкую колбу вместимостью 100 мл, заливали 15 мл спирта этилового 70%, нагревали на водяной бане с обратным холодильником в течение 30 минут. Затем извлечение охлаждали, фильтровали в мерную колбу вместимостью 50 мл. Операцию повторяли дважды порциями спирта этилового 70% по 15 мл. Затем объем в мерной колбе доводили до метки спиртом этиловым 70% и тщательно перемешивали (раствор А).
5 мл раствора А помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляли 1 мл 2% спиртового раствора алюминия хлорида, 0,5 мл 5% раствора кислоты уксусной и доводили до метки спиртом этиловым 95%. Через 30 минут измеряли оптическую плотность полученного раствора при длине волны 410 нм относительно раствора сравнения [1, c 85].
Обсуждение результатов
Специфичность методики определяли, сравнивая
спектры испытуемого раствора со спектром стандартного образца рутина, после проведения реакции с хлоридом алюминия. Растворы готовили в соответствии с разработанной методикой. Регистрацию спектров проводили в диапазоне длин волн от 350 до 500 нм. Предложенная методика оказалась специфичной, так как максимумы поглощения (410 нм), а также характер дифференциальных спектров рутина и суммы флавоноидов, извлеченных 70%-ным спиртом этиловым из травы манжетки твердой, совпадали. Таким образом, другие БАВ, переходящие в раствор при экстрагировании растительного сырья, не влияли на результаты определения суммы флавоноидов.
Линейную зависимость между содержанием суммы флавоноидов и величиной сигнала (оптической плотности) устанавливали путем разведения полученных извлечений с последующим проведением реакции ком-плексообразования. Исследования проводили на 3 уровнях концентраций суммы флавоноидов (80%, 100% и 120%) в пересчете на рутин. Значение аналитического сигнала для каждой концентрации получали путем расчета среднего результата из трех измерений. В таблице 1 представлены результаты полученных исследований.
Таблица 1
Определение линейности разработанной методики количественного определения флавоноидов в 70%-ном _извлечении травы манжетки твердой_
Концентрация флавоноидов (по отношению к декларированному содержанию) Содержание флавоноидов, % Показания прибора (Ах)
80% 1,03±0,13 0,302
100% 1,27±0,02 0,466
120% 1,50±0,23 0,659
Для оценки линейности рассчитывали уравнение регрессии и коэффициент корреляции (рисунок 1).
0,2
0
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 1,4 1,6
Х, %
Рисунок 1 - Зависимость оптической плотности (А) от содержания (Х,%) флавоноидов в 70%-ном извлечении травы
манжетки твердой
Согласно полученным результатам установлено, что в выбранном диапазоне применения методики имеется прямо пропорциональное соотношение между концентрацией флавоноидов в измеряемой пробе и аналитическим сигналом. Линейная зависимость характеризуется высоким коэффициентом корреляции ^>0,99), что считается приемлемым для установления строгой линейности. Полученные данные подтверждаются и графическим представлением регрессионной прямой.
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о соблюдении линейности разработанной методики в диапазоне применяемых концентраций.
Прецизионность методики оценивалась исследованиями повторяемости. Для определения повторяемости разработанной методики проводили измерение 6 испытуемых проб. Пробы готовили из одного образца сырья независимо друг от друга в соответствии с разработанной методикой. Исследования проводили в течение короткого временного интервала, анализ выполнял один и тот же аналитик на одном приборе (СФ-2000).
Статистически полученные результаты исследований, представленные в таблице 2, не превышают критериев приемлемости для спектрофотометрических методов, что свидетельствует о прецизионности разработанной методики в условиях повторяемости.
Таблица 2
Результаты оценки повторяемости разработанной методики количественного определения суммы флавоноидов
в 70%-ном извлечении травы манжетки твердой
Номер пробы 1 2 3 4 5 6
Аналитический сигнал 0,467 0,476 0,461 0,468 0,460 0,465
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин, % 1,27 1,30 1,26 1,28 1,26 1,27
n Х, % S2 RSD, % Р, % tp, t ДХ £, %
6 1,27 0,0002 0,0119 0,0061 95 2,57 0,0158 ±1,24
Таким образом, для разработанной методики подтверждены валидационные характеристики (специфичность, линейность и повторяемость), что свидетельствует о её валидности и возможности включения в фармакопейную статью на траву манжетки твердой.
Список литературы 1. Андреева, В.Ю. Разработка методики количественного определения флавоноидов в манжетке обыкновенной Alchemilla vulgaris L.S.L. / В.Ю. Андреева, Г.И. Калинкина // Химия растительного сырья. -2000. - №1. - С. 85-88.
2. Арзамасцев, А.П. «Проект ОФС «Валидация фармакопейных методов»/ А.П. Арзамасцев, Н.П. Садчи-кова, Ю.Я.Харитонов// Ведомости научного центра экспертизы и гос. контроля лек. средств. - 2002. -№1. - С. 28 - 30.
3. Северцева, О.В. Валидация аналитических методов контроля качества таблеток экстракта из листьев боярышника/ О.В. Северцева//Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: Материалы 6 Между-нар. съезда. - СПб, 2002. - С. 294 - 299.
ФАРМАКОКИНЕТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ СУБСТАНЦИИ И 1% ИНЪЕКЦИОННОГО
РАСТВОРА АВЕССТИМА
Бушуева Инна Владимировна
кандидат фарм. наук, доцент Кныш Евгений Григорьевич доктор фарм. наук, профессор Панасенко Александр Иванович
доктор фарм. наук, профессор, Запорожский государственный медицинский университет, г. Запорожье
PHARMACOKINETIC STUDY OF SUBSTANCES AND 1% INJECTION SOLUTION AVESSTIM
Bushueva Inna, Candidate of Science, associate professor, Knish Evgeny, Dr. Pharm. Sciences, professor
Panasenko Alexander, Dr. Pharm. Sciences, professor, Zaporozhye state medical University, Zaporozhye
АННОТАЦИЯ
В результате фармакокинетических исследований нового органического соединения из группы 1,2,4-триазола - морфолиний 2-(5-(пиридин-4-ил)-1,2,4-триазол-3-илтио)ацетата, установлено существование прямой статистически достоверной корреляционной зависимости между результатами его высвобождения из субстанции и 1% инъекционного раствора, всасыванием лекарственного вещества из данной лекарственной формы и поступлением его в кровь. С помощью моделирования фармакокинетики соединения после перорального и инъекционного внутривенного введения установлены константы скорости всасывания, элиминации, плазматический клиренс и другие параметры.
Ключевые слова: субстанция; инъекционный раствор; фармакокинетика; стерилизация; срок годности; Авес-
стим.
ABSTRACT
As a result of pharmacokinetic studies of new organic compounds from the group of 1,2,4-triazole - morpholine 2-(5-(pyridin-4-yl)-1,2,4-triazole-3-ylthio)acetate, the existence of a direct statistically significant correlation between the results of the release of substances and 1% injection solution, the absorption of medicinal substance from a given dosage form and supplied to the blood. Through simulation of the pharmacokinetics of the compound after oral and intravenous injection set of the rate constant of absorption, elimination, plasma clearance, and other parameters.
Keywords: active pharmaceutical ingredient; injection solution; pharmacokinetics; sterilization; shelf life; Avеsstim.
Целью данного исследования была разработка научно-обоснованного состава, технологии, анализа инъекционного раствора с Авесстимом, проведения биофармацевтического изучения указанной лекарственной
формы. Авесстим - желтого цвета порошок, со слабым своеобразным запахом. Легко раствор в воде (1:10), трудно растворим в органических растворителях [1,с.277].
