CC BY
130
УДК 615.074
ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДА ПЛАМЕННОЙ ФОТОМЕТРИИ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАТРИЙ-ИОНА В ПРЕПАРАТЕ АЛЬБУМИН, 20%-й РАСТВОР ДЛЯ ИНФУЗИЙ
И.А. Емельянова, М.Л. Кондратьева, О.В. Шкуратова
Филиал ФГУП НПО "Микроген" Минздравсоцразвития России в г. Томск "НПО "Вирион"
E-mail: obtk@ virion.tomsknet.ru
THE VALIDATION OF FLAME PHOTOMETY METHOD OF SODIUM-ION TESTING IN THE DRUG ALBUMIN (20% SOLUTION FOR INFUSION)
I.A. Emelyanova, M.L. Kondratyeva, O.V. Shkuratova
"Virion" - Tomsk Branch of the Federal State Unitary Company "Microgen" Scientific Industrial Company for Immunobiological Medicines" of the Ministry of Health and Social Development of the Russian Federation
Целью исследования являлась валидация метода определения натрий-иона в препарате альбумин, 20%-й раствор для инфузий, методом пламенной фотометрии. В ходе валидации при оценке результатов по калибровочной кривой было установлено, что коэффициент корреляции линейной зависимости графика меньше критерия приемлемости. Вследствие чего, возникла необходимость дополнительного изучения и доработки данной методики.
По результатам исследования рекомендовано внести изменение в методику измерения количественного содержания натрий-иона в растворе альбумина.
Ключевые слова: валидация аналитического метода, определение натрий-иона, метод пламенной фотометрии.
The study was aimed at validating the method of sodium-ion testing in the drug albumin (20% solution for infusion) using flame photometry method. In the course of validation, the calibration estimation of the findings revealed that the correlation coefficient of the linear dependence in the diagram was lower than the acceptability criterion. Consequently, it became necessary to continue studying and improving this method. The further research has shown that it is necessary to make some alterations to the method of measuring quantitative concentration of sodium-ion in the albumin solution.
Key words: analytical method validation, sodium-ion testing, flame photometry method.
Введение
Валидация аналитических методов является неотъемлемой частью системы обеспечения качества наряду с программами валидации производственных помещений, оборудования, технологических процессов. Прошедший валидацию метод гарантирует, что выбранная методика будет давать воспроизводимые и достоверные результаты. Результаты валидации аналитических методов могут либо подтвердить, что процедура анализа проводится стандартно и тем самым повышается степень гарантии качества продукции, либо указать на наличие несоответствий и проблем, которые необходимо решать [1].
При внедрении в производство нового препарата (20%-го раствора альбумина) возникла необходимость провалидировать методы контроля данного препарата. Цель исследования: валидация метода определения натрий-иона в препарате альбумин, раствор для инфузий 20%-м методом пламенной фотометрии.
Материал и методы
Согласно ФСП на препарат “Альбумин, раствор для инфузий 20%” определение натрий-иона в растворе проводили на пламенно-фотометрическом анализаторе жидкости ПАЖ-2, а количественное содержание натрий-иона рассчитывали по калибровочному графику.
Для проведения валидации использовали три коммер-
ческие серии препарата альбумин, раствор для инфузий 20% и государственный стандартный образец (ГСО) раствора иона натрия. Для построения калибровочной кривой применяли рабочие стандартные растворы натрия хлорида (ГОСТ 4233-77, квалификация “хч”). Планирование эксперимента и статистическую обработку данных проводили согласно РМГ 61-2003 [2].
Результаты и обсуждение
При оценке результатов исследования (табл. 1) было установлено, что коэффициент корреляции линейной зависимости калибровочного графика меньше критерия приемлемости, предусмотренного ГФ XI. В связи с этим возникла необходимость дополнительного изучения и выявления причин несоответствия метода требованию ГФ XI по корреляции.
Для проверки точности построения калибровочной кривой и оценки правильности работы прибора был использован ГСО раствора иона натрия. С помощью данного ГСО были приготовлены растворы концентрации
0,4; 0,6; 0,8; 1,0; 1,4; 1,6 ммоль/л, совпадающие с концентрациями рабочих стандартных растворов, используемых при построении калибровочной кривой. На первом этапе калибровочная кривая линейной зависимости содержания определяемого компонента в рабочих стандартных растворах от интенсивности эмиссии ионов натрия
Сибирский медицинский журнал, 2011, Том 26, № 2, Выпуск 2
Таблица 1
Содержание натрий-ионов в растворах ГСО*
№ п.п Теоретическая концентрация натрий-ионов в растворах ГСО, ммоль/л Концентрация натрий-ионов в растворах ГСО, найденная по калибровочной кривой, ммоль/л Погрешность определения, % Коэффициент корреляции линейной зависимости
1 0,300 0,306 2,0 0,9978
2 0,400 0,418 4,6 0,9993
3 0,400 0,433 8,3 0,9978
4 0,400 0,397 0,8 0,9993
5 0,600 0,615 2,6 0,9993
6 0,600 0,623 3,8 0,9993
7 0,600 0,580 3,3 0,9978
8 0,800 0,785 1,9 0,9993
9 0,800 0,765 4,3 0,9978
10 1,000 0,959 4,1 0,9993
Примечание: * - диапазон построения калибровочной кривой (0,2-2,0) ммоль/л; шкала прибора настроена по раствору 2,0 ммоль/л.
строилась в полном соответствии с ФСП на препарат, в диапазоне (0,2—2,0) ммоль/л. Коэффициент корреляции линейной зависимости составил не более 0,9787, что меньше критерия приемлемости: 0,98 по ГФ XI. Погрешность определения содержания ионов натрия в растворах ГСО от теоретических концентраций в диапазоне (0,2-1,0) ммоль/л, составила около 25%, в диапазоне (1,0-
2,0) ммоль/л - не более 7%.
Калибровочная кривая зависимости содержания определяемого компонента в рабочих стандартных растворах от интенсивности эмиссии ионов натрия представлена на рисунках 1 и 2. Из рисунка 1 видно, что наблюдается полиномиальная зависимость. Следовательно, необходимо разбить данный диапазон определяемых концентраций на поддиапазоны и построить калибровочный график отдельно для каждого поддиапазона.
Ожидаемые значения концентрации натрий-иона в растворе альбумина лежат в диапазоне (0,3-
0,7) ммоль/л. Перед нами возникла задача максимально уменьшить разность полученных результатов от действительных (теоретически рассчитанных) значений ГСО, т.к.
это непосредственно влияет на точность определения натрий-иона в препарате данным методом. Было решено калибровочную кривую начинать с раствора, содержащего натрий-ион в концентрации 0,1 ммоль/л, а верхнюю точку кривой снизить до 1,0 ммоль/л. При построении калибровочного графика в поддиапазоне (0,1-1,0) ммоль/л (шкала прибора настроена по раствору 2,0 ммоль/л), коэффициент корреляции линейной зависимости получился не менее 0,9859, что удовлетворяет критерию приемлемости. Теоретические расчеты растворов ГСО с концентрациями 0,3; 0,4; 0,6 ммоль/л отличаются от результатов полученных опытным путем не более чем на 8% (табл. 2).
В соответствии с паспортом на прибор, шкала фотометра с отметкой “100” должна настраиваться по раствору с концентрацией, равной максимально ожидаемой, т.е. в данном случае
1,0 ммоль/л. В диапазоне концентраций натрий-иона (0,1-1,0) ммоль/л коэффициент корреляции линейной зависимости калибровочного графика получился удовлетворительным, не менее 0,9818. Значения концентрации натрий-ионов в растворах ГСО в диапазоне ожидаемых концен-
Рис. 1. Калибровочная кривая для определения содержания натрий-иона в препарате альбумин. Линейная зависимость
Рис. 2. Калибровочная кривая для определения содержания натрий-иона в препарате альбумин. Полиномиальная зависимость
Таблица 2
Содержание натрий-ионов в растворах ГСО*
№ п.п. Теоретическая концентрация натрий-ионов в растворах ГСО, ммоль/л Концентрация натрий-ионов в растворах ГСО, найденная по калибровочной кривой, ммоль/л Погрешность определения, % Коэффициент корреляции линейной зависимости
1 0,300 0,306 2,0 0,9868
2 0,400 0,418 4,6 0,9859
3 0,400 0,433 8,3 0,9937
4 0,400 0,397 0,8 0,9868
5 0,600 0,615 2,6 0,9859
6 0,600 0,623 3,8 0,9937
7 0,600 0,580 3,3 0,9868
8 0,800 0,785 1,9 0,9937
9 0,800 0,765 4,3 0,9868
10 1,000 0,959 4,1 0,9937
Примечание: * - Диапазон построения калибровочной кривой (0,Н,0) ммоль/л; шкала прибора настроена по раствору 2,0 ммоль/л.
траций (0,3—0,7) ммоль/л воспроизводились с точностью до 6% (табл. 3).
Результаты анализа для расчета метрологических характеристик метода определения натрий-иона в препарате “Альбумин раствор для инфузий 20%” были получены в диапазоне построения калибровочной кривой (0,1-
1,0) ммоль/л; шкала прибора была настроена по раствору 1,0 ммоль/л. В результате валидации установлены основные метрологические характеристики метода при доверительной вероятности Р=0,95:
- показатель повторяемости а =3,0%;
- показатель внутрилабораторной воспроизводимости ак*=5,0%;
- показатель правильности ±Ас=1,0%;
- показатель точности ±А=10,0%;
- предел повторяемости Г=0,083-Х ммоль/л;
- предел внутрилабораторной воспроизводимости И*=0,139-Х ммоль/л.
Выводы
1. Рекомендовано внести изменение в методику измерения количественного содержания натрий-иона в
Таблица 3
Содержание натрий-ионов в растворах ГСО*
№ п/п. Теоретическая концентрация натрий-ионов в растворах ГСО, ммоль/л Концентрация натрий-ионов в растворах ГСО, найденная по калибровочной кривой, ммоль/л Погрешность определения, % Коэффициент корреляции линейной зависимости
1 0,300 0,316 5,2 0,9818
2 0,400 0,393 1,9 0,9943
3 0,400 0,425 6,2 0,9965
4 0,400 0,407 1,8 0,9818
5 0,600 0,613 2,2 0,9943
6 0,600 0,616 2,7 0,9965
7 0,600 0,567 5,5 0,9818
8 0,800 0,788 1,5 0,9965
9 0,800 0,688 13,9 0,9818
10 1,000 0,947 5,3 0,9965
Примечание: * - диапазон построения калибровочной кривой (0,Н,0) ммоль/л; шкала прибора настроена по раствору 1,0 ммоль/л.
растворе альбумина: калибровочный график строить по растворам с содержанием натрий-ионов в диапазоне (0,1-1,0) ммоль/л; шкалу прибора настраивать по раствору с максимальной концентрацией, т.е.
1,0 ммоль/л.
2. Для исключения ошибки оператора при определении линейной зависимости необходима компьютерная обработка калибровочной кривой и результатов анализа.
3. Метрологические характеристики метода оценены с учетом вышеизложенных рекомендаций.
Литература
1. Дьяконова Е.В., Шарахова О.В., Быстрицкий Л.Д. Методические подходы к организации валидационных мероприятий на предприятии-производителе лекарственных средств. // Сибирский медицинский журнал (Томск). - 2009. - Т. 24, № 2. - С. 94-97.
2. РМГ 61-2003. Показатели точности, правильности, прецизионности методик количественного химического анализа. Методы оценки. Введ. 01.01.05. - 56 с.
Поступила 06.04.2011
