CC BY
26619:616.995.132
УСОВЕРШЕНСТВОВАННАЯ МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ ПОЧВЫ НА ЗАГРЯЗНЕННОСТЬ ИХ ВОЗБУДИТЕЛЯМИ ПАРАЗИТОЗОВ
1Д.А.Долбин - кандидат биологических наук, ст. научный сотрудник; 2М.Х.Лутфуллин - доктор
ветеринарных наук, профессор.
1ФБУН«Казанский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии» Роспотребнадзора, г.Казань (420015, г.Казань, ул. Большая Красная, 67, e-mail: dda_sns@mail.ru).
2ФГБОУ ВО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им.Н.Э.Баумана», г.Казань (420039, г.Казань, Сибирский тракт, 35; e-mail: parasitology-kazan@mail.ru).
Эпидемические данные о пораженности токсокарозом населения довольно противоречивы, хотя по очевидным причинам, все авторы сходятся в том, что зараженность сельского населения значительно выше, чем городского, так же как обсемененность почвы токсокарами. Целью работы было улучшение метода выявления яиц гельминтов в пробах почвы, осуществление количественной оценки степени загрязненности почвы яйцами паразитических червей. Для исследования почвы нами применился метод Романенко Н.А. и разработанный авторами метод. Разработанный нами метод позволил дополнительно выявить большее количество яиц аскарид, по сравнению с методом Романенко, что обусловлено использованием многокомпонентной флотационной смеси. Эффективность выявления яиц в почве статистически достоверно отличается при оценке по критерию Стьюдента (уровень значимости 0,95). Данный метод был применен для обследования песочниц в детских садах и на детских площадках различных районов города Казани, с целью выявления загрязненности данных объектов яйцами геогельминтов. Детские песочницы Казани являются потенциальным источником заражения токсокарозом, трихо-цефалезом и аскаридозом. Кроме того, в Казани были исследованы пробы почвы с официальных пляжей. Пляжи города нельзя считать безопасными с точки зрения возможности заражения токсокарами. Таким образом, предлагаемый способ позволяет значительно повысить эффективность выявления яиц в пробах почвы по сравнению с методом Н.А.Романенко и может использоваться на практике и при проведении научных исследований.
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: геогельминтозы, методы обследования почвы, токсокароз, аскариды, метод Романенко.
Эпидемические данные о пораженности токсокарозом населения довольно противоречивы, хотя по очевидным причинам, все авторы сходятся в том, что пораженность сельского населения значительно выше, чем городского, так же как обсемененность почвы токсокарами. Например, в Еврейской автономной области обсемененность почвы яйцами данного паразита превышает такой показатель для городских условий в четыре раза. Причем в городской местности наибольший процент обсемененных проб приходится на почву, взятую в местах производства растениеводческой продукции (теплицы) [9].
Нужно отметить, что в Тульской области корреляционной связи между заболеваемостью и благоустройством жилья, наличием собак не было выявлено [4].
Большая зараженность детей также отмечается большинством авторов [9].
А.В.Слободенюк с соавторами [7] при обследовании взрослого населения и детей, проживающих в Свердловской области, получили неожиданные результаты: по их данным, доля инвазированных взрослых (серологическое обследование по клиническим показателям) была в два раза выше, чем детей.
С 1996 по 2004 годы зараженность людей токсокарозом по Республике Татарстан составила 0,0005% (1996), 0,0002% (1997), 0,0002% (1998), 0,0004% (1999), 0,002% (2000), 0,002% (2001), 0,003% (2002),
0,003% (2003), 0,003% (2004) на 100 тысяч человек [7].
С 2000 года число больных токсокорозом увеличилось в среднем в 7 раз, что вероятно обусловлено внедрением более эффективных лабораторно-диа-гностических методов (серологических) исследования населения на это заболевание.
По литературным источникам, загрязненность почвы яйцами Toxocara canis почвы достигает 10%. Если обобщить выводы ученых разных стран о пораженности токсокарозом человека, то можно сделать вывод о том, что серопозитивность людей к антигену токсокар изучена недостаточно. Также остаются не зарегистрированными и многие клинически выраженные случаи токсокароза [8].
Анализ результатов гельминтоовоскопических исследований показал, что заболеваемость щенков токсокарозом выше, чем взрослых собак (например, 19,2±1,3% у взрослых против 47,8±2,1% у щенков). Так же очевидна большая значимость, при контаминации окружающей среды яйцами токсокар, бродячих животных по сравнению с домашними. Собаки в сельской местности, как и следовало ожидать, более поражены токсокарозом, чем в городских условиях [1].
Наиболее актуальна оценка загрязненности почвы яйцами часто встречающихся в песке, в частности на детских площадках и в песочницах - Toxocara canis, Toxocara cati и Ascaris lumbricoides.
ЕГЕПШАРНЫЙ
Врач
Наиболее часто используемым методом исследования почвы, с целью выявления яиц гельминтов, является комбинированный метод Романенко, где в качестве флотационной жидкости используется насыщенный раствор нитрата натрия [3].
На основании ранее примененного нами подхода для диагностики паразитозов [10, 11], в данной работе была поставлена цель - разработать новый метод выявления яиц гельминтов и простейших в пробах почвы, осуществление количественной оценки степени загрязненности почвы яйцами паразитических червей.
Материалы и методы. Пробы почвы брали с поверхности пласта и на глубине 10-20 см. На однотипном участке почву собирали в 5-10 различных местах по 10-20 г, объединяя пробы в одну, общей массой не менее 100-200 г.
На территории одного объекта (усадьба, детский сад и т. д.) брали 10 проб. Пробу помещали в закрытую стеклянную посуду или полиэтиленовый пакет. Внутрь вкладывали этикетку с указанием места и условий отбора пробы и хранили в холодильнике (50С) не более месяца.
Для исследования по методу Н.А.Романенко [3] из общей пробы отбирали 25 г почвы, помещали в центрифужную пробирку вместимостью 250 мл и заливали 150 мл воды. Смесь тщательно размешивали стеклянной палочкой в течение 5 мин или с помощью электромешалки - 1 минуту.
Всплывшие крупные частицы сразу же удаляли. После центрифугирования в центрифуге марки ЦЛС-3 в течение 3 мин при 800-1000 оборотов в минуту, воду сливали, а в пробирки добавляли 150 мл насыщенного раствора нитрата натрия. Перемешивали палочкой и вновь центрифугировали 3 минуты.
Пробирки устанавливали в штатив, доливали тем же раствором до образования выпуклого мениска, накрывали обезжиренным стеклом (размер 6x12 см), так, чтобы оно касалось слоя жидкости. Через 15 мин стекло снимали, на влажную поверхность добавляли несколько капель 50% водного раствора глицерина и микроскопировали. С целью повышения эффективности выявления яиц снятие препарата повторяли 2-3 раза. В очагах тениидозов и эхинококкоза обнаружение яиц затруднено тем, что они обладают определенной липкостью и, склеиваясь с частицами почвы, плохо всплывают во флотационном растворе.
Результаты исследований. Был проведён сравнительный анализ исследования почвы: методом Романенко и разработанного нами метода выявления яиц гельминтов. В пробу песка искусственно вносили яйца Ascaris suum, Toxocara canis и Ascaris lumbricoides в количестве 100 яиц на 1 г песка. Яйца были получены из матки самки аскариды.
Выявление яиц гельминтов в пробах почвы авторским способом проводили по следующей схеме: вначале готовили комбинированную флотационную смесь из трех ингредиентов: 1. насыщенный раствор цинка хлори-
да (2 кг 7пО!2 на 1 л воды); 2. насыщенный раствор натрия хлорида (0,442 кг №0! на 1 л воды); 3. глицерин (Ч). Далее эти три компонента смешивали в соотношении 1:1:1. Всплывшие крупные частицы сразу же удаляли. После центрифугирования в течение 3 мин при 800-1000 об/ мин воду сливали, а в пробирки добавляли 150 мл трех-компонентной флотационной системы. Перемешивали палочкой и вновь центрифугировали 3 минуты.
Пробирки устанавливали в штатив, доливали тот же раствор до образования выпуклого мениска, накрывали обезжиренным стеклом (размер 6x12 см) так, чтобы оно касалось слоя жидкости. Через 20-30 мин стекло снимали и микроскопировали. С целью повышения эффективности выявления яиц снятие препарата повторяли 2-3 раза.
Результаты исследования с использованием яиц АБоапБ Биит представлены в таблице 1.
При искусственном внесении в пробу почвы 100 яиц на грамм песка, не содержавшего яиц гельминтов или насекомых, метод Романенко в нашем опыте позволил выявить от 1 до 5 яиц аскарид. Авторский метод от 7 до 12 яиц.
Недостатком данного метода является низкая удельная плотность флотационного раствора. Кроме того, насыщенный раствор нитрата натрия, а так же альтернативные растворы, предлагаемые в литературе (тиосульфата натрия и натриевой селитры) очень быстро кристаллизуются, что затрудняет просмотр проб и снижает выявление яиц гельминтов.
Эффективность выявления яиц в почве статистически достоверно отличается при оценке по критерию Стьюдента (уровне значимости 0,95) [5].
Разработанный нами метод позволил дополнительно выявить большее количество яиц аскарид, по сравнению с методом Романенко Н.А., что обусловлено использованием многокомпонентной флотационной смеси. Компоненты предлагаемой флотационной системы не нарушали морфологию яиц паразитов и не создавали затруднений с морфологической идентификацией возбудителя. Каждый из них выполнял определенную функцию: хлористый цинк повышал плотность раствора, глицерин снижал время кристаллизации, увеличивая качество исследования, хлорид натрия снижал себестоимость анализа. Как правило, применение такого рода смесей позволяет повысить выявление яиц, ооцист и цист простейших, но требует проведение оптимизации состава смеси к каждому конкретному случаю [2]. Также, предлагаемый нами способ позволяет вдвое сократить время проведения анализа.
Усовершенствованный метод был применен для обследования песочниц в детских садах и на детских площадках различных районов города Казани, с целью выявления эпидемической и эпизоотологической картины загрязненности данных объектов яйцами геогельминтов. Результаты обследования представлены в таблице 2.
Из данных таблицы видно, что процент яиц гельминтов потенциально опасных для человека составляет почти треть от всех исследованных проб.
Таблица 1
Сравнение эффективности выявления яиц в пробах почвы с искусственным внесением яиц Ascaris suum
Проба почвы Количество яиц Ascaris suum выявленных
методом Романенко авторским методом
1 2 9
2 3 8
3 2 10
4 4 11
5 5 11
6 2 7
7 3 12
8 2 11
9 1 8
10 2 10
M ± m 2,6 ± 0,41 9, 7± 0,52
Таблица 2
Результаты исследования проб почвы авторским методом
Район Казани Место сбора Комбинированный метод
1 2 3
Московский ДП sp. Toxocara - 3 яйца
ДС «Энже» sp. Toxocara - 1 яйцо
ДС комбинированного вида 314 sp. Toxocara - 3 яйца; пыльца американсокго клена
ДС 291 (Жилплощадка) sp. Toxocara - 1 неоплодотворенное яйцо
ДП Парк моторостроителей 0
Кировский ДС 313 sp. Strongylata - 2; яйца сободноживущих беспозвоночных.
ДС 169 Споры грибов
ДС 356 sp. Toxocara - 1
ДС комбинированного вида 417 0
Авиастроительный ДС 36 Свободноживущий червь
ДС 172 0
ДС 392 0
Вахитовский ДС 255 Пыльца
ДС 312 Свободноживущий червь
ДС 34 Пыльца, свободноживущий червь
Приволжский ДС 373 Циста простейшего sp. Toxocara - 1, sp. Trichocephalus - 1.
ДС 27 Пыльца
ДС комбинированного вида 42 Яйца свободноживущих беспозвоночных
ДП sp. Strongylata - яйцо
Ново-Савиновский ДС 122 sp. Trichostrongylus
ДС 93 0
ДС комбинированного вида 337 Свободноживущий червь
ЕГЕПШАРНЫЙ
Врач
Примечание: ДС - детский сад, ДП - песочница на детской площадке.
Продолжение таблицы 2
1 2 3
Советский ДС 305 sp. Strongylata - яйцо и червь.
ДС 352 0
ДС 290 0
Детские песочницы Казани являются потенциальным источником заражения токсокарозом, трихоце-фалезом и аскаридозом.
При практическом испытании данного метода в почве нами выявлялись яйца токсокар, трихоцефал, яйца членистоногих, а так же обнаруживались свобод-ноживущие черви.
При исследовании данных проб почвы методом Романенко, лишь в песке с детской дворовой площадки из Московского района, были обнаружены яйца геогельминтов.
Кроме того, в г.Казани нами были исследованы пробы почвы с официальных пляжей: «Локомотив», «Изумрудный», «Глубокое озеро». Пляжи города нельзя считать безопасными с точки зрения возможности заражения токсокарами, так как яйца данных возбудителей не были нами обнаружены лишь на пляже «Голубое озеро».
Заключение. Таким образом, предлагаемый способ позволяет значительно повысить эффективность выявления яиц в пробах почвы по сравнению с методом Н.А.Романенко и может использоваться на практике и при проведении научных исследований.
Литература
1. Козырева, Т.Г. Проблема токсокароза на Дальнем Востоке и пути ее решения / Т.Г.Козырева, Т.А.Семенова // Мед. паразит. и паразит. бол. - 2002. - № 3. - С. 16-18.
2. Лутфуллин, М.Х. Гельминто-копроскопические исследования животных / М.Х.Лутфуллин, Д.Г.Латыпов, М.Д.Корнишина. - Казань: Казмед, 2002. - 24 с.
3. МУК 4. 2. 796 - 99. «Методы санитарно-паразитологических исследований». - М., 2000. - 53 с.
4. Токсокароз в Тульской области / З.А.Ошевская [и др.] // Мед. паразит. и паразит. бол. - 2003. - № 1. - С. 30-32.
5. Применение статистических методов в эпидемиологическом анализе / Е.Д.Савилов [и др.]. - М.: «МЕД-пресс-информ», 2004. - 26 с.
6. Слободенюк, А.В. Особенности распространения токсокароза на территориях сельского и городского типов / А.В.Слободенюк, А.А.Косова, С.И.Руколеева // Мед. паразитол. - 2005. - № 3. - С. 36-39.
7. Соколина, Ф.М. Нематодозы населения республики Татарстан / Ф.М.Соколина, А.А. Белова // Труды ВИ-ГИС. - 2006. - Т. 43. - С. 20-25.
8. Ветеринарная паразитология / Г. Уркхарт [и др.]. - М.: «Аквариум», 2000. - 87 с..
9. Янович, В.А. Исследование почвы на наличие яиц токсокар в Еврейской автономной области (ЕАО) / В.А.Янович, Н.М.Брюнеткина // Мед. паразит. и паразит. бол. - 1999. - № 3. - С. 29-30.
10. Долбин, Д.А. Сравнительная эффективность различных гельминтоовоскопических методов для диагностики неоаскаридоза телят / Д.А.Долбин, М.Х.Лутфуллин, Д. Г. Латыпов // Тр. ВИГИС. - 2005. - Т. 41. - С. 154-160.
11. Пути улучшения качества лабораторной диагностики гельминтозов / Д.А.Долбин [и др.] // Казмед ж. -2007. - Т. LXXXVIII, № 4. - С. 398-402.
AN IMPROVED METHOD FOR DETECTION OF SOIL CONTAMINATION WITH PARASITIC EGGS
1Dolbin D.A. - Candidate of Biological Sciences; 2Lutfullin M.Kh. - Doctor of Veterinary Medicine, professor.
1Kazan Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Kazan (e-mail: dda_sns@mail.ru).
2Bauman N.E. Kazan State Academy of Veterinary Medicine, Kazan (tel.+7(843) 273-96-17; e-mail: parasitology-kazan@mail.ru).
Epidemic data on toxocariasis infection rate are quite controversial, although for obvious reasons, all the authors agree that the contamination of the rural population is significantly higher than the urban one as well as soil contamination with toxocara. The aim of the work was to improve the detection of helminthic eggs in soil samples, quantitative assessment of the level of soil contamination with eggs of parasitic worms. To study the soil the method proposed by Romanenko N.A. and the method developed by the authors of this article were used. The use of multi-component flotation mixtures
in our method allowed identifying a larger number of Ascarida eggs than the Romanenko method. The results of the eggs detection in soil using the proposed method were significantly different from the Student's method (significance level 0.95). This method was used to survey the sandbox in kindergartens and playgrounds of various areas of Kazan, in order to identify the epidemic and epidemiological picture of pollution with geohelminthes eggs. In Kazan the children sandboxes are a potential source of infection of toxocariasis, trihotsefaleze and ascariasis. Moreover, in Kazan the soil samples from official beaches were investigated. The city beaches cannot be considered safe from the point of view of the possibility of toxocara infection. Thus, the proposed method can significantly improve the efficiency of parasitic eggs detection in soil samples in comparison with the Romanenko method and can be used in practice and for research.
KEYWORDS: geohelminthiasis, methods of soil survey, toxocariasis, roundworm, Romanenko method.
References
1. Kozyreva, T.G. Problema toksakaroza na Dalnem Vostoke i puti yeyo resheniya [The problem of toxocariasis in the Far East and its solutions] / T.G.Kozyreva, T.A.Semenova // Med. parasit.i parasit. bol. - Medicinal parasitology and parasitic diseases - 2002. - Vol. 3. - P.16-18.
2. Lutfullin, M.H. Gelmintno-koproskopicheskiye issledovaniya zhivotnyh [Helminthic and coproscopic studies of animals] / M.H.Lutfullin, D.G.Latypov, M.D.Kornishina. - Kazan: Kazmed, 2002. - 24 p.
3. MUK 796-99. "Metody sanitarno-paraziticheskih issledovaniy" [Methodical guidelines "Methods of sanitation and parasitological studies"]. - Moscow, 2000. - 53 p.
4. Toksokaroz v Tulskoy oblasti [Toksokaroz in Tula region] / Z.A.Oshevskaya // Med. parasit.i parasit. bol. - Medicinal parasitology and parasitic diseases - 2003. - Vol. 1. - P. 30 - 32.
5. Primeneniye statisticheskih metodov v epidemiologicheskom analize [Application of statistical methods in epidemiological analyzes]. / E.D.Savilov [i dr.]. - Moscow: "MEDpress-Inform", 2004. - 26 p.
6. Slobodenyuk, A.V. Osbennosti rasprostraneniya toksokaroza na territoriyah selskogo i gorodskogo tipov [Peculiarities of toxocariasis spread in areas of rural and urban types] / A.V.Slobodenyuk, A.A.Kosova, S.I.Rukoleeva // Meditsinkaya parazitologiya - 2005. - Vol. 3. - P.36 - 39.
7. Sokolina, F.M. Nematodozy naseleniya respubliki Tatarstan [Human nematodosis in the Republic of Tatarstan] / F.M.Sokolina, A.A.Belov // Proceedings VIGIS - 2006. - Vol.43. - P. 20-25.
8. Veterinarnaya parazitologiya [Veterinary parasitology]/ G. Urkhart [et al.]. - Moscow: «Akvarium», 2000. - 87 p.
9. Yanovich, V.A. Issledovaniye pochvy na nalichiye yaits toksokar v Evreyskoy avtonomnoy oblasti (EAO) [Soil investigation for toxocara eggs presence in Jewish autonomous region (EAO)] / V.A.Yanovich, N.M.Brunetkina // Med. parasit.i parasit. bolezni. - 1999. - Vol. 3. - P. 29-30.
10. Dolbin, D.A. Sravnitelnaya effektivnost raznichnyh gelmintovoskopicheskih metodov dlya diagnostiki neoaskaridoza telyat [Comparative efficiency of different helminthoscopic methods for detection of calves neooskaridosis] / D.A.Dolbin, M.H.Lutfullin, D.G.Latypov // Articles by VIGIS. - 2005. - Vol. 41. - P. 154-160.
11. Puti uluchsheniya kachestva laboratornoy diagnostiki gelmintozov [Ways to improve the quality of laboratory diagnosis of helminth infections] / D.A.Dolbin [et al.] // Kazansky meditsinsky jurnal. - 2007. - Vol. LXXXVIII, Issue 4. - P. 398-402.
ПРИЕМ В АСПИРАНТУРУ
ФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» объявляет прием в аспирантуру на 2017 год по специальностям:
- ветеринарная фармакология с токсикологией;
- ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотокси-кологией и иммунология;
- радиобиология;
- микробиология.
Условия приема общие.
Документы направлять на имя директора Центра до 17 августа 2017 г. по адресу: 420075, г.Казань, Научный городок-2, ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ».
Вступительные экзамены - с 21 по 29 августа.
