CC BY
3
Таблица I
Результаты определения компонентов метолом добавок (п = 10, р = 0,95)
Аттестованное содер-Компонсит жание в стандартном образце Найдено, С ± е Погрешность А % Введено Найдено, С ± е Погрешность I), %
Метиловый спирт, об. % 0,005 0,0047 ± 0,0002 6,0 0,01 0,0153 ± 0,002 2,0
0,01 0.010 ± 0.001 - 0,02 0.032 ± 0,003 6,7
0.03 0,031 ± 0,002 3.0 0,04 0.076 ± 0,006 8,5
0,05 0.052 ± 0,003 4,0 0,06 0,116 ± 0.007 5.0
0,10 0,105 ± 0,008 5.0 0,20 0.300 ± 0.05 -
Альдегиды (в пересчете 1,00 1,7 ± 0,09 6,2 2.2 3,64 ± 0,22 4.2
на уксусный альдегид), 4,0 4,2 ± 0,08 5,0 4,76 9,20 ± 0,31 4.9
мг/дм-т 8,0 7,89 ± 0,35 1,41 7,70 16,12 ± 0,58 2,7
20,0 20,50 ± 0,94 2,5 28,34 50,14 ± 1.12 3,7
30,0 29,30 ± 1.20 2,3 32,84 60,91 ± 1.58 3.1
Эфиры (в пересчете на 10 10,86 ± 0,94 8.6 10,29 21.14 ± 0.86 4,2
уксусно- этиловый 20 20,14 ± 1,01 0.7 23,42 44.60 ± 2,10 2,7
эфир), мг/дм3 30 30,74 ± 1.24 2.5 38,14 66,00 ± 3.10 2,7
50 49,50 ± 2,18 1,0 50,12 101,00 ± 6.80 0.9
100 100,90 ± 3,61 0.9 110.10 206,00 ± 8.4 1.9
Изобутиловый спирт. 1 1,08 ± 0,08 8,0 2.10 3.00 ± 0,24 3,3
мг/дм3 4 4,10 ± 0.33 2.5 4,36 8.94 ± 0.61 7,0
20 20,51 ± 0,94 2,8 27,00 45,00 ± 2,10 4.3
Изоамиловый спирт. 3 3,16 ± 0,12 5,1 4,20 7,81 ± 0,63 8.5
мг/дм3 12 11,69 ± 0,93 2,6 15,16 29,01 ± 1,44 6.8
60 60,41 ±4,11 0,7 77,00 133,00 ± 6,24 2,9
Таблица 2 Метрологические характеристики методики
Определяемые компоненты Показатель сходимости а. % Показатель воспроизводимости А % Показатель точности Д. %
Метиловый спирт 1,8 8,7 8,5
Альдегиды (в пересчете
на уксусный альдегид) 4,8 7,3 4,9
Эфиры (в пересчете на
уксусно-этиловый эфир) 7.9 9,0 4,2
Изобутиловый спирт 4,4 8,3 7,0
Изоамиловый спирт 4,8 9,7 8.5
Правильность разработанной методики проверена ¡иетодом добавок (табл. 1), а также сопоставлением с данными, полученными арбитражными методами [5]. Расхождения между средними результатами, рассчитанные по /-критерию, статистически незначимы и укладываются в рамки случайного разброса. Проведена метрологическая аттестация методики. Сходимость результатов измерения содержания анализируемых компонентов не превышает допустимой погрешности анализа (45). Суммарная погрешность измерения не превышает 10% (табл. 2). Диапазон измеряемых концентраций: метилового спирта 0,005 — 0,1 об.%, альдегидов 1,0—30
мг/дм3, сложных эфиров 10—100 мг/дм3, изобу-тилового спирта 1—10 мг/дм3, изоамилового спирта 3 — 60 мг/дм3.
Предлагаемая методика позволяет определять указанные компоненты, одновременно контролировать их содержание на уровне и ниже гигиенических нормативов, отличается простотой и быстротой, так как сокращает время анализа более чем в 4 раза, что существенно при проведении серийных анализов.
Разработанную методику могут использовать контролирующие органы Госсанэпиднадзора, госстандарта, производственные лаборатории.
Литература
1. ГОСТ 5962—67 Спирт этиловый ректификованный. Технические условия. — М., 1967.
2. ГОСТ 12712—80 Водки и водки особые. Технические условия. — М„ 1980.
3. ГОСТ 5363—82 Водка. Правила приемки и методы испытаний. — М., 1982.
4. ГОСТ 5964—82 Спирт этиловый. Правила приемки и методы испытаний. — М., 1982.
5. Доер(рель К. Статистика в аналитической химии: Пер. с нем. — М.. 1969.
Поступила 18.07.44
Й Я. Ф. КОТЕНОК. В. А. КОПЫСОВ, 1995 УДК 615.471.03:614.718-078
Я. Ф. Котенок, В. А. Копысов
УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ПРИБОРОВ И МЕТОДИК ИХ ПРИМЕНЕНИЯ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ
МИКРОБНОЙ ОБСЕМЕНЕННОСТИ ВОЗДУХА
Кировский педагогический институт им. В. И. Ленина
По данным ряда авторов [1—3, 7], важными источниками распространения бактериальных аэрозолей являются туалеты, больные животные и люди, а также микробиологические лаборато-
рии. Своевременное обнаружение источников бактериального загрязнения атмосферного воздуха и выявление при этом видового состава микробов позволит предупредить распростране-
Рис. I. Принципиальная схема прибора М-25 (объяснение в тексте).
нис многих инфекционных болезней.
Применяемые в наетояшее время приборы и методы [4—6] для определения общей обсеме-ненности атмосферного воздуха и наличия в нем микробов искомого вида имеют существенные недостатки. Мы предлагаем усовершенствованный прибор (модель М-25), характеризующийся высокой эффективностью, простотой использования и возможностью существенного расширения его применения в бактериологической практике (рис. 1, 2). Рекомендуемый нами прибор состоит из металлического цилиндра (У) высотой 220 мм и диаметром 100 мм. К внешней стороне крышки (2) герметично крепится дополнительный сосуд — генератор аэрозоля высотой 45 мм и диаметром 90 мм. Через крышку генератора аэрозоля (3) вмонтированы 2 патрубка (4) диаметром 10 мм. Внешние их концы выступают над крышкой на 20 мм. Они имеют внешнюю резьбу для винтовых колпачков, используемых при стерилизации прибора на электроплитке. При этом нижние концы патрубков не доходят до дна генератора аэрозоля на 20 мм. К ним крепятся с помощью резьбы распылители-барбо-теры (устройство барботсра описано ниже). К внутренней стороне крышки прибора с помощью сварки крепится цилиндр-отстойник (6) диаметром 30 мм. Нижний конец отстойника не доходит до дна стакана на 35 мм. В него вмонтирован цилиндр длиной 60 мм, заполненный гранулами (7) из нейтрального стекла, которые зафиксированы с торцов цилиндра сетками (8, 9) из нержавеющей стали. В верхней части цилиндра-отстойника вмонтирован пеногаситель (10). В крышку (2) прибора вмонтированы концы 2 трубок (77) диаметром 8 мм. Они не доходят до внутренней крышки генератора аэрозоля на 20 мм.
Остальные участки трубок намотаны на ци-линдр-отстойник. образуя спирали-завихрители (72). На нижних концах спиралей с помощью резьбы крепятся распылители-барботеры (13). Барботер состоит из металлического кольца (14) диаметром 35 мм и металлического колпачка (77) высотой 15 мм с сеткой (76) из нержавеющей стали. У дна цилиндра вмонтирован краник (75).
Присоединение прибора к вакуумному насосу или бытовому пылесосу осуществляется с помощью резиновой трубки к ротаметру (7сУ). Прибор снабжен манометром (19) для контроля за давлением пара в приборе при стерилизации его на электроплитке.
Приготовление прибора к работе. Через отверстие (5) в крышке генератора аэрозоля в прибор заливают 120—150 мм сорбирующей жидкости, в качестве которой могут быть использованы 0,5— 1,0% раствор крахмала, 3% раствор сахарозы или пептона. В сорбирующую жидкость добавляют 0,01% пеногасителя (растительного масла). Прибор стерилизуют в автоклаве или на электроплитке. В последнем случае состояние температуры в нем определяется величиной избыточного давления пара, которое регистрируется с помощью манометра. Давление пара в приборе не должно превышать 2 атм. При этом режиме прибор стерилизуют 25—30 мин.
Методика работы с прибором. Подготовленный к работе прибор подключают с помощью резиновой трубки к вакуумному насосу или бытовому пылесосу. Исследуемый воздух просасывают через барботеры генератора аэрозоля со скоростью 10—12 л/мин. При этом образующийся в нем мелкодисперсный аэрозоль из сорбирующей жидкости с потоком исследуемого воздуха поступает в спирали-завихрители, образуя на их внутренних стенках липкую пленку. На нее фиксируется значительное количество частиц — носителей бактериальных клеток, содержащихся в
исследуемом воздухе. Затем он проходит через распылители-барботсры цилиндра (/), оставляя в сорбирующей жидкости цилиндра основное количество бактериальных клеток. Наконец, струя воздуха проходит через слой стеклянных бус (7), покрытых липкой пленкой сорбирующей жидкости. Здесь завершается изоляция из него бактерий.
Эффективность прибора М-25 по выделению бактерий из атмосферного воздуха определена по следующей методике: выходящий из прибора воздух направляют с помощью стерильной резиновой трубки в сосуд, содержащий обеспложенный физиологический раствор хлорида натрия, и диспергируют его через барботср.
После окончания просасывания исследуемого воздуха через прибор закрывают патрубки (4) на крышке генератора аэрозоля (3) и открывают патрубок (5), через патрубок (/<У) вводят в прибор 100 мл дистиллированной воды. Затем к нему присоединяют через резиновую трубку шприц емкостью 300 мл и производят смыв с внутренних поверхностей спиралей-завихрите-лей, стеклянных бус отстойника и стенок генератора аэрозоля. Затем по принятой в бактериологической практике методике определяют концентрацию бактерий в смывной жидкости, а также в физиологическом растворе, в котором был диспергирован выходящий из прибора воздух. Зная количество микробных клеток в 1 мл физиологического раствора и смывной жидкости, их объемы, а также количество прошедшего через прибор исследуемого воздуха, несложно получить информацию о степени общей обсемснен-ности микробами исследуемого воздуха и определить коэффициент проскока бактериальных клеток через прибор в зависимости от концентрации их в исследуемом воздухе.
С целью определения потенциальной возможности испытуемого прибора по изоляции бактерий из исследуемого воздуха в последнем активно повышали их концентрацию путем распыления различных количеств культуры вакцинного штамма кишечной палочки (штамм М-17). Приведенные в табл. 1 результаты исследования воздуха по описанной выше методике с помощью прибора М-25 свидетельствуют о его высокой эффективности.
Таблица 1
Эффективность прибора М-25 по изоляции бактерий из воздуха
Количество воздуха, м-
Температура воздуха. 'С
Число бактерий в I м' вощуха
Рост бактерий в физиологическом растворе
контроль
0,75 0.65 0,70
0,60 0,70 0,60 0.65 0,75
19-20
20-22
21-23
22-23 19-21
-18 -20 -23
17 000 38 000 75 000
160 000 280 000 2 000 1 200 1 000
Н. о.
Н. о. Н. о.
Отдельные колонии То же Н. о. Н. о. Н. о.
Обильный
Слабый
Примечание. Опыт — диспергирование в физиологическом растворе воздуха, прошедшего через прибор, контроль — не прошедшего через прибор, Н. о. — не обнаружено.
Наличие в генераторе аэрозоля барботеров (4) позволяет существенно расширить возможности применения рекомендуемого прибора в микробиологической практике и использовать его: 1) для определения уровня загрязнения бактериями воздуха при положительных и отрицательных температурах (см. табл. 1); 2) для исследования воздуха, содержащегося в герметично изолированной емкости, снабженной бактериальным фильтром; 3) для определения плотности аэрозоля вакцинного штамма при аэрогенной вакцинации животных. При этом прибор может находиться за пределом помещения для вакцинируемых животных.
Во всех указанных выше опытах исследуемый воздух направляют в прибор через стерильные резиновые трубки, герметично соединенные с барботерами (4) генератора аэрозоля.
Итак, прибор может быть эффективно использован в различных условиях для изоляции бактерий из исследуемого воздуха с целью определения уровня его обшей обсемененности смешанной культурой. Высокая эффективность прибора экспериментально подтверждена значительным количеством лабораторных опытов.
Важно также, что применение прибора не связано с необходимостью стерилизации его в автоклаве, так как он может быть обеспложен на любом источнике тепла (керогаз, электроплитка).
Разумеется, что санитарной службе очень важно иметь достоверную информацию не только о состоянии общей обсемененности микробами воздуха, но и о наличии в нем бактерий искомого вида — возбудителей того или иного инфекционного заболевания. Существующие в настоящее время методики качественного анализа смешанной культуры, в том числе выделенной из исследуемого воздуха, требуют существенных усовершенствований.
Мы предлагаем использовать с этой целью прибор, названный нами "трофосепаратор" (рис. 3).
Рис. 3. Общин вид трофосепаратора (объяснение в тексте).
Он состоит из металлического стакана (7) диаметром 45—50 мм и высотой 150—155 мм. У основания прибор снабжен патрубками (2) диаметром 10—12 мм и длиной 8—10 мм. К ним с помощью резьбы крепятся краники (3) и цилиндры (4) диаметром 40 мм и высотой 20—25 мм. От к;икдого из них отходят металлические трубки (5) диаметром 10 мм. Вокруг 5 из них спирально закручены трубки (6) диаметром 10 мм. Спирали различаются по числу витков (от 1 до 8). В одну из трубок (без спирали) вмонтирован бактериальный фильтр с резиновой грушей (7), оборудованной всасывающим клапаном (<V). Цилиндры и образующие спирали трубки закрыты металлическими пробками (9) с резиновыми уплотнителями. Стакан прибора также закрывают металлической крышкой (/0 с резиновым уплотнителем. В центре крышки имеется отверстие, диаметр которого регулируется или даже полностью перекрывается специальным устройством (//). К центру крышки крепится бактериальный фильтр (72).
Эффективность трофосепаратора (см. рис. 3) определена с помощью следующей методики. Прибор стерилизуют в автоклаве при 120°С в течение 25—30 мин и после охлаждения закрывают краники (3). В центральный сосуд прибора вносят исследуемую смешанную культуру апатоген-ных микробов (В. subtilis, В. myeoides, В. mesen-tericus, Proteus vulgaris). В наших опытах в качестве бактерий искомого вида в указанную выше культуру добавляют разнос количество бактерий вакцинного штамма кишечной палочки М-17. Затем цилиндр прибора с исследуемой культурой заполняют стерильной питательной средой (pH 7,1—7,2), содержащей 0,75% глюкозы и 0,03% гидросульфата |9). Последний добавляют в питательную среду для снижения ее окислительно-восстановительного потенциала и тем самым уменьшают лагфазу (период задержки размножения искомых бактерий).
Трофосепаратор помещают в термостат и инкубируют в течение 5—6 ч в статических условиях при 35—37°С. Затем в цилиндры сепараторов вводят селективные среды для бактерий искомых видов. В наших опытах для Е. coli М-17 применяли среду следующего состава: пептон pH 7,3— 7,4, содержащий 1% глюкозы, 0,03% гидросульфата. Для ингибирования роста грамположительных бактерий в питательную среду добавляли один из трифенилмстановых красителей 1:1 000 000 [8J. Через 6—8 ч повторной инкубации при 37°С из цилиндров и трубок спиралей, выполня-
Таблииа 2
Результаты исследования смешанной культуры на содержание бактерий искомого вила (Е. coli М-17)
Число живых бактерий в 1 мл смешанной культуры Число положительных результатов (числитель) И1 числа опытов (знаменатель)
М-17 сопутствующие (истерии (4 вила) опыт контроль
120 2.5 • 106 2/3 0/3
216 3,4 • 106 2/3 0/3
350 4,0 ■ 106 3/3 0/3
480 3.8 ■ 106 3/3 2/3
620 3,2 • 106 3/3 3/3
950 5,0 • 106 3/3 3/3
ющих в приборе роль сепараторов, проводят высевы на плотные питательные срсды в чашках Петри. После их инкубации в термостате в течение 20—24 ч выделяют из различных по величине, форме и другим признакам колоний чистые культуры микробов для определения их видовой принадлежности. Контролем в этих опытах служили результаты исследований подопытных культур по принятой методике выделения чистой культуры.
Как показывают приведенные в табл. 2 результаты сопоставимых опытов, предлагаемая нами конструкция прибора позволяет выделять микробы искомого вида при минимальном их содержании в исследуемой смешанной культуре. Следует отметить, что в большинстве опытов микробы искомого вида были выделены в чистой культуре при первом же высеве из сепараторов прибора на плотные питательные среды.
Важно также, что конструкция трофосепаратора, видимо, может обеспечить выделение микробов не только с аэробным, но и с анаэробным типом биологического окисления.
Высокая эффективность результатов исследования смешанной культуры на содержание в ней микробов искомого вида в значительной степени обусловлена особенностями конструкции трофосепаратора. Так, наличие спиралей-завихрите-лей, объединенных общей камерой для размножения исследуемой смешанной культуры, обеспечивает возможность в процессе ее подращивания регулировать в каждом из них условия, наиболее полно отвечающие особенностям биологических свойств выделяемых бактерий. Это достигается в основном одновременным применением раличных по составу селективных сред в одном опыте для микробов разных видов (в том числе и по типу дыхания от анаэробов до обли-гатных аэробов).
Существенное значение для результатов исследования имеет различие сепараторов в приборе по числу витков в спиралях-завихрителях для повышения вероятности дифференциации выделяемых бактерий из исследуемой культуры по уровню их активной подвижности. Объем центрального сосуда (10) трофосепаратора обеспечивает возможность в каждом опыте использовать практически неограниченное количество исследуемого вещества. Это не может не сказаться положительно на повышении вероятности обнаружения микробов искомого вида при минимальном их содержании в исследуемых материалах.
Выводы. 1. Предложена усовершенствованная модель прибора М-25 для выделения бактерий из воздуха с целью определения обшей его обсемененности микробами, а также для исследования воздуха, содержащегося в герметично изолированной емкости, снабженной бактери-;шьным фильтром и определения плотности аэрозоля вакцинного штамма при аэрогенной вакцинации животных.
2. Разработана схема и по ней изготовлена модель прибора — трофосепаратора, обеспечивающего выделение бактерий искомого вида при минимальном их содержании в смешанной куль-
туре. При этом в опыте одновременно используются селективные питательные среды для микробов разных видов как с аэробным, так и с анаэробным типом биологического окисления.
Литература
1. Ганчерук Е. И.. Широбоков В. П., Салата О. В. // Гиг. и сан. - 1990. - № 7. - С. 18-20.
2. Зуева Л. П. Ц Микробиология. — 1986. — № 2. — С. 59-63.
3. Исакова X. И.. Владовец В. В., Колкер И. И. Микробиологические аспекты внутрибольничных инфекций в хирургических стационарах. — Ташкент, 1987. — С. 69—72.
4. Котенок Я. Ф. // Журн. микробиол. - 1989. — № 8. — С. 109-111.
5. К/>иг П. // Методы общей бактериологии / Под ред. Ф Герхардта. - М.. 1983. - С. 299.
6. Матвеев К. И. // Руководство по микробиологической диагностике. — М., 1973. — С. 21—29.
7. Нарижных А. А., Котенок Я. Ф., Уранов Н. Н. // Журн. микробиол. — 1977. — № 12. — С. 16—20.
8. Палий Г. К.. Раковский Р. В. // Ускоренные методы диагностики инфекционных болезней. — Кишинев. 1987. — С. 51-53.
9. Речменский С. С. Очерки экспериментальной аэробиологии. - М.. 1973. - С. 28-30.
Поступила 08.04.94
» КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ. 1995 УДК 613.2/.3:614.7):615.285.71 -074
Г. М. Басова, В. Е. Басов, Л. А. Забугина, Ю. И. Степкин, М. И. Чубирко ОРГАНИЗАЦИЯ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА РАБОТЫ АККРЕДИТОВАННОЙ ЛАБОРАТОРИИ
Воронежский областной центр Госсанэпиднадзора
Токсикологическая лаборатория Воронежского областного центра Госсанэпиднадзора была аккредитована как испытательная лаборатория по широкому спектру исследований, в том числе по определению пестицидов и микотоксинов в продуктах питания, пестицидов в объектах внешней среды и воздухе рабочей зоны, а также по санитарно-токсикологическому исследованию новых веществ и материалов, игрушек, посуды, мебели, одежды, обуви. В связи с этим большое значение приобрели вопросы качества и эффективности работы и была создана система внешнего и внутреннего контроля качества, которая постоянно корректируется и совершенствуется. В настоящее время система включает следующие элементы: 1) группу стандартов предприятия; 2) аналитические проработки; 3) унифицированную учетно-отчетную документацию; 4) применение ЭВМ для механизации трудоемких работ.
В целях установления единых требований к отдельным видам работ созданы и используются стандарты: 1) построение и обсчет погрешности градуировочных графиков [5|; 2) санитарно-хи-мические исследования древесно-стружечных, древесно-волокнистых плит и изделий из них (11; 3) внешний и внутренний контроль качества аналитических работ при спектрофотометричес-ких исследованиях(4); 4) отбор проб воздуха рабочей зоны (31; 5) контроль за содержанием веществ при использовании методов тонкослойной и газожидкостной хроматографии (2].
В результате внедрения этих стандартов соблюдаются единые требования к построению и поверке погрешностей градуировочных графиков, к метрологическому обеспечению различных видов аналитических работ, к использованию приборов, оборудования, реактивов, документов и расчетов, устранены ошибки ряда методик; в соответствии со стандартами проводится работа с ведомственными и межрайонными лабораториями.
Среди аналитических наработок, позволивших улучшить качество работы токсикологической лаборатории, можно выделить следующие: проведение параллельных исследований одним или раз-
ными исполнителями; исследование закодированных проб; использование нескольких методов при исследовании одного и того же образца (например, атомно-абсорбционной спектрофотометрии и полярографии при исследовании керамической посуды); внесение стандартных растворов при различных операциях исследования (экстракция, очистка, отгонка и др.) для проверки качества выполнения этих операций; сличительные исследования одних и тех же проб в аналогичных лабораториях ветеринарной, агрохимической служб и др.
Многообразие видов исследования требует большого количества документации — актов отбора проб, направлений, протоколов результатов исследования, отчетов, информационных карт, а при проведении анализа деятельности лаборатории и отчета о работе необходимо заполнять большое количество таблиц. Унификация учетно-отчетной документации решается нами по двум направлениям: путем создания программного обеспечения отчетов и подработки перс-численных выше документов в соответствии с требованиями по обработке данных на ЭВМ.
Составление периодической (за месяц, квартал, год) отчетности требует очень больших и к тому же непроизводительных затрат времени. Разработанная в токсикологической лаборатории программа "Отчетность" позволяет в десятки раз сократить потери рабочего времени. Она обеспечивает создание баз данных по материалам текущей деятельности лаборатории, проведение выборок по различным признакам (районы, группы объектов, объекты, вещества) за любые промежутки времени (от 1 мес до нескольких лет), оформление отчетности по форме 18 (таблицы 7, 1, 6, 2 и т.п.), проведение внутреннего анализа работы лаборатории по стандарту предприятия. База данных ведется по разделам: пищевые продукты, санитарная химия, внешняя среда. По программе "Отчетность" осуществляется в полном объеме работа с базами данных — заполнение, проведение выборок по любым признакам, внесение изменений, просмотр базы данных, удаление из базы данных.
