CC BY
3
вить не удается, тогда как между кишечной палочкой и возбудителем сибирской язвы (штамм СТИ) имеется явное различие.
Различаются и спектры суточной и трехнедельной сибиреязвенной культуры. В спектре препарата, содержащего большое число спор, выявляется сильная полоса поглощения при 1750 см-1, обусловленная, по-видимому, липидами; характерное для нуклеотидов поглощение в области 1250 см-1, напротив, в этом спектре ослаблено. Есть и другие отличия, интерпретация которых пока еще не ясна; дальнейшие исследования в данном направлении могут оказаться полезными при расшифровке биохимической сущности процесса спорообразования.
Как видно из изложенного, описанная методика позволяет довольно успешно изучать индивидуальные спектральные характеристики микроорганизмов. Однако, потребуются еще детальные исследования на более обширном материале, прежде чем можно будет сделать вывод о-возможности дифференциации отдельных родов и видов микроорганизмов по их ИК спектрам.
ЛИТЕРАТУРА
Вайль Ю. С., Клевакин В. М. Ж. микробиол., 1962, № 6, с. 96. — Benedict A. A. et al., Texas. Rep. biol. Med., 1954, v. 12, p. 21. — G о 1 d e n J. D. S., S h a r -ре E. M., J. Gen. Microbiol., 1958, v.19, p. 76. — G r e e n s t r e e t J. E. C., Nor ris К. P., Spectrochem. Acta, 1957, v. 9, p. 177. — К i r k p a t r i с k H. C„ Lindner R. C., Phytopatology, 1954, v. 44, p. 525. — Zevine S. et al., J. Bact., 1953, v. 65, p. 10.— L e v i n e S. et al., J. infect. Dis., 1955, v. 96, p. 193. — Schneider M. D., McLaughlin J., J. Bact., 1955, v. 70, p. 87. — R a n d a 11 H. M. et al., Am. Rev. Tuberc., 1951, v. 63, p. 372.— Smith D. W. et al., Am. Rev. Tuberc., 1954, v. 69, p. 505. — S m i t h D. W. et al., Ann. N.-Y. Acad. Sei., 1957, v. 69, p. 145. — S t e v e n s о n H. J„ Bol-duan О. E., Science, 1952, v. 116, p. 111. —Thomas L. C., Greenstreet J. E., Spectrochem. Acta, 1954, v. 6, p. 302.
Поступила 21/IV 1966 r.
УДК 614.777-078:576.851.49.097.21-
УСКОРЕННЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИРУЛЕНТНОСТИ ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ ВОДЫ БРЮШНОТИФОЗНЫХ БАКТЕРИЙ
Ю. Г. Талаева
Институт общей и коммунальной гигиены им. А. Н. Сысина АМН СССР, Москва
Атипичным формам бактерий в настоящее время не уделяют должного внимания. Санитарные бактериологи иногда при обнаружении в воде атипичных штаммов не имеют возможности заниматься более глубоким изучением их культуральных свойств и указывают на отсутствие в воде возбудителей инфекций. В тех случаях, когда общепринятые бактериологические приемы идентификации выделенных из воды штаммов (морфологические, биохимические и серологические) не позволяют окончательно решить вопрос об их видовой принадлежности, для правильного представления о санитарно-эпидемиологическом значении этих «водных» штаммов необходимо ориентироваться на их биологическую активность, а именно вирулентность.
Общепринятый метод определения вирулентности брюшнотифозных бактерий на белых мышах требует 3—5-дневного срока наблюдения. Такие сроки анализа не могут удовлетворить требований практических работников.
Известно, что вирулентность многих бактериальных видов можно-определять в культуре ткани. Holland и Pickett работали в этом направ-
.лении с возбудителями бруцеллеза, Brosbe и соавторы, Hanks, Shepard и многие другие — с микобактериями. Н. Н. Гинсбург и И. Г. Макаренко, Ю. М. Федотова определяли в культуре ткани вирулентность ряда возбудителей особо опасных инфекций — сибирской язвы, туляремии, бруцеллеза. Т. А. Шарапова и Б. К. Гаврилюк успешно проводили дифференциацию в культуре ткани энтеропатогенных и непатогенных кишечных палочек. Литературных данных об использовании клеток культуры ткани для исследования вирулентности брюшнотифозных бактерий нет. Поэтому мы поставили перед собой задачу выяснить принципиальную возможность выявления вирулентности брюшнотифозных бактерий на клетках культуры ткани и при положительном результате применить этот метод для изучения вирулентности длительно вегетировавших в воде (в эксперименте) бактерий брюшного тифа. Были использованы клетки первично трипсинизированных тканей (фибробласты человеческого и куриного эмбрионов) и перевиваемые линии клеток (HeLa, НЕр-2, KB, амниотические, ткань почки морской свинки, рак эпителия рта, клетки почки человека). Клетки выращивали 2 способами: на покровных стеклах в пенициллиновых флаконах и в пробирках с питательной средой № 199 в течение 3—4 суток при 37°. В опыт отбирали стекла и пробирки с хорошим монослоем.
Для заражения ткани исследуемый штамм засевали на столбик мя-со-пептонного агара. Посев подращивали при 37° в течение суток. Затем стерильным физиологическим раствором смывали рост культуры (примерно 2—3 мл на пробирку), концентрацию бактериальной взвеси устанавливали по оптическому стандарту и заражали определенный объем питательной среды № 199 (без антибиотиков) из расчета 1 млрд. бактерий в 1 мл среды. Питательную среду, в которой подращивали клетки культуры ткани, заменяли зараженной средой № 199, разливая ее по 2 мл в пробирку или пенициллиновый флакон, который затем помещали в термостат с температурой 37°.
Наблюдения за характером изменений монослоя клеток проводили путем непосредственного микроскопирования предметных стекол и пробирок при малом увеличении. Однако более четкая картина получается при окрашивании клеток культуры ткани. Мы проверяли различные способы окрашивания: метиленовым синим 20—30 мин. (фиксация метиловым спиртом 10—20 мин.), по Романовскому—Гимзе 20—30 мин. (фиксация метиловым спиртом 10—20 мин.) и по Граму (фиксация абсолютными спиртом 10—20 мин.). Лучшие результаты дало окрашивание по Граму — клетки культуры ткани интенсивно окрашивались в розовый цвет. Последний метод окрашивания позволяет также определить банальное бактериальное загрязнение тканевой культуры грамположитель-ными кокками и палочками и может быть рекомендован для проверки стерильности культуры ткани.
Оказалось, что все перечисленные выше виды клеток культуры ткани были одинаково чувствительны к воздействию брюшнотифозных бактерий. Это обстоятельство облегчает возможность использования указанного метода в практике.
Установлено, что через 18—20 часов контакта в термальных условиях патогенные штаммы брюшного тифа в концентрации 1 млрд. микробных тел в 1 мл питательной среды вызывали дегенерацию клеток культуры ткани, разрушая монослой. Сапрофитные штаммы кишечной палочки при тех же условиях опыта не оказывали цитопатического действия. На рис. 1 (ув. 4X10) показан монослой фибробластов куриных эмбрионов (контроль), на рис. 2 — неповрежденная ткань после 18-часового совместного культивирования с сапрофитной кишечной палочкой в концентрации 1 млрд. в 1 мл питательной среды. На рис. 3 представлены результаты опыта с вирулентным штаммом брюшного тифа № 299. Как видно из этого рисунка, клеточный слой утратил свою монолитность —
имеются большие просветы на стекле, свободные от клеток культуры ткани, а сохранившиеся на стекле клетки подверглись дегенерации — сморщились и уплотнились под влиянием вирулентных брюшнотифозных бактерий. Результаты некоторых опытов по определению вирулентности
Рис. 1. Однослойная культура фибробластов куриных эмбрионов (контрольная).
Рис. 2. Неповрежденная однослойная культура фибробластов куриных эмбрионов через 18 часов совместного культивирования с сапрофитной кишечной палочкой.
Рис. 3. Дегенерация клеток фибробластов куриных эмбрионов через 18 часов совместного культивирования с вирулентным штаммом брюшнотифозных бактерий.
Рис. 4. Дегенерация клеток фибробластов куриных эмбрионов через 18 часов совместного культивирования с брюшнотифозным штаммом. выделенным на 280-й день из экспериментально зараженной воды.
бактерий на белых мышах и фибробластах куриного эмбриона показаны в таблице. Как видно из таблицы, результаты 2 методов совпадают. Исходный контрольный брюшнотифозный штамм № 299, свежевыделенный от больного, вирулентен для белых мышей и вызывает цитопатический
эффект, что не отмечается в опытах с сапрофитной кишечной палочкой. Всего проведено свыше 800 определений на культуре ткани при параллельном заражении 350 белых мышей.
Убедившись в надежности метода культуры ткани, мы применили •его для определения вирулентности брюшнотифозных бактерий, длительно вегетировавших в воде (в экспериментальных условиях). Для выделения этих штаммов из воды пользовались обычной бактериологической методикой: концентрированием бактерий путем фильтрования воды через мембранные фильтры с последующим подращиванием их на элективных питательных средах. Выделенную чистую культуру дифференцировали по морфологическим, биохимическим и серологическим свойствам, а затем уже определяли их вирулентность на культуре ткани и белых мышах. Оказалось, что некоторые «водные» штаммы не утратили вирулентных свойств. Так, на рис. 4 представлен препарат, показывающий разрушенный монослой, дегенерацию клеток фибробластов куриного
Результаты параллельного определения вирулентности брюшнотифозного штамма № 299 путем заражения белых мышей и фибробластов куриных эмбрионов
Штамм Срок вегетирования в воде (в днях) Опыт с мышами (по 20 мышей в опыт) Опыт с культурой ткани (1 млрд. в 1 МЛ)
заражающая доза (в мл) в течение 3 дней (в млн.. по Кербе-РУ) время контакта (в часах) количество пробирок цитопатнче-ское действие
погибло живые
Брюшнотифозный № 299 Контроль 500 250 125 60 3 5 4 3 2 1 2 891 130 18 3 +
Тот же 181 5 250 125 60 4 4 3 3 1 1 2 2 89 130 4 18 3 *
Тот же 206 500 250 125 60 5 5 4 3 1 2 67 620 18 3 -Ф-
•Сапрофитная кишечная палочка Контроль 1 млрд. 500 250 125 60 1 4 5 5 5 5 Больше 1 млрд. 18 3 —
эмбриона в результате 18-часового совместного культивирования с бактериями брюшного тифа, выделенными на 280-й день из экспериментально зараженной автоклавированной речной воды.
Определение вирулентности по обычной методике (заражение белых мышей) доступно крупным бактериологическим лабораториям, которые в настоящее время почти везде работают совместно с вирусологическими •отделениями (в городских, областных или республиканских санэпидстанциях). Это при необходимости может обеспечить комплексирование ра-
боты бактериологов и вирусологов и постоянную возможность работы с культурой ткани.
Предлагаемый метод сокращает срок анализа в 3—5 раз, не требует содержания животных в специальных условиях, поэтому может быть использован для апробирования в практических лабораториях.
Выводы
1. Вирулентность брюшнотифозных бактерий можно анализировать-по цитопатическому действию на клетках культуры ткани.
2. Параллельное определение вирулентности бактерий путем заражения белых мышей и в культуре ткани приводит к полному совпадению результатов, что свидетельствует о надежности метода.
3. При использовании различных видов тканевых культур (перевиваемых и первично трипсинизированных) вирулентные брюшнотифозные бактерии оказывают цитопатическое действие во всех случаях.
4. Метод определения вирулентности брюшнотифозных бактерий на клетках культуры ткани имеет преимущества перед классическим в скорости получения результатов (18 часов вместо 3—4 суток), простоте и дешевизне.
5. Этим методом можно пользоваться для изучения вирулентности брюшнотифозных бактерий, длительно вегетировавшихся в воде.
ЛИТЕРАТУРА
Г и н с б у р г Н. Н., Макаренко И. Г. Арх. пат., 1964, № 7, с. 41. — Федотова Д. М. Ж. микробиол., 1963, № 12, с. 84.—Шарапова Т. А., Гаврилюк Б. К. Там же, № 8, с. 94. — В г о s b е Е. A., S u g i h а г d Р. Т., Smith С. R., J. Bact., 1962, v. 84, p. 128.— Hanks J. H., Am. Rev. Tuberc., 1958, v. 77, p. 789.— Holland J. J., Pickett M. J., J. exp. Med., 1958, v. 108, p. 343. — S h e p а г d C. C.„ J. Bact., 1957, v. 73, p. 494. — I d e m, J. exp. Med., 1957, v. 105, p. 39.
Поступила 5/VIII 1966 r.
УДК 614.37:614.73-
МЕТОДИКА САНИТАРНО-ДОЗИМЕТРИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ ЗА ПУНКТАМИ ЗАХОРОНЕНИЯ РАДИОАКТИВНЫХ ОТХОДОВ
Канд. мед. наук В. Н. Гуськова
Ленинградский научно-исследовательский институт радиационной гигиены Министерства здравоохранения РСФСР
Захоронение радиоактивных отходов представляет собой последнее звено технологического процесса обезвреживания радиоактивных отходов при их централизованном сборе и удалении. Обеспечение радиационной безопасности для работающих, а также охрана внешней среды от радиоактивного загрязнения являются основными задачами организаций, осуществляющих сбор, удаление и захоронение радиоактивных отходов.
Предупредительный санитарный надзор за выбором, проектированием, ходом строительства и эксплуатацией пунктов проводится в соответ-
