CC BY
74
14-20'
УСИЛЕНИЕ АПОПТОЗА ЛИМФОЦИТОВ ПОД ВЛИЯНИЕМ СИНТЕТИЧЕСКОГО ПЕПТИДА ИЗ АЛЬФА-ФЕТОПРОТЕИНА ЧЕЛОВЕКА (АФП ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ЯЗВЕ
Терентьев А. А., Казимирский А. Н., Лычкова А. Э., Салмаси Ж. М. РНИМУ им. Н. И. Пирогова, МКНЦ, Москва
LYMPHOCYTE APOPTOSIS ENHANCEMENT BY THE SYNTHETIC PEPTIDE OF HUMAN ALPHAFETOPROTEIN (AFP 14-20) IN EXPERIMENTAL ULCER
Terentev A. A., Kazimirsky A. N., Lychkova A. E., Salmasi J. M.
RNIMU after N. I. Pirogov MCNTC, Moscow
Лычкова Алла Эдуардовна Lychkova Alla E. E-mail:
lychkova@mail. ru
Терентьев Александр Александрович, заведующий кафедрой биохимии РНИМУ им. Н. И. Пирогова Казимирский Александр Николаевич, профессор кафедры биохимии РНИМУ им. Н. И. Пирогова Лычкова Алла Эдуардовна, д.м.н., заведующая отделом научных и патентных исследований МКНЦ Салмаси Жеан Мустафаевич, профессор кафедры патфизиологии РНИМУ им. Н. И. Пирогова Terent'ev Alexander Alexander, head of the Department of Biochemistry RNIMU after N. I. Pirogov Lychkova Alla Edward, MD, Head, Department of scientific and patent research MCNTC Kazimirsky Alexander Nicola, Professor, Department of Biochemistry RNIMU after N. I. Pirogov Salmasy Jeahn Mustafa, professor of pathological physiololgy RNIMU after N. I. Pirogov
Резюме
Изучено влияние регуляторного пептида типа АФП на течение экспериментальной язвы. Показано, что активация процессов апоптоза усиливает местную воспалительно-некротическую реакцию, с одной стороны, и активирует развитие спаечного процесса, с другой.
Ключевые слова: апоптоз лимфоцитов, синтетический пептид АФП, экспериментальная язва желудка. Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология 2014; 110 (10):50-52
Summary
The influence of regulatory peptide type of AFP on the course of experimental ulcers was investigated. It has been shown that activation of apoptosis by AFP enhance local necrotic inflammatory reaction, on the one hand, and enables the development of adhesions with the other.
Keywords: apoptosis of lymphocytes, the synthetic peptide AFP experimental gastric ulcer. Eksperimental'naya i Klinicheskaya Gastroenterologiya 2014; 110 (10):50-52
усиление апоптоза лимфоцитов... | lymphocyte apoptosis enhancement.
Альфа-фетопротеин человека включен во многие процессы, связанные с ростом, развитием и клеточной дифференцировкой. Продукты спонтанной протеолитической деградации альфа-фетопротеи-на оказывают регулирующее влияние на иммунную систему человека. Синтезирован фрагмент молекулы альфа-фетопротеина (АФП ) способный существенно увеличивать экспрессию рецептора запуска активационного апоптоза CD95 в активированных лимфоцитах человека. Активационный апоптоз лимфоцитов зависит от экспрессии двух взаимодействующих рецепторов Fas (CD95) — и FasL (CD178) -которые представляют собой важнейший механизм активационной элиминации лимфоцитов. Благодаря включению этого механизма удаляется большинство лимфоцитов после выполнения ими возложенный на них функций.
Ранее полученные данные показывают, что АФП14-20не влияет на лимфоциты, полученные от здоровых доноров, т.е. биологическое действие пептида зависит от функционального состояния клеток-мишеней.
Однако остается неясным насколько широко процесс индукции апоптоза активированных (развивающихся) клеток в организме может регулировать синтетический пептид АФП .
Определенный интерес представляет выяснение влияния синтетического АФП14 20на экспрессию рецепторов запуска активационного апоптоза лимфоцитов, активированных при воспалении и на течение экспериментальной язвы желудка у животных.
Исследование влияния АФП на течение экспериментальной язвы желудка проводили на 15 крысах породы Вистар 230-250 г в щадящих условиях нембуталового наркоза (40 мг/кг). Моделирование язвы желудка осуществляли путем нанесения аце-тоуксусной кислоты на границу фундального и ан-трального отделов желудка (модель язвы по Ока-бе). Регистрировали электромоторную активность (ЭМА) фундального и антрального отделов желудка с помощью погружных и поверхностных электродов площадью контактной поверхности 0,1-0,3 мм2 и 0,5-1 мм2, соответственно. На 4-5-й день модели язвы проводили контрольную регистрацию ЭМА отделов желудка с последующим обкалыванием пе-риульцерозной зоны пептидом LDSYQCT, соответствующим фрагменту АФП14-20. На 10-й день вновь проводили лапаротомию, регистрировали ЭМА отделов желудка. Контрольную группу составили 5 животных с моделью язвы по Окабе.
Исследование роли пептида АФП14-20.Фоновая частота медленноволновой активности фундального отдела желудка на 4-5 день язвы по Окабе
составляла 7,6±1,1 в мин, амплитуда 0,14±0,02 мВ. Фоновая активность гладких мышц антрального отдела желудка представлена медленноволновой и спайковой активностью. Частота медленных волн ЭМА составила 7,5±0,9 в мин, амплитуда — 0,12±0,02 мВ. В 22% случаев отмечается низкоамплитудная спайковая активность частотой 0,2±0,02 на 100 медленных волн и амплитудой 0,1±0,02 мВ.
Введение пептида АФП в периульцерозную зону сопровождалось активацией медленных волн ЭМА гладких мышц фундального отдела желудка: частота увеличивается до 8,5±1,3 в мин (18%), амплитуда — до 0,18±0,03 мВ (28,5%). В 52% наблюдений отмечалась спайковая активность амплитудой 0,10±0,01 мВ, частотой 0,40±0,02 на 100 медленных волн.
Введение пептида АФП в периульцерозную зону сопровождалось активацией медленных волн ЭМА гладких мышц антрального отдела желудка: частота увеличивается до 8,3±1,2 в мин (10,7%), амплитуда — до 0,15±0,04 мВ (25%). В 22% наблюдений наблюдалась спайковая активность амплитудой 0,2±0,02 мВ, частотой 0,60±0,02 на 100 медленных волн (200%, р<0,01).То есть, введение пептида АФП в периульцерозную зону сопровождается ростом медленноволновой и значительным увеличением спайковой активности отделов желудка, которая характеризует увеличение моторной деятельности желудка в целом.
На 10-й день существования язвы желудка в условиях введения пептида АФП частота и амплитуда медленноволновой активности увеличивается соответственно, дополнительно на 45-49% и на 120-150%. Спайковая активность выявляется чаще на 60-80% и амплитуда ее несколько выше. То есть, введение регуляторного пептида АФП14-20сохраняет электромоторную активность отделов желудка на высоком уровне, тогда как в контроле к 10-му дню существования язвы по Окабе показатели моторики практически нормализуются.
Макроскопически на 10-й день язва по Окабе, активированная пептидом АФП14-20, представляет собой глубокий обширный дефект стенки желудка с подрытыми краями, дно которого заполнено гнойными наложениями. Отмечаются мощный спаечный процесс в брюшной полости. Соединительнотканные спайки образуются между желудком, селезенкой, правой долей печени, тонкой и толстой кишкой.
Таким образом, повреждающее действие пептида АФП14-20на фоне моделированной язвы желудка более выражено, чем у Е-пептида из ТБГ, что подтверждается электрофизиологическими и макроскопическими исследованиями.
Фундальный отдел
Антральный отдел
Язва по Окабе Частота амплитуда частота амплитуда
Язва по Окабе на 5-й день 7,6±1,4 0,14±o,02 7,5±0,9 0,12±0,02
АФП14-20-пептиды 5-й день 8,±1,3 0,18±0,03 8,3±1,2 0,15±0,04
АФП 14-20-пептиды 10-й день 12,6±1,7 0,42±0,06 13,1±1,5 0,35±0,05
Таблица.
ЭМА фундального и антрального отдела желудка при моделировании язвы по Окабе и применении
АФИ пептида.
Заключение
АФП14-20влияет на активационный процесс в лимфоцитах человека путем увеличения экспрессии рецептора запуска активационного апоптоза CD95, что повышает апоптоз среди CD95+-лимфоцитов. В модели экспериментальной язвы желудка у крыс происходит усиление электромоторной активности. Как установлено ранее (Лычкова А. Э., 2004а, б), восстановительные процессы в этой экспериментальной модели сопровождаются активацией серотонинергических систем, величина которой коррелирует с усилением электромоторной активности. Введение пептида АФП14 20приводит к выраженному увеличению электромоторной
Литература
1. Казимирский А. Н., Салмаси Ж. М., Макарков А. И., Терентьев Р. А., Татаринов Ю. С. Исследование им-мунорегуляторной активности альфа-фетопротеина человека, выделенного на эстроген-иммобилизо-ванном сорбенте. // Росс. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, проктологии, 1996, № 2, С. 62-66.
2. Казимирский А. Н., Терентьев А. А. Механизмы внутриклеточного запуска апоптоза. // Вестник РГМУ — 2002 — Т. 24, N 3, С. 34-39.
3. Казимирский А. Н., Терентьев А. А., Салмаси Ж. М. Эмбриоспецифические белки в коррекции иммунопатологических состояний. // Аллергия и иммунопатология.: М. -1999.-Глава 18, с. 251-269.
4. Лычкова А. Э. Серотонинергическая нервная система сердца при патологии и органов брюшной полости при функциональной нагрузке и патологии. // Бюлл экспер биол мед. — 2004 -;138 (4):325-9.
5. Лычкова А. Э. Серотонинергические системы би-лиарного тракта, желудка и двенадцатиперстной
активности, которое нарастает к 10-му дню существования язвы. Это может быть связано, прежде всего, с активацией процесса апоптоза на фоне усиления активности серотонинергических систем, которые в совокупности уменьшают местную иммунологическую реактивность тканей желудка и компенсаторно увеличивают реактивные процессы в брюшной полости.
Таким образом, полученные данные свидетельствуют о способности изучаемого пептида активировать апоптоз развивающихся клеток и за пределами иммунной системы в ходе восстановительных процессов.
кишки в норме и при экспериментальной язве желудка. // Экспер клин гастроэнтерол. — 2004 -; (6): 100-4.
6. Терентьев А. А. Выявление гомологичных последовательностей в первичных структурах альфа-фе-топротеина и некоторых онкофетальных белков человека. // Вестник РГМУ — 2001 — № 5 (20), С. 52-54.
7. Хаитов P. M., Игнатьева Г. А., Сидорович И. Г. Иммунология (2-е издание). М.: Медицина. — 2002-536 С.
8. Boyum A. Separation of leucocytes from blood and bone marrow. // Scand. J. Lab. Invest. — 1968. — V. 21, Suppl. 97, P. 9-109.
9. Sabelko-Downes K. A., Russell J. H. The role of Fas ligand in vivo as a cause and regulator of pathogenesis. // Current Opinion in Immunology — 2000 — N 12, P. 330-335.
10. Suneel D. Raza M., Raza A. A multistep process of Fas activation ensures the timely death of the desired target and prevents the bystander death of normal cells. // Trends in Immunology — 2002 — V 23, N 4, P. 187-194.
