Научная статья на тему 'Уровень IgE и влияние rlL-4, rlL-2, rlFN-γ на lgE-продукцию при нарушениях эритроидной пролиферации'

Уровень IgE и влияние rlL-4, rlL-2, rlFN-γ на lgE-продукцию при нарушениях эритроидной пролиферации Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

CC BY
259
28
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
ЭРИТРОБЛАСТЫ / НВМ / RLNFY И RIL-4 / AMLM6 / PV / IGE / RIL-2

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Ригер Н. А., Ханферян Роман Авакович

Ранние предшественники эритробластов, оказывая различное влияние на дифференцировку В-лимфоцитов, способствуют переключению предшественников В-лимфоцитов в IgE-продуценты. Ключевую роль в регуляции синтеза IgE играют цитокины, продуцируемые субпопуляциями Т-хелперов: Th1 и Th2. Механизмы IgE-продукции при угнетении эритропоэза или злокачественной пролиферации эритроидных предшественников остаются недостаточно исследованными. В работе обследовано 40 человек. 10 здоровых доноров составили контрольную группу. 30 больных с нарушениями эритроидной пролиферации были разделены по трем нозологическим единицам: 1-я группа 10 больных апластической анемией (подавление эритроидной пролиферации, НВМ); 2-я группа 10 больных острым эритромиелозом (клональная пролиферация эритробластов, AML-M6); 3-я группа 10 больных истинной полицитемией (миелопролиферативное заболевание с преобладанием эритроидного ростка кроветворения хроническая эритремия, РV). Содержание IgE в крови больных AML-M6 и PV в 2-2, 5 раза выше по сравнению с больными НВМ и здоровыми донорами (Р

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине , автор научной работы — Ригер Н. А., Ханферян Роман Авакович

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Ige Levels and Influence of rIL-4, rIL-2 and rIFN-γ on IgE production in Impaired Erythroid Proliferation

Early erythroblast precursors influence B-lymphocyte differentiation and, thus, promote transformation of B-lymphocytes into IgE antibody producers. Cytokines, produced by T-helper subpopulations Thl and Th2, play a major role in regulation of IgE production. Mechanisms of IgE production in depressed erythropoiesis or malignant proliferation oferythroid precursors need to be investigated more thoroughly. We examined 40 people. The control group consisted of 10 healthy donors. 30 patients with impaired erythroid proliferation were divided into 3 groups: the first group 10 patients with aplastic anemia (suppressed erythroid proliferation, HBM); the second group 10 patients with acute erythromyelosis (clonal erythroblast proliferation, AML-M6); the third group 10 patients with polycythemia vera (myeloproliferative disease with erythroid lineage prevalence chronic erythremia, PV). IgE level in blood of patients with AML-M6 and PV was 2-2. 5 times higher than in patients with HBM and healthy donors (p

Текст научной работы на тему «Уровень IgE и влияние rlL-4, rlL-2, rlFN-γ на lgE-продукцию при нарушениях эритроидной пролиферации»

Медицинская Иммунология 2002, Т. 4, N° 1, стр 37-44 © 2002, СПб РО РААКИ

Оригинальные статьи

УРОВЕНЬ IgE И ВЛИЯНИЕ rlL-4, rlL-2, rlFN-y НА IgE-ПРОДУКЦИЮ ПРИ НАРУШЕНИЯХ ЭРИТРОИДНОЙ ПРОЛИФЕРАЦИИ

/

Гематологическое отделение Краевого Онкологического диспансера, Краснодар * Институт “Аллергии и Астмы", Краснодар

Резюме. Ранние предшественники эритробластов, оказывая различное влияние на дифференцировку В-лим-фоцитов, способствуют переключению предшественников В-лимфоцитов в IgE-продуценты. Ключевую роль в регуляции синтеза IgE играют цитокины, продуцируемые субпопуляциями Т-хелперов: Thl и Th2. Механизмы IgE-продукции при угнетении эритропоэза или злокачественной пролиферации эритроидных предшественников остаются недостаточно исследованными. В работе обследовано 40 человек. 10 здоровых доноров составили контрольную группу. 30 больных с нарушениями эритроидной пролиферации были разделены по трем нозологическим единицам: 1-я группа - 10 больных апластической анемией (подавление эритроидной пролиферации, НВМ); 2-я группа - 10 больных острым эритромиелозом (клональная пролиферация эритробластов, AML-M6); 3-я группа - 10 больных истинной полицитемией (миелопролиферативное заболевание с преобладанием эритро-идного ростка кроветворения - хроническая эритремия,РУ). Содержание IgE в крови больных AML-M6 и PV в 2-2,5 раза выше по сравнению с больными НВМ и здоровыми донорами (Р<0,05). Лечение, подавляющее эрит-роидную пролиферацию, приводит к уменьшению содержания IgE в крови больных PV и AML-M6, а иммуно-депрессивная терапия способствует восстановлению эритропоэза и росту уровня IgE в крови больных НВМ (Р<0,05). Обнаружена различная чувствительность мононуклеарных клеток (МПК) больных с нарушениями эритроидной пролиферации к основным цитокинам(1Ь-4, IL-2 и INFy), регулирующим продукцию IgE. При подавлении эритропоэза повышен ответ лимфоцитов к супрессирующим синтез IgE факторам (rIL-2 и rlNFy), и отсутствует стимулирующий эффекг rIL-4. Злокачественная эритроидная пролиферация сопровождается снижением реакции МПК больных PV и AML-M6 на действие негативных регуляторов IgE-ответа (rIL-2 и rlNFy), которые могут даже увеличивать IgE-продукцию in vitro. Одновременно нарушена чувствительность МПК к IL-4, который может как слабо подавлять, так и ощутимо (особенно в высоких концентрациях) стимулировать синтез IgE у больных эритроидными вариантами лейкозов.

Ключевые слова: эритробласты, НВМ, AML-M6, PV, IgE, rIL-2, rlNFy и rIL-4.

Rygger N.A., Khanferyan R.A.

IGE LEVELS AND INFLUENCE OF rIL-4, rIL-2 AND rIFNg ON IgE PRODUCTION

IN IMPAIRED ERYTHROID PROLIFERATION

Abstract. Early erythroblast precursors influence B-lymphocyte differentiation and, thus, promote transformation of B-lymphocytes into IgE antibody producers. Cytokines, produced by T-helper subpopulations Thl and Th2, play a major role in regulation of IgE production. Mechanisms of IgE production in depressed erythropoiesis or malignant proliferation of eryth-roid precursors need to be investigated more thoroughly. We examined 40 people. The control group consisted of 10 healthy donors. 30 patients with impaired erythroid proliferation were divided into 3 groups: the first group - 10 patients with aplastic anemia (suppressed erythroid proliferation, HBM); the second group - 10 patients with acute erythromyelosis (clonal erythroblast proliferation, AML-M6); the third group - 10 patients with polycythemia vera (myeloproliferative disease with erythroid lineage prevalence - chronic erythremia, PV). IgE level in blood of patients with AML-M6 and PV was 2-2.5 times higher than in patients with HBM and healthy donors (p<0.05). The appropriate treatment, suppressing erythroid proliferation led to

Ригер H.A., Ханферян P.A.*

Адрес для переписки:

Ханферян Роман Авакович, д.м.н., профессор,

Тел./факс: (8612) 68-49-56

decrease in IgE levels in blood of patients with PV and AML-M6, while immunodepressive therapy led to normalization of erythropoiesis and increase in IgE levels in patients with HBM (p<0.05). We determined different susceptibility of mononuclear cells of patients with abnormal erythroid proliferation to

major cytokines (IL-4, IL-2 and IFN-y), which regulate IgE production. In depressed erythropoiesis the response of lymphocytes to IgE synthesis inhibitors (rIL-2 and rlFNy) increased, and rIL-4 had no stimulating effect. Malignant erythroid proliferation was accompanied with decreased response of mononuclear cells of patients with PV and AML-M6 to the influence of negative regulators of IgE response (rIL-2 and rlFNy), which can even enhance IgE production in vitro. At the same time, the susceptibility of mononuclear cells to IL-4 influence was disturbed. IL-4 can slightly decrease or significantly (especially in high concentrations) stimulate IgE synthesis in patients with erythroid variants of leukosis. (Med.Immunol., 2002, vol.4, Nl,pp 37-44)

Введение

Взаимодействие эритроидной и иммунной систем является одним из механизмов влияния на регуляцию антителообразования [11, 12, 18, 20, 53, 55, 56, 60, 62, 64]. Воздействия, стимулирующие эритропоэз, приводят к накоплению неспецифических супрессорных клеток, способных подавлять гуморальный иммунный ответ как in vivo, так и in vitro. Показано, что этими супрессорными клетками являются эритроидные ядросодержащие клетки - эр-супрессоры (Эр-с). Эр-с, ингибируя как спонтанную, так и индуцированную мито-генами пролиферацию В-лимфоцитов [20], подавляют IgM- и IgG-антителогенез на ранних этапах индукции иммунного ответа [12]. Популяция незрелых предшественников эритробластов вызывает стимуляцию синтеза гомоцитотропных антител у мышей. Ранние предшественники эритробластов, оказывая различное влияние на дифференцировку В-лимфоцитов в IgE-и IgG-синтезирующие клетки, способствуют переключению предшественников В-лимфоцитов в IgE-npo-дуценты [13]. Хорошо известно, что ключевую роль в регуляции синтеза IgE играют цитокины, продуцируемые субпопуляциями Т-хелперов (Th): Thl и Th2. Th2 продуцируют IL-4, IL-5, IL-10, IL-13 и IL-16. Супрессорами по отношению к ТЬ2-зависимому механизму иммунитета являются Thl, продуцирующие IL-2, IL-12 и IFNy, IL-3, лейкотриены и фактор стимуляции колоний макрофагов и гранулоцитов (GM-CSF). Субпопуляции Th различаются не только продукцией ци-токинов, но и выраженностью Fc-рецепторов для иммуноглобулинов [2, 3].

Во многих работах описаны количественные и качественные нарушения синтеза иммуноглобулинов классов A, G и М при различных злокачественных заболеваниях крови [1,9,10,14,16, 21,32,54]. Механизмы цитокиновой регуляции синтеза IgE при угнетении (гипопластическая анемия - НВМ) или злокачественной пролиферации эритроидных предшественников (истинная полицитемия, хроническая эритремия - PV, острый эритробластный лейкоз -AML-M6) остаются недостаточно исследованными. Между тем имеются основания предполагать их участие в развитии гемобластозов [27, 47, 57, 61].

Материалы и методы

Группы обследованных

В работе обследовано 40 человек. Контрольную группу составили 10 здоровых доноров. 30 впервые

выявленных больных с нарушениями эритроидной пролиферации были разделены по трем нозологическим единицам: 1-я группа - 10 больных апластичес-кой анемией (подавление эритроидной пролиферации, НВМ); 2-я группа - 10 больных острым эритро-миелозом (моноклональная пролиферация эритробластов, AML-M6); 3-я группа -10 больных истинной полицитемией (миелопролиферативное заболевание с преобладанием эритроидного ростка кроветворения

- хроническая эритремия, PV). Во всех случаях диагноз подтвержден на основании результатов цитологических, гистологических, цитохимических и им-мунофенотипических методов исследования костного мозга по общепринятым методикам [1, 7, 39, 43].

Эритроидная пролиферация

Вычисление индекса эритро/лейко у больных проводилось по отношению суммы всех эритронор-мобластов ко всем костномозговым элементам кроветворения, исключая ретикулярные и плазматические клетки, недифференцируемые бласты и клетки красного ряда. Индекс эритро/лейко в контрольной группе определялся по клеточному составу костного мозга в норме [7].

Определение общего IgE в сыворотках крови больных и здоровых доноров

Сыворотки больных и здоровых собирали и хранили в стерильных пластиковых пробирках (объем-1,5мл) при -20°С. Определение общего IgE в сыворотках до начала лечения и после 1-го месяца специфической терапии проводили с использованием стандартного тест-набора для определения общего IgE человека (IgE-total, FEIA, Pharmacia) - CAP System FEIA MasterCAP AM, Software Version 2.2; MasterCAP RM, Software Version 1.0 - method CAP FEIA (Pharmacia).

Исследование влияния rIL-4, rIL-2, IFNy на IgE-продукцию

Мононуклеары периферической крови (МПК) больных выделяли из гепаринизированной крови общепринятым методом на центрифуге РС-6 в градиенте плотности фиколл-пак (плотность - 1077-78) (“Pharmacia”). После 3-х кратной отмывки в среде 199 лейкоциты ресуспендировали в среде RPMI 1640 (“Serva”) и подсчитывали количество выделенных клеток. Культивирование в течение 9 суток проводилось в 96-луночных пластиковых планшетах в среде RPMI 1640, содержащей: 2 мМ глютамина, ЮмМ

Hepes (“Serva”), 50 мкг/мл телячьей сыворотки и 40 мкг/мл гентамицина (“Flow”), в концентрации 3x105 клеток на лунку и объеме 150 мкл в атмосфере, содержащей 5% С02, при 37°С и 96% влажности. Жизнеспособность клеток проверяли под микроскопом в проходящем свете в нативных препаратах с добавлением трипанового синего (“Serva”) (Клаус 1990). Для исследования механизмов регуляции синтеза IgE в культурах МПК использовали рекомбинантные интерлейкины: rIL-2, rIL-4 (“Boehringer Mannheim”) в интервале концентраций 1-100 IU/мл и рекомбинантный интерферон rlFNy (“Boehringer Mannheim”) в интервале концентраций 10-1000 IU/мл.

Определение общего IgE в супернатантах

Супернатанты собирали в стерильные пластиковые пробирки (объем-1,5 мл) и хранили при -20°С. Определение уровня общего IgE в супернатантах проводили с использованием стандартного тест-на-бора для определения общего IgE человека в субна-нограммовых диапазонах (IgE-ultra, FEIA, “Pharmacia”) - CAP System FEIA MasterCAP AM, Software Version 2.2; MasterCAP RM, Software Version 1.0 - method CAP FEIA (Pharmacia).

Статистическая обработка

Статистическая обработка полученных результатов выполнялась на персональной ЭВМ: WINDOWS 95; Microsoft Exel 7,0 (пакет статистических программ). Уже в начале статистической обработки данных было установлено, что изучаемые иммунологические показатели имеют логнормальное распределение. В связи с этим в дальнейшем значения всех показателей брали в логарифмической форме. Влияние цитокинов на синтез IgE оценивалось по отношению индуцированного уровня IgE к уровню IgE в спонтанных культурах МПК (и/с).

Результаты

Исследование концентрации IgE в сыворотке крови Изучение механизмов цитокиновой регуляции синтеза IgE при нарушениях эритроидной пролиферации было начато с исследования уровня IgE в кро-

Табл. 1. УРОВЕНЬ IgE У БОЛЬНЫХ С НАРУШЕНИЯМИ ЭРИТРОИДНОЙ ПРОЛИФЕРАЦИИ

Группы обследованных Уровень IgE (In) Эритро/лейко

НВМ AML-M6 PV Здоровые 2,68 ± 0,20 5,33 + 0,09** 6,43 ± 0,18** 2,90 ± 0,34 0,15 - 0,2 0,90 - 1,79** 0,67 - 0,89** 0,20 - 0,25

Примечание. ** - достоверные различия (Р<0,05) в группе больных и здоровых

ви больных. Полученные результаты количественного определения этих антител представлены в табл.1.

Уровень IgE достоверно различается среди исследуемых групп больных. Содержание IgE в крови больных острым эритробластным лейкозом (AML-М6) и истинной полицитемией (PV) в 2-2,5 раза выше (Р<0,05) по сравнению с больными аплазией кроветворения (НВМ) и здоровыми донорами. Эрит-роидных предшественников в костном мозге (индекс эритро/лейко, табл.1) у больных НВМ и здоровых меньше, чем у больных со злокачественной эритроидной пролиферацией. Таким образом, при заболеваниях, связанных с клональной злокачественной пролиферацией эритроидного ростка кроветворения, уровень IgE в крови выше, чем у больных с подавлением эритроидного ряда и у здоровых доноров.

Влияние специфического лечения на уровень IgE

Все больные исследуемых групп получали специфическое лечение по стандартным протоколам [5, 7]. Динамика уровня IgE в крови больных в течение 1 -го месяца терапии отражена в табл. 2.

Лечение больных PV и Мб цитостатическими препаратами, угнетающими пролиферацию гемопоэти-ческих предшественников, приводит к достоверному уменьшению содержания IgE в крови этих групп больных. Терапия глюкокортикоидами и CsA способствует росту уровня IgE в крови больных НВМ (Р<0,05 в сравнении с уровнем IgE до лечения; табл. 2).

Влияние rIL-4, rIL-2, rlFNy на IgE-продукцию in vitro

Обнаруженные нами изменения уровня сывороточного IgE до и после лечения у больных с нарушениями эритропоэза: НВМ, AML-M6 и PV позволяют предполагать различия в активности и соотношении Thl и Th2. Количественное и функциональное доминирование каждого из этих типов клеток приводит к повышению активности продуцируемых ими цитокинов. В частности - стимулирующих (IL-4) или супрессирующих (IL-2 и IFNy) IgE-npo-дукцию факторов [15, 2, 3, 51, 52].

Влияние рекомбинантных IL-4, IL-2 и IFNy на синтез IgE различается в группах исследуемых заболеваний (рис. 1-3). rIL-2 и rlFNy в культурах МПК

Табл. 2. УРОВЕНЬ 1дЕ У БОЛЬНЫХ ЧЕРЕЗ 1 МЕСЯЦ ПОСЛЕ НАЧАЛА СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ

Группы Уровень IgE (In) Уровень IgE (In)

обследованных до лечения через 1 месяц

НВМ 2,68 ± 0,20 3,07 ± 0,07*

AML-M6 5,33 ± 0,09 5,08 ± 0,08*

PV 6,43 ± 0,18 6,25 ± 0,19

Примечание. * - достоверные различия (Р<0,05) в группах больных после лечения по сравнению с контролем до лечения

больных НВМ дозозависимо подавляют продукцию

(р<0,05). г1Ь-4 в концентрации 1-10МЕ/мл у этой группы больных не влияет на синтез ^Е и лишь в концентрации 100МЕ/мл тормозит ^Е-ответ (рис. 1). г1Ь-4 в диапазоне концентраций от 1 до ЮМЕ/мл вызывает супрессию синтеза ^Е в культурах МПК больных АМЬ-М6 (рис. 2). При повышении концентрации г1Ь-4 до 100МЕ/мл ^Е-продукция возрастает в 2-2,5 раза (р<0,05). г1Ь-2 в дозе 1МЕ/мл увеличивает на 30%, а в дозе ЮОМЕ/мл снижает на 50% ^Е-продукцию МПК больных АМЬ-М6 (р<0,05). Достоверного влияния ЮМЕ/мл 1Ь-2 на синтез ^Е у этих больных не обнаружено. г1РКу может дозозависимо тормозить процесс синтеза ^Е в культурах МПК больных АМЬ-М6 (рис. 2). г1Ь-4 дозозависимо стимулирует продукцию ^Е в культурах МПК больных полицитемией (рис. 3, р<0,05). В зависимости от дозы г1Ь-4 ^Е-ответ возрастает в 2-4 раза. При всех используемых дозах г1Ь-2 влияния на синтез ^Е у больных РУ обнаружено не было. г1ЕЫу может дозозависимо снижать ^Е-продукцию при РУ (рис. 3).

Обсуждение

Известно, что эритробластные клетки способны подавлять спонтанную и индуцированную митогена-

- ♦- 1ёЕ

- ■- -1Ь2 -А- 1Ь-4

- -ж - 1КМ-у

ми пролиферацию В-лимфоцитов, что указывает на прямой механизм действия эритроидных ядросодержащих клеток на продукцию антител [12, 20]. Эрит-робласты являются пролиферирующими клетками, в которых происходят активные процессы транскрипции и трансляции [8]. Исследование содержания мРНК цитокинов в единичных эритроидных колониях показало наличие в эритроидных клетках мРНК 1Ь1, 1Ь-4,1Ь6, ПТЧу, СМ-СЗР.ТСРР [20]. Цитокины: 1Ь-1,1ЬЗ, 1Ь-4,1Ы0,1Ь-13, зСБ23К, 5^-411 и другие факторы способны как защищать злокачественный клон эритробластов от гибели [6,22,23-25], так и участвовать в дифференцировке ТЬО в ТЬ2 и переключению В-клеток на ^Е-продукцию [2,3]. Отсутствие запрограммированной гибели приводит к накоплению клона эритроидных предшественников [6]. Следовательно, наблюдаемое повышение уровня ^Е у больных с усиленным эритропоэзом (АМЬ-Мб, РУ) обусловлено стимулирующим влиянием большого количества эритроидных предшественников на продукцию ^Е (табл. 1.). Причиной угнетения эритропоэза при НВМ является иммунологически опосредованный дефицит ранних кроветворных предшественников и их сниженный пролиферативный потенциал [33, 35,

44, 63]. Гипоплазия кроветворения характеризуется разрушением гемопоэтических предшественников на

- ♦- 1ЕЕ

-11,-2

11.-4

Ж ■ -Ж- №N-7

Рис. 1. Влияние 11.-2, И-4 и 1Ж-у на синтез 1дЕ МПК больных

НВМ. Примечания:

1. по оси X: 1 -11.-2,11.-4 - 1и/ш1; 1Ж-у - 10и/т1. 2 - 11.-2,11.-4 - 10и/ т1; 1ГО-у - 100и/т1. 3 -11.-2, 1Ь4 - 100и/т1; ^-у - 1000и/т1;

2. по оси У: 1дЕ-индуцированный/1дЕ-спонтанный;

3.1дЕ - спонтанный синтез;

4.*- р<0,05 в сравнении со спонтанным синтезом

Рис. 2. Влияние 11.-2,11.-4 и ^N-7 на синтез 1дЕ МПК больных АМЬМб. Примечания:

1. по оси X: 1 - И-2,11.-4 - 1и/т1; 1РМ-у - 10и/т1. 2 - 11.-2, И-4 - 10и/ т1; И^-у - 100и/т1. 3 - И-2, 11.-4 - 100и/т1; 1ГО-у - 1000и/т1;

2. по оси У: 1дЕ-индуцированный/1дЕ-спонтанный;

3. 1дЕ - спонтанный синтез;

4. * - р<0,05 в сравнении со спонтанным синтезом

самых ранних стадиях пролиферации и дифференци-ровки [23,25]. Непосредственными эффекторами процесса гибели и функциональной недостаточности стволовых клеток являются цитотоксические эффекторы (Т-лимфоциты, макрофаги, МК-клетки) [53, 55,

60, 62, 64]. Ингибиторный эффект субпопуляций Т-клеток СШ*/С08+, СВ8+НЬА-1Ж* на пролиферацию и дифференцировку самых ранних эритроидных предшественников у больных НВМ связан с повышенной продукцией 1Ь-2; ЮТу и ЮТа; ТЫР-а [44]. У большинства больных обнаруживают повышенные уровни 1Ь-2 и ТО Р-а, ЮТа и ШРу, угнетение выработки 1Ь-1 [5,16,19,44,56]. 1Ь-2,1Ь-12, ТЫР-а, ШРа и ШРу блокируют превращение ТЬО в ТЬ2, угнетают активацию и дифференцировку В-лимфоцитов в ^Е-анти-телопродуценты, что ведет к подавлению синтеза ^Е [2,3,15,26, 28,30,45, 46]. Таким образом уровень ^Е у больных с депрессией эритопоэза становится достоверно ниже, по сравнению с содержанием ^Е в крови больных со злокачественной эритроидной пролиферацией (табл. 1.).

Наиболее широко используемые в лечении НВМ Циклоспорин А (СбА) и синтетические аналоги гормонов коры надпочечников (преднизолон, дексаме-тазон, метилпреднизолон и другие) ингибируют активность ТЫ и цитотоксических клеток-эффекто-

Рис.З. Влияние 11.-2, И-4 и 1РЫ-у на синтез 1дЕ МПК больных РV.

Примечания:

1. по оси X: 1 - 11.-2, 11.-4 - 1 и/ш1; ^И-у - 10и/ш1. 2 - 11.-2, 11.-4 -10и/ш1; 1НМ-у - 100и/т1. 3 -11.-2, 11.-4 - 100и/т1; 1РЫ-у - 1000и/т1;

2. по оси У: 1дЕ-индуцированный/1дЕ-спонтанный.;

3. 1дЕ — спонтанный синтез;

4. * - р<0,05 в сравнении со спонтанным синтезом.

ров, подавляют продукцию IL-2 и IFNy, стимулируют дифференцировку Th2 и секрецию IL-1, IL-4, IL-3, GM-CSF [2, 3, 31, 36, 41], что способствует повышению уровня IgE у больных НВМ. Цитостатики при AML-M6 и PV вызывают подавление пролиферации и дифференцировки как индукторов и эффекторов синтеза антител, так и предшественников эритопоэза [9,32]. Через 1 месяц после начала цитоста-тической терапии происходит подавление антите-лопродукции и снижение уровня IgE в крови больных AML-M6 и PV (табл. 2).

При гиперпродукции сывороточного IgE В-лим-фоциты больных находятся в состоянии исходной повышенной активности с выраженным преобладанием плазмоцитарной реакции над иммунобластной [4]. Сравнивая полученные нами результаты влияния rIL-4, rIL-2 и rlFNy у исследуемых больных (Рис. 1-3.), очевидно, что при нарушениях эритро-поэза изменяется чувствительность клеточных популяций, регулирующих IgE-продукцию, к супрес-сирующим и активирующим синтез IgE цитокинам. При заболеваниях, обусловленных неконтролируемой пролиферацией эритроидных предшественников (AML-M6, PV), механизмы супрессии синтеза IgE, опосредуемые через влияние IL-2 и IFNy, могут вообще не оказывать своего действия на продуценты IgE. IL-2 в малых концентрациях даже стимулирует синтез IgE у больных AML-M6 (Рис. 2). Частичным подтверждением этого факта может быть обнаруженное ранее стимулирующее действие IL-2 [38] на начавшийся синтез IgE плазмоцитами IgE-синтезирующей миеломы. Следовательно, при злокачественной эритроидной пролиферации IL-2 может даже потенцировать IgE-продукцию активированными В-клетками. Добавление IFNy к генерации бласттрасформированных IL-4 В-клеток потенцирует синтез IgE [49, 59]. Наблюдаемое повышение уровня IgE в крови больных PV и AML-M6 (табл. 1.) можно объяснить угнетением клеточных механизмов, подавляющих синтез этих антител [50]. Дополнительно, как это было обнаружено у здоровых и больных атопией лиц, при гиперпродукции IgE возможно усиление экспрессии FceRII на моно-нуклеарах [42]. Это ведет к усилению продукции IgE лимфоцитами при воздействии на них IL-4 и снижению влияния подавляющих синтез IgE IL-2 и IFNy [2].

В крови больных с гиперпродукцией сывороточного IgE значительно чаще, чем у здоровых людей встречаются Th2 [2, 3, 52]. При стимуляции МПК таких больных in vitro снижается по сравнению со здоровыми донорами количество вырабатываемых IL-2 и IFNy, а продукция IL-4 не страдает или повышена [37]. Уровень цитокинов, супрессирующих синтез IgE у больных с эритроидной пролиферацией также может быть просто снижен, как это наблюдается у больных атопией, а при подавлении эрит-

ропоэза - повышен. Однако предшественники ТЫ и Th2 - ThO не предетерминированы к переходу в первый или второй класс. Поэтому преобладание Th2 у больных с гиперпродукцией IgE может быть не причиной, а следствием [2]. В свою очередь у больных с нарушениями эритроидной пролиферации стимуляция или подавление IgE-продукции также может быть следствием раздражения или угнетения эритропоэза.

С другой стороны может повышаться чувствительность IgE-продуцирующих клеток к IL-4, что также ведет к стимуляции синтеза IgE [49, 51, 52]. Для стимуляции in vitro синтеза IgE мононуклеара-ми здоровых доноров требуются значительно большие количества IL-4, чем у больных атопией. Максимальный стимулирующий эффект IL-4 на синтез IgE мононуклеарными клетками здоровых и больных атопией наблюдается при концентрациях 1-10 МЕ/мл [29]. При эритроидной пролиферации стимуляция IgE-продукции наблюдается в более высоких концентрациях (до 100МЕ/мл).

В отличие от здоровых лиц и больных аллергией, когда наблюдается стимуляция синтеза IgE, при угнетении эритропоэза IgE-продукция подчиняется другим закономерностям. Мононуклеарные клетки больных НВМ нечувствительны к действию концентраций rIL-4, способных стимулировать IgE-продукцию in vitro у здоровых людей, больных аллергией, полицитемией и эритромиелозом. Высокие концентрации rIL-4 не только не стимулируют синтез IgE при угнетении эритропоэза, но и оказывают супрессорное действие на антителопродуценты (рис. 1). С другой стороны, у больных НВМ может повышаться чувствительность IgE-антитело-проду-центов к супрессирующим синтез IgE цитокинам. Повышение количества IFNy при гипоплазии костного мозга может тормозить IgE-продукцию под воздействием IL-4 и блокировать переход ThO в Th2 [2, 3]. IL-4 в высоких концентрациях может потенцировать супрессию IgE-продукции [29].

В работах по регуляции синтеза IgE in vitro указывается на необходимость прямого контакта между Т- и В-лимфоцитами. Очищенная фракция В-клеток, содержащая надосадочную жидкость Т-клеток, в присутствии IL-4 не синтезирует IgE [2,15, 29,40]. Продукция IgE, индуцированная IL-4, резко снижается после удаления моноцитов. Процесс индукции синтеза IgE IL-4 Т-зависим и оптимален при наличии моноцитов [59]. Однако в работе тех же авторов [34] было показано, что очищенная фракция В-клеток здоровых людей и больных лимфолейкозом in vitro в присутствии рекомбинантного IL-4 (ЮОМЕ/мл) и гидрокортизона (10'7-105 М) способна продуцировать IgE в 7-40 раз больше по сравнению с контролем. Антитела к IL-6 сильно ингибируют этот процесс. В обеих работах указывается, что IL-5 и IL-6, но не IL-2 или IFNy, способствуют более интенсив-

ному синтезу IgE при стимуляции IL-4 без заметного влияния на клеточную пролиферацию [34,48,58]. Следовательно, можно предположить, что в культуре МПК больных PV и AML-M6, стимулированных rIL-4, не всегда необходим прямой контакт В-, Т-клеток и моноцитов. Синтез IgE дополнительно повышается за счет преактивации В-клеток in vivo повышенными сывороточными концентрациями кортикостероидов у онкологических больных [17]. Такое предположение сочетается с высоким уровнем IgE в крови при злокачественной трансформации эритро-идного ростка кроветворения.

Таким образом, обнаружена различная чувствительность МПК больных с нарушениями эритроидной пролиферации к основным цитокинам, регулирующим продукцию IgE. При подавлении эритропоэза повышен ответ лимфоцитов к супрессирующим синтез IgE факторам (IL-2 и INFy), и отсутствует стимулирующий эффект IL-4 (рис. 1). Злокачественная эритроидная пролиферация сопровождается снижением реакции МПК больных на действие негативных регуляторов, которые могут даже увеличивать IgE-продукцию В-лимфоцитами, стимулированными in vivo. Одновременно нарушена чувствительность мононуклеарных клеток к IL-4, который может, как слабо подавлять, так и ощутимо (особенно в высоких концентрациях) стимулировать синтез IgE у больных эритроидными вариантами лейкозов (рис. 2-3).

Выводы

1. У больных AML-M6 и PV с увеличенной эритроидной пролиферацией уровень сывороточного IgE выше, чем при угнетении эритропоэза у больных НВМ и при нормальном гемопоэзе у здоровых доноров. Специфическое лечение цитостатиками у больных AML-Мб и PV снижает уровень IgE, а у больных НВМ продукция сывороточного IgE повышается.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

2. При подавлении эритропоэза rIL-2, rIL-4 и rlNFy супрессируют IgE-ответ МПК больных. При повышенной эритроидной пролиферации rIL-4 ощутимо (особенно в высоких концентрациях) стимулирует синтез IgE и снижается отрицательное влияние rIL-2 и rlNFy на индуцированную in vivo IgE-продукцию.

3. Анализ IgE-продукции in vivo и in vitro при нарушениях эритроидной пролиферации может иметь диагностическое и прогностическое значения для оценки тяжести заболевания, механизмов дезрегуляции иммунитета.

Список литературы

1. Барышников А. Ю., Кадагидзе 3. Г., Тупицын Н. Н. Иммунологический фенотип лейкозной клетки //-М.:Медицина, 1989.-240 с.

2. Беклемишев Н. Д. Т- хелпер 2 - ключевая клетка противометазойного иммунитета и реакций аллергии немедленного типа // Иммунология. 1995. -N5. - С. 4-9.

3. Беклемишев Н. Д. Положительные обратные связи в механизмах иммунного ответа //Иммунология. 1998.-N5.-С. 15-21.

4. Бережная Н. М., Бейко В. А., Бобкова Л. П. Т-клеточные супрессорные факторы в регуляции специфического и неспецифического ответа В-лимфо-цитов // Иммунология. 1992. - N5 - С. 42-44.

5. Богачева Н. Ю., Шнейдер М. М., Масчан А. А.. “Циклоспориновая зависимость” при лечении тяжелых апластических анемий у детей // Гематология и трансфузиология,- 1996. N2.-0. 18-21.

6. Владимирская Е. Б., Масчан А. А., Румянцев А. Г. Апоптоз и его роль в развитии опухолевого роста. // Гематология и трансфузиология. - 1997. N5.

- С. 4-9.

7. Воробьев А. И. Руководство по гематологии // М.: Медицина, 1985.- Руководство в 2-х томах.

8. Гаврилов О. К„ Козинец Г. И., Черняк Н. Б. Клетки костного мозга и периферической крови //- М.: Медицина, 1985.- 386 с.

9. Гусева С. А. Особенности действия миелосана на иммунный статус больных хроническим миело-лейкозом // Антибиотики и химиотер.- 1992. №8,-С. 46-48.

10. Гусева С. А. Изменения Т-клетотчного звена иммунитета у больных сублейкемическим миелозом на различных стадиях патологического процесса // Гематология и трансфузиология.- 1995. N3.-0. 3-5.

11. Козлов В. А., Журавкин И. Н., Цырлова И. Г. Стволовая кроветворная клетка и иммунный ответ.-Новосибирск: Наука, 1982.- 222 с.

12. Козлов В. А., Цырлова И. Г., Чеглякова В. В. // Докл. АН СССР.- 1984,- Т. 275, №1. - С 247 - 249.

13. Колесникова Н. В., Ханферян Р. А., Цырлова И. Г., Козлов В. А. Стимуляция синтеза гомоцитот-ропных ^Е-антител иммунорегуляторными клетками эритроидной природы // Иммунология - 1990 -№2 - С. 46-47.

14. Левина А. А., Андреева А. П., Цибульская М. М. и др. Взаимосвязь между циркулирующими иммунными комплексами и ферритином сыворотки при гиперсидерозах различной этиологии // Гематология и трансфузиология,- 1991.- N3 - С. 22-25.

15. Медуницин Н. В. Цитокины и аллергия, опосредованная ^Е // Иммунология,-1993. N5,- С. 11-13.

16. Ниссен К.. Патофизиология апластической анемии // Гематология и трансфузиология,- 1993.-N1 - С. 7-11.

17. Один В. И., Цырлина Е. В., Гамаюнова В. Б., Берштейн Л. М. Надпочечниковые стероиды у больных раком молочной железы и у женщин с возрастными нарушениями толерантности к глюкозе // Вопросы онкологии - 1996, Т.42 - N4,- С. 22-26.

18. Орловская И. А., Шкловская Е. В., Козлов В. А. Негативные регуляторы гемопоэза. Гомеостатическая роль в формировании взаимоотношений между гемопоэтической и иммунной системами // Иммунология - 1996. - №5 - С. 8-13.

19. Пономаренко В. М., Блинова Т. С., Шилова

Е. Р. и др. Новые ультраструктурные особенности стромальных клеток костного мозга больных с апластической анемией // Гематология и трансфузиология - 1993.-N1-С. 11-15.

20. Сенников С. В., Гуськова Л. В., Самарин Д. В. и др. Иммунорегуляторные свойства эритроидных ядросодержащих клеток // Иммунология,- 1997. -N2 - С. 32-35.

21. Сомова А. В., Пустовая Е. И., Толкачева Т. В. Сравнительная характеристика иммунологических показателей у больных реактивными лимфаденопа-тиями, ХЛЛ и НЗЛ // Гематология и трансфузиология.- 1987.-N11,- С. 24-28.

22. Шичкин В. П. Патогенетическое значение цитокинов и перспективы цитокиновой/антицито-киновой терапии // Иммунология - 1998. - N2. - С. 9-13.

23. Ярилин А. А. Апоптоз и его место в иммунных процессах // Иммунология.- 1996. - N6. - С. 10

- 23.

24. Ярилин А. А. Система цитокинов и принципы ее функционирования в норме и при патологии // Иммунология,- 1997.- N5.-С.7-14.

25. Beguin Y.; Lampertz S.; De-Groote-D. et al. Soluble CD23 and other receptors (CD4, CD8, CD25, CD71) in serum of patients with chronic lymphocytic leukemia// Leukemia.- 1993. Vol. 7.-N12.- P. 2019-25.

26. Bohle B., Ebner C., Wilheim M. et al. Hydrocortisone and IL-4 increase allergen specific IgE pro-daction // ICACI XV.EAACI’94 1994.P. 957.

27. Bruserud O. IL-4, IL-10 and IL-13 in acute myelogenous leukemia // Cytokines. Cell. Mol. Ther.-1998,- Vol.4, N3,- P. 187-98.

28. Cho Y. J„ Oh S. W„ Hong S. J„ Moon H. B. The effects of hydrocortisone on the synthesis of allergen-spe-cific IgE antibodies by peripheral mononuclear cells from atopic patients // ICACIV.EAACI’94.-1994. -P.551.

29. Claasen J. K., Levine A. D., Buckley R. H. Reko-mbinant human IL-4 induced IgE and IgG synthesis by normal and atopic donor mononuclear cells.Similar dose responce,time course,requirement for T-cells,and the effect of poke-weed mitogen//J. Immunol-1990,-Vol.144, N6.- P.2123- 2130.

30. Gagro A., Rabatic S., Kljajic-Turkalj M. IL-4 induced CD23 on CD21- В cells//ICACI XV.EAACI’94.-1994. - P. 906.

31. Graham R. M. Cyclosporin: mechanism of action and toxicity // Cleve. Clin. J. Med. 1994,- Vol.

61,- P. 308- 313.

32. Guseva S. A., Zverkova A. S., Bal’shin M. D., Grin’ko V. I. The immunological reactivity character-

istics of patients with polycythemia vera. // Vrach-Delo. -1991.-№8.- P. 3-6.

33. Hotta T., Kato T., Maeda H. // Act. Haematol.-1985,- Vol 74,- P. 65-69.

34. Jabara H. H., Ahern D. J., Vercelli D., Geha R.

S. Hidrocortisone and IL-4 induced IgE isotype switching in human B cells.// J. Immunol.-1991.- Vol. 147, N5. - P. 1557-1560.

35. Juneja H. S., Lee S., Gardner F. H. // Int. J. Cell Cloing.- 1989. - Vol. 7. - P.129-135.

36. Kahan B. D. Cyclosporin. // N. Engl. J. Med.-

1989,-N321,-P. 1725 -38.

37. Kapp A. // Allergologie.-1991.-Bd 14.-N8.-P.291-297.

38. Konig W., Pfeil P., Hofmann U. et al. Cellular Requirements of IgE-Antibody Regulation// Immuno-pathol. -1988,- 16, N4,- P.203-208.

39. Kurec A.S.; Cruz V.E.; Barrett D. et al. Immu-nophenotyping of acute leukemias using paraffin-embedded tissue sections.// Am. J. Clin. Pathol.- 1990. Vol. 93.- N4,- P. 502-9.

40. Le Gros G., Ledermann F., Schlienger C., Heuss-er C.H. Non- B, Non- T cells switch activated B cells to IgE synthesis // Schweiz, med. Wschr. 1991; 121: Suppl. 40/ L- P. 8.

41. Lindholm A. Therapeutic monitoring of cyclosporin - an update. // Eur. J. Clin. Phamacol.-1991. Vol. 41.-P. 273 - 283.

42. Matsumoto T., Miike T., Yamagucni K. et al. Serum levels of soluble IL-2 receptor, IL-4 and IgE-binding factors in childhood allergic diseases // Clin, and Exp. Immunol.-1991,- 85, N2. - P. 288-292.

43. Mizoguchi H.; Takahashi M. Primary polycythemia //Nippon-Rinsho.-1991, Vol.3.- N3.-P. 599-604.

44. Miura A., Endo K., Sugawara T. et al. T-cell-mediated inhibition of erythropoiesis in aplastic anaemia: the possible role of IFNgamma and TNF-al-pha // Br.J.Haematol.- 1991, Vol. 78.-N7.- P. 442-449.

45. Mosman T. The role of IL-10 and g-IFN in crossregulation of cytokine synthesis // I. Interferon Res.-1991.-Vol. 11, N1,- P.132.

46. Munoz E., Beutner U., Zubiaga A., Huber B. IL-1 activates two separate signal transduction pathways in T-helper type II cells //J. Immunol.-1990.-Vol.144, N3.-P.964-969.

47. Nilsson G.; Carlsson M.; Jones I. et al. TNF-al-pha and IL-6 induce differentiation in the human basophilic leukaemia cell line KU812 // Immunology.-1994,-Vol. 81, N1,- P. 73-8.

48. Oshiba A., Gelfand E.W. Crosslinking of the B-cell antigen - receptor augments cell proliferation and IgG, IgA and IgM production but negatively regulates IgE production activated through CD40, IL-4, IL-10 // ICACI XV.EAACI ’94- 1994,- P. 580.

49. PeneJ.,Chretien J.,Rousset F.et al.Modulation of IL-4-induced human IgE production in vitro by INFy and IL-5: The role of soluble CD23 // J.Cell Biochem.-

1989.-Vol.39, N3.-P.253-264.

50. Renz H. et al. Differetial inhibition of T and В cell function in IL-4-dependent IgE production by cyclosporin A and methylprednisolone // J. Immunol.-

1990,- Vol. 45, N11. - P.3641-3646.

51. Romagnani S. Regulation and deregulation of human IgE synthesis // Immunol. Today.-1990.-Vol.ll., N9.- P. 316-321.

52. Romagnani S. Thl and Th2, subsets: doubt no more// Immunol Today.-1991.-Vol.12,N8.-P.256-257.

53. Schrezenmeier H.; Kaltwasser J. P.; Herrmann

F.; Raghavachar A. Soluble interleukin-2-receptor and souluble CD8-antigen in the sera of patients with aplastic anemia // Oncologie.-1991.- Vol.14, N2.- P.148.

54. Tohda S.; Nara N.; Tanikawa S. et al. Pure red cell aplasia following autoimmune haemolytic anaemia. Cell-mediated suppression of erythropoiesis as a possible pathogenesis of pure red cell aplasia // Acta. Haematol.- 1992., Vol.87.- N2,- P.98-102.

55. Torok-Storb B.// Amer. J. Pediatr. Hematol. Oncol. - 1990,- Vol.12.- P.346-401.

56. Ulich T.R.; Shin S.S.; del-Castillo J. Haemato-logic effects of TNF // Res. Immunol.- 1993., Vol.144.-N5., P.347-354.

57. Vellenga E.; Dokter W.; Halie R. M. Interleukin-4 and its receptor; modulating effects on immature and mature hematopoietic cells // Leukemia.- 1993.-Vol.7; N8.- P. 1131-41.

58. Vercelli D., Jabara H.H., Arai K.I. .et al. Endogenous IL-6 plays an obligatory role in interleukin 4-dependent human IgE synthesis // Eur.J.Immunol.-

1989.-Vol.19, N8.-P.1419-1424.

59. Vercelli D., Jabara H.H., Lauener R. et al. IL-4 inhibits the synthesis of INFy and induces the synthesis of IgE in human mixed lymphocytes culture.// Ibid.-

1990.-Vol.l44.-P.570-573.

60. Vurphy М., Perussia B., Trinchieri G. // Exp. Hematol. - 1988,- Vol.16. - P. 131-138.

61. Watanabe S.; Kondo М.; Takatsu K.; Sugamura K.; Arai K. Involvement of the interleukin-2 receptor gamma subunit in interleukin-4-dependent activation of mouse hematopoietic cells and splenic В cells. // Eur. J. Immunol.- 1995,- Vol.25, N1,- P. 126-31.

62. Young N. S. Haematology, Basic Principles and Practice.// Eds R. Hoffman et al. - Edinburgh, 1991.-P. 122-159.

63. Yoshida K., Miura I., Takahashi G. et al. // Scan. J. Hematol.- 1983,- Vol. 30,- P.317-323.

64. Zoumbos N., Gascon P., Trost S. et al.// N.Engl.J.Med.- 1985,- Vol.312.- P. 257-265.

поступила в редакцию 21.05.2001 принята к печати 18.09.2001

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.