Медицинская Иммунология 2002, Т. 4, N° 1, стр 37-44 © 2002, СПб РО РААКИ
Оригинальные статьи
УРОВЕНЬ IgE И ВЛИЯНИЕ rlL-4, rlL-2, rlFN-y НА IgE-ПРОДУКЦИЮ ПРИ НАРУШЕНИЯХ ЭРИТРОИДНОЙ ПРОЛИФЕРАЦИИ
/
Гематологическое отделение Краевого Онкологического диспансера, Краснодар * Институт “Аллергии и Астмы", Краснодар
Резюме. Ранние предшественники эритробластов, оказывая различное влияние на дифференцировку В-лим-фоцитов, способствуют переключению предшественников В-лимфоцитов в IgE-продуценты. Ключевую роль в регуляции синтеза IgE играют цитокины, продуцируемые субпопуляциями Т-хелперов: Thl и Th2. Механизмы IgE-продукции при угнетении эритропоэза или злокачественной пролиферации эритроидных предшественников остаются недостаточно исследованными. В работе обследовано 40 человек. 10 здоровых доноров составили контрольную группу. 30 больных с нарушениями эритроидной пролиферации были разделены по трем нозологическим единицам: 1-я группа - 10 больных апластической анемией (подавление эритроидной пролиферации, НВМ); 2-я группа - 10 больных острым эритромиелозом (клональная пролиферация эритробластов, AML-M6); 3-я группа - 10 больных истинной полицитемией (миелопролиферативное заболевание с преобладанием эритро-идного ростка кроветворения - хроническая эритремия,РУ). Содержание IgE в крови больных AML-M6 и PV в 2-2,5 раза выше по сравнению с больными НВМ и здоровыми донорами (Р<0,05). Лечение, подавляющее эрит-роидную пролиферацию, приводит к уменьшению содержания IgE в крови больных PV и AML-M6, а иммуно-депрессивная терапия способствует восстановлению эритропоэза и росту уровня IgE в крови больных НВМ (Р<0,05). Обнаружена различная чувствительность мононуклеарных клеток (МПК) больных с нарушениями эритроидной пролиферации к основным цитокинам(1Ь-4, IL-2 и INFy), регулирующим продукцию IgE. При подавлении эритропоэза повышен ответ лимфоцитов к супрессирующим синтез IgE факторам (rIL-2 и rlNFy), и отсутствует стимулирующий эффекг rIL-4. Злокачественная эритроидная пролиферация сопровождается снижением реакции МПК больных PV и AML-M6 на действие негативных регуляторов IgE-ответа (rIL-2 и rlNFy), которые могут даже увеличивать IgE-продукцию in vitro. Одновременно нарушена чувствительность МПК к IL-4, который может как слабо подавлять, так и ощутимо (особенно в высоких концентрациях) стимулировать синтез IgE у больных эритроидными вариантами лейкозов.
Ключевые слова: эритробласты, НВМ, AML-M6, PV, IgE, rIL-2, rlNFy и rIL-4.
Rygger N.A., Khanferyan R.A.
IGE LEVELS AND INFLUENCE OF rIL-4, rIL-2 AND rIFNg ON IgE PRODUCTION
IN IMPAIRED ERYTHROID PROLIFERATION
Abstract. Early erythroblast precursors influence B-lymphocyte differentiation and, thus, promote transformation of B-lymphocytes into IgE antibody producers. Cytokines, produced by T-helper subpopulations Thl and Th2, play a major role in regulation of IgE production. Mechanisms of IgE production in depressed erythropoiesis or malignant proliferation of eryth-roid precursors need to be investigated more thoroughly. We examined 40 people. The control group consisted of 10 healthy donors. 30 patients with impaired erythroid proliferation were divided into 3 groups: the first group - 10 patients with aplastic anemia (suppressed erythroid proliferation, HBM); the second group - 10 patients with acute erythromyelosis (clonal erythroblast proliferation, AML-M6); the third group - 10 patients with polycythemia vera (myeloproliferative disease with erythroid lineage prevalence - chronic erythremia, PV). IgE level in blood of patients with AML-M6 and PV was 2-2.5 times higher than in patients with HBM and healthy donors (p<0.05). The appropriate treatment, suppressing erythroid proliferation led to
Ригер H.A., Ханферян P.A.*
Адрес для переписки:
Ханферян Роман Авакович, д.м.н., профессор,
Тел./факс: (8612) 68-49-56
decrease in IgE levels in blood of patients with PV and AML-M6, while immunodepressive therapy led to normalization of erythropoiesis and increase in IgE levels in patients with HBM (p<0.05). We determined different susceptibility of mononuclear cells of patients with abnormal erythroid proliferation to
major cytokines (IL-4, IL-2 and IFN-y), which regulate IgE production. In depressed erythropoiesis the response of lymphocytes to IgE synthesis inhibitors (rIL-2 and rlFNy) increased, and rIL-4 had no stimulating effect. Malignant erythroid proliferation was accompanied with decreased response of mononuclear cells of patients with PV and AML-M6 to the influence of negative regulators of IgE response (rIL-2 and rlFNy), which can even enhance IgE production in vitro. At the same time, the susceptibility of mononuclear cells to IL-4 influence was disturbed. IL-4 can slightly decrease or significantly (especially in high concentrations) stimulate IgE synthesis in patients with erythroid variants of leukosis. (Med.Immunol., 2002, vol.4, Nl,pp 37-44)
Введение
Взаимодействие эритроидной и иммунной систем является одним из механизмов влияния на регуляцию антителообразования [11, 12, 18, 20, 53, 55, 56, 60, 62, 64]. Воздействия, стимулирующие эритропоэз, приводят к накоплению неспецифических супрессорных клеток, способных подавлять гуморальный иммунный ответ как in vivo, так и in vitro. Показано, что этими супрессорными клетками являются эритроидные ядросодержащие клетки - эр-супрессоры (Эр-с). Эр-с, ингибируя как спонтанную, так и индуцированную мито-генами пролиферацию В-лимфоцитов [20], подавляют IgM- и IgG-антителогенез на ранних этапах индукции иммунного ответа [12]. Популяция незрелых предшественников эритробластов вызывает стимуляцию синтеза гомоцитотропных антител у мышей. Ранние предшественники эритробластов, оказывая различное влияние на дифференцировку В-лимфоцитов в IgE-и IgG-синтезирующие клетки, способствуют переключению предшественников В-лимфоцитов в IgE-npo-дуценты [13]. Хорошо известно, что ключевую роль в регуляции синтеза IgE играют цитокины, продуцируемые субпопуляциями Т-хелперов (Th): Thl и Th2. Th2 продуцируют IL-4, IL-5, IL-10, IL-13 и IL-16. Супрессорами по отношению к ТЬ2-зависимому механизму иммунитета являются Thl, продуцирующие IL-2, IL-12 и IFNy, IL-3, лейкотриены и фактор стимуляции колоний макрофагов и гранулоцитов (GM-CSF). Субпопуляции Th различаются не только продукцией ци-токинов, но и выраженностью Fc-рецепторов для иммуноглобулинов [2, 3].
Во многих работах описаны количественные и качественные нарушения синтеза иммуноглобулинов классов A, G и М при различных злокачественных заболеваниях крови [1,9,10,14,16, 21,32,54]. Механизмы цитокиновой регуляции синтеза IgE при угнетении (гипопластическая анемия - НВМ) или злокачественной пролиферации эритроидных предшественников (истинная полицитемия, хроническая эритремия - PV, острый эритробластный лейкоз -AML-M6) остаются недостаточно исследованными. Между тем имеются основания предполагать их участие в развитии гемобластозов [27, 47, 57, 61].
Материалы и методы
Группы обследованных
В работе обследовано 40 человек. Контрольную группу составили 10 здоровых доноров. 30 впервые
выявленных больных с нарушениями эритроидной пролиферации были разделены по трем нозологическим единицам: 1-я группа - 10 больных апластичес-кой анемией (подавление эритроидной пролиферации, НВМ); 2-я группа - 10 больных острым эритро-миелозом (моноклональная пролиферация эритробластов, AML-M6); 3-я группа -10 больных истинной полицитемией (миелопролиферативное заболевание с преобладанием эритроидного ростка кроветворения
- хроническая эритремия, PV). Во всех случаях диагноз подтвержден на основании результатов цитологических, гистологических, цитохимических и им-мунофенотипических методов исследования костного мозга по общепринятым методикам [1, 7, 39, 43].
Эритроидная пролиферация
Вычисление индекса эритро/лейко у больных проводилось по отношению суммы всех эритронор-мобластов ко всем костномозговым элементам кроветворения, исключая ретикулярные и плазматические клетки, недифференцируемые бласты и клетки красного ряда. Индекс эритро/лейко в контрольной группе определялся по клеточному составу костного мозга в норме [7].
Определение общего IgE в сыворотках крови больных и здоровых доноров
Сыворотки больных и здоровых собирали и хранили в стерильных пластиковых пробирках (объем-1,5мл) при -20°С. Определение общего IgE в сыворотках до начала лечения и после 1-го месяца специфической терапии проводили с использованием стандартного тест-набора для определения общего IgE человека (IgE-total, FEIA, Pharmacia) - CAP System FEIA MasterCAP AM, Software Version 2.2; MasterCAP RM, Software Version 1.0 - method CAP FEIA (Pharmacia).
Исследование влияния rIL-4, rIL-2, IFNy на IgE-продукцию
Мононуклеары периферической крови (МПК) больных выделяли из гепаринизированной крови общепринятым методом на центрифуге РС-6 в градиенте плотности фиколл-пак (плотность - 1077-78) (“Pharmacia”). После 3-х кратной отмывки в среде 199 лейкоциты ресуспендировали в среде RPMI 1640 (“Serva”) и подсчитывали количество выделенных клеток. Культивирование в течение 9 суток проводилось в 96-луночных пластиковых планшетах в среде RPMI 1640, содержащей: 2 мМ глютамина, ЮмМ
Hepes (“Serva”), 50 мкг/мл телячьей сыворотки и 40 мкг/мл гентамицина (“Flow”), в концентрации 3x105 клеток на лунку и объеме 150 мкл в атмосфере, содержащей 5% С02, при 37°С и 96% влажности. Жизнеспособность клеток проверяли под микроскопом в проходящем свете в нативных препаратах с добавлением трипанового синего (“Serva”) (Клаус 1990). Для исследования механизмов регуляции синтеза IgE в культурах МПК использовали рекомбинантные интерлейкины: rIL-2, rIL-4 (“Boehringer Mannheim”) в интервале концентраций 1-100 IU/мл и рекомбинантный интерферон rlFNy (“Boehringer Mannheim”) в интервале концентраций 10-1000 IU/мл.
Определение общего IgE в супернатантах
Супернатанты собирали в стерильные пластиковые пробирки (объем-1,5 мл) и хранили при -20°С. Определение уровня общего IgE в супернатантах проводили с использованием стандартного тест-на-бора для определения общего IgE человека в субна-нограммовых диапазонах (IgE-ultra, FEIA, “Pharmacia”) - CAP System FEIA MasterCAP AM, Software Version 2.2; MasterCAP RM, Software Version 1.0 - method CAP FEIA (Pharmacia).
Статистическая обработка
Статистическая обработка полученных результатов выполнялась на персональной ЭВМ: WINDOWS 95; Microsoft Exel 7,0 (пакет статистических программ). Уже в начале статистической обработки данных было установлено, что изучаемые иммунологические показатели имеют логнормальное распределение. В связи с этим в дальнейшем значения всех показателей брали в логарифмической форме. Влияние цитокинов на синтез IgE оценивалось по отношению индуцированного уровня IgE к уровню IgE в спонтанных культурах МПК (и/с).
Результаты
Исследование концентрации IgE в сыворотке крови Изучение механизмов цитокиновой регуляции синтеза IgE при нарушениях эритроидной пролиферации было начато с исследования уровня IgE в кро-
Табл. 1. УРОВЕНЬ IgE У БОЛЬНЫХ С НАРУШЕНИЯМИ ЭРИТРОИДНОЙ ПРОЛИФЕРАЦИИ
Группы обследованных Уровень IgE (In) Эритро/лейко
НВМ AML-M6 PV Здоровые 2,68 ± 0,20 5,33 + 0,09** 6,43 ± 0,18** 2,90 ± 0,34 0,15 - 0,2 0,90 - 1,79** 0,67 - 0,89** 0,20 - 0,25
Примечание. ** - достоверные различия (Р<0,05) в группе больных и здоровых
ви больных. Полученные результаты количественного определения этих антител представлены в табл.1.
Уровень IgE достоверно различается среди исследуемых групп больных. Содержание IgE в крови больных острым эритробластным лейкозом (AML-М6) и истинной полицитемией (PV) в 2-2,5 раза выше (Р<0,05) по сравнению с больными аплазией кроветворения (НВМ) и здоровыми донорами. Эрит-роидных предшественников в костном мозге (индекс эритро/лейко, табл.1) у больных НВМ и здоровых меньше, чем у больных со злокачественной эритроидной пролиферацией. Таким образом, при заболеваниях, связанных с клональной злокачественной пролиферацией эритроидного ростка кроветворения, уровень IgE в крови выше, чем у больных с подавлением эритроидного ряда и у здоровых доноров.
Влияние специфического лечения на уровень IgE
Все больные исследуемых групп получали специфическое лечение по стандартным протоколам [5, 7]. Динамика уровня IgE в крови больных в течение 1 -го месяца терапии отражена в табл. 2.
Лечение больных PV и Мб цитостатическими препаратами, угнетающими пролиферацию гемопоэти-ческих предшественников, приводит к достоверному уменьшению содержания IgE в крови этих групп больных. Терапия глюкокортикоидами и CsA способствует росту уровня IgE в крови больных НВМ (Р<0,05 в сравнении с уровнем IgE до лечения; табл. 2).
Влияние rIL-4, rIL-2, rlFNy на IgE-продукцию in vitro
Обнаруженные нами изменения уровня сывороточного IgE до и после лечения у больных с нарушениями эритропоэза: НВМ, AML-M6 и PV позволяют предполагать различия в активности и соотношении Thl и Th2. Количественное и функциональное доминирование каждого из этих типов клеток приводит к повышению активности продуцируемых ими цитокинов. В частности - стимулирующих (IL-4) или супрессирующих (IL-2 и IFNy) IgE-npo-дукцию факторов [15, 2, 3, 51, 52].
Влияние рекомбинантных IL-4, IL-2 и IFNy на синтез IgE различается в группах исследуемых заболеваний (рис. 1-3). rIL-2 и rlFNy в культурах МПК
Табл. 2. УРОВЕНЬ 1дЕ У БОЛЬНЫХ ЧЕРЕЗ 1 МЕСЯЦ ПОСЛЕ НАЧАЛА СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ
Группы Уровень IgE (In) Уровень IgE (In)
обследованных до лечения через 1 месяц
НВМ 2,68 ± 0,20 3,07 ± 0,07*
AML-M6 5,33 ± 0,09 5,08 ± 0,08*
PV 6,43 ± 0,18 6,25 ± 0,19
Примечание. * - достоверные различия (Р<0,05) в группах больных после лечения по сравнению с контролем до лечения
больных НВМ дозозависимо подавляют продукцию
(р<0,05). г1Ь-4 в концентрации 1-10МЕ/мл у этой группы больных не влияет на синтез ^Е и лишь в концентрации 100МЕ/мл тормозит ^Е-ответ (рис. 1). г1Ь-4 в диапазоне концентраций от 1 до ЮМЕ/мл вызывает супрессию синтеза ^Е в культурах МПК больных АМЬ-М6 (рис. 2). При повышении концентрации г1Ь-4 до 100МЕ/мл ^Е-продукция возрастает в 2-2,5 раза (р<0,05). г1Ь-2 в дозе 1МЕ/мл увеличивает на 30%, а в дозе ЮОМЕ/мл снижает на 50% ^Е-продукцию МПК больных АМЬ-М6 (р<0,05). Достоверного влияния ЮМЕ/мл 1Ь-2 на синтез ^Е у этих больных не обнаружено. г1РКу может дозозависимо тормозить процесс синтеза ^Е в культурах МПК больных АМЬ-М6 (рис. 2). г1Ь-4 дозозависимо стимулирует продукцию ^Е в культурах МПК больных полицитемией (рис. 3, р<0,05). В зависимости от дозы г1Ь-4 ^Е-ответ возрастает в 2-4 раза. При всех используемых дозах г1Ь-2 влияния на синтез ^Е у больных РУ обнаружено не было. г1ЕЫу может дозозависимо снижать ^Е-продукцию при РУ (рис. 3).
Обсуждение
Известно, что эритробластные клетки способны подавлять спонтанную и индуцированную митогена-
- ♦- 1ёЕ
- ■- -1Ь2 -А- 1Ь-4
- -ж - 1КМ-у
ми пролиферацию В-лимфоцитов, что указывает на прямой механизм действия эритроидных ядросодержащих клеток на продукцию антител [12, 20]. Эрит-робласты являются пролиферирующими клетками, в которых происходят активные процессы транскрипции и трансляции [8]. Исследование содержания мРНК цитокинов в единичных эритроидных колониях показало наличие в эритроидных клетках мРНК 1Ь1, 1Ь-4,1Ь6, ПТЧу, СМ-СЗР.ТСРР [20]. Цитокины: 1Ь-1,1ЬЗ, 1Ь-4,1Ы0,1Ь-13, зСБ23К, 5^-411 и другие факторы способны как защищать злокачественный клон эритробластов от гибели [6,22,23-25], так и участвовать в дифференцировке ТЬО в ТЬ2 и переключению В-клеток на ^Е-продукцию [2,3]. Отсутствие запрограммированной гибели приводит к накоплению клона эритроидных предшественников [6]. Следовательно, наблюдаемое повышение уровня ^Е у больных с усиленным эритропоэзом (АМЬ-Мб, РУ) обусловлено стимулирующим влиянием большого количества эритроидных предшественников на продукцию ^Е (табл. 1.). Причиной угнетения эритропоэза при НВМ является иммунологически опосредованный дефицит ранних кроветворных предшественников и их сниженный пролиферативный потенциал [33, 35,
44, 63]. Гипоплазия кроветворения характеризуется разрушением гемопоэтических предшественников на
- ♦- 1ЕЕ
-11,-2
11.-4
Ж ■ -Ж- №N-7
Рис. 1. Влияние 11.-2, И-4 и 1Ж-у на синтез 1дЕ МПК больных
НВМ. Примечания:
1. по оси X: 1 -11.-2,11.-4 - 1и/ш1; 1Ж-у - 10и/т1. 2 - 11.-2,11.-4 - 10и/ т1; 1ГО-у - 100и/т1. 3 -11.-2, 1Ь4 - 100и/т1; ^-у - 1000и/т1;
2. по оси У: 1дЕ-индуцированный/1дЕ-спонтанный;
3.1дЕ - спонтанный синтез;
4.*- р<0,05 в сравнении со спонтанным синтезом
Рис. 2. Влияние 11.-2,11.-4 и ^N-7 на синтез 1дЕ МПК больных АМЬМб. Примечания:
1. по оси X: 1 - И-2,11.-4 - 1и/т1; 1РМ-у - 10и/т1. 2 - 11.-2, И-4 - 10и/ т1; И^-у - 100и/т1. 3 - И-2, 11.-4 - 100и/т1; 1ГО-у - 1000и/т1;
2. по оси У: 1дЕ-индуцированный/1дЕ-спонтанный;
3. 1дЕ - спонтанный синтез;
4. * - р<0,05 в сравнении со спонтанным синтезом
самых ранних стадиях пролиферации и дифференци-ровки [23,25]. Непосредственными эффекторами процесса гибели и функциональной недостаточности стволовых клеток являются цитотоксические эффекторы (Т-лимфоциты, макрофаги, МК-клетки) [53, 55,
60, 62, 64]. Ингибиторный эффект субпопуляций Т-клеток СШ*/С08+, СВ8+НЬА-1Ж* на пролиферацию и дифференцировку самых ранних эритроидных предшественников у больных НВМ связан с повышенной продукцией 1Ь-2; ЮТу и ЮТа; ТЫР-а [44]. У большинства больных обнаруживают повышенные уровни 1Ь-2 и ТО Р-а, ЮТа и ШРу, угнетение выработки 1Ь-1 [5,16,19,44,56]. 1Ь-2,1Ь-12, ТЫР-а, ШРа и ШРу блокируют превращение ТЬО в ТЬ2, угнетают активацию и дифференцировку В-лимфоцитов в ^Е-анти-телопродуценты, что ведет к подавлению синтеза ^Е [2,3,15,26, 28,30,45, 46]. Таким образом уровень ^Е у больных с депрессией эритопоэза становится достоверно ниже, по сравнению с содержанием ^Е в крови больных со злокачественной эритроидной пролиферацией (табл. 1.).
Наиболее широко используемые в лечении НВМ Циклоспорин А (СбА) и синтетические аналоги гормонов коры надпочечников (преднизолон, дексаме-тазон, метилпреднизолон и другие) ингибируют активность ТЫ и цитотоксических клеток-эффекто-
Рис.З. Влияние 11.-2, И-4 и 1РЫ-у на синтез 1дЕ МПК больных РV.
Примечания:
1. по оси X: 1 - 11.-2, 11.-4 - 1 и/ш1; ^И-у - 10и/ш1. 2 - 11.-2, 11.-4 -10и/ш1; 1НМ-у - 100и/т1. 3 -11.-2, 11.-4 - 100и/т1; 1РЫ-у - 1000и/т1;
2. по оси У: 1дЕ-индуцированный/1дЕ-спонтанный.;
3. 1дЕ — спонтанный синтез;
4. * - р<0,05 в сравнении со спонтанным синтезом.
ров, подавляют продукцию IL-2 и IFNy, стимулируют дифференцировку Th2 и секрецию IL-1, IL-4, IL-3, GM-CSF [2, 3, 31, 36, 41], что способствует повышению уровня IgE у больных НВМ. Цитостатики при AML-M6 и PV вызывают подавление пролиферации и дифференцировки как индукторов и эффекторов синтеза антител, так и предшественников эритопоэза [9,32]. Через 1 месяц после начала цитоста-тической терапии происходит подавление антите-лопродукции и снижение уровня IgE в крови больных AML-M6 и PV (табл. 2).
При гиперпродукции сывороточного IgE В-лим-фоциты больных находятся в состоянии исходной повышенной активности с выраженным преобладанием плазмоцитарной реакции над иммунобластной [4]. Сравнивая полученные нами результаты влияния rIL-4, rIL-2 и rlFNy у исследуемых больных (Рис. 1-3.), очевидно, что при нарушениях эритро-поэза изменяется чувствительность клеточных популяций, регулирующих IgE-продукцию, к супрес-сирующим и активирующим синтез IgE цитокинам. При заболеваниях, обусловленных неконтролируемой пролиферацией эритроидных предшественников (AML-M6, PV), механизмы супрессии синтеза IgE, опосредуемые через влияние IL-2 и IFNy, могут вообще не оказывать своего действия на продуценты IgE. IL-2 в малых концентрациях даже стимулирует синтез IgE у больных AML-M6 (Рис. 2). Частичным подтверждением этого факта может быть обнаруженное ранее стимулирующее действие IL-2 [38] на начавшийся синтез IgE плазмоцитами IgE-синтезирующей миеломы. Следовательно, при злокачественной эритроидной пролиферации IL-2 может даже потенцировать IgE-продукцию активированными В-клетками. Добавление IFNy к генерации бласттрасформированных IL-4 В-клеток потенцирует синтез IgE [49, 59]. Наблюдаемое повышение уровня IgE в крови больных PV и AML-M6 (табл. 1.) можно объяснить угнетением клеточных механизмов, подавляющих синтез этих антител [50]. Дополнительно, как это было обнаружено у здоровых и больных атопией лиц, при гиперпродукции IgE возможно усиление экспрессии FceRII на моно-нуклеарах [42]. Это ведет к усилению продукции IgE лимфоцитами при воздействии на них IL-4 и снижению влияния подавляющих синтез IgE IL-2 и IFNy [2].
В крови больных с гиперпродукцией сывороточного IgE значительно чаще, чем у здоровых людей встречаются Th2 [2, 3, 52]. При стимуляции МПК таких больных in vitro снижается по сравнению со здоровыми донорами количество вырабатываемых IL-2 и IFNy, а продукция IL-4 не страдает или повышена [37]. Уровень цитокинов, супрессирующих синтез IgE у больных с эритроидной пролиферацией также может быть просто снижен, как это наблюдается у больных атопией, а при подавлении эрит-
ропоэза - повышен. Однако предшественники ТЫ и Th2 - ThO не предетерминированы к переходу в первый или второй класс. Поэтому преобладание Th2 у больных с гиперпродукцией IgE может быть не причиной, а следствием [2]. В свою очередь у больных с нарушениями эритроидной пролиферации стимуляция или подавление IgE-продукции также может быть следствием раздражения или угнетения эритропоэза.
С другой стороны может повышаться чувствительность IgE-продуцирующих клеток к IL-4, что также ведет к стимуляции синтеза IgE [49, 51, 52]. Для стимуляции in vitro синтеза IgE мононуклеара-ми здоровых доноров требуются значительно большие количества IL-4, чем у больных атопией. Максимальный стимулирующий эффект IL-4 на синтез IgE мононуклеарными клетками здоровых и больных атопией наблюдается при концентрациях 1-10 МЕ/мл [29]. При эритроидной пролиферации стимуляция IgE-продукции наблюдается в более высоких концентрациях (до 100МЕ/мл).
В отличие от здоровых лиц и больных аллергией, когда наблюдается стимуляция синтеза IgE, при угнетении эритропоэза IgE-продукция подчиняется другим закономерностям. Мононуклеарные клетки больных НВМ нечувствительны к действию концентраций rIL-4, способных стимулировать IgE-продукцию in vitro у здоровых людей, больных аллергией, полицитемией и эритромиелозом. Высокие концентрации rIL-4 не только не стимулируют синтез IgE при угнетении эритропоэза, но и оказывают супрессорное действие на антителопродуценты (рис. 1). С другой стороны, у больных НВМ может повышаться чувствительность IgE-антитело-проду-центов к супрессирующим синтез IgE цитокинам. Повышение количества IFNy при гипоплазии костного мозга может тормозить IgE-продукцию под воздействием IL-4 и блокировать переход ThO в Th2 [2, 3]. IL-4 в высоких концентрациях может потенцировать супрессию IgE-продукции [29].
В работах по регуляции синтеза IgE in vitro указывается на необходимость прямого контакта между Т- и В-лимфоцитами. Очищенная фракция В-клеток, содержащая надосадочную жидкость Т-клеток, в присутствии IL-4 не синтезирует IgE [2,15, 29,40]. Продукция IgE, индуцированная IL-4, резко снижается после удаления моноцитов. Процесс индукции синтеза IgE IL-4 Т-зависим и оптимален при наличии моноцитов [59]. Однако в работе тех же авторов [34] было показано, что очищенная фракция В-клеток здоровых людей и больных лимфолейкозом in vitro в присутствии рекомбинантного IL-4 (ЮОМЕ/мл) и гидрокортизона (10'7-105 М) способна продуцировать IgE в 7-40 раз больше по сравнению с контролем. Антитела к IL-6 сильно ингибируют этот процесс. В обеих работах указывается, что IL-5 и IL-6, но не IL-2 или IFNy, способствуют более интенсив-
ному синтезу IgE при стимуляции IL-4 без заметного влияния на клеточную пролиферацию [34,48,58]. Следовательно, можно предположить, что в культуре МПК больных PV и AML-M6, стимулированных rIL-4, не всегда необходим прямой контакт В-, Т-клеток и моноцитов. Синтез IgE дополнительно повышается за счет преактивации В-клеток in vivo повышенными сывороточными концентрациями кортикостероидов у онкологических больных [17]. Такое предположение сочетается с высоким уровнем IgE в крови при злокачественной трансформации эритро-идного ростка кроветворения.
Таким образом, обнаружена различная чувствительность МПК больных с нарушениями эритроидной пролиферации к основным цитокинам, регулирующим продукцию IgE. При подавлении эритропоэза повышен ответ лимфоцитов к супрессирующим синтез IgE факторам (IL-2 и INFy), и отсутствует стимулирующий эффект IL-4 (рис. 1). Злокачественная эритроидная пролиферация сопровождается снижением реакции МПК больных на действие негативных регуляторов, которые могут даже увеличивать IgE-продукцию В-лимфоцитами, стимулированными in vivo. Одновременно нарушена чувствительность мононуклеарных клеток к IL-4, который может, как слабо подавлять, так и ощутимо (особенно в высоких концентрациях) стимулировать синтез IgE у больных эритроидными вариантами лейкозов (рис. 2-3).
Выводы
1. У больных AML-M6 и PV с увеличенной эритроидной пролиферацией уровень сывороточного IgE выше, чем при угнетении эритропоэза у больных НВМ и при нормальном гемопоэзе у здоровых доноров. Специфическое лечение цитостатиками у больных AML-Мб и PV снижает уровень IgE, а у больных НВМ продукция сывороточного IgE повышается.
2. При подавлении эритропоэза rIL-2, rIL-4 и rlNFy супрессируют IgE-ответ МПК больных. При повышенной эритроидной пролиферации rIL-4 ощутимо (особенно в высоких концентрациях) стимулирует синтез IgE и снижается отрицательное влияние rIL-2 и rlNFy на индуцированную in vivo IgE-продукцию.
3. Анализ IgE-продукции in vivo и in vitro при нарушениях эритроидной пролиферации может иметь диагностическое и прогностическое значения для оценки тяжести заболевания, механизмов дезрегуляции иммунитета.
Список литературы
1. Барышников А. Ю., Кадагидзе 3. Г., Тупицын Н. Н. Иммунологический фенотип лейкозной клетки //-М.:Медицина, 1989.-240 с.
2. Беклемишев Н. Д. Т- хелпер 2 - ключевая клетка противометазойного иммунитета и реакций аллергии немедленного типа // Иммунология. 1995. -N5. - С. 4-9.
3. Беклемишев Н. Д. Положительные обратные связи в механизмах иммунного ответа //Иммунология. 1998.-N5.-С. 15-21.
4. Бережная Н. М., Бейко В. А., Бобкова Л. П. Т-клеточные супрессорные факторы в регуляции специфического и неспецифического ответа В-лимфо-цитов // Иммунология. 1992. - N5 - С. 42-44.
5. Богачева Н. Ю., Шнейдер М. М., Масчан А. А.. “Циклоспориновая зависимость” при лечении тяжелых апластических анемий у детей // Гематология и трансфузиология,- 1996. N2.-0. 18-21.
6. Владимирская Е. Б., Масчан А. А., Румянцев А. Г. Апоптоз и его роль в развитии опухолевого роста. // Гематология и трансфузиология. - 1997. N5.
- С. 4-9.
7. Воробьев А. И. Руководство по гематологии // М.: Медицина, 1985.- Руководство в 2-х томах.
8. Гаврилов О. К„ Козинец Г. И., Черняк Н. Б. Клетки костного мозга и периферической крови //- М.: Медицина, 1985.- 386 с.
9. Гусева С. А. Особенности действия миелосана на иммунный статус больных хроническим миело-лейкозом // Антибиотики и химиотер.- 1992. №8,-С. 46-48.
10. Гусева С. А. Изменения Т-клетотчного звена иммунитета у больных сублейкемическим миелозом на различных стадиях патологического процесса // Гематология и трансфузиология.- 1995. N3.-0. 3-5.
11. Козлов В. А., Журавкин И. Н., Цырлова И. Г. Стволовая кроветворная клетка и иммунный ответ.-Новосибирск: Наука, 1982.- 222 с.
12. Козлов В. А., Цырлова И. Г., Чеглякова В. В. // Докл. АН СССР.- 1984,- Т. 275, №1. - С 247 - 249.
13. Колесникова Н. В., Ханферян Р. А., Цырлова И. Г., Козлов В. А. Стимуляция синтеза гомоцитот-ропных ^Е-антител иммунорегуляторными клетками эритроидной природы // Иммунология - 1990 -№2 - С. 46-47.
14. Левина А. А., Андреева А. П., Цибульская М. М. и др. Взаимосвязь между циркулирующими иммунными комплексами и ферритином сыворотки при гиперсидерозах различной этиологии // Гематология и трансфузиология,- 1991.- N3 - С. 22-25.
15. Медуницин Н. В. Цитокины и аллергия, опосредованная ^Е // Иммунология,-1993. N5,- С. 11-13.
16. Ниссен К.. Патофизиология апластической анемии // Гематология и трансфузиология,- 1993.-N1 - С. 7-11.
17. Один В. И., Цырлина Е. В., Гамаюнова В. Б., Берштейн Л. М. Надпочечниковые стероиды у больных раком молочной железы и у женщин с возрастными нарушениями толерантности к глюкозе // Вопросы онкологии - 1996, Т.42 - N4,- С. 22-26.
18. Орловская И. А., Шкловская Е. В., Козлов В. А. Негативные регуляторы гемопоэза. Гомеостатическая роль в формировании взаимоотношений между гемопоэтической и иммунной системами // Иммунология - 1996. - №5 - С. 8-13.
19. Пономаренко В. М., Блинова Т. С., Шилова
Е. Р. и др. Новые ультраструктурные особенности стромальных клеток костного мозга больных с апластической анемией // Гематология и трансфузиология - 1993.-N1-С. 11-15.
20. Сенников С. В., Гуськова Л. В., Самарин Д. В. и др. Иммунорегуляторные свойства эритроидных ядросодержащих клеток // Иммунология,- 1997. -N2 - С. 32-35.
21. Сомова А. В., Пустовая Е. И., Толкачева Т. В. Сравнительная характеристика иммунологических показателей у больных реактивными лимфаденопа-тиями, ХЛЛ и НЗЛ // Гематология и трансфузиология.- 1987.-N11,- С. 24-28.
22. Шичкин В. П. Патогенетическое значение цитокинов и перспективы цитокиновой/антицито-киновой терапии // Иммунология - 1998. - N2. - С. 9-13.
23. Ярилин А. А. Апоптоз и его место в иммунных процессах // Иммунология.- 1996. - N6. - С. 10
- 23.
24. Ярилин А. А. Система цитокинов и принципы ее функционирования в норме и при патологии // Иммунология,- 1997.- N5.-С.7-14.
25. Beguin Y.; Lampertz S.; De-Groote-D. et al. Soluble CD23 and other receptors (CD4, CD8, CD25, CD71) in serum of patients with chronic lymphocytic leukemia// Leukemia.- 1993. Vol. 7.-N12.- P. 2019-25.
26. Bohle B., Ebner C., Wilheim M. et al. Hydrocortisone and IL-4 increase allergen specific IgE pro-daction // ICACI XV.EAACI’94 1994.P. 957.
27. Bruserud O. IL-4, IL-10 and IL-13 in acute myelogenous leukemia // Cytokines. Cell. Mol. Ther.-1998,- Vol.4, N3,- P. 187-98.
28. Cho Y. J„ Oh S. W„ Hong S. J„ Moon H. B. The effects of hydrocortisone on the synthesis of allergen-spe-cific IgE antibodies by peripheral mononuclear cells from atopic patients // ICACIV.EAACI’94.-1994. -P.551.
29. Claasen J. K., Levine A. D., Buckley R. H. Reko-mbinant human IL-4 induced IgE and IgG synthesis by normal and atopic donor mononuclear cells.Similar dose responce,time course,requirement for T-cells,and the effect of poke-weed mitogen//J. Immunol-1990,-Vol.144, N6.- P.2123- 2130.
30. Gagro A., Rabatic S., Kljajic-Turkalj M. IL-4 induced CD23 on CD21- В cells//ICACI XV.EAACI’94.-1994. - P. 906.
31. Graham R. M. Cyclosporin: mechanism of action and toxicity // Cleve. Clin. J. Med. 1994,- Vol.
61,- P. 308- 313.
32. Guseva S. A., Zverkova A. S., Bal’shin M. D., Grin’ko V. I. The immunological reactivity character-
istics of patients with polycythemia vera. // Vrach-Delo. -1991.-№8.- P. 3-6.
33. Hotta T., Kato T., Maeda H. // Act. Haematol.-1985,- Vol 74,- P. 65-69.
34. Jabara H. H., Ahern D. J., Vercelli D., Geha R.
S. Hidrocortisone and IL-4 induced IgE isotype switching in human B cells.// J. Immunol.-1991.- Vol. 147, N5. - P. 1557-1560.
35. Juneja H. S., Lee S., Gardner F. H. // Int. J. Cell Cloing.- 1989. - Vol. 7. - P.129-135.
36. Kahan B. D. Cyclosporin. // N. Engl. J. Med.-
1989,-N321,-P. 1725 -38.
37. Kapp A. // Allergologie.-1991.-Bd 14.-N8.-P.291-297.
38. Konig W., Pfeil P., Hofmann U. et al. Cellular Requirements of IgE-Antibody Regulation// Immuno-pathol. -1988,- 16, N4,- P.203-208.
39. Kurec A.S.; Cruz V.E.; Barrett D. et al. Immu-nophenotyping of acute leukemias using paraffin-embedded tissue sections.// Am. J. Clin. Pathol.- 1990. Vol. 93.- N4,- P. 502-9.
40. Le Gros G., Ledermann F., Schlienger C., Heuss-er C.H. Non- B, Non- T cells switch activated B cells to IgE synthesis // Schweiz, med. Wschr. 1991; 121: Suppl. 40/ L- P. 8.
41. Lindholm A. Therapeutic monitoring of cyclosporin - an update. // Eur. J. Clin. Phamacol.-1991. Vol. 41.-P. 273 - 283.
42. Matsumoto T., Miike T., Yamagucni K. et al. Serum levels of soluble IL-2 receptor, IL-4 and IgE-binding factors in childhood allergic diseases // Clin, and Exp. Immunol.-1991,- 85, N2. - P. 288-292.
43. Mizoguchi H.; Takahashi M. Primary polycythemia //Nippon-Rinsho.-1991, Vol.3.- N3.-P. 599-604.
44. Miura A., Endo K., Sugawara T. et al. T-cell-mediated inhibition of erythropoiesis in aplastic anaemia: the possible role of IFNgamma and TNF-al-pha // Br.J.Haematol.- 1991, Vol. 78.-N7.- P. 442-449.
45. Mosman T. The role of IL-10 and g-IFN in crossregulation of cytokine synthesis // I. Interferon Res.-1991.-Vol. 11, N1,- P.132.
46. Munoz E., Beutner U., Zubiaga A., Huber B. IL-1 activates two separate signal transduction pathways in T-helper type II cells //J. Immunol.-1990.-Vol.144, N3.-P.964-969.
47. Nilsson G.; Carlsson M.; Jones I. et al. TNF-al-pha and IL-6 induce differentiation in the human basophilic leukaemia cell line KU812 // Immunology.-1994,-Vol. 81, N1,- P. 73-8.
48. Oshiba A., Gelfand E.W. Crosslinking of the B-cell antigen - receptor augments cell proliferation and IgG, IgA and IgM production but negatively regulates IgE production activated through CD40, IL-4, IL-10 // ICACI XV.EAACI ’94- 1994,- P. 580.
49. PeneJ.,Chretien J.,Rousset F.et al.Modulation of IL-4-induced human IgE production in vitro by INFy and IL-5: The role of soluble CD23 // J.Cell Biochem.-
1989.-Vol.39, N3.-P.253-264.
50. Renz H. et al. Differetial inhibition of T and В cell function in IL-4-dependent IgE production by cyclosporin A and methylprednisolone // J. Immunol.-
1990,- Vol. 45, N11. - P.3641-3646.
51. Romagnani S. Regulation and deregulation of human IgE synthesis // Immunol. Today.-1990.-Vol.ll., N9.- P. 316-321.
52. Romagnani S. Thl and Th2, subsets: doubt no more// Immunol Today.-1991.-Vol.12,N8.-P.256-257.
53. Schrezenmeier H.; Kaltwasser J. P.; Herrmann
F.; Raghavachar A. Soluble interleukin-2-receptor and souluble CD8-antigen in the sera of patients with aplastic anemia // Oncologie.-1991.- Vol.14, N2.- P.148.
54. Tohda S.; Nara N.; Tanikawa S. et al. Pure red cell aplasia following autoimmune haemolytic anaemia. Cell-mediated suppression of erythropoiesis as a possible pathogenesis of pure red cell aplasia // Acta. Haematol.- 1992., Vol.87.- N2,- P.98-102.
55. Torok-Storb B.// Amer. J. Pediatr. Hematol. Oncol. - 1990,- Vol.12.- P.346-401.
56. Ulich T.R.; Shin S.S.; del-Castillo J. Haemato-logic effects of TNF // Res. Immunol.- 1993., Vol.144.-N5., P.347-354.
57. Vellenga E.; Dokter W.; Halie R. M. Interleukin-4 and its receptor; modulating effects on immature and mature hematopoietic cells // Leukemia.- 1993.-Vol.7; N8.- P. 1131-41.
58. Vercelli D., Jabara H.H., Arai K.I. .et al. Endogenous IL-6 plays an obligatory role in interleukin 4-dependent human IgE synthesis // Eur.J.Immunol.-
1989.-Vol.19, N8.-P.1419-1424.
59. Vercelli D., Jabara H.H., Lauener R. et al. IL-4 inhibits the synthesis of INFy and induces the synthesis of IgE in human mixed lymphocytes culture.// Ibid.-
1990.-Vol.l44.-P.570-573.
60. Vurphy М., Perussia B., Trinchieri G. // Exp. Hematol. - 1988,- Vol.16. - P. 131-138.
61. Watanabe S.; Kondo М.; Takatsu K.; Sugamura K.; Arai K. Involvement of the interleukin-2 receptor gamma subunit in interleukin-4-dependent activation of mouse hematopoietic cells and splenic В cells. // Eur. J. Immunol.- 1995,- Vol.25, N1,- P. 126-31.
62. Young N. S. Haematology, Basic Principles and Practice.// Eds R. Hoffman et al. - Edinburgh, 1991.-P. 122-159.
63. Yoshida K., Miura I., Takahashi G. et al. // Scan. J. Hematol.- 1983,- Vol. 30,- P.317-323.
64. Zoumbos N., Gascon P., Trost S. et al.// N.Engl.J.Med.- 1985,- Vol.312.- P. 257-265.
поступила в редакцию 21.05.2001 принята к печати 18.09.2001