CC BY
126
Эффективность умифеновира (Арбидола) на модели экспериментальной сочетанной вирусно-бактериальной пневмонии мышей
И. А. ЛЕНЁВА', И. Н. ФАЛЫНСКОВА', Е. И. ЛЕОНОВА', И. Т. ФЕДЯКИНА2,
H. Р. МАХМУДОВА', Е. А. ОСИПОВА', Л. Н. ЛЕПЕХА3, Н. А. МИХАЙЛОВА', В. В. ЗВЕРЕВ'
' НИИ вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова РАМН, Москва
2 НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского Минздрава России, Москва
3 Центральный НИИ туберкулеза РАМН, Москва
Umifenovir (Arbidol) Efficacy in Experimental Mixed Viral and Bacterial Pneumonia of Mice
I. A. LENEVA, I. N. FALYNSKOVA, E. I. LEONOVA, I. T. FEDYAKINA, N. R. MAKHMUDOVA, E. A. OSIPOVA, L. N. LEPEKHA, N. A. MIKHAILOVA, V. V. ZVEREV
I. I. Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera, Russian Academy of Medical Science, Moscow D. I. Ivanovsky Institute of Virology, Ministry of Health of the Russian Federation, Moscow Central Research Institute of Tuberculosis, Russian Academy of Medical Sciences, Moscow
Большинство смертельных исходов вследствие гриппа обусловлено вторичными бактериальными осложнениями, среди которых преобладает пневмония. В нашем исследовании изучена эффективность противогриппозного препарата уми-феновир (Арбидол) на модели экспериментальной вирусно-бактериальной пневмонии мышей, индуцированной З.аиггт после заражения вирусом гриппа А/Калифорния/04/2009 (НШ1) . Показано, что лечение мышей умифеновиром в дозах 40 и 60 мг/кг/день эффективно при различных схемах заражения, при этом повышается выживаемость мышей, уменьшается потеря ими массы тела, снижается титр вируса и плотность бактерий в лёгких животных. Клинические, вирусологические и микробиологические данные по эффективности умифеновира коррелировали с результатами пато-морфологических исследований, которые свидетельствовали о выраженном терапевтическом эффекте препарата, разрешении фокусов бронхопневмонии в лёгких на модели сочетанной вирусно-бронхиальной инфекции мышей.
Ключевые слова: грипп, умифеновир (Арбидол), вторичные пневмонии после гриппозной инфекции, S.aureus.
Pneumonia often occurs as a secondary infection after influenza and accounts for a large proportion of the morbidity and mortality associated with seasonal and pandemic influenza outbreaks. The efficacy of umifenovir (Arbidol) was investigated on a murine model of S.aureus pneumonia following A/California/04/2009 (H1N1) influenza virus infection . Oral treatment with umifenovir (40 and 60 mg/kg/day ) in all the contamination schemes increased the survival rate in the mice from 0% to 90% and lowered the animal weight loss. The umifenovir treatment also decreased the virus titer by >2 logs and the viable bacteria counts in the lungs of the mice. The lungs of the mice treated with umifenovir had less severe histopathologic lesions compared to the control group.
Key words: influenza, umifenovir (Arbidol), bacterial pneumonia after influenza, S.aureus.
Введение
Грипп является острым респираторным инфекционным заболеванием, наносящим вред здоровью людей и приводящим к огромным экономическим потерям. Большая часть смертельных исходов при гриппе обусловлена вторичными бактериальными осложнениями, среди которых ведущую роль отводится пневмонии. Из 429,2 млн случаев пневмонии, регистрируемых ежегодно, 200 млн случаев пневмонии развиваются после перенесённых ОРВИ и гриппа, из них 3—4 млн смертельных исходов, что составляет
© Коллектив авторов, 2014
Адрес для корреспонденции: 105064, Москва, Малый Казенный переулок, д. 5а. НИИ ВС им. И. И. Мечникова РАМН. E-mail: wnyfd385@yandex.ru
примерно 7% от общей смертности. К группе особого риска относятся дети младше 5 лет, у которых 43—67% случаев пневмоний зарегистрированы после перенесённых ОРВИ, из них ежегодно примерно 1,4—1,6 млн заканчиваются смертельными исходами [1, 2]. Во время последней пандемии в 2009 г., вызванной И1Ш, 25—56% тяжёлых форм заболеваний и смертельных исходов были ассоциированы с бактериальной пневмонией, из них 14—46% привели к смертельным исходам [2].
ВОЗ в дополнение к вакцинации в качестве основной стратегии борьбы с гриппозной инфекцией рекомендует применение противовирусных препаратов. Одним из важнейших критериев эффективности применения противовирусных препаратов в клинике является снижение осложне-
ний при гриппозной инфекции, в частности пневмонии [3]. Однако результатов клинических испытаний часто бывает недостаточно для оценки эффективности препаратов, исходя из вторичных осложнений после гриппа. Так, в 2012 г. FDA потребовала предоставить дополнительные экспериментальные и клинические данные по эффективности снижения числа осложнений для Тамифлю (озельтамивир), который в настоящее время является золотым стандартом в противогриппозной терапии. В связи с вышесказанным большой интерес представляет возможность экспериментальной оценки эффективности профилактики и лечения гриппозной инфекции в отношении осложнений. С этой целью нами была разработана валидированная, охарактеризованная по различным параметрам экспериментальная модель сочетанной вирусно-бактериальной пневмонии, индуцированной вирусом гриппом с последующим заражением S.aureus.
В России зарегистрирован и широко применяется отечественный препарат Арбидол (умифе-новир), являющийся ингибитором слияния вирусной липидной оболочки с внутриклеточными мембранами [4—5], вирусспецифической мишенью действия которого в цикле репродукции вируса гриппа является его поверхностный белок HA [6]. Умифеновир обладает противовирусной активностью в отношении различных штаммов вирусов гриппа А и В, а также возбудителей ряда ОРВИ в культуре клеток и на модели гриппозной пневмонии мышей [7—9]. В настоящее время Всемирной Организацией Здравоохранения уми-феновиру присвоен международный код АТХ как препарату прямого противовирусного действия. Эффективность и безопасность применения уми-феновира были подтверждены в многочисленных регистрационных и пострегистрационных клинических исследованиях. Тем не менее остается актуальным получение современных дополнительных данных об эффективности и новых свойствах препарата.
Целью нашей работы являлось изучение эффективности умифеновира на модели экспериментальной вирусно-бактериальной пневмонии мышей, индуцированной S.aureus после заражения вирусом гриппа А/Калифорния/04/2009 (H1N1).
Материал и методы
Препараты, их субстанции и приготовление растворов.
Субстанцию арбидола (ЦХЛС-ВНИХФИ) растворяли в 1% растворе крахмала. Для приготовления озельтамивира содержимое капсул Тамифлю (Хоффман-ля-Рош) растворяли в дистиллированной воде. Дозы всех использованных препаратов готовились непосредственно перед проведением эксперимента и указаны из расчёта содержания чистой субстанции в лекарственной форме.
Вирусы, клетки, штаммы. Для моделирования гриппозной инфекции был использован штамм вируса гриппа А/Кали-
форния/04/2009 (пндм H1N1 2009), полученный из ВОЗ, адаптированный к мышам. Культура штамма Staphylococcus aureus 1986 из коллекции лаборатории протективных антигенов ФГБУ НИИВС им. И. И. Мечникова хранилась в лиофи-лизированном состоянии. Для получения живой культуры ампулу в стерильных условиях вскрывали и добавляли 1 мл питательного бульона (ГРМ-БУЛЬОН, ФБУН ГНЦ ПМБ). Суспензию переносили в пробирку объёмом 2 мл и инкубировали 4 ч при температуре 37°С. Затем проводили посев на скошенный питательный агар (ГРМ-агар, ФБУН ГНЦ ПМБ). Пробирки с культурой инкубировали в течение 18 ч при температуре 37°С, по стандарту мутности определяли содержание бактерий в 1 мл объёма и в этот же день использовали для заражения животных.
Животные. Мышей BALB/с — самок с массой тела 12—14 г получали из питомника «Андреевка» (Московская обл.) и содержали на стандартном рационе в регламентированных условиях вивария. Содержание и кормление животных соответствовало правилам по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев).
Определение эффективности препаратов на модели вирус-но-бактериальной пневмонии мышей. Предварительно взвешенные мыши инфицировались интраназально вирусом гриппа. Через 4 дня их инфицировали S.aureus. В день заражения вирусом начинали лечение животных противовирусными препаратами и продолжали его в течение 5 дней. Дозы препаратов рассчитывали в мг/кг массы тела животных в сутки: озельтамивир — 10 мг/кг/день, арбидол — в дозах 30, 40 и 60 мг/кг/день вводили внутрижелудочно с помощью специальной иглы (лаваж). За лечеными и контрольными животными велось ежедневное наблюдение, в первые 5 дней после инфицирования вирусом мышей взвешивали каждый день, далее через день.
Химиотерапевтическую активность соединений на модели вирусно-бактериальной пневмонии мышей оценивали по следующим критериям: выживаемость животных, увеличение средней продолжительности жизни и уменьшение снижения массы тела [10]. Животные контрольной группы были инфицированы вирусом гриппа и S.aureus и не получали никакого лечения.
Получение образцов лёгких мышей. На 6-й день после инфицирования вирусом гриппа (на 2-й день после инфицирования S.aureus) в каждой группе забивали по три мыши, в стерильных условиях извлекали лёгкие, гомогенизировали их и ресуспендировали в 1 мл холодного стерильного 0,01М фос-фатно-солевого буфера. Суспензию осветляли от клеточного дебриса центрифугированием при 2000 g в течение 10 мин; 0,1 мл супернатанта отбирали для определения бактериальной плотности, а оставшийся супернатант использовали для определения инфекционного титра вируса в культуре клеток MDCK. Определение титра вируса и плотности бактерий (в колониеобразующих единицах — КОЕ) в лёгких мышей проводили, как описано [10].
Гистологические исследования. На 6-й день после инфицирования вирусом гриппа в каждой группе забивали по три мыши, извлекали из них лёгкие, которые фиксировали 10% забуференным формалином, обезвоживали в спиртах восходящей концентрации и заключали в парафин. Гистологические срезы окрашивали гематоксилином и эозином, просматривали в световом микроскопе 0lympus-BS250 при различных увеличениях (х10, 40, 100).
Результаты исследования
Изучение эффективности умифеновира на модели вирусно-бактериальной пневмонии мышей, индуцированной внутрибрюшинным или интраназаль-ным заражением S.aureus после заражения вирусом гриппа.
Рис. 1. Влияние умифеновира (арбидола) на выживаемость (а) и изменение массы тела мышей (б), заражённых вирусом гриппа, при внутрибрюшинном заражении S.aureus.
Таблица 1. Средняя продолжительность жизни, выживаемость и титр вируса при внутрибрюшинном и ин-траназальном заражении S.aureusв зависимости от введённой дозы умифеновира (арбидола)
Условия эксперимента Средняя продолжительность Выживаемость, % Титр вируса,
_жизни, дни_^ ТЦИД50
в/б* и/н** в/б и/н в/б и/н
Контрольная группа 10,9 13,2 0 20 4,4+0,1 6,2+0,6
(А/Калифорния/04/09 + З.аитеш)
Озельтамивир 10 мг/кг/день 10,4 14,8 31 60 2,25+0.4 3,8+0,7
Арбидол 30 мг/кг/день 14,4 18,2 50 80 3,1+0,9 5,3+1,4
Арбидол 40 мг/кг/день 18,9 18,1 90 92 3+0 5,1+0,4
Арбидол 60 мг/кг/день 16,3 19 87 90 3,3+0,7 4+0
Примечание. в/б* - внутрибрюшинное заражение; и/н** — интраназальное.
В первой серии экспериментов бактериальная пневмония была индуцирована Б.аыгет при двух способах заражения — внутрибрюшинно и интраназально на 4-й день после вирусного заражения. В контрольной группе животных, заражённых вирусом гриппа и Б.аыгет внутрибрюшинно, к 15 дню погибли все животные. Эффективность лечения умифеновиром зависела от дозы препарата: повышалась при её увеличении. В дозе 30 мг/кг/день данное лечение защищало от смертности половину животных, увеличивая среднюю продолжительность жизни в 1,3 раза. Лечение умифеновиром в дозах 40 и 60 мг/кг/день было более эффективным: предотвращало смертность 87—90% животных и увеличивало продолжительность их жизни, по сравнению с группой контроля уже в 1,5—1,7 раз. Наименее эффективным было лечение озельта-мивиром в дозе 10 мг/кг/день, которое защищало 30% животных, не увеличивая продолжительность их жизни. Во всех группах не было отмечено значительного снижения массы тела, в то время как в группе инфицированных и нелеченых животных снижение массы тела наблюдалось, начиная с 5 дня после заражении вирусом, и достигло 27—30% к 14 дню (рис. 1, табл. 1).
Лечение всеми дозами умифеновира, несмотря на различающуюся эффективность, достоверно и сходным образом подавляло титр вируса в
лёгких по сравнению с группой контроля (см. табл. 1). Несмотря на то что лечение озельтамиви-ром было наименее эффективным, оно приводило к наибольшему подавлению титра вируса в лёгких животных.
Во второй серии экспериментов была изучена эффективность различных доз умифеновира при втором способе заражения Б.аыгет — интрана-зальном. В контрольной группе животных, заражённых интраназально Б.аыгет на 4-й день после вирусного заражения и не получавших никакого лечения, начиная с 5 дня наблюдалась гибель, к 15 дню погибли 8 из 10 животных, а 2 оставшихся в живых стали набирать вес. Лечение умифенови-ром во всех изученных дозах значительно не различалось по своей эффективности, защищая от гибели 60—80% инфицированных животных, увеличивая среднюю продолжительность жизни примерно в 1,4 раза. Лечение всеми исследуемыми препаратами позволило предотвратить потерю мышами массы тела, в то время как в контрольной группе животных наблюдалась потеря массы тела, достигая максимума 20% на 11-й день после заражения (рис. 2, см. табл. 1).
При интраназальном заражении Б.аыгет подавление титра вируса в лёгких леченых животных зависело от дозы умифеновира: снижение его в 10 и 100 раз наблюдалось при лечении дозами 30 и 60 мг/кг/день соответственно (см. табл. 1). При
Рис. 2. Выживаемость (а) и изменение массы тела (б) мышей при интраназальном заражении S.aureus после заражения вирусом гриппа в зависимости от дозы умифеновира (арбидола).
Рис. 3. Выживаемость (а) и изменение массы тела (б) мышей при интраназальном заражении низкой дозой S.аureus после заражения вирусом гриппа при лечении умифеновиром (арбидолом) и озельтамивиром.
обоих способах заражения S.aureus, лечение озельтамивиром перорально в дозе 10 мг/кг/день наиболее значительно подавляло размножение вируса в лёгких животных по сравнению с группой вирусного контроля (более чем в 100 раз), хотя оно было наименее эффективным по клиническим признакам. Таким образом, проведённые нами исследования на модели вирусно-бактери-альной пневмонии мышей, индуцированной вирусным заражением с последующим как внутри-брюшинным, так и интраназальным заражением S.aureus показали эффективность лечения умифеновиром. Данное лечение увеличивало выживаемость животных и среднюю продолжительность жизни, снижало или полностью предотвращало потерю веса животных, а также снижало титр вируса в лёгких животных, по сравнению с группой контроля.
Эффективность умифеновира при пневмонии мышей, индуцированной вирусным заражением с последующим интраназальным заражением S.aureus в низкой и высокой дозах.
Полученные нами ранее данные при моделировании сочетанной вирусно-бактериальной пневмонии позволяют предположить, что пневмония более выражена при интраназальном, чем при внутрибрюшинном заражении S.aureus. Для более детального изучения эффективности уми-
феновира в следующей серии экспериментов мы использовали интраназальное заражение S.aureus в двух дозах — низкой (2х 107 КОЕ/мл) и высокой (2х109 КОЕ/мл). В соответствии с дозой заражения в контрольной группе не получавших лечения животных, заражённых вирусом и низкой дозой S.aureus, к 15 дню погибло 75% животных. Лечение умифеновиром в дозе 30 мг/кг/день, так же как и лечение озельтамивиром в дозе 10 мг/кг/день, было практически неэффективно, увеличение дозы умифеновира до 40 мг/кг/день защищало от смертности половину животных, снижая потерю веса в данной группе по сравнению с группой контроля. Наиболее эффективным было лечение умифеновиром в самой высокой из изученных доз 60 мг/кг/день, оно полностью предотвращало гибель животных, и значительно снижало потерю ими массы тела (рис. 3, табл. 2).
В контрольной группе животных, инфицированных высокой дозой S.aureus интраназально, на 4-й день после вирусного заражения, погибли все животные, а максимальная потеря массы наблюдалась на 9-й день и составила 21%. В группах, леченных умифеновиром в высоких дозах — 40 и 60 мг/кг/день выжило 45—50% животных, продолжительность их жизни увеличилась более чем в 1,3 раза по сравнению с контрольной группой. При обеих дозах заражения S.aureus лечение
Таблица 2. Средняя продолжительность жизни, выживаемость и титр вируса при низкой и высокой дозе ин-траназального заражения S^ureus после заражения вирусом гриппа при введении умифеновира и озельта-мивира
Условия эксперимента Средняя продолжительность Выживаемость, Титр вируса, Плотность бактерий, lg
_жизни, дни_%_lg ТЦИД50_КОЕ/мл_
низкая доза высокая низкая высокая низкая высокая низкая высокая
S.aureus* доза доза доза доза доза доза доза
S.aureus** S.aureus* S.aureus** S.aureus* S.aureus** S.aureus* S.aureus**
Контрольная группа
(А/Калифорния/04/09 + S.aureus) 13,5 9,5 25 0 8,7+0,3 6,7+1 4,5+0,5 >4
Озельтамивир 11,5 8,5 25 0 4,3+0,1 4,1+0,4 0,4+0,5 2+0
Арбидол 30 мг/кг/день 12,8 — 25 — 6+0,5 — 0,4+0 —
Арбидол 40 мг/кг/день 15,5 13 50 43 6,3+0,3 2+0,5 0,4+0,5 2+0
Арбидол 60 мг/кг/день 16 14 50 50 5,6+0,1 2+0,9 0,3+0,2 1,5+0,5
Примечание. * - 2X1Q7 КОЕ/мл; ** - 2X1Q9 КОЕ/мл.
Рис. 4. Выживаемость (а) и изменение массы тела (б) мышей при интраназальном заражении высокой дозой S^ureus после заражения вирусом гриппа при лечении умифеновиром (арбидолом) и озельтамивиром.
озельтамивиром перорально не защищало животных от гибели, не влияло на среднюю продолжительность их жизни и не влияло на потерю массы тела (рис. 4).
Определение титра вируса в лёгких мышей при обеих дозах заражения показало, что эффективное лечение умифеновиром в дозах 40 и 60 мг/кг/день достоверно подавляло размножение вируса в лёгких инфицированных животных, при этом разница с группой контроля была более выражена при высокой дозе заражения.. Важно отметить, что при обеих дозах заражения, несмотря на то что лечение озельтамивиром не защищало от гибели животных, оно значительно подавляло титр вируса и плотность бактерий в их лёгких (см. табл. 1 и 2). Определение количества S.aureus в лёгких показало, что плотность бактерий в группах, леченных всеми дозами умифеновира, была сходной, незначительно отличалась от плотности бактерий в группах, леченных озельтамивиром и была значительно ниже, чем плотность бактерий в контрольной группе (см. табл. 2).
Морфологическое изучение лёгких мышей с экспериментальной вирусно-бактериальной пневмонией, леченных умифеновиром.
Морфологическое изучение лёгких мышей с со-четанной вирусно-бактериальной пневмонией, леченных умифеновиром в дозе 40 и 60 мг/кг/день, было проведено в сравнении с контрольной группой
инфицированных таким же образом животных, но не получавших лечения. В контрольной группе были выявлены распространённые деструктивные изменения воздухоносных путей в сочетании с обширными фокусами пневмонии в перибронхиальной паренхиме. Отмечена характерная некротизация реснитчатого эпителия с массивными скоплениями полиморфноядерных лейкоцитов (ПЯЛ) в просвете крупных бронхов и заполнение гнойно-слизистым экссудатом более мелких (рис. 5, а). Крупные участки бронхопневмонии консолидируют с обширными зонами периваскулярных и особенно субплевральных пневмонических фокусов (см. рис. 5, б). Некротизация межальвеолярных перегородок сопровождается крупными скоплениями ПЯЛ в этих зонах (см. рис. 5, в). Сохраняющая воздушность лёгочная ткань у нелеченых мышей составляет не более 30% площади среза, межальвеолярные перегородки повсеместно утолщены за счёт отёка и инфильтрации клеточными элементами воспаления, в том числе ПЯЛ.
У опытных животных, принимавших умифе-новир в обеих изученных дозах, структурные изменения органов дыхания заметно варьируют в зависимости от использованной дозы препарата. У мышей, получавших 40 мг/кг/день, деструктивные изменения бронхиального дерева и лёгочной паренхимы сохраняются в виде консолидации сформированных фокусов бронхопневмонии и
Рис. 5. Деструктивные изменения органов дыхания у мышей с сочетанной вирусно-бактериальной пневмонией (а—в) и морфологические признаки положительной динамики воспалительного процесса в лёгких опытных мышей, леченных умифеновиром (г—и).
Примечание: а - гнойно-слизистый экссудат заполняет просвет бронха, ув. х10; б- консолидация перибронхиаль-ных, периваскулярных и субплевральных пневмонических фокусов, ув. х10; в - некроз межальвеолярных перегородок, ув. х40; г- очаговый инфильтрат в стенке бронха, х10; д - деструкция альвеолярного эпителия, 40 мг/кг/день, ув. х40; е - фокус некроза, периваскулярный инфильтрат, 40 мг/кг/день, ув. х20; ж- субплевральный пневмонический фокус содержащий ПЯЛ, 60 мг/кг/день, ув. х20; з - преобладание воздушной лёгочной паренхимы, 60 мг/кг/день, ув. х10; и - очаговая инфильтрация межальвеолярных перегородок клеточными элементами воспаления, 60 мг/кг/день, ув. х40.
субплевральных зон воспаления (см. рис. 5, г). Определяются значительные скопления ПЯЛ в участках деструкции респираторного эпителия (рис. 5, ä), хотя и выраженные в меньшей степени, чем в контрольной группе. Отдельные фокусы некроза определяются в периваскулярных клеточных инфильтратах (см. рис. 5, е). У мышей, получавших умифеновир в дозе 60 мг/кг/день, терапевтический эффект препарата более выражен, что, прежде всего, отражается на состоянии воздухоносных путей. Эпителиальная выстилка бронхов на значительном протяжении имеет нормальное строение. Небольшие мононуклеарные инфильтраты с примесью ПЯЛ в слизистом и подслизи-стом слоях определяются относительно редко. В
лёгочной паренхиме сохраняются перибронхи-альные и субплевральные пневмонические фокусы, хотя и более редкие по частоте выявления и меньшие по площади, чем во всех остальных терапевтических группах. Среди клеточных элементов, которые располагаются более рыхло, много макрофагов, хотя по-прежнему среди них определяются ПЯЛ; имеются микронекрозы (см. рис. 5, ж). Воздушная лёгочная паренхима в этой группе составляет не менее 60% площади среза (см. рис. 5, з). Межальвеолярные перегородки чаще всего не утолщены или могут быть слабо инфильтрированы клеточными элементами воспаления (см. рис. 5, и), что наиболее заметно в периваскулярных зонах.
Обсуждение результатов
Многочисленные клинические исследования показывают, что лечение этиотропными противогриппозными препаратами, начатое в ранние сроки, приводит к сокращению длительности заболевания, уменьшению симптомов инфекции, сокращению периода выделения вируса и его репродукции в носоглотке, а также к снижению количества осложнений, в частности пневмоний [1, 3]. В настоящее время именно фактор снижения количества осложнений рассматривается как важнейший при оценке эффективности противогриппозного препарата, этому аспекту уделяется большое внимание как стороны ВОЗ, так и разрешительных органов. Эти требования инициировали интерес к возможности экспериментальной оценки эффективности противогриппозных препаратов на модели сочетанной вирусно-бактери-альной пневмонии мышей. С использованием модели сочетанной вирусно-бактериальной пневмонии мышей показано, что применение ингибитора нейраминидазы озельтамивира у мышей, инфицированных вирусом гриппа А с последующим заражением Streptococcus pneumoniae, снижает смертность в результате вторичной бактериальной пневмонии, развивающейся после гриппозной инфекции, уменьшает проявление её симптомов и облегчает протекание заболевания [11]. Сходные данные были получены с лицензированным в 2011 г. новым ингибитором нейраминидазы перамивиром [12], а также с находящимся на III стадии клинических испытаний препаратом Флюдаза [13]. На модели сочетанной вирусно-бактериальной пневмонии показано также, что последовательное использование озельтамивира и ампициллина было более эффективно, чем использование одного антибиотика [14].
В нашем исследовании показана эффективность умифеновира на стандартизированной экспериментальной модели сочетанной вирус-но-бактериальной пневмонии мышей, индуцированной заражением вирусом гриппа с последующим заражением S.aureus при различных схемах заражения и дозах препарата. Эффективность лечения умифеновиром на этой модели ЛИТЕРАТУРА
1. Legand A, Briand S, Shindo N, Brooks W.A., de Jong M, Farrar J, Aguilera J, Hayden F. G. Addressing the public health bürden of respiratory viruses the battle against respiratory viruses (BRaVe). Initiative Future Virology. 2013; 8: 10: 953-968.
2. Webster R.G., Govorkova E.A. Continuing challenges in influenza. Ann N Y Acad Sci 2014; 1323: 1: 115-139.
3. Center for Disease Control and Prevention. Antiviral agents for influenza guidance on the use of influenza antiviral agents. Available at: http://www.cdc.gov/flu/professionals/antivirals/summary-clinicians.htm. Accessed 5 March 2014.
4. Boriskin Y, Leneva I., Pecheur E, Polyak S. Arbidol: a broad-spectrum antiviral compound that blocks viral fusion. Curr Med Chem 2008; 15: 10: 997-1005.
подтверждалась как клиническими показателями, так и вирусологическими и микробиологическими критериями. Патоморфологическое изучение органов дыхания у мышей, леченных умифеновиром, коррелировало с данными вирусологических и микробиологических исследований и свидетельствовало о выраженном терапевтическом эффекте препарата и разрешении фокусов бронхопневмонии на модели сочетан-ной вирусно-бронхиальной инфекции.
Полученные результаты коррелируют с данными клинических исследований умифеновира. Уже в регистрационых клинических испытаниях было отмечено отсутствие осложнений у пациентов при терапевтическом применении препарата, в то время как в группе, получавших плацебо, осложнения составили 13,2% [15]. В дальнейших пострегистрационных исследованиях, проведённых у взрослых и детей, применение Арбидола уменьшало количество осложнённых случаев от 1,66 у военнослужащих до 4 раз у часто болеющих детей [16, 17]. В фармакоэпидемическом исследовании ЭГИДА, проведённом среди 523 пациентов в первый постпандемический период в 2010—2011 гг., показано, что терапевтическое применение умифеновира в первые 48 часов после проявления симптомов достоверно снижало количество осложнений, причём пневмония регистрировалась в 0—0,3% случаев, по сравнению с 23,7% у пациентов, принимающих только симптоматическую терапию [18].
В связи с вышесказанным, полученные в настоящей работе данные об эффективности уми-феновира на модели сочетанной вирусно-бакте-риальной пневмонии, индуцированной вирусом гриппом с последующим бактериальным заражением, являются важным дополнением к результатам клинических исследований препарата. Кроме того, эти данные могут быть использованы для разработки дизайна дальнейших клинических исследований умифеновира, являясь основой при выборе схем и доз лечения, с целью оптимизации его применения для профилактики и лечения гриппа и ассоциированной с ним вторичной бактериальной пневмонии.
5. Blaising J., Polyak S.J., Pecheur E.I. Arbidol as a broad-spectrum antiviral: an update. Antiviral Res 2014; 107: 84—94.
6. Leneva I.A., Russell R.J., Boriskin Y.S., Hay A.J. Characteristics of arbidol-resistant mutants of influenza virus: implications for the mechanism of anti-influenza action of arbidol. Antiviral Res 2009; 81: 2: 132—140.
7. Brooks M.J, Burtseva E.I, Ellery P.J, Marsh G.A., Lew A.M., Slepushkin A.N. et al. Antiviral activity of arbidol, a broad-spectrum drug for use against respiratory viruses, varies according to test conditions. J Med Virol 2012; 84: 1: 170—181.
8. Shi L, Xiong H, He J. et al. Antiviral activity of arbidol against influenza A virus, respiratory syncytial virus, rhinovirus, coxsackie virus and adenovirus in vitro and in vivo. Arch Virol 2007;152: 1447—1451.
9. Ленёва И.А., Федякина И.Т., Еропкин М.Ю., Тудова Н.В., Романовская А.А., Даниленко Д.М, Виноградова С.М., Лепешкин А.Ю., Шес-топалов А.М. Изучение противовирусной активности отечествен-
ных противогриппозных химиопрепаратов в культуре клеток и на модели животных. Вопр вирусол 2010; 3: 19—27.
10. Leneva I., Roberts N, Govorkova E. et al. The neuraminidase inhibitor GS4104 (oseltamivir phosphate) is efficacious against A/Hong Kong/156/97 (H5N1) and A/Hong Kong/1074/99 (H9N2) influenza virus. Antivir Res 2000; 48: 101—115.
11. McCullers J.A. Preventing and treating secondary bacterial infections with antiviral agents. Antivir Ther 2011; 16: 123—135.
12. Tanaka A., Nakamura S, Seki M. et al. The effect of intravenous peramivir, compared with oral oseltamivir, on the outcome of postinfluenza pneumococcal pneumonia in mice. Antivir Ther 2014 Feb 12. doi: 10.3851/IMP2744.
13. Hedlund M, Aschenbrenner L. M, Jensen K. et al. Sialidase-based antiinfluenza virus therapy protects against secondary pneumococcal infection. J Infect Dis. 2010; 201: 1007—1015.
14. McCullers J.A. Effect of antiviral treatment on the outcome of secondary bacterial pneumonia after influenza. J Infect Dis 2004; 190: 519—526.
15. Гусъкова T.A., Глушков Р.Г. Арбидол-иммуномодулятор, индую^ интерферона, антиоксидант. М.: Тимотек, 1999; 93.
16. Шумилов В.И., Шустер A.M., Лобастое и др. Эффективность Арби-дола при профилактике и лечении острых респираторных инфекций. Военно-мед журн 2002; 9: 51—53.
17. Учайкин В.Ф., Харламова С.Г., Чешик С.Г. и др. Применение Арби-дола и амиксина в качестве этиотропной терапии гриппа и ОРВИ у детей Педиатрия. 2004; 5: 73—77.
18. Малеев В В. Селъкова Е.П., Простяков И.В., Остова E.A. Фарма-коэпидемиологическое исследование течения гриппа и других ОРВИ в сезоне 2010/11 гг. Инфекц бол 2012; 10: 3: 15—23.
