CC BY
106
Ультраструктурное исследование сперматозоидов у пациентов с астенозооспермией
С.Ш. Хаят, Е.Е. Брагина, Л.Ф. Курило
ФГБУ«Медико-генетический научный центр» РАМН, Москва
Контакты: Любовь Федоровна Курило kurilo@med-gen.ru
Ультраструктура двигательного аппарата жгутика сперматозоида является высоко консервативной и состоит из ряда элементов цитоскелета, необходимых для обеспечения движения сперматозоида. Обсуждаются нарушения ультраструктурных механизмов у 86 пациентов с астенозооспермией.
Ключевые слова: астенозооспермия, аксонемный комплекс
Ultrastructural investigation of human sperm from asthenozoospermic men
S.Sh. Khayat, E.E. Bragina, L.F. Kurilo
Medical Genetics Research Center, Russian Academy of Medical Sciences, Moscow
Ultrastructure of the flagellum is highly conserved and is composed of a number of cytoskeletal elements whose proper assembly is criticalfor sperm motility. Ultrastructural mechanisms damage as cause of asthenozoospermia development are discussed.
Key words: asthenozoospermia, axoneme
E
W
E
Введение
Гетерогенность форм астенозооспермии, разнообразие причин, приводящих к нарушению подвижности сперматозоидов, зависимость двигательной активности половых клеток от работы ферментов гликолиза (регулируемых ядерными генами) и комплексов дыхательной цепи митохондрий обуславливает необходимость соблюдения комплексного подхода в изучении патогенеза астенозооспермии.
Сперматозоид — это уникальная высокоспециализированная клетка, основная функция которой — перенос отцовского генома в яйцеклетку. Для выполнения этой функции сперматозоид морфологически разделен на 2 компартмента, необходимых для оплодотворения, — головка и жгутик. Головка, в свою очередь, разделена на акросомный участок и ядро, содержащее гаплоидный набор хромосом. Собственно акросома представляет собой плоскую цистерну, плотно примыкающую к ядру и окруженную мембраной. Наружная акросомная мембрана, в свою очередь, окружена плазматической мембраной сперматозоида. Жгутик, имеющий сложное строение, обеспечивает подвижность сперматозоида. Морфологическая основа жгутика — аксонема, построенная из микротрубочек. По длине жгутик сегментирован в зависимости от окружающих аксонему периаксонемных структур. В более толстом проксимальном отделе жгутика (сред-
ний отдел) аксонема окружена наружными плотными фибриллами, выполняющими скелетную функцию, и митохондриальным слоем, обеспечивающим аксо-нему энергией в относительно аэробных условиях мужских половых путей. В более тонком и длинном дистальном отделе (основной отдел) жгутика аксонема окружена фиброзной оболочкой, снабжающей аксо-нему энергией за счет гликолиза при прохождении через женские половые пути.
Отличительной особенностью сперматозоидов является то, что их окончательное созревание и трансформация в функционально компетентную форму происходит в постсперматогенный период, когда отсутствует транскрипция генов и трансляция иРНК. Сперматозоиды выходят из семявыводящих канальцев в функционально неактивной форме и проходят через эпидидимис, где происходит окончательное биохимическое созревание хроматина [1] и сперматозоиды обретают подвижность [2]. Когда сперматозоиды попадают в головку эпидидимиса, в белках конденсированного хроматина ядра и в белках жгутика присутствует большое количество свободных сульфгидрильных групп. По мере прохождения через эпидидимис формируются ковалентные связи между БЫ-группами, происходит фосфорилирование тирозина. Протеоми-ка позволяет определить некоторые молекулы, связанные посттрансляционными изменениями в эпидиди-
мисе [3]. Механизм активации сперматозоидов при прохождении через эпидидимис пока полностью не исследован, однако на основании известных данных можно предполагать о наличии общих регуляторных процессов при созревании хроматина и жгутика.
При попадании в женские половые пути сперматозоиды подвергаются процессу капацитации. Термин «капацитация» был введен в 1952 г., он означает, что сперматозоиды должны подвергнуться зависимым от времени физиологическим изменениям, чтобы приобрести способность (capacity) к формированию акро-сомной реакции и гиперактивации, т. е. к оплодотворению. При капацитации происходит изменение ионного содержимого цитоплазмы сперматозоидов [4] и изменение мембранного потенциала. Мембраны сперматозоидов гиперполяризуются во время капаци-тации (мембранный потенциал — около 80 мВ), активируются К+ каналы, уменьшается проводимость Na+ каналов. Капацитация представляет собой комплексные биохимические и физиологические изменения сперматозоидов, в результате которых происходят следующие этапы активации — изменяется тип подвижности сперматозоидов (асимметричное биение жгутиков — гиперактивация), сперматозоиды приобретают способность ориентированного движения по направлению к хемоаттрактантам женских половых путей, а также появляется способность к экзоцитозу акросо-мы [5]. Для осуществления успешного оплодотворения необходимы все компоненты функциональной компетентности сперматозоидов — «зрелый» конденсированный хроматин, прогрессивная подвижность, гиперактивация, акросомная реакция.
Жгутик, ядро и акросома имеют значительные структурные различия и находятся в разных компарт-ментах сперматозоида. В последнее время появляются данные, свидетельствующие о том, что в нормальных физиологических условиях жгутик не только является органоидом движения, но также играет ключевую роль в контроле акросомной реакции [6, 7], благодаря тому, что одни и те же сигнальные пути с участием Са2+ регулируют акросомный экзоцитоз и подвижность. Созревание хроматина и жгутика, по-видимому, также регулируется некоторыми общими механизмами. Можно ожидать, что при морфологических аномалиях одной из вышеназванных структур будут выявлены морфологические аномалии и других компонентов сперматозоидов.
Методом преодоления бесплодия при выраженной астенозооспермии в настоящее время является интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида (ИКСИ). Отбор сперматозоидов для ИКСИ проводят на светооптическом уровне, при этом выбирают морфологически нормальные сперматозоиды, которые, как следует из предположения об общности регуля-торных механизмов созревания сперматозоидов,
могут иметь выраженные аномалии не только в структуре жгутика.
В настоящем исследовании мы проводили количественный ультраструктурный анализ сперматозоидов при астенозооспермии. Применение ультраструктурного анализа позволяет выявить особенности органоидов сперматозоидов — состояние акросомы, компактизацию хроматина, строение жгутика и его компонентов, структуру центриоли, состояние и функционирование митохондрий. Целью настоящего исследования явилось установление комплексности нарушений структуры сперматозоидов при астенозооспермии и анализ комбинаций этих нарушений.
Материалы и методы
Выборка пациентов с астенозооспермией составила 86 человек, из них у 4 пациентов выявлена абсолютная астенозооспермия. В группу условного контроля включены 62 инфертильных пациента, у которых показатели подвижности сперматозоидов соответствовали нормативным.
Эякулят, полученный путем мастурбации, после разжижения фиксировали 2,5 % раствором глутарово-го альдегида на 0,1 М какодилатном буфере (рН 7,2—7,4) и 1 % осмиевой кислотой и заливали в эпоксидную смолу. Ультратонкие срезы получали на ультрамикротоме Reichert III и просматривали в электронном микроскопе Hitachi 700.
При электронно-микроскопическом исследовании сперматозоидов проводили количественный анализ следующих показателей: доля головок нормальной морфологии, количество ядер в сперматозоиде, наличие или отсутствие акросомы, положение акросомы (нормальное или удаленное от ядра), форма акросомы (нормальная или измененная), содержимое акросомы (компактное или некомпактное), прореагировавшая акросома, форма ядра (нормальная, сферическая, аморфная), состояние хроматина (конденсированный, недостаточно конденсированный — незрелый, вакуо-лярный, разрушенный), наличие цитоплазматических капель на головке и шейке сперматозоида, особенности ультраструктуры митохондрий — форма (нормальная или раздутая), укладка (нормальная или нерегулярная), матрикс (нормальный или темный), морфология аксонемы жгутика (нормальное строение аксонемы, отсутствие центральной пары микротрубочек, нарушение количества дуплетов микротрубочек, дезорганизация аксонемы), морфология периаксонем-ных структур — наружных плотных фибрилл и фиброзного слоя (нормальная или аномальная).
Для сравнения двух выборок (пациентов с астено-зооспермией и группы условного контроля) применяли критерий х2. Различия считали достоверными при р < 0,05 (х2 < 3,84).
т а т
Результаты и обсуждение
Популяция сперматозоидов человека гетерогенна, наряду со сперматозоидами нормального строения в эякуляте фертильных мужчин выявляются разнообразные формы с патологией акросомы, укладки хроматина, с различными аномалиями ультраструктуры жгутика (аксонемы и периаксонемных структур, отсутствие динеиновых ручек). Однако у фертильных мужчин доля патологически измененных сперматозоидов не превышает определенной величины. ВаЛооу й а1. [8], Бочарова и соавт. [9] приводят данные количественного ультраструктурного исследования пациентов фертильной группы. Эти показатели мы брали как референсные значения при оценке эякулята пациентов с патозооспермией (табл. 1).
А
Таблица 1. Референсные значения при оценке эякулята пациентов с патоспермией
т а т
Электронно-микроскопическое исследование ультраструктур сперматозоидов Референсные значения
Нормальные акросомы не менее 40 %
Деградация акросом не более 20 %
Незрелый хроматин не более 30 %
Нормальный жгутик не менее 80 %
Нормальные митохондрии не менее 80 %
Нормальная аксонема не менее 70 %
Дисплазия фиброзного слоя не более 10 %
Аномалия наружных плотных фибрилл не более 20 %
Хроматин нормально развившихся сперматозоидов плотно конденсирован и визуализируется как однородная структура средней электронной плотности (рис. 1). При нарушениях конденсации в ядрах виден гранулярный, так называемый «незрелый» хроматин, в котором просматривается хромонемная структура — фибриллы толщиной 0,1—0,2 мкм (рис. 2). Акросома типичных сперматозоидов представляет собой плос-
Рис. 2. Сперматозоид с нормальной акросомой (А) и недостаточно конденсированным «незрелым» хроматином (Х), в котором выявляются гранулярные структуры
кую цистерну, заполненную гомогенным веществом средней электронной плотности и покрывающую примерно 2/3 передней поверхности ядра головки. Деградация акросомы в эякуляте является проявлением преждевременной акросомной реакции. Истинная акросомная реакция определяется разрушением акро-сомы при сохранении постакросомальной пластины (рис. 3). Патологическими изменениями акросомы считаются изменения ее толщины и формы.
При количественном электронно-микроскопическом исследовании эякулята пациентов с астено-зооспермией показано, что наряду с ожидаемыми аномалиями структуры аксонемы жгутиков и пери-аксонемных структур у этих пациентов обнаруживали аномалии структуры головки. Из 86 обследованных
Рис. 1. Сперматозоид с нормальной формой головки, конденсированным (нормальным) хроматином (Х) и акросомой (А) нормальной морфологии. Ак — аксонема жгутика, М — митохондрии
■ ^ , Ц С
1 мкм
Рис. 3. Сперматозоид с прореагировавшей акросомой. У сперматозоида сохранена постакросомная пластинка (ПП), на месте акросомы — мембранные пузырьки (стрелки). Аномальная двойная аксонема (Ак) жгутика расположена асимметрично в цитоплазматической капле
пациентов с астенозооспермией у 64 повышено количество сперматозоидов с измененным положением акросомы. У 62 человек повышено число сперматозоидов с прореагировавшей акросомой, у 2 повышено число сперматозоидов с аномальной морфологией акросомы, у 24 повышено количество сперматозоидов с незрелым хроматином.
Повышенное содержание сперматозоидов с прореагировавшей акросомой у пациентов с астенозоо-спермией обнаруживалось в 2 раза чаще, чем у пациентов с нормальной подвижностью сперматозоидов. Прореагировавшая акросома означает, что в сперматозоиде прошла акросомная реакция. Нефизиологическая (преждевременная) акросомная реакция сперматозоида в эякуляте происходит при повышенном содержании в семенной жидкости активных форм кислорода [10] и при наличии воспалительных заболеваний урогенитального тракта, которые, как известно, часто сочетаются с нарушением подвижности сперматозоидов [11].
Повышенное содержание сперматозоидов с измененным положением акросомы у пациентов с астенозооспермией обнаружили в 1,5 раза чаще, чем у пациентов с нормальной подвижностью сперматозоидов. Изменение положения акросомы, выявленное у 64 пациентов, сочетается с наличием цитоплазматической капли на головке и нерегулярной укладкой митохондрий у 10 пациентов.
Таким образом, и нарушение положения акросомы, и прореагировавшая акросома ассоциированы с нарушением подвижности. В то же время изменение формы акросомы у инфертильных пациентов с нормальной подвижностью сперматозоидов выявляется в 11 раз чаще, чем у пациентов с астенозооспермией, это свидетельствует о том, что у этих пациентов фактором инфертильности может быть именно измененная форма акросомы. Важно отметить, что для осуществления пенетрации сперматозоидом оболочек ооцита необходима интактная акросома, поэтому сведения об ультраструктуре головки и акросомы сперматозоидов могут играть ключевую роль в прогнозировании успешного проведения экстракорпорального оплодотворения [12].
В табл. 2 представлен сравнительный анализ различных параметров структуры сперматозоидов у пациентов с астенозооспермией и у пациентов с нарушенной фертильностью, но с нормативными показателями подвижности.
Морфологически нормальный жгутик состоит из аксонемы и периаксонемных структур. Аксонема жгутика состоит из 9 пар периферических микротрубочек, расположенных по окружности (дуплетов), и одной пары центральных микротрубочек (9 + 2). От каждого дуплета отходят так называемые «динеи-новые ручки», обладающие АТФ-азной активностью.
Таблица 2. Аномалии органоидов сперматозоидов у пациентов с астенозооспермией и у пациентов с нарушением фертильности, но с нормативными показателями подвижности (группа контроля)
Патологические нарушения ультраструктуры сперматозоидов
Пациенты c астенозооспермией (частота вы-явления,%)
Группа контроля (частота выявления, %)
> 60 % сперматозоидов с измененной формой акросомы 2 14
> 20 % сперматозоидов с измененным положением акросомы 64 30
> 20 % сперматозоидов с прореагировавшей акросомой 62 19
> 30 % сперматозоидов с «незрелым» хроматином 24 13
> 20 % сперматозоидов с цито-плазматической каплей на головке 14 6
> 20 % сперматозоидов с цито-плазматической каплей на шейке 7 7
> 20 % сперматозоидов с нерегулярной укладкой митохондрий 53 46
сперматозоиды с электронноплот-ным матриксом митохондрий 29 29
> 30 % сперматозоидов с отсутствием центральной пары микротрубочек аксонемы жгутика 2 0
> 30 % сперматозоидов с нарушением строения пар периферических микротрубочек аксонемы жгутика (5 + 2, 7 + 2 и т. д.) 12 7
> 30 % сперматозоидов с дезорганизацией строения пар микротрубочек аксонемы жгутика 2 1
> 20 % сперматозоидов со сдвинутыми плотными фибриллами 10 1
> 50 % сперматозоидов с диспла-зией фиброзного слоя 4 0
В среднем отделе жгутика аксонема окружена 9 наружными плотными фибриллами, каждая из которых расположена за одним из дуплетов микротрубочек, и слоем митохондрий (митохондриальной спиралью). В более длинном основном отделе жгутика аксонема окружена фиброзным слоем, который построен по принципу лестницы-стремянки — 2 вертикальные колонны, тянущиеся вдоль аксонемы, скреплены поперечными кольцевыми ребрами, расположенными вокруг аксонемы (рис. 4).
При количественном анализе структуры жгутиков сперматозоидов показано, что морфологические аномалии затрагивают различные компоненты жгутиков сперматозоидов — аксонему, наружные плотные фибриллы, фиброзный слой (рис. 5—9).
Из 86 обследованных пациентов с астенозооспер-мией у 10 пациентов было выявлено повышенное содержание сперматозоидов со сдвинутыми плотными фибриллами, у 2 человек — повышенное содержание сперматозоидов с отсутствием центральной пары
Е га Е
Е га Е
0,1 мкм
Рис. 6. Поперечный срез аксонемы с дополнительными дуплетами микротрубочек (МТ) (стрелки), (11 + 2)
Рис. 4. Поперечные срезы через жгутики сперматозоидов нормальной морфологии. Внизу — срез через средний отдел жгутика. Аксонема состоит из 9 периферических дуплетов микротрубочек (МТ) и центральной пары микротрубочек (Ц) — (9 + 2). Аксонема окружена наружными плотными фибриллами (НФ) и митохондриями (М), вверху — срез через основной отдел жгутика, аксонема окружена фиброзным слоем (ФС)
Рис. 5. Поперечный срез через основной отдел жгутика с уменьшенным количеством дуплетов микротрубочек (МТ) (8 + 2)
микротрубочек аксонемы (9 + 0), у 12 пациентов — повышено количество сперматозоидов с нарушением количества дуплетов периферических микротрубочек (5 + 2, 7 + 2 и т. д.), у 2 пациентов — число сперматозоидов с дезорганизацией микротрубочек. Проведение
Рис. 7. Поперечный срез через жгутик с дезорганизацией микротрубочек аксонемы (МТ), наружных плотных фибрилл (НФ) и асимметричным фиброзным слоем (ФС)
количественного анализа морфологических аномалий аксонемы имеет прогностическое значение у пациентов с астенозооспермией [13, 14].
Отмечено сочетание нарушений нескольких ультраструктур. Нарушение строения пар периферических микротрубочек, выявленное у 12 пациентов, сопровождается изменением положения акросомы (у 11 пациентов), нерегулярной укладкой митохондрий (у 10 пациентов), сдвигом наружных плотных фибрилл (у 8 пациентов). При этом у 6 из 12 пациентов наблюдали все 4 ультраструктурные аномалии сперматозоидов — нарушение строения пар периферических
■ * ¿¿TV, , ïV ' . у \ . ... ,, : , л-\ ■ , оfY .Ai
ш
Рис. 8. Поперечный срез через жгутик с двойной аксонемой (стрелки)
микротрубочек, изменение положения акросомы, нерегулярная укладка митохондрий, сдвиг наружных плотных фибрилл.
При проверке достоверности предположений о том, что для каждого из исследованных ультраструктурных нарушений будет выявлена зависимость от нарушения подвижности, они были подтверждены (р < 0,05) для таких нарушений ультраструктуры сперматозоидов, как незрелый хроматин, цитоплазматиче-ская капля на головке, цитоплазматическая капля на шейке, нерегулярная укладка митохондрий, элект-ронноплотный матрикс митохондрий, отсутствие центральной пары микротрубочек аксонемы жгутика, нарушение строения пар периферических микротру-
бочек аксонемы жгутика (5 + 2, 7 + 2 и т. д.), дезорганизация строения пар микротрубочек аксонемы и дисплазия фиброзного слоя жгутика сперматозоида. А для таких нарушений ультраструктуры сперматозоидов, как изменение формы и положения акросомы, наличие прореагировавшей акросомы, а также сдвинутые плотные фибриллы аксонемы, предположения о зависимости от нарушения подвижности не были подтверждены.
Неспецифические аномалии жгутиков описаны в популяции как фертильных, так и инфертильных мужчин [15, 16], однако значительные нарушения подвижности сперматозоидов часто ассоциированы с повышенным содержанием сперматозоидов со структурными дефектами аксонемы и периаксонемных структур жгутиков. Это может быть изменение количества или топографии структур аксонемы или наружных плотных фибрилл при сохранении нормальной морфологии жгутика в светооптическом микроскопе. Подобные изменения описаны в 70 % случаев выраженной астенозооспермии [17, 18]. У фертильных пациентов аномалии структуры компонентов жгутика не превышают 30 %. Возникновение неспецифических структурных аномалий жгутиков сперматозоидов может быть различной этиологии.
Особо следует отметить морфологию жгутиков 4 пациентов с абсолютной астенозооспермией. У этих пациентов содержалось более 50 % сперматозоидов с нарушенным расположением компонентов фиброзного слоя аксонемы. Хаотичное расположение колонн
Е га Е
Рис. 9. Продольный и поперечные срезы через жгутик сперматозоида пациента с дисплазией фиброзного слоя (ФС).
На поперечных срезах заметно отсутствие центральной пары микротрубочек (стрелки). На продольном срезе заметна дезорганизация ФС. Г — головка сперматозоида аморфной формы с прореагировавшей акросомой
Е га Е
и ребер фиброзного слоя принято называть дисплазией фиброзного слоя. Эта аномалия структуры часто сочетается с отсутствием центральной пары микротрубочек аксонемы.
В тех случаях, когда сперматозоиды с определенной атипией строения головки, аксонемы или пери-аксонемных структур составляют абсолютное большинство (90—95 %) клеток эякулята данного пациента, можно предполагать генетически обусловленные формы патозооспермии. При этом фенотип сперматозоидов не меняется со временем, не поддается терапевтической коррекции и сходен с атипией сперматозоидов других пациентов с аналогичными нарушениями фертильности, аномалии нередко носят семейный характер [19, 20].
При неспецифических аномалиях обнаруживают гетерогенную комбинацию различных изменений, которые не носят семейного характера, корректируются терапевтическими методами [19, 21]. Часто множественные аномалии головки и жгутиков представлены одновременно, их проявления могут варьировать по времени у одного и того же пациента.
В настоящее время метод ИКСИ широко используется для преодоления бесплодия в парах, где у мужчин выявляется выраженная астенозооспермия. Движение сперматозоида — сложный процесс, в который вовлечено большое количество белков. Дефекты любого из генов, кодирующих белки в этой длинной цепочке биохимических процессов, приводят к нарушению подвижности. Пока невозможно определить все возможные нарушения на молекулярно-биологи-ческом уровне. Единственным методом, позволяющим провести дифференциальную диагностику генетически обусловленной и функциональной форм астено-зооспермии, является метод ультраструктурного анализа [22].
Хотя полный механизм астенозооспермии пока не выяснен, потенциальный риск переноса репродуктивных аномалий и аномалий систем, связанных с функционированием двигательного аппарата клетки, в том числе ресничного эпителия, построенного по тому же сценарию, что и жгутики сперматозоидов (отмечено
при анализе патологии бронхо-легочной, сердечнососудистой систем), должен учитываться пациентами, обращающимися для проведения ИКСИ [23, 24].
Заключение
В представленном исследовании рассмотрены различные формы нарушений ультраструктурной организации сперматозоидов у пациентов с астенозоо-спермией. Показано, что повышенное количество сперматозоидов с измененным положением акросомы у пациентов с астенозооспермией обнаруживают в 1,5 раза чаще, чем у пациентов с нормальной подвижностью. Из 86 обследованных пациентов с астено-зооспермией у 10 выявлено повышенное содержание сперматозоидов со сдвинутыми плотными фибриллами, у 2 человек — повышенное содержание сперматозоидов с отсутствием центральной пары микротрубочек аксонемы (9 + 0), у 12 пациентов повышено количество сперматозоидов с нарушением количества дуплетов периферических микротрубочек (5 + 2, 7 + 2 и т. д.), у 2 — повышено число сперматозоидов с дезорганизацией микротрубочек.
Отмечено сочетанное нарушение ультраструктуры ряда компонентов сперматозоидов. Показано, что повышенное количество сперматозоидов с измененным положением акросомы у пациентов с астенозоо-спермией и нарушениями структуры жгутика обнаруживают в 1,5 раза чаще, чем у пациентов с нормальной подвижностью.
У 4 пациентов с абсолютной астенозооспермией выявили генетически обусловленную форму патозоо-спермии — в эякуляте содержалось более 50 % сперматозоидов с хаотичным расположением колонн и ребер фиброзного слоя, которое часто сочеталось с отсутствием центральной пары микротрубочек аксонемы (дис-плазия фиброзного слоя). Проведение количественного анализа морфологических аномалий аксонемы имеет прогностическое значение для пациентов с астенозоо-спермией — выявление ее генетических причин важно при планировании вспомогательных репродуктивных технологий, так как в этих случаях имеется риск передачи потомству генетической патологии от родителя.
1. Auger J., Dadoune J-P. Nuclear status of human sperm cells by transmission electron microscopy and image cytometry: changes in nuclear shape and chromatin texture during spermiogenesis and epididymal transit. Biol Reprod 1993;49:166-75.
2. Cornwall G.A. New insights into epididymal biology and function. Hum Reprod Update 2009;15:213-27.
3. Baker MA., Witherdin R., Hetherington L. et al. Identification of post-translational
ЛИТЕРАТУРА
modifications that occur during sperm maturation using difference in two-dimensional gel electrophoresis. Proteomics 2005;5:1003-12.
4. Florman H.M., Ducibella T. Fertilization in mammals. In: Neil J.D. (ed.), The Physiology of Reproduction, vol. 1. St. Louis, MO: Elsevier-Academic Press, 2006. Pp. 55-112.
5. Zanetti N., Mayorga L.S. Acrosomal swelling and membrane docking are required for hybrid vesicle formation during
the human sperm acrosome reaction. Biol Reprod 2009;81:396-405.
6. Xia J., Reigada D., Mitchell C.H., Ren D. CATSPER channel mediated Ca2+ entry into mouse sperm triggers a tail-to-head propagation. Biol Reprod 2007;77:551-9.
7. Buffone M., Ijuri T., Cao W. et al. Heads or tails? Structural events and molecular mechanisms that promote mammalian sperm acrosomal exocytosis and motility. Mol Repr Dev 2012;79:4-18.
8. Bartoov B., Eltes F., Pansky M. et al. Improved diagnosis of male fertility potential via a combination of quantitative ultramorphology and routine semen analyses. Hum Reprod 1994;9(11):2069-75.
9. Бочарова Е.Н., Брагина Е.Е., Гусак Ю.К. Количественное ультраструктурное исследование сперматозоидов человека при нарушении фертильности. Вестн новых мед технол 2007;XIV(4):199-201.
10. Henkel R.R. Leukocytes and oxidative stress: dilemma for sperm function and male fertility. Asian J Androl 2011;13(1):43-52.
11. Menkveld R., Huwe P., Ludwig M., Weidner W. Morphological sperm alterations in different types of prostatitis. Andrologia 2003;35:288-93.
12. Gianaroli L., Magli M.C., Collodel G. et al. Sperm head's birefringence: a new criterion for sperm selection. Fertil Steril 2008;90(1):104-12.
13. Ryder T.A., Mobberley M.A., Hughes L., Hendry W.F. A survey of the ultrastructural defects associated with absent or impaired human sperm motility. Fertil Steril 1990;53(3):556-60.
14. Chemes H.E., Alvarez S.C. Tales of the tail and sperm headaches: changing concepts on the prognostic significance of sperm pathologies affecting the head, neck and tail. Asian J Androl 2012;14(1):14-23.
15. Wilton L.J., Teichtahl H., Temple-Smith P.D., de Kretser D.M. Structural heterogeneity of the axonemes of respiratory cilia and sperm flagella in normal men.
J Clin Invest 1985;75(3):825-31.
16. Chia S.E., Lim T. A., Tay S.K., Lim S.T. Factors associated with male infertility: a case-control study of 218 infertile and 240 fertile men. BJOG 2000;107(1):55-61.
17. Williamson RA., Koehler J.K., Smith WD., Stenchever M.A. Ultrastructural sperm tail defects associated with sperm immotility. Fertil Steril 1984;41(1):103-7.
18. Courtade M., Lagorce C., Bujan L. et al. Clinical characteristics and light and transmission electron microscopic sperm defects of infertile men with persistent unexplained asthenozoospermia. Fertil Steril 1998;70(2):297-304.
19. Chemes E.H., Rawe Y.V. Sperm pathology: a step beyond descriptive
morphology. Origin, characterization and fertility potential of abnormal sperm phenotypes in infertile men. Hum Reprod Update 2003;9(5):405-28.
20. Chemes H.E., Rawe V.Y. The making of abnormal spermatozoa: cellular and molecular mechanisms underlying pathological spermiogenesis. Cell Tissue Res 2010;341(3):349-57.
21. Chemes H.E. Phenotypes of sperm pathology: genetic and acquired forms in infertile men. J Androl 2000;21(6):799-808.
22. Neiderberger C. Complete asthenospermia: to diagnose or not to diagnose? J Androl 2005;26(3):306-7.
23. Курило Л.Ф. Нарушение репродуктивной функции при первичной цилиар-ной дискинезии и синдроме Картагенера. В кн.: Синдром Картагенера у детей. Ред.: Н.Н. Розинова, А.Е. Богорад. М.: Династия, 2007. С. 58-64.
24. Francavilla S., Cordeschi G., Pelliccione F. et al. Isolated teratozoospermia: a cause of male sterility in the era of ICSI? Front Biosci 2007; 1:69-88.
т а т
