CC BY
48
УДК 619:616-091.8:636.52/58 Е.Г. Турицына, Н.В. Донкова
ЦИТОМОРФОЛОГИЯ ОРГАНОВ ИММУНОГЕНЕЗА КУР ПРИ МНОГОКРАТНЫХ АНТИГЕННЫХ СТИМУЛЯЦИЯХ
Изучена цитоморфология органов иммуногенеза кур под влиянием многократных антигенных стимуляций при реализации комплексных программ вакцинопрофилактики.
Установлено развитие лимфофолликулярной гиперплазии тимуса и сосудистого гиалиноза в тимусе и селезенке при гипериммунизациях.
Ключевые слова: куры, морфология, тимус, фабрициевая бурса, селезенка, гипериммунизации.
E.G. Turitsyna, N.V. Donkova CYTOMORPHOLOGY OF THE HEN IMMUNOGENESIS ORGANS AT REPEATED ANTIGENIC STIMULATIONS
The cytomorphology of hen immunogenesis organs under the influence of repeated antigenic stimulations in the process of the complex vaccinal prevention program realization is studied.
Development of lymph and follicular pan T-cell hyperplasia and blood-vascular hyalinosis in T-cell and spleen at hyperimmunizations is revealed.
Key words: hens, morphology, T-cell, bursa of Fabricius, spleen, hyperimmunizations.
При иммунизациях развиваются два типа структурных процессов: неспецифические, отражающие общие для всех антигенов морфологические изменения, и специфические, морфология которых носит черты, характерные для конкретного антигена [1]. Общие морфологические изменения характеризуются гиперпла-стическими процессами со стороны лимфоидных и макрофагальных элементов организма, клеточной трансформацией, приводящей к развитию плазмоцитарной реакции изменением метаболической активности иммунокомпетентных клеток [2-4].
Степень гиперплазии в органах иммуногенеза варьирует в широком диапазоне. Считается, что при умеренной антигенной стимуляции не возникает длительная гиперплазия лимфоидной ткани, поскольку пролиферирующие лимфоциты обладают коротким сроком жизни [5]. В то же время остается открытым вопрос о влиянии гипериммунизаций на органы иммуногенеза кур.
Цель и методика исследований
Целью исследования явилось изучение цитоморфологии органов иммуногенеза кур под влиянием многократных антигенных стимуляций при реализации комплексных программ вакцинопрофилактики. Исследования проведены на кафедре анатомии и гистологии животных Красноярского государственного аграрного университета. Материалом для исследований служили тимус, фабрициевая бурса и селезенка клинически здорового иммунизированного молодняка кур яичного кросса «Хайсекс браун» разновозрастных групп от 1- до 120-дневного возраста. Птица вакцинирована в условиях ОАО «Птицефабрика Заря» Красноярского края однократно против болезни Марека (БМ) и синдрома снижения яйценоскости (ССЯ), двукратно против инфекционного ларинготрахеита (ИЛТ), трехкратно против инфекционной бурсальной болезни (ИББ), четырехкратно против ньюкаслской болезни (НБ) и инфекционного бронхита кур (ИБК).
Гистологические исследования проведены по общепринятым методикам, готовые парафиновые срезы окрашены гематоксилином и эозином, коллагеновые волокна выявлены по Маллори и ван Гизону, ретикулиновые - импрегнацией серебром по Футу, углеводсодержащие биополимеры - комбинированной окраской по Крейбергу и ШИК-реакцией [6].
Морфометрические исследования включали определение абсолютной массы и весовых индексов органов. В тимусе определяли соотношение площади корковой и мозговой зоны (индекс коры), плотность лимфоцитов в условном поле зрения коры и медуллы, количество митозов на 1000 клеток (митотический индекс), количество и размеры телец Гассаля. В фабрициевой бурсе и селезенке определяли размеры фолликулов и интенсивность плазмоцитарной реакции. Результаты статистически обработаны с использованием t-критерия Стьюдента.
Результаты исследований
Тимус только что вылупившихся цыплят реагировал на стимуляцию против БМ ростом абсолютной массы на 5,4%, относительной - на 6,6% в течение суток после вакцинации. При одновременной стимуляции против БМ и ИБК разница абсолютной массы с непривитой птицей достигала 20%, весовой индекс органа увеличился на 16%. Рост массы тимуса был обусловлен пролиферацией лимфоцитов корковой зоны, поскольку митотический индекс (МИ) в течение суток вырос в 1,5 раза (Р<0,05). Индекс коры (ИК) увеличился на 21,4% (Р<0,01), плотность лимфоцитов в условном поле зрения выросла в коре и медулле на 5 и 13% соответственно по сравнению с непривитой птицей. Количество телец Г ассаля увеличилось в два раза (Р<0,05).
У 12-суточных цыплят, привитых против БМ, ИБК, ИББ, митотическая активность лимфоцитов выросла почти на 60% относительно суточной птицы, ИК составил 1,25±0,04 ед., увеличилась плотность лимфоцитов в коре и медулле, число телец Г ассаля колебалось от 5 до 9 в одной дольке, их диаметры составили 10,8±0,29 мкм.
В тимусе 18-суточных цыплят, привитых против БМ, ИБК, ИББ, ИБК+НБ, митотическая активность лимфоцитов выросла почти на треть относительно предыдущего возраста (Р<0,05), что сопровождалось нарастанием плотности лимфоцитов в коре и медулле, гиперемией сосудов и активизацией эндотелия мелких сосудов. Междольковая соединительная ткань разрыхлялась, в ней появлялись многочисленные макрофаги и плазмоциты.
После антигенных стимуляций против БМ, ИБК, НБ+ИБК, ИЛТ и двукратно против ИББ у 30-суточных цыплят митотическая активность лимфоцитов коры увеличилась в 3,5 раза относительно исходного состояния (рис. 1, А). В корковой зоне обнаружены лимфатические фолликулы, окруженные нежными коллагеновыми волокнами (рис. 1, Б). Поскольку в норме тимус не имеет фолликулов, их появление свидетельствовало о развитии лимфофолликулярной гиперплазии как ответной реакции на гипериммунизацию.
Рис. 1. Тимус: А - многочисленные фигуры митозов (указано стрелками);
Б - лимфатические фолликулы в верхних слоях корковой зоны. Возраст 30 суток. Гематоксилин (А), ШиК-реакция (Б). Ув. 1000 (А), 100 (Б)
Дольки тимуса 60-суточных цыплят, подвергнутых восьмикратным антигенным стимуляциям, были крупными, упругими, серого цвета. Корковое вещество широкое, из-за мелких очагов опустошения имело вид «звездного неба». Плотность лимфоцитов в коре и медулле увеличилась на 40-50% относительно 30-суточной птицы (Р<0,01).
Рис. 2. Кольцевидные и округлые скопления лимфоцитов в мозговой зоне тимуса. Возраст 95-суток. Гематоксилин-эозин. Ув. 100
Мозговое вещество тимуса 90-95-суточных кур, вакцинированных однократно против БМ и ИЭМ, двукратно против ИЛТ и НБ, трехкратно против ИБК и ИББ, обильно инфильтрировано лимфоцитами, формирующими скопления в виде тяжей, фолликулов или кольцевидных структур (рис. 2).
После введения инактивированной вакцины против ИБК+НБ+ССЯ, завершающей программу вакцинаций, в тимусе наблюдалась развернутая картина лимфофолликулярной гиперплазии тимуса. От соединительнотканной капсулы отходили хорошо выраженные внутридольковые прослойки, достигающие кортико-медуллярной границы и делящие кору на многочисленные фолликулы. Мозговая зона интенсивно инфильтрирована лимфоцитами, формирующими округлые скопления и тяжи (рис. 3, А). Соединительнотканные волокна
стенок мелких сосудов мозговой зоны теряли фибриллярность и сливались в гомогенную хрящеподобную гиалиновую массу. Отложения гиалина в сосудистой стенке и периваскулярных пространствах сопровождалось стенозом просвета сосудов и вело к снижению функциональных возможностей микроциркуляторного русла и органа в целом. Инфильтрация гиалиновых масс гранулоцитами, макрофагами и лимфоидными клетками свидетельствовала о воспалительном характере протекающих патологических процессов.
А Б
Рис. 3. Тимус: А - лимфофолликулярная гиперплазия со скоплением лимфоцитов в мозговой зоне (указано стрелками); Б - гиалиноз периваскулярного пространства и стенки мелкой артерии со стенозом просвета сосуда. Возраст 120 суток, иммунизации - однократная против БМ и ССЯ, двукратная против ИЛТ, трехкратная против ИББ, четырехкратная против НБ и ИБК. Окраска по Футу (А) и Крейбергу (Б).
Ув. 100 (А) и 400 (Б)
Центральные участки крупных гиалиновых масс подвергались ослизнению, в них появлялся субстрат, дающий положительную реакцию на кислые ГАГ. На месте скопления эпителиоцитов мозговой зоны формировались кистозные полости, содержащие клеточный детрит.
В фабрициевой бурсе антигенные стимуляции суточных цыплят вызвали кратковременное сокращение абсолютной и относительной массы на 10 и 9,4% соответственно. На шестые сутки абсолютная масса фабрициевой бурсы привитых цыплят увеличилась на 32,2% (Р<0,05), что произошло за счет активной пролиферации лимфоцитов в фолликулах, обильной инфильтрации соединительнотканной основы лимфоцитами, а также экссудативных процессов, характеризующихся гиперемией сосудов и отечностью коллагеновых волокон складок. Высота эпителиальной выстилки увеличилась по сравнению с непривитой птицей суточного возраста и составила в среднем 12,6±0,84 мкм, усилилась секреция кислых ГАГ.
Иммунизация семисуточных цыплят против ИББ вызвала рост массы фабрициевой бурсы в 1,5-1,7 раза по сравнению с непривитой птицей за счет гиперемии сосудов, отечности и набухания складок, повышенной секреции слизи эпителиальной выстилкой. Площадь лимфатических фолликулов увеличилась в 1,82 раза по сравнению с исходным состоянием (Р<0,05).
Продолжающиеся иммунизации стимулировали пролиферацию лимфоцитов в фолликулах фабри-циевой бурсы 30-суточного молодняка кур, что вело к увеличению их площади до 0,107±0,028 мм2. Фолликулы так плотно заполняли складки, что приобретали полигональную форму (рис. 4, А).
А Б
Рис. 4. Фабрициевая бурса: А - гиперплазия лимфофолликулов; Б - плазматические клетки в мозговой зоне фолликулов. Возраст 30 суток. Гематоксилин-эозин. Ув. 40 (А) и 1000 (Б)
Третья часть фолликулов контактировала с эпителиальной выстилкой, что вело к появлению в ней бухтообразных углублений. Интерфолликулярная и субэпителиальная соединительная ткань обильно инфильтрирована лимфоцитами, гранулоцитами и плазматическими клетками разной степени зрелости. В 30 полях зрения насчитывалось 179,2±4,08 плазмоцита. Кроме того, плазмоциты встречались в мозговом веществе фолликулов (рис. 4, Б).
Антигенные стимуляции молодняка кур 60-суточного возраста не вели к дальнейшему усилению гиперплазии лимфатических фолликулов. В фабрициевой бурсе развертывались инволютивные процессы, характеризующиеся сокращением количества и размеров фолликулов, появлением их кистозного или железистого перерождения. Размеры фолликулов сократились в 1,7-2,2 раза относительно 30-суточной птицы Эпителиальная выстилка неравномерная. Содержание плазмоцитов сократилось почти на 40% по сравнению с 30-суточными цыплятами.
У трехмесячной птицы полного восстановления органа не происходило. Складки бурсы имели изрезанные контуры, были неравномерно заполнены лимфатическими фолликулами, размеры и форма которых значительно варьировали. Встречались фолликулы овальные, округлые и вытянутой формы. Общим для них являлось рыхлое заполнение лимфоцитами и криброзность мозговой зоны.
Завершающая вакцинация молодняка кур инактивированной вакциной против НБ+ИБК+ССЯ вызвала резкий рост размеров фабрициевой бурсы до 15x22 мм, что сопровождалось гиперплазией фолликулов, всплеском секреторной активности эпителиальной выстилки, высота которой на верхушках складок поднималась до 40-45 мм, интенсивной плазмоцитарной реакцией в соединительной ткани.
Лимфатические фолликулы имели крупные размеры, округлую или неправильную овальную форму. Их количество в складках уменьшалось, а площадь увеличивалась до 0,227±0,042 мкм2. Корковое вещество содержало 4-8 рядов малых и средних лимфоцитов, среди которых встречались фигуры митоза. Контуры кортико-медуллярной границы были четко выраженными, но неровными из-за неравномерного заполнения клетками корковой зоны. Мозговое вещество содержало мелкие лимфоциты с признаками пикноза ядер.
Антигенные стимуляции суточных цыплят против БМ и ИБК обусловили рост абсолютной массы селезенки на 11,7% по сравнению с невакцинированной суточной птицей. Рост абсолютной массы происходил за счет сосудистых явлений, а также за счет пролиферации лимфоцитов и увеличения их относительного содержания в красной пульпе.
На поперечном срезе селезенки суточных привитых и интактных цыплят отсутствовали оформленные лимфатические фолликулы. Они впервые появились у двухнедельной птицы независимо от вакцинаций, но антигенные стимуляции влияли на количество и размеры фолликулов и периартериальных лимфоидных скоплений, а также на клеточный состав красной пульпы.
У 30-суточных цыплят на поперечном срезе селезенки содержалось 5-6 фолликулов, у птицы 45-суточного возраста - 7-8 фолликулов. Они округлые, окружены нежной оболочкой из коллагеновых волокон. Вакцинации стимулировали митотическую активность лимфоцитов, что сопровождалось появлением в фолликулах многочисленных бластов.
Динамика накопления плазматических клеток в селезенке аналогична реакции фабрициевой бурсы. В первые 15 дней после начала программы вакцинаций плазмоциты составляли 11,3±0,41% от всех клеток красной пульпы, причем плазмобласты и незрелые плазмоциты занимали более 8%. Они формировали небольшие скопления вблизи сосудов и по периферии фолликулов. К 30 суткам содержание плазмоцитов увеличилось в два раза по сравнению с 15-суточными цыплятами и составило 18,9±0,34%. Плазмоциты располагались группами по 3-5 клеток. По мере созревания плазматических клеток нарастала пиронинофилия цитоплазмы.
В 45-суточном возрасте содержание плазмоцитов в селезенке сохранялось на уровне 15%, количество макрофагов поднималось до 22,8±0,46%, что явилось следствием продолжительного антигенного раздражения организма.
У двухмесячной птицы обнаружено плазматическое пропитывание стенок мелких артерий. Коллагеновые волокна сосудистой стенки набухали, теряли четкие контуры и фибриллярность. К 90-120-суточному возрасту плазматизация стенок сосудов среднего и мелкого калибров становилась повсеместной, появлялись участки гиалинизации, такие, как в стенке сосудов тимуса. Гомогенные гиалиновые массы вызвали стеноз просвета кровеносных сосудов. Вокруг сосудов появилась незначительная инфильтрация лимфоидными клетками, гранулоцитами и макрофагами.
Вывод
Многократные антигенные стимуляции молодняка кур при реализации комплексных программ вакцинаций вызывают:
гиперпластические процессы в лимфоидных структурах органов иммуногенеза, обусловленные пролиферацией активированных лимфоцитов;
интенсивную плазмоцитарную реакцию, вследствие трансформации иммунокомпетентных клеток; развитие иммунопатологических процессов, характеризующихся лимфофолликулярной гиперплазией тимуса, преждевременной инволюцией фабрициевой бурсы и системным гиалинозом сосудов тимуса и селезенки.
Литература
1. Рапопорт Я.Л. Морфологические основы иммуногенеза (иммуноморфология) // Архив патологии. -1957. - № 2. - С. 3-19.
2. Садчикова А.А. Патоморфология и иммуноморфологические реакции при инфекционном бурсите цыплят (Болезни Гамборо) и при вакцинации: автореф. дис. ... канд. вет. наук. - М., 2004. - 19 с.
3. Старун А.С. Костномозговое кроветворение и иммунореактивность цыплят в норме и при вакцинации против инфекционного ларинготрахеита на фоне применения витамина С: автореф. дис. ... канд. биол. наук. - Омск, 2005. - 17 с.
4. Луппова И.М., Грушин В.Н. Гистохимические показатели внутренних органов цыплят, аэрозольно вакцинированных против болезни Ньюкасла // Ветеринарная патология. - 2008. - № 2. - С. 91-92.
5. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология. - М.: Мир, 2000. - 592 с.
6. Автандилов Г.Г. Основы патологоанатомической практики. - М.: РМАПО, 1994. - С. 372-407.
--------♦-----------
