CC BY
20«1нновщи в стоматологи», № 2, 2013 ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-ТЕОРЕТИЧНИЙ РОЗД1Л
УДК (616.314.17)—008.1—02 + 678.746.47): 599.323.4 - 018
А. В. Николаева, к. мед. н., Е. К. Ткаченко, к. биол. н., В. Е. Бреус
Государственное учреждение «Институт стоматологии Национальной академии медицинских наук Украины»
ЦИТОМОРФОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ПРЕПАРАТА ПОЛИФЕНОЛОВ ТРАВЫ HYPERICUM PERFORATUM L.
НА СОСТОЯНИЕ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ЩЕКИ КРЫС В УСЛОВИЯХ МОДЕЛИРОВАНИЯ ПАРОДОНТИТА
При моделировании пародонтита в слизистой оболочке щеки у крыс было обнаружено уменьшение содержания межклеточного матрикса и количества клеток, способных синтезировать компоненты соединительной ткани. Препарат из травы Hypericum perforatum L. (ПФЗв) увеличивал количество коллагеновых волокон и их расположение в ткани. В группе крыс, получавших препарат, количественно преобладали фиброциты - клетки, потерявшие способность к активному делению и биосинтезу белка.
Ключевые слова: слизистая оболочка щеки, моделирование пародонтита, межклеточный матрикс, полифенолы, фиброциты.
А. В. Школаева, С. К. Ткаченко, В. С. Бреус
Державна установа «1нститут стоматологи Нацюнальнл академп медичних наук Украши»
ЦИТОМОРФОЛОГ1ЧНЕ ДОСЛ1ДЖЕННЯ ВПЛИВУ ПРЕПАРАТУ ПОЛ1ФЕНОЛ1В ТРАВИ HYPERICUM PERFORATUM L. НА СТАН СЛИЗОВОÏ ОБОЛОНКИ ЩОКИ ЩУР1В В УМОВАХ МОДЕЛЮВАННЯ ПАРОДОНТИТУ
При моделювант пародонтиту в слизовт оболонцi щоки у щур1в було виявлено зменшення вмгсту м1жкл1-тинного матриксу та кiлькостi клтин, здатних синтезувати компоненти сполучно'1 тканини. Препарат з трави Hypericum perforatum L. (ПФЗв) збшьшував юльюсть колагенових волокон i 1'х розташування в тканит. У групi щурiв, ят отримували препарат, кшьюсно переважали фiброцити - клтини, що втратили здатнкть до активного подшу та бюсинтезу бшка.
Ключов1 слова: слизова оболонка щоки, моделювання пародонтиту, мiжклiтинний матрикс, полiфеноли, фiброцити.
A. V. Nikolaeva, E. K. Tkachenko, V. E. Breus
State Establishment "The Institute of Stomatology of the National academy of medical science of Ukraine"
CYTOMORPHOLOGY OF MUCOUS MEMBRANE OF CHEEKS UNDER PERIODONTITIS MODELING AND INFLUENCE OF HYPERICUM PERFORATUM L. POLYPHENOLES
Under periodontitis modeling in mucous membrane of mouth cavity was found loss extracellular matrix. It was in consequence of decrease in number of cell's, which can synthesize components of tissue. Preparation of Hypericum perforatum L. was increase number of collagen's fibres and their positions in tissue. It was similar to pure group. In group, which obtained preparation, extracellular matrix prevail over fibroblastes more, then in pure group.
Key words: mucous membrane of cheeks, periodontitis modelling, extracellular matrix, polyphenols, fibrociytes.
© Николаева А. В., Ткаченко Е. К., Бреус В. Е., 2013
«1нновацп в стоматологи.», № 2, 2013
Особенности процессов метаболизма и катаболизма соединительной ткани связаны с особенностями ее строения. Как известно, характерным для соединительной ткани является наличие в ней межклеточного матрикса (МКМ), который в нормальных условиях занимает значительно больший объем, чем клетки.
Деструктивные изменения в МКМ играют существенную роль в развитии пародонтита. Нарушение метаболизма МКМ пародонта воспроизводили у крыс введением с питьевой водой ксенобиотика купренила (D - пеницилламина) [1]. Купренил - синтетический препарат, по структуре представляющий собой часть молекулы пенициллина, является диметильным производным аминокислоты цистеин. Основное свойство купренила - комплексообразующая активность в отношении ионов металлов (меди, ртути, свинца, железа, а также кальция и магния). Препарат применяется при острых и хронических отравлениях, в основном, ионами тяжелых металлов. Кроме того, купренил оказывает многостороннее действие на метаболизм коллагена, блокируя его синтез.
Разработанная нами экспериментальная модель пародонтита вызвала биохимические изменения метаболизма МКМ пародонта крыс. Коррекцию этих изменений осуществляли перораль-ным введением препарата полифенолов из травы Hypericum perforatum L. [2].
Цель настоящего исследования
Изучение цитоморфологических изменений в структуре соединительной ткани слизистой оболочки щеки (СОЩ) крыс при моделировании у них пародонтита, а также коррекция этих нарушений препаратом растительных полифенолов
(ПФ).
Материалы и методы исследования
Исследования проведены на 23 белых крысах-самцах 1,5-2-х месс. возраста, которые содержались на стандартном рационе вивария. Ин-тактную группу составили 7 особей. Модель па-родонтита воспроизводили введением с питьевой водой купренила (АТ ТЕВА, Польша) в дозе 20 мг/кг массы тела крыс 7 дней в неделю на протяжении 55 дней (8 крыс).
На фоне введения купренила 8 крыс 5 раз в неделю получали per os препарат надземной части Зверобоя продырявленного (Нурейсит perforatum L.), полученный в лабораторных условиях (рабочее название ПФЗв) в дозе 0,1 мг/100 г массы тела крыс, а также комплекс минералов Дуовит (КРКА, Словения) - 1 табл./8крыс. Длительность проведения эксперимента составила 55 дней.
После окончания экспериментов кусочки СОЩ иссекали, фиксировали в формалине и заключали в парафин. Срезы толщиной 10 мкм окрашивали гематоксилином и эозином по Ван Ги-зону и проводили дифференцированную окраску клеточных ядер по методу А.Н. Яцковского [3]. Полученные препараты использовали для обзорных цитоморфологических исследований, оценивая изменения в структуре соединительной ткани СОЩ. Для этого анализировали общую картину соединительной ткани, оценивали особенности ее клеточного состава и компонентов межклеточного вещества.
Полученные данные подвергали статистической обработке в соответствии с ^критерием достоверности различий по Стьюденту.
Результаты исследования и их обсуждение
Исследование проводили в 3-х сериях опытов. Прежде всего изучали состояние СОЩ в ин-тактной группе. Слой соединительной ткани слизистой и подслизистой оболочек в данной группе по толщине превышал слой эпителия. Ткань выглядела умеренно рыхлой, отечности не отмечалось. Клетки располагались как одиночно, так и в форме скоплений, по 2-3. Клеточный состав представлен, в основном, клетками фибробла-стического дифферона. Клетки других видов (макрофаги, лаброциты) встречались редко. Среди фибробластических клеток преобладали (около 70 %) дифференцированные и малодиффе-ренцированные клетки, у которых выявляли относительно крупные овальные ядра, заполненные эухроматином, на фоне которого четко были видны ядрышки. Цитоплазма таких клеток без четких границ переходила в межклеточное вещество. Остальные клетки фибробластического ряда - фиброциты - имели более четкие клеточные границы. Их ядра, меньшие по размеру, более вытянуты, содержали преимущественно гетеро-хроматин и поэтому выглядели более темными. Ядрышки были видны слабо и непостоянно.
Изредка встречались иммигрировавшие из сосудов лейкоциты.
Межклеточное вещество занимало большую по объему часть по сравнению с клетками. Кол-лагеновые волокна относительно тонкие, собраны в изгибающиеся пучки, которые сетевидно переплетаються между собой. Отечность соединительной ткани выражена не была.
Соединительные сосочки, вдающиеся в слой эпителия, расположены сравнительно равномерно вдоль границы контакта тканей. Высота сосочков, в основном, небольшая (практически не превышала половину толщины эпителия).
Эндомизий выражен достаточно хорошо, поэтому границы отдельных мышечных волокон
«1нноваци в стоматологИ», № 2, 2013
видны четко. Хорошо видна и поперечная исчер-ченность отдельных волокон. Картина межмышечной соединительной ткани практически не отличалась от аналогичной ткани в слизистой и подслизистой оболочках.
В группе крыс, которые получали с питьевой водой купренил (модель пародонтита), были отмечены некоторые особенности цитоморфологи-ческой картины СОПР. В целом, общий слой соединительной ткани слизистой и подслизистой оболочек выглядел истонченным. Мышцы располагались ближе к эпителию, чем в интактной группе.
Соединительнотканные клетки, представленные, в основном, фибробластическим рядом, расположены более компактно, чем в интактной группе. Чаще, чем в интактной группе, отмечалось групповое расположение клеток. Среди фибробластических клеток преобладали фиброциты, ядра которых уплотнены и при этом часто имели веретеновидную форму.
Объем межклеточного вещества в этой группе меньший, чем в интактной группе. Коллагено-вых волокон также меньше. Они выглядели более грубыми, лежали более компактно, пучки мало переплетались. Относительно часто между пучками волокон лежали одиночные фиброциты с веретенообразно вытянутыми плотными ядрами.
Признаки отечности соединительной ткани не выражены. Соединительнотканные сосочки на границе с эпителием расположены относительно равномерно вдоль границы тканей. Глубина проникновения в слой эпителия местами превышала половину толщины эпителиального пласта.
В группе животных, получавших препарат растительных ПФ (ПФЗв) с комплексом минералов Дуовит толщина слоя соединительной ткани в слизистой и подслизистой оболочках соответствовала таковой у интактных животных, что свидетельствует о нормализации изученного показателя. Плотность расположения клеточных элементов внешне также не отличалась от ин-тактной группы. В основном, это клетки фиб-робластического ряда, среди которых незначительно встречались активные фибробласты, что подтверждалось типичной картиной их ядер (крупные размеры, преобладание эухроматина, четкое выявление ядрышек). Количество неактивных клеток - фиброцитов встречалось в меньшем количестве, чем в контрольной группе (модель пародонтита). Клетки вне фибробласти-ческого дифферона встречались редко.
Межклеточное вещество по объему преобладало над клетками. Волокна располагались четко сетевидно, были собраны в извивающиеся пучки,
окрашены сравнительно равномерно. Признаков отечности в межклеточном веществе не наблюдалось.
Сосочки, проникающие в эпителий мало различались по величине, не углублялись в слой эпителия более, что на половину его толщины, лежали сравнительно равномерно вдоль границы с эпителием. Картина эндомизия внешне была сходной с отмеченной в интактной группе.
Таким образом, основное отличие морфологической картины в данной экспериментальной группе - присутствие значительного числа фиброцитов - неактивных клеток, потерявших способность к активному делению.
Проведенные биохимические исследования по влиянию комплекса препарата ПФЗв с минералами Дуовит выявили пародонтопротекторные свойства в костных структурах, но не в полной мере оказали защитные эффекты в мягких тканях пародонта [2].
Выводы
1. В СОЩ крыс при моделировании пародонтита выявлено снижение объема межклеточного вещества и количества коллагеновых волокон, а также числа фибробластов, способных синтезировать компоненты межклеточного вещества.
2. Использование препарата ПФ из травы Hypericum perforatum L. в целом позволяет сделать вывод о его положительном влиянии на морфологическую картину СОЩ. В то же время неполнота защиты слизистой оболочки полости рта растительными полифенолами (препарат ПФЗв) в условиях действия купренила объяснима в связи с преобладанием в основном веществе соединительной ткани фиброцитов - клеток, потерявших способность к активному делению и синтезу белков.
Список литературы
1. Пат. 67897 УкраТна, МПК 2012.01 А 62 Р 31/00 Споаб моделювання пародонтиту з ураженням сполучно! тканини пародонту / Ткаченко £. К., Косен-ко К. М., Новосельська Н. Г., Мокшина О. Г.; заявник та патентовласник ДУ «1С НАМН». - № u201109837; заявл. 29.07.00; опубл. 12.03.12, Бюл. № 5.
2. Пародонтопротекторные свойства комплекса водного экстракта полифенолов травы Зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L.) с минералами / Косенко К. Н., Ткаченко Е. К., Новосельская Н. Г. [и др.] // Вюник стоматологи. - 2011. - № 2 (75). -С. 133-134.
3. Яцковский А. Н. Оценка активности клеточных ядер. / А. Н. Яцковский // Архив АГЭ. - 1987. -№ 1. - С. 76-79.
