CC BY
45
Hygiene & Sanitation (Russian Journal). 2016; 95(10)
_DOI: http://dx.doi.org/10.1882/0016-9900-2016-10-969-973
Оriginal article
Методы гигиенических исследований
О КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2016 УДК 614.7:612.014.2.064.08-053.2
Ингель Ф.И.1, Юрченко В.В.1, Кривцова Е.К.1, Юрцева Н.А.1, Легостаева Т.Б.2
ЦИТОМНЫЙ АНАЛИЗ ЭПИТЕЛИЯ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ЩЕКИ В КОМПЛЕКСНОМ ГЕНЕТИКО-ГИГИЕНИЧЕСКОМ ОБСЛЕДОВАНИИ ДЕТЕЙ В ПРОМЫШЛЕННОМ ГОРОДЕ
'ФГБУ «НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н. Сысина» Минздрава России, 119121, Москва; 2ФГБОУ ВПО «Магнитогорский государственный технический университет им. Г.И. Носова», Институт педагогики, психологии и социальной работы, кафедра специального образования и биомедицинских знаний, 455000, Магнитогорск
Представлены результаты цитомного анализа эпителия слизистой оболочки щеки у 167 детей 5-7 лет, постоянно проживающих в Магнитогорске и посещающих муниципальные детские сады. Частоты основных показателей теста составляли: клетки с микроядрами 0,29±0,04%, с протрузиями ядра 1,47±0,17%, с двойным ядром 1,96±0,13%%, с двумя ядрами 3,28±0,16%о, с перинуклеарной вакуолью 9,66±0,86%, с пикнозом ядра 4,60±0,31 на 1000 клеток, с кариорексисом 0,86±0,15 на 1000 клеток, с лизисом ядра 54,34±3,90 на 1000 клеток, с конденсированным хроматином в ядре 10,59±1,35 на 1000 клеток. Частоты этих показателей были ассоциированы с содержанием 19 из 328 обнаруженных компонентов загрязнения сезонных проб снега, собранных на территориях детских садов, которые посещали обследованные дети. Показано отсутствие различий с базовыми значениями основных показателей теста, установленных ранее для детей такого же возраста в Москве, за исключением клеток с перинуклеарной вакуолью, частота которых была в Москве вдвое выше. Выявлены сопутствующие факторы, ассоциированные с показателями теста - пол ребенка, количество острых респираторных заболеваний за год, группа здоровья, душевой доход, употребление алкоголя родителями.
Ключевые слова: эпителиоциты щеки дошкольников; микроядерный тест; цитомный анализ; связь показателей теста с загрязнением и сопутствующими факторами.
Для цитирования: Ингель Ф.И., Юрченко В.В., Кривцова Е.К., Юрцева Н.А., Легостаева Т.Б. Цитомный анализ эпителия слизистой оболочки щеки в комплексном генетико-гигиеническом обследовании детей в промышленном городе. Гигиена и санитария. 2016; 95(10): 969-973. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0016-9900-2016-95-10-969-973
Ingel F.I.1, Yurchenko V.V.1, Krivtsova E.K.1, Urtseva N.A.1, Legostaeva T.B.2
BUCCAL MICRONUCLEUS CYTOME ASSAY IN COMPLEX GENETIC-HYGIENIC STUDY OF PRESCHOOL CHILDREN
'A.N.Sysin Research Institute of Human Ecology and Environmental Health, Moscow, 199121, Russian Federation; 2G.I.Nosov Magnitogorsk State Technical University, Education Science, Psychology and Social Work Institute, Magnitogorsk, 455000, Russian Federation
There are presented results of the cytome analysis of epithelium of buccal mucosa in 167 children aged of 5-7 years, permanently residing in the city of Magnitogorsk and visiting municipal kindergartens. Frequencies of the main indices of genotoxic and toxic effects were: cells with micronuclei - 0.29±0.04 %%, with protrusions ofnuclei -1.47±0.17 %%, with double nuclei -1.96±0.13 %%, with two nuclei - 3,28±0,16 %%, with perinuclear vacuole - 9.66±0.86 %%, with pycnosis of nucleus -4.60±0.31 per 1000 cells, with karyorrhexis - 0.86±0.15per 1000 cells, with lysis of nucleus - 54.34±3.90per 1000 cells, the condensed chromatin cells - 10.59±1.35 per 1000 cells. Most of these indices didn't differ from the same detected earlier in buccal epithelial cells from children of the same age in Moscow, except cells with perinuclear vacuole, which frequency in Moscow cohort was twice higher. Frequencies of cells with these anomalies were associated with the content of 19 out of 326 revealed components of contamination of the total-winter snow samples, taken on the territories of the kindergartens, which were visited by examined children. There was shown lack of differences from basic values of main indices previously establishedfor the children of the same age in Moscow, with the exception of cells with perinuclear vacuole, the rate of which in Moscow was twice higher. There were revealed confounding factors associated with test indices: gender of the child, the annual number of acute respiratory diseases, health group, income per one person in family, alcohol intake by parents.
Keywords: buccal epitheliocytes in preschool children; industrial city with developed black metallurgy; micronuclei test; cytome analysis; correlations with air pollution and confounding factors.
For citation: Ingel F.I., Yurchenko V.V., Krivtsova E.K., Urtseva N.A., Legostaeva T.B. Buccal micronucleus cytome assay in complex genetic-hygienic study of preschool children. Gigiena i Sanitaria (Hygiene and Sanitation, Russian journal) 2016; 95(10): 969-973. (In Russ.). DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0016-9900-2016-95-10-969-973
For correspondence: Valentina V. Yurchenko, MD, PhD, DSci., senior researcher of the Laboratory of genetic monitoring, A.N.Sysin Research Institute for Human Ecology and Environmental Health, Moscow, 199121, Russian Federation. E-mail: vvyurchenko@mail.ru
Information about authors: Yurchenko V.V. http://orcid.org/0000-0002-9910-1762; Ingel F.I., http://orcid.org/0000-0002-2262-6800; Krivtsova E.K., http://orcid.org/0000-0002-5039-8980; Urtseva N.A. http://orcid.org/0000-0002-5039-8980; Legostaeva T.B. http://orcid.org /0000-0002-0146-1015 Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
Acknowledgment. The work was executed in the frameworks of the budget theme "The impact of indices of the quality of life on the genomic instability of children residing in the city with developed metallurgicalindustry», State registration No: 01.2.00703762 Received: 30.03.2016 Accepted: 13.05.2016
гиена и санитария. 2016; 95(10)
DOI: http://dx.doi.org/10.1882/0016-9900-2016-10-969-973_
Оригинальная статья
Магнитогорск - крупный промышленный центр с развитой металлургической промышленностью, один из 35 самых экологически неблагополучных городов мира [1]. Река Урал делит город на две части - правобережную и левобережную, в которой расположен магнитогорский металлургический комбинат с полным производственным циклом (АО ММК). Данные литературы по сравнительной оценке экологической обстановки в этих двух районах противоречивы [2, 3].
Настоящая работа является фрагментом многопараметро-вого исследования, направленного на изучение здоровья детей в Магнитогорске. Ранее мы опубликовали данные других фрагментов этой работы: результаты анализа заболеваемости детей [4], данные по химическому анализу загрязнений, накопленных в снежном покрове в течение зимнего сезона, и результаты оценки их суммарной мутагенности в тесте на индукцию доминантных летальных мутаций в половых клетках дрозофилы [5], результаты цитомного анализа нестабильности генома детей с помощью микроядерного теста (МТ) на культуре лимфоцитов периферической крови с цитохалазином Б [6], результаты анализа связей между показателями нестабильности и чувствительности генома детей, психосоциальными факторами семьи, тревогой и вегетативным балансом детей [7]. В настоящей работе изложены результаты, полученные параллельно в том же обследовании в МТ на эпителии слизистой оболочки щеки тех же детей.
Материал и методы
Для обследования выбрали 8 муниципальных детских садов (д/с), расположенных в Магнитогорске на разном расстоянии от АО ММК на обоих берегах р. Урал, в которых дети находились на централизованном (общегородском) питании и в условиях единого режима дня. В каждом из этих д/с выбирали мальчиков и девочек 5-7 лет (группы из 20-30 человек), родители которых до рождения ребенка не работали на коксохимическом производстве АО ММК. Другими критериями выбора детей для обследования были:
1) практически здоровые дети;
2) проживание с рождения на расстоянии не более 1 км от выбранного д/с и посещение его не менее 3 лет;
3) отсутствие заболеваний, лекарственной и других видов терапии, рентгенографии, хирургических вмешательств и др. в течение 2 мес до начала обследования;
4) нормальный уровень тревоги, определенный по 8-цвето-вому тесту Люшера [ 7, 13, 14] за 10-14 дней до обследования.
Всего из 1364 детей 5-7 лет, посещавших выбранные детские сады, для обследования было отобрано 79 детей в Левобережном районе и 88 детей в Правобережном районе.
Соскоб слизистой делали с помощью одноразового стерильного влажного деревянного шпателя, мазки фиксировали, окрашивали ацетоорсеином и светлым зеленым. Анализ вели по протоколу [8, 9] (рис. 1 на 3-й стр. обложки). У каждого ребенка анализировали 1000 отдельно лежащих клеток с непрерывным гладким краем ядра, учитывая клетки со следующими аномалиями, характеризующими генотоксические эффекты: микроядро, все виды протрузии ядра, два ядра, двойное ядро, а также с аномалиями, которые следует классифицировать как результат токсического действия: перину-клеарная вакуоль, хвостатая клетка. Сверх этих 1000 клеток учитывали отдельно лежащие клетки с пикнозом ядра, кари-орексисом, конденсированным хроматином в ядре, неполным кариолизисом и апоптозными телами в цитоплазме. Результаты представляли в виде среднего значения и стандартной ошибки среднего.
Загрязнения атмосферы оценивали по составу загрязнений суммарных сезонных проб снега, собранных в конце снежного сезона на крышах беседок, расположенных на территориях детских садов, которые посещали обследованные дети [5].
Для корреспонденции: Юрченко Валентина Васильевна, канд. мед. наук, ст. науч. сотр. лаб. генетического мониторинга ФГБУ «НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н. Сысина» Минздрава России, 119121, Москва. E-mail: vvyurchenko@mail.ru
Таблица 1
Средние частоты буккальных эпителиоцитов с аномалией на 1000 эпителиоцитов у детей из двух районов Магнитогорска
Аномалия Левобережный район Правобережный район Весь город
Микроядро 0,30±0,06 0,29±0,06 0,29±0,04
Протрузия 1,14±0,13 1,82±0,28 1,47±0,17
Двойное ядро 1,71±0,15 2,08±0,18 1,96±0,13
Два ядра 3,41±0,23 3,15±0,20 3,28±0,16
Вакуоль 10,06±1,05 9,40±1,27 9,66±0,86
Пикноз ядра 5,15±0,41 4,41±0,42 4,60±0,31
Кариорексис 0,77±0,18 0,86±0,15 0,86±0,15
Конденсация 9,61±1,33 11,57±1,45 10,59±1,35
Лизис ядра 56,49±5,51 52,18±3,70 54,34±3,90
Апоптозные тела 0,41±0,09* 0,33±0,15 0,37±0,10
«Хвостатая» клетка 0,34±0,08 0,78±0,14* 0,63±0,11*
Примечание. * - различие между районами значимо при р < 0,05.
Социопсихологические особенности семьи определяли по результатам психологического тестирования родителей и их ответам на вопросы специально разработанной анкеты [7].
Значимость различий между группами оценивали по критерию х2 и ^-критерию Манна-Уитни, корреляционные связи выявляли с использованием критерия Спирмена. Расчеты проводили с использованием пакета программ Statistica 10.1 В1а180Й. Анализировали три вида корреляций: 1) индивидуальные -по всему массиву данных; 2) территориальные - по районам, сравнивая Правобережную и Левобережную части города; 3) групповые - по отдельным детским садам, сравнивая их между собой и со среднегородскими частотами каждого типа клеток.
Результаты
С использованием всего массива данных была обнаружена связь частоты эпителиоцитов с протрузией ядра в форме везикулы и пола ребенка. Средняя частота таких клеток у девочек составила 0,63±0,03%о, у мальчиков - 1,06±0,17%о (р = 0,03). Образование везикул - генетическое событие, которое связывают с удалением из ядра незаконно амплифицированной ДНК [9], поэтому повышение частоты клеток с везикулой принято считать проявлением генотоксичности.
Сравнение групп детей из различных районов (табл. 1), выявило различие между ними только по частоте клеток с поглощенными остаточными апоптозными телами в цитоплазме: 0,41±0,09 %о на левом берегу и 0,33±0,15%о на правом (р < 0,05) и «хвостатых» клеток (соответственно 0,34±0,08 и 0,78±0,14%о, р < 0,05). Следует отметить, что наличие в клетках остаточных тел (продуктов апоптоза, поглощенных эпителио-цитами из внеклеточного пространства [9]) до настоящего времени удалось ассоциировать только с наличием лимфоцитов на поверхности эпителиального пласта [10], что является одним из признаков воспаления. При воспалении также могут наблюдаться и «хвостатые» клетки [11]. Однако точный смысл этих аномалий окончательно не выяснен.
Группы детей из отдельных детских садов не различались по частоте клеток с микроядрами, с протрузией ядра, двойным ядром или двумя ядрами (табл. 2). Различия были обнаружены только по частоте клеток с перинуклеарной вакуолью и с кари-орексисом, причем детские сады, в которых у детей наблюдались максимальные значения этих показателей, были расположены как на левом, так и на правом берегах р. Урал.
Мы не обнаружили различий в химическом составе загрязнений проб снега как между детскими садами, так и между районами Магнитогорска [5], поэтому найденные различия в частотах аномальных клеток нельзя отнести за счет загрязнения воздуха. Косвенно о том же говорит отсутствие корреля-
Hygiene & Sanitation (Russian Journal). 2016; 95(10)
_DOI: http://dx.doi.org/10.1882/0016-9900-2016-10-969-973
Таблица 2
Средние частоты буккальных эпителиоцитов с аномалией на 1000 эпителиоцитов с непрерывным краем ядра у детей из детских садов Магнитогорска
Район города
Левобережный (вокруг АО ММК) Правобережный
Показатель № детского сада
179 163 126 122 146 и 141 (расположена: рядом) 170 и 18 (расположены рядом)
Обследовано детей 27 29 23 30 31 27
Микроядро 0,37±0,11 0,34±0,10 0,17±0,08 0,23±0,08 0,23±0,08 0,48±0,15
Протрузия 0,85±0,17 1,10±0,20 1,52±0,32 1,83±0,42 1,71±0,32 1,95±0,67
Двойное ядро 1,67±0,27 1,79±0,28 1,65±0,23 1,90±0,26 1,94±0,31 2,38±0,44
Два ядра 3,37±0,39 3,17±0,36 3,74±0,47 3,20±0,36 2,90±0,29 2,95±0,43
Вакуоль 14,33±2,51** 7,38±1,03 8,43±1,19 12,07±2,20* 9,58±2,72 7,00±1,14
Кариопикноз 5,63±0,84 5,34±0,56 4,30±0,72 4,40±0,70 4,48±0,80 4,76±0,85
Кариорексис 0,59±0,28 0,52±0,23 1,30±0,44* 0,53±0,21 1,00±0,25* 1,19±0,39*
Конденсация 8,11±1,73 8,59±1,51 12,65±3,61 9,00±1,24 13,64±3,26 12,04±2,56
Лизис ядра 69,07±12,82 50,17±6,87 49,70±7,31 39,10±5,80 57,61±6,27 68,71±6,92
Остаточные тела 0,44±0,18 0,41±0,14 0,35±0,12 0,43±0,16 0,39±0,39 0,14±0,08
Примечание. Различие по сравнению со среднегородскими уровнями значимо: * -р < 0,05; ** -р < 0,01.
ций между средними значениями показателей МТ на эпителии слизистой щеки детей и показателями генотоксичности проб снега, определенных в тесте на дрозофиле [5]. Из показателей цитотоксичности, по которым группы детей из разных детских садов различались (это клетки с перинуклеарной вакуолью и кариорексисом), причем частота клеток с кариорексисом не проявила сопряженности на убедительном уровне (р < 0,01) с содержанием отдельных химических веществ, обнаруженных в пробах снега. В то же время (рис. 2), частота клеток с перинуклеарной вакуолью коррелировала с содержанием 2-буток-сиэтанола в пробах снега (г = 0,975; р = 0,005). Такие же высокоуровневые корреляции по 18 химическим загрязнителям снега (бензонафтофуран, изопропилпальмитат, 1,8-нафтале-вый ангидрид, 1-пропилбензол, 1-метилнафталин, 7-этил-на-фталин, триметилпиридин, 5-гептилдигидро-2 (ЗН)-фуранон, метилфенантрен, тетрадекан, тридекановая кислота, циклопен-та (<1е1)фенантренон, 2-метил-2-циклопентен-1-он, а также не-идентифицированные алканы, алкиламиды и альдегиды) были получены для тех показателей МТ, по которым группы детей, обследованных на разных территориях, не различались.
В генетико-гигиенических обследованиях людей несбалансированность групп по каким-либо сопутствующим факторам может маскировать эффект изучаемого воздействия или, наоборот, обеспечить ложноположительный ответ. Мы проанализировали связь значений показателей МТ со всеми
Оriginal article
учтенными сопутствующими факторами (с привлечением индивидуальных данных родителей обследованных детей: социальных, экономических, психологических и других сведений) и данными по детям (заболеваемость, степень выраженности тревоги, баланс отделов вегетативной нервной системы и др.). Очевидно, что в первую очередь связь с показателями МТ следовало оценить для тех сопутствующих факторов, по которым различались районы города (р < 0,01). Корреляционный анализ выявил связь показателей МТ с уровнями образования родителей (Z = -2,97, p = 0,0009 и Z = -4,78, p = 0,0000 для матерей и отцов соответственно) и хроническими заболеваниями детей (Z = 3,1, p = 0,0009). Последнее наблюдалось при отсутствии различий в уровне заболеваемости по обращаемости (следует добавить, что наличие у обследованных детей хронических заболеваний удалось установить только после окончания обследования, когда дети прошли диспансеризацию для школы) [4].
Важно отметить, что частота клеток с МЯ была связана с частотой острых респираторных заболеваний ребенка за последний год перед обследованием (рис. 3). Подобную связь для МТ на буккальных эпителиоцитах в доступной литературе удалось обнаружить всего в одной публикации [12].
Интересно, что частоты эпителиоцитов с аномалиями, по которым различались группы детей в разных детских садах, не проявили сопряженности ни с одним из сопутствующих факторов, по которым различались группы детей и их родителей. Однако обнаружилась связь между частотой клеток с пикнозом ядра и группой здоровья ребенка (r = 0,213; р < 0,01), показателем, по которому различий между районами выявлено не было: в обоих районах прослеживалось повышение частоты клеток с пикнозом ядра по мере ухудшения состояния здоровья ребенка (табл. 3). Учитывая, что частота клеток с пикнозом ядра не проявила достаточно убедительной (р < 0,01) сопряженности ни с одним из учтенных сопутствующих факторов, кроме группы здоровья ребенка, представляется возможным отнести это различие за счет пребывания детей в данном районе города или за счет влияния каких-либо других неучтенных сопутствующих факторов.
Известно, что даже не очень сильные связи, но выявленные на выборках большого объема, могут заслуживать внимания в плане накопления материала для дальнейшего осмысления. Так, в нашей работе при обследовании 167 детей:
- частота клеток с пикнозом ядра была сопряжена с возрастом матери (r = 0,213; р = 0,007) и потреблением ею алкоголя
>5 О т а. га
<в „
5 о > о
л
о о
5 Т
16-, 14 1210864
—i— 0,1
"Г
"Г
~г
—I—
0,5
—i 0,6
0,2 0,3 0,4
2-бутоксиэтанол, мг/л
Рис. 2. Средняя частота буккальных эпителиоцитов у детей, посещающих детские сады, расположенные на территориях с разным содержанием 2-бутоксиэтанола в пробах снега.
т-1-1-г
01 23456789 Число ОРЗ за год
Рис. 3. Связь частоты клеток с МЯ в эпителии слизистой оболочки детей с заболеваемостью.
хгиена и санитария. 2016; 95(10)
РРк http://dx.doi.org/10.1882/0016-9900-2016-10-969-973
Оригинальная статья
Таблица 3
Средняя частота клеток с пикнозом ядра в слизистой щеки у детей, отнесенных к разным группам здоровья и посещающих детские сады в двух районах города
Группа Левобережный район Правобережный район
здоровья дети М±т (на 1000 клеток) дети М±т (на 1000 клеток)
1 11 5,09±1,01 12 2,33±0,70*
2 62 5,10±0,47 54 4,33±0,47
3 3 7,67±2,7 14 6,93±1,58
Примечание. *-р< 0,05.
(г = -0,173; р = 0,031). Эта связь представляется слабой, но тем не менее у детей из таких семей средняя частота клеток с пикнозом ядра составила 1,83±0,6%о (хотя пьющих матерей оказалось всего 6 человек), а при непьющей матери - 4,95±0,32%о (р = 0,032);
- частота двуядерных клеток была ассоциирована с потреблением алкоголя отцом (г = 0,273; р = 0,0014). В семьях с пьющим отцом у детей двуядерных клеток было 4,31±0,36%о (32 семьи), а с непьющим (103 семьи) - 2,98±0,18%о (р = 0,0019).
Анализ связи изучаемых показателей любого теста с сопутствующими факторами может дать весьма неожиданные и интересные результаты. Так, тест Люшера позволяет, кроме тревоги и некоторых особенностей личности человека, определить сбалансированность работы отделов вегетативной нервной системы (по коэффициенту Шипоша [13, 14]), отвечающей, в частности, за реакцию организма на изменение среды. С использованием всего массива данных мы показали, что тревога детей не была ассоциирована с показателями МТ. В то же время с коэффициентом Шипоша были связаны частота клеток с пикнозом ядра, но только у детей на левом берегу р. Урал (г = -0,28,р < 0,05) и клеток с двойным ядром - только у детей, проживающих на правом берегу (г = -0,28, р < 0,05). У детей со сбалансированной работой отделов вегетативной нервной системы (норма), проживающих на левом берегу р. Урал, наблюдалась большая частота клеток с двойным ядром (генетическое событие) и меньшая - с пикнозом ядра, чем у детей с доминированием симпатического отдела (р < 0,05, табл. 4). В двух районах дети с эрготропным тонусом различались по частоте клеток с пикнозом ядра (р < 0,01, см. табл. 4). Вспомним, что повышенная частота клеток с пикнозом ядра обнаружена у детей первой группы здоровья с левого берега р. Урал (см. табл. 3), т. е. данные табл. 4 дополняют заключение, сделанное по табл. 3. Неожиданно - для детей, проживавших на правом берегу р. Урал, связей показателей МТ с балансом отделов вегетативной нервной системы обнаружено не было.
Корреляция между частотой клеток с МЯ в эпителии детей и душевым доходом была выявлена только для детей из Левобережного района (г = -0,294; р < 0,01, см. рис. 4). Для проведения корреляционного анализа мы доход выражали в категориях: чем выше категория, тем ниже доход. Как мы показали ранее, семьи, обследованные в двух районах города, не различались по уровню дохода, но акцентуация на материальный достаток была сильнее выражена в Левобережном районе [7].
Таблица 4
Изменение показателей микроядерного теста в зависимости от баланса отделов вегетативной нервной системы (по коэффициенту Шипоша) у детей из двух районов Магнитогорска
Соотношение Левобережный район Правобережный район
активности отделов вегетативной дети с двойное пикноз дети с двойное пикноз
нервной системы признаком ядро ядра признаком ядро ядра
Трофотропный 26 1,78±0,30 4,73±0,81 17 2,60±0,51 4,93±0,74
тонус
Баланс(норма) 17 2,64±0,41* 4,00±0,86 33 1,81±0,26 4,03±0,64
Эрготропный 32 1,62±0,20 5,72±0,65* 17 2,04±0,28 4,17±0,75
тонус
Доход, категория
Рис. 4. Сопряженность между частотой клеток с микроядрами в эпителии щеки у детей и уровнем душевого дохода.
Обсуждение
Результаты цитомного анализа клеток буккального эпителия детей (см. табл. 1 и 2) показали, что средние частоты практически всех учтенных аномалий в Магнитогорске не отличались от установленных ранее для 223 московских детей того же возраста [10]. Исключение составили клетки с вакуолями, частота которых в Магнитогорске была примерно вдвое ниже, чем в Москве. Ранее мы показали, что 2-недельное употребление напитка с антиоксидантными витаминами привело к существенному снижению частоты клеток с вакуолями [15]. Биологический смысл вакуоли несомненен - признак некроза клетки. Однако до сих пор имеется слишком мало работ на клетках буккального эпителия, в которых учитывается эта аномалия и обсуждаются факторы, которые могут ее вызывать. Следует отметить, что все значимые различия по показателям МТ для детей, сгруппированных по детским учреждениям или районам города, находились в пределах колебаний фона.
Хорошо известно, что статистическая значимость корреляций не подразумевает причинно-следственной связи, а только характеризует сходство закономерностей изменения показателей. Например, выявленная в нашей работе сопряженность средних значений МТ для групп детей в детских садах с содержанием отдельных веществ в сезонных пробах снега вполне может оказаться случайной по следующим соображениям. К каждой из шести территорий привязаны средние значения 11 показателей МТ и 326 значений концентраций отдельных веществ, что дает 3586 пар шестичленных рядов, из которых некоторые вполне могут оказаться «однонаправленными». Кроме того, неизвестны закономерности накопления в снежном покрове химических веществ из воздуха, однако накопленные дозы (в основном менее 1 мг/л) в нашем исследовании были растянуты на несколько месяцев сезонной экспозиции - уровень воздействия представляется слишком ничтожным для того, чтобы вызвать заметный биологический эффект - к тому же сверхспецифический, направленный на сдвиг единственного показателя МТ. С другой стороны, высокоуровневые корреляционные связи были выявлены только для 19 веществ из 326, обнаруженных в пробах снега, что указывает на возможность неслучайных ассоциаций. В то же время анализ сопряженности между индивидуальными значениями показателей МТ и различными признаками, присущими самому ребенку или его семье, по нашему мнению, позволил выделить те сопутствующие факторы, которые потенциально способны искажать результаты генетико-гигиени-ческого исследования, и поэтому желательно их учитывать при планировании дальнейших работ с применением микроядерного теста на эпителии щеки.
Выводы
1. Частоты буккальных эпителиоцитов с аномалиями ядра у воспитанников детских садов в Магнитогорске соответствуют установленным ранее для детей такого же возраста в Москве.
2. У детей в Магнитогорске, проживавших в двух районах города (или посещающих разные
детские сады на этих территориях), буккальные эпителиоци-ты различались только по показателям токсического эффекта, причем максимальные значения этих показателей наблюдались как в районе, расположенном вокруг металлургического комбината, так и на другом берегу р. Урал.
3. Выявлены сопутствующие факторы, влияющие на показатели МТ на буккальных эпителиоцитах, как общие с МТ на культуре лимфоцитов (вегетативный коэффициент ребенка, душевой доход, возраст матери и потребление родителями алкоголя), так и выявленные только на эпителии щеки (пол ребенка, группа здоровья, число острых респираторных заболеваний за год).
Финансирование. Работа выполнена в рамках бюджетной темы «Влияние показателей качества жизни на нестабильность генома детей, проживающих в городе с развитой металлургической промышленностью», № гос. регистрации 01.2.00703762
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Литература (пп. 8, 11-12 см. References)
1. О результатах сопоставления перечней наиболее загрязненных городов. Официальный сайт Федеральной службы по гидрометеорологии и мониторингу окружающей среды (Росгидромет). Available at: http://www.meteorf.ru
2. Уральшин А.Г., Гаврилов А.П., Брылина Н.А., Никифорова Е.В., Бекетов А.Л., Сычев Ю.А. и др. Ингаляционный риск от воздействия выбросов промышленных предприятий Магнитогорска. Гигиена и санитария. 2007; (3): 15-8.
3. Котышева Е.Н., Болотская М.Л., Кошкина В.С., Хрипач Л.В., Ре-вазова Л.А. Некоторые эколого-гигиенические аспекты здоровья дошкольников промышленного города. Гигиена и санитария. 2004; (4): 55-7.
4. Легостаева Т.Б., Ингель Ф.И., Антипанова Н.А., Юрченко В.В. Заболеваемость детей старшего дошкольного возраста в Магнитогорске. Гигиена и санитария. 2011; (4): 34-40.
5. Легостаева Т.Б., Ингель Ф.И., Антипанова Н.А., Юрченко В.В., Юрцева Н.А., Котляр Н.Н. Гигиеническая оценка суммарной мутагенной активности проб снега Магнитогорска. Гигиена и санитария. 2010; (4): 47-52.
6. Ингель Ф.И., Кривцова Е.К., Юрцева Н.А., Антипанова Н.А., Легостаева Т.Б. Нестабильность и чувствительность генома здоровых детей из Магнитогорска. Гигиена и санитария. 2013; (3): 20-7.
7. Ингель Ф.И., Степанова А.А., Степанова О.П., Легостаева Т.Б., Коганова З.И., Козлова О.Б. Факторы тревоги и вегетативный тонус старших дошкольников из Магнитогорска. Гигиена и санитария. 2013; (4): 65-73.
9. Юрченко В.В., Подольная М.А., Ингель Ф.И., Кривцова Е.К., Беляева Н.Н., Недачин А.Е. и др. Микроядерный тест на буккальных эпителиоцитах. В кн.: Рахманин Ю.А., Сычева Л.П., ред. Полиорганный микроядерный тест в эколого- гигиенических исследованиях. М.: Гениус; 2007.
10. Юрченко В.В., Кривцова Е.К., Подольная М.А., Беляева Н.Н., Малышева А.Г., Дмитириева Р.А. и др. Микроядерный тест на эпителии щеки в комплексной оценке экологического благополучия детей в Москве. Гигиена и санитария. 2007; (6): 83-6.
13. Драгунский В.В. Цветовой личностный тест. Практическое пособие. М.: Харвест; 2004.
14. Собчик Л.Н. Метод цветовых выборов. Модификация восьмиц-ветового теста Люшера. СПб.: Речь; 2003.
15. Лейтина Б.И., Юрченко В.В., Ингель Ф.И., Кривцова Е.К., Пла-
Hygiene & Sanitation (Russian Journal). 2016; 95(10)
_DOI: http://dx.doi.org/10.1882/0016-9900-2016-10-969-973
Оriginal article
тонова В.И., Ревазова Ю.А. и др. Влияние витаминизированных напитков на спонтанный и индуцированный мутагенез in vivo. Хранение и переработка сельхозсырья. 2003; (5): 90-1.
References
1. About results of maximum impured towns lists comparison. Official Site of Federal hydrometeorology and environment monitoring service (Roshydromet). Available at: http://www.meteorf.ru. (in Russian)
2. Ural'shin A.G., Gavrilov A.P., Brylina N.A., Nikiforova E.V., Beke-tov A.L., Sychev Yu.A. et al. Inhalation risk upon exposure to emission from industrial enterprises in the town of Magnitogorsk. Gigi-ena i sanitariya. 2007; (3): 15-8. (in Russian)
3. Kotysheva E.N., Bolotskaya M.L., Koshkina V.S., Khripach L.V., Revazova L.A. Some environmental and hygienic aspects of preschool children's health in an industrial town. Gigiena i .sanitariya. 2004; (4): 55-7. (in Russian)
4. Legostaeva T.B., Ingel' F.I., Antipanova N.A., Yurchenko V.V. Morbidity among senior preschool children in Magnitogorsk. Gigiena i sanitariya. 2011; (4): 34-40. (in Russian)
5. Legostaeva T.B., Ingel' F.I., Antipanova N.A., Yurchenko V.V., Yurtseva N.A., Kotlyar N.N. Hygienic evaluation of the total mutagenic activity of snow samples from Magnitogorsk. Gigiena i sanitariya. 2010; (4): 47-52. (in Russian)
6. Ingel' F.I., Krivtsova E.K., Yurtseva N.A., Antipanova N.A., Legostaeva T.B. Instability and sensitivity of the genome of healthy children in Magnitogorsk. Gigiena i sanitariya. 2013; (3): 20-7. (in Russian)
7. Ingel' F.I., Stepanova A.A., Stepanova O.P., Legostaeva T.B., Ko-ganova Z.I., Kozlova O.B. Factors of anxiety and autonomic tonus in senior preschool children from Magnitogorsk. Gigiena i sanitariya. 2013; (4): 65-73. (in Russian)
8. Tolbert P.E., Shy C.M., Allen J.W. Micronuclei and other nuclear anomalies in buccal smears: methods development. Mutat. Res. 1992; 271: 69-77.
9. Yurchenko V.V., Podol'naya M.A., Ingel' F.I., Krivtsova E.K., Belyaeva N.N., Nedachin A.E. et al. The micronucleus test in buccal epithelium cells. In: Rakhmanin Yu.A., Sycheva L.P., eds. The Polyorgans Micronucleus Test in Ecological and Hygienic Research [Poliorgannyy mikroyadernyy test v ekologo-gigienicheskikh issledovaniyakh]. Moscow: Genius; 2007. (in Russian)
10. Yurchenko V.V., Krivtsova E.K., Podol'naya M.A., Belyaeva N.N., Malysheva A.G., Dmitirieva R.A. et al. Buccal epithelial micronuclear test in the comprehensive assessment of children's ecological well-being in Moscow. Gigiena i sanitariya. 2007; (6): 83-6. (in Russian)
11. Koss L.G. Diagnostic Cytology and its Histopathologic Bases. 3rd ed. 2 volumes. Philadelphia-Toronto: J.B. Lippincott Co; 1979.
12. Gagoshidse M.V., Antelava M.O., Zedginidze A.G., Mandzhavidze N.Sh. Dependence of child health on the ecology. Georgian Med. News. 2005; 118: 49-52.
13. Dragunskiy V.V. The Color Identity Test. The Practice Textbook [Tsvetovoy lichnostnyy test. Prakticheskoe posobie]. Moscow: Kharvest; 2004. (in Russian)
14. Sobchik L.N. The Color Selection Method. The 8-Color Lusher Test Modification [Metod tsvetovykh vyborov. Modifikatsiya vos'mitsvetovogo testa Lyushera]. St.Petersburg: Rech'; 2003. (in Russian)
15. Leytina B.I., Yurchenko V.V., Ingel' F.I., Krivtsova E.K., Platonova V.I., Revazova Yu.A. et al. The vitamin-rich beverage influence on spontaneous and induced mutaganesis in vivo. Khranenie i pererabotka sel'khozsyr'ya. 2003; (5): 90-1. (in Russian)
Поступила 30.03.16 Принята к печати 13.05.16
