CC BY
153
Цитологическое исследование пунктата печени при пироплазмозе у собак
М.С. Кривко, аспирант, Л.П. Славинская, соискатель, Н.В. Ярошенко, соискатель, ГНУ СКЗНИВИ,
В настоящее время возросла актуальность вопросов пато- и морфогенеза гепатитов у собак паразитарной этиологии, поскольку с этим связано повышение эффективности диагностики и лечения [1, 2].
При выяснении вопросов тяжести течения пироплазмоза нами особое внимание уделялось проведению цитологического исследования печени.
Цель работы установить морфологические изменения в печени при пироплазмозе разной степени тяжести.
Материал и методы исследования. После уточнения топографии печени относительно костных образований (ребра, позвонки) проводили пункцию и забор клеточного материала паренхимы. Одной рукой кожу смещали в сторону, другой производили прокол и вводили иглу перпендикулярно коже на нужную глубину, после чего производили аспирацию шприцем, при этом незначительно смещали вперед и назад.
Из полученного материала делали мазок, который окрашивали готовым красителем «Гемок-рафиксом». При малом увеличении находили монослойные участки, а затем мазок исследовали при большом увеличении. В цитопунктате печени обращали внимание на клеточный состав (эритроциты, нейтрофилы, эозинофилы, эпителиальные клетки, макрофаги, атипичные клетки, бактерии); однородность клеток одного класса (размер и форма клеток, соотношение размера цитоплазмы и ядра, форма, восприимчивость к красителям, размер ядра, различия в форме и размере ядер, наличие множественных ядер, их деформация, форма и размер ядрышек, наличие вакуолей и митозов). Изменения цитологической картины печени при пироплазмозе сравнивали с цитологической картиной печени здоровых животных.
Результаты исследования. При микроскопическом исследовании пунктата нормальной печени в поле зрения представляется однородная картина, состоящая почти сплошь из отдельных клеток печеночной паренхимы. Клетки печени однообразны в размерах. Форма клеток полигональная, реже приближающаяся к округлой или слегка вытянутой. Ядро округлое, сравнительно с протоплазмой малых размеров, часто расположено эксцентрически. В норме до 20% печеночных клеток имеют два ядра; двуядерность печеночных клеток следует рассматривать как проявление регенерации, свойственной и нормальному органу.
В период реконвалесценции после пироплазмоза, когда имеют место репаративные процессы, количество двуядерных клеток увеличивается. При окраске гемокрафиксом цитоплазма печеночных клеток окрашивается в светло-лиловый цвет, в синеватый или в светло-фиолетовый. Протоплазма окрашена неравномерно. Различие в окраске протоплазмы печеночной клетки, прежде всего, может быть объяснено физиологическим состоянием клетки, однако чаще это бывает связано с дистрофическими процессами в клетках.
При легком клиническом течении пироплазмоза в большинстве своем гепатоциты выглядят как нормальные, но в их цитоплазме отмечается незначительная вакуолизация. Возможны изменения размеров на 2—4 мкм самих клеток и размеров ядра на 1—3 мкм, изменения ядерно-цитоплазматического соотношения в пользу ядра, незначительная метахромазия, нарушение окраски цитоплазмы и ядра. Отмечаются начальные проявления дегенерации, протоплазма печеночной клетки приобретает гомогенную оксифильную окраску. Иногда протоплазма содержит вакуоли. По мере утяжеления течения заболевания прогрессирует жировая дистрофия, в продвинутых случаях число вакуолизированных клеток резко увеличено.
Печеночные клетки нормального органа содержат глыбки желчного пигмента — билирубина, но при пироплазмозе его количество резко увеличивается даже при легком течении заболевания, и билирубин присутствует практически во всех клетках.
При пироплазмозе средней тяжести гепатоци-ты значительно изменены. В них наблюдается выраженная вакуолизация цитоплазмы, характерны изменения размеров ядра на 1—3 мкм, изменение ядерно-цитоплазматического соотношения в сторону цитоплазмы (40—30%), то есть наблюдается кариопикноз. Возможен и противоположный процесс — плохое прокрашивание ядра с одновременным его увеличением, что характерно для кариолизиса. Выражена метахромазия, нарушения окраски цитоплазмы и ядра. Возможна сильная вакуолизация вплоть до полного отсутствия ее (контурируется только мембрана) при наличии нормального ядра. В таком ядре при пироплазмозе средней тяжести характерны изменения не только со стороны цитоплазмы, но и со стороны ядра. Ядра клеток разного размера, от гигантских — более 20 мкм до пикнотических, резко уменьшенных — до 1—2 мкм. Очень часто визуализируются ядра разной формы, от овальных до треугольных. Нормальная цитоплазма при
Цитограмма печени у собак, больных гепатитом
Показатели Клинически здоровые животные Животные, больные пироплазмозом
течение болезни
легкое среднее тяжелое крайне тяжелое
Нормальные печеночные клетки с одним ядром, % Двуядерные гепатоциты, % Многоядерные гепатоциты, % Дегенеративные печеночные клетки, % 82,1 4,3 15,3 2,7 0,82 0,1 1,74 0,25 74.2 5,6 21.3 3,9 1,53 0,26 2,97 0,19 69.3 6,9 24.4 5,2 1,79 0,31 4,52 0,28 42,3 8,7 12,7 2,3 1,96 0,27 43,04 3,47 9,8 0,38 8,7 0,6 1,03 0,12 80,47 6,97
наличии выраженной сморщенности ядра или сильного изменения ядерно-цитоплазматического соотношения в пользу цитоплазмы также встречается в цитопунктате печени при среднем течении гепатита.
Для тяжелого и крайне тяжелого течения пироплазмоза характерны значительные изменения в морфологии гепатоцитов. В целом гепатоциты выглядят сильно измененными, практически разрушенными, в цитоплазме отмечается значительная вакуолизация; возможны изменения размеров клетки с изменением ядерно-цитоплазматического соотношения в пользу ядра (30—10%). Ядро практически отсутствует, в нем невозможно выявить ядрышки или хроматин, сильно воспринимает окраску — наблюдается полный кари-орексис, при этом цитоплазма всегда изменена, без четкой границы. Значительная метахромазия — нарушение окраски цитоплазмы и ядра. Наличие распада ядра.
При утяжелении пироплазмоза отмечаются дальнейшие изменения в ядрах клеток. Ядра гепатоцитов имеют нечеткие контуры, содержат более двух ядрышек. Часто в них обнаруживаются крупные тельца-включения, которые имеют различную окраску и форму. Тельца-включения также обнаруживаются и в купферовских клетках. При тяжелом течении заболевания характерны не столько дистрофические, сколько некротические изменения гепатоцитов. Участки некроза располагаются в основном в периацинарных областях. Портальные тракты зачастую подвергаются клеточной инфильтрации. Ядрышки выглядят уменьшенными, сморщенными и сильно окрашенными.
При пироплазмозе лейкоцитарная реакция в печени выражена слабо — отмечаются отдельные нейтрофильные лейкоциты, лимфоциты, моноциты.
Таким образом, прослеживается четкая граница между цитограммой при легком и среднем течении и цитограммой при тяжелом и крайне тяжелом течении пироплазмоза. Это, прежде всего, связано со срывом регенеративных процессов в печеночной паренхиме при тяжелом и очень тяжелом течении заболевания.
Данный вывод подтверждает значительное снижение количества двуядерных гепатоцитов в цитопунктате печени при тяжелом и очень тяжелом течении соответственно до 12,7+2,3 и 8,7±0,6%, в то время как при легком и среднем течении наблюдается обратный процесс — число двуядерных гепатоцитов увеличивается соответственно до 21,3+3,9 и 24,4+5,2%. Увеличение и снижение количества двуядерных гепатоцитов отражает степень регенеративных процессов в печеночной ткани.
Для тяжелого и крайне тяжелого течения пироплазмоза характерны значительные изменения в морфологии гепатоцитов. В целом гепатоциты выглядят сильно измененными, практически разрушенными, в цитоплазме отмечается значительная вакуолизация; возможны изменения размеров клетки с изменением ядерно-цитоплазматического соотношения в пользу ядра (30—10%). Ядро практически отсутствует, в нем невозможно выявить ядрышки или хроматин, сильно воспринимает окраску — наблюдается полный кариорексис, при этом цитоплазма всегда изменена, без четкой границы. Значительная метахромазия — нарушение окраски цитоплазмы и ядра. Наличие распада ядра.
Одновременно со снижением двуядерных гепа-тоцитов при тяжелом и крайне тяжелом течении гепатита отмечается значительное увеличение числа дегенеративных гепатоцитов с 1,74+0,25 у здоровых животных до 43,04+3,47 при тяжелом течении и 80,47+6,97% при крайне тяжелом течении гепатитов (таблица).
Таким образом, по мере развития пироплазмоза и усиления его тяжести в цитопунктате печени количество нормальных печеночных клеток с одним ядром значительно снижается, а число дегенеративных гепатоцитов возрастает. Два других показателя (дву- и многоядерные клетки) имеют более сложную количественную динамику, обусловленную состоянием регенеративных процессов в печеночной ткани.
Литература
1. Раймонд, Н. Техника цитопункции // Ветеринар. 1999. № 3-4. С. 43-44.
2. Федюк, В.И. Цитологические аспекты диагностики заболеваний печени у собак / В.И. Федюк, Д.Н. Казаков // Практик. 2003. № 7-8. С. 98-101.
