CC BY
17УДК 537.533.35:616.992:57.012.4
ЦИТОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ASPERGILLUS FUMIGATUS FRES. В ЛЕГКИХ МЫШЕЙ
Степанова А.А. (зав. лаб.)*, Босак И.А. (врач-лабораторный миколог), (с.н.с.)
НИИ медицинской микологии им. П.Н. Кашкина Северо-Западного государственного медицинского университета им. И.И. Мечникова, Санкт-Петербург, Россия
© Коллектив авторов, 2013
Изучены особенности ультраструктурной организации гиф мицелия A.fumigatus в легких инфицированных мышей.
Выявлено, что морфогенез клеток мицелия A. fumigatus в легких мышей сопровождался усилением уровня вакуолизации, аккумуляцией небольшого числа запасных веществ, формированием снаружи клеточных стенок широкого наружного темного гранулярного внеклеточного матрикса. Гифы мицелия не различались между собой по ультраструктуре интерфазных ядер, митохондрий и компонентов эндомембранной системы, однако различались по качеству аккумулируемых запасных веществ. Способность изученных тканевых форм гриба формировать таллоконидии, покоящиеся клетки гиф мицелия, а также хорошо развитый внеклеточный матрикс снаружи клеточных стенок клеток гиф, можно отнести к цитологическим факторам его вирулентности. Альвеолярные макрофаги мышей фагоцитировали молодые клетки гиф, лишенные внеклеточного матрикса, очевидно, несущего протективные функции.
Ключевые слова: Aspergillus fumigatus, in vivo компоненты клеток, легкие мышей, макрофаги, экспериментальный аспергил-лез, электронная микроскопия
CYTOLOGICAL INVESTIGATIONS OF ASPERGILLUS FUMIGATUS FRES. IN MURINE LUNG
Stepanova A.A. (head of the laboratory), Bosak I.A. (laboratory mycologist), (senior scientific collaborator)
Kashkin Research Institute of Medical Mycology, North-Western State Medical University named after 1.1. Mechnikov, St. Petersburg, Russia
© Collective of authors, 2013
Ultrastructural features of the organization of A. fumigatus hy-phal cells of mycelium in infected murine lung have been studied. It was revealed that the morphogenesis ofhyphal cells of A. fumigatus in murine lung was accompanied by increasing of vakuolization level, accumulation of a small number of storage compounds, formation outside
* Контактное лицо: Степанова Амалия Аркадьевна,
тел.: (812) 303-51-40
Sinitskaya I.A.
Синицкая И.А.
of cellular walls a wide external dark granular extracellular matrix. Mycelial hyphae didn’t differ among themselves on ultrastructure of interphase nucleus, mitochondries and components of endomembrane system, however, differed on quality of accumulated storage compounds. Ability of the studied tissular fungal forms to form tallokonidiya, hyphal rest cells of mycelium and well developed outside hyphal cell extracellular matrix can be considered as cytological factors of its virulence. Murine alveolar macrophages phagocytized the young hyphal cells as a rule without extracellular matrix that may be evidence of its protective function.
Key words: Aspergillus fumigatus, cell components, electron microscopy, experimental aspergillosis, in vivo, macrophages, murine lung
ВВЕДЕНИЕ
Ранее, нами на примере штамма (РКПГГ-1172) Aspergillus fumigatus Fres. детально были изучены ультраструктурные особенности биологии развития разных типов клеток в условиях культуры [1-5]. Представляло интерес продолжить начатые исследования и провести сравнительный анализ морфогенеза и тканевых и культуральных форм этого вида гриба, воспроизвести в местных условиях модель экспериментального аспергиллеза с использованием мышей, ранее предложенную Balloy V. с соавторами [6].
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Модель экспериментального аспергиллеза воспроизводили по методике, представленной в работе Balloy V. с соавторами [6], на мышах - самцах линии Balb массой 18-20 г в пятикратной повторности. По мнению Latge J.-P. (1999), A. fumigatus становится патогенным только у имунносупрессированного хозяина. Поэтому, в целях подавления иммунитета, мышам за три дня до эксперимента интраперитониаль-но вводили суспензию гидрокортизона к количестве
0,01 мл на 1 г веса животного.
Мышей инфицировали интраназально конидиями (1-107 в 0,05 мл дистиллированной воды) клинического изолята A. fumigatus (штамм РКПГР-1172 из Российской коллекции патогенных грибов НИИ медицинской микологии им. П.Н. Кашкина). Культуру гриба выращивали 7 суток при 37 °С на агаре Сабуро (pH 5,7). Ранее [5] было показано, что через 6 часов после помещения при 37 °С в жидкую среду Чапека зрелых конидий используемого в настоящей работе штамма аспергилла частота встречаемости проросших конидий составила 90,6%.
Вскрытие мышей проводили через 5 суток после начала эксперимента, поскольку была отмечена гибель 20% животных от общего числа. Кусочки легких мышей фиксировали глутаральдегидом-осмием и заливали в смесь эпоксидных смол эпон-аралдит по методике, описанной нами ранее [1].
С целью выявления элементов гриба в тканях легких мышей для последующего электронно-микроскопического изучения, полутонкие эпоксидные срезы легких толщиной 3-5 мкм окрашивали толуиди-новым синим и изучали в световом микроскопе Leica DM 4000 (Германия). Ультратонкие срезы получали
Рис. 1. Световая (а, б) и трансмиссионная электронная микроскопия (в-к) ткани легкого мышей, инфицированных A. fumigatus. Ув.: а - х1 ООО; 6 - х400; в,г,д - х5000; е - х10000; ж,з - хбООО; и - Х20000, к - Х25000.
Условные обозначения здесь и на рис. 2,3: В - вакуоль, ВМ - внеклеточный матрикс, БВ - белковое включение, Г - гифы, Гл - гликоген, ГП - гранулы полифосфатов, ИГ - интактная гифа, КС - клеточная стенка, ЛВ - липидн(ое)ые включени(е)я, М- митохондрия, Мф - макрофаг, П - пробка, ПР - разрушающиеся гифы, С-септа, ТВ-тельце Воронина, ФБ-фибриллярный белок, Я - ядро.
Рис. 2. Ультраструктура стенок клеток разновозрастных гиф А. /итідаШ5, инфицирующих ткани легкого мышей.
Ув.: а-е -х25000. в-е - | показан внеклеточный матрикс
на ультрамикротоме LKB V, контрастировали урани-лацетатом и цитратом свинца и исследовали в трансмиссионном электронном микроскопе Jem 100SX II (Япония).
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
11ри светооптическом исследовании полутонких эпоксидных срезов легких мышей выявляли в их паренхиме хаотично локализующиеся небольшие скопления гиф гриба (Рис. 1 а, стрелки), а также радиально ориентированные (Рис. 2 б, стрелка) варьирующего диаметра (от 15 до 35 мкм) скопления гиф.
В первом случае гифы гриба могли довольно плотно примыкать друг к другу (Рис. 1 в) либо располагались на удалении друг от друга, одиночно (Рис. 1 г). Диаметр их варьировал в пределах от 2,0 до 3,0 мкм. Клетки гриба различались по степени вакуолизации. Ядра в слабо вакуолизированных клетках, как правило, попарно сближенные, занимали весь просвет гифы. Ядра (Рис. 1 д, ж) округлой (1,0 .мкм) либо слегка эллипсоидной (0,9x1,2 мкм) формы, слабо хрома-тизированы, содержали одно крупное (0,3-0,5 мкм) эксцентричное высококонтрастное ядрышко, с неровным контуром и преобладанием гранулярного компонента.
Митохондрии (Рис. 1 д, ж) равномерно распределены по площади среза клетки, многочисленные, собраны в небольшие группы, довольно крупные (0,3-0,5 мкм), полиморфные, с темным матриксом и густыми светлыми кристами, параллельно ориентирующиеся относительно друг друга. Матрикс орга-нелл отличался более высокой электронной плотностью, по сравнению с цитозолем, что делало их легко различимыми.
Вакуоли встречались редко. В одних клетках гиф они в небольшом числе (Рис. 1 д, е, ж), мелкие, разнообразной формы, светлые, в других — более многочисленные (Рис. 1 з). Также выявили клетки гиф с редкими вакуолями средних размеров (Рис. 1 г) либо крупными (Рис. 1 в), занимающими основную часть
на площади среза клетки. В их содержимом встречались одиночные темные гомогенные округлые белковые включения. Последние локализовались в центральной (Рис. 1 в) или периферической части вакуолей, находясь в тесном контакте с их тонопластом (Рис. 1 д, з). В мелких вакуолях описанные включения могли занимать весь их объем (Рис. 1 д). Отметим, что глобулы сходного строения были обнаружены в вакуолях зрелых клеток гиф вегетативного мицелия [1], а также прорастающих конидий этого штамма А. fumigatus [4, 5]. Запасные вещества в цитозоле обнаруживали редко, в основном, это немногочисленные, мелкие, округлой формы и умеренной электронной плотности липидные включения, располагающиеся в толще цитозоля одиночно или в небольших группах (Рис. 1 е). Компоненты эндомембранной системы были представлены редкими, короткими, сильно искривленными цистернами эндоплазматического ретикулума и мелкими светлыми пузырьками, расположенными в толще цитозоля. Цитозоль довольно плотный, насыщен свободными рибосомами.
Плазмалемма плотно примыкала к клеточной стенке. Последняя тонкая (0,15-0,20 мкм), светлая, гомогенная, со слабо различимыми, хаотично ориентированными микрофибрилами (Рис. 2 а).
Отметим, что клетки гиф мицелия изученного вида гриба in vitro [1] формировали сходные по толщине и строению с таковыми тканевых форм клеточные стенки. Снаружи клеточной стенки присутствовал хорошо развитый темный гранулярный слой (Рис. 2 б-д, стрелка), гак называемый «внеклеточный матрикс», согласно терминологии англоязычных авторов [7 и др.]. Формирование данного слоя происходило следующим образом: сначала на поверхности клеточной стенки возникали сгустки темного хлопьевидного материала небольших размеров (Рис.
2 б), которые постепенно увеличивались в размерах (Рис. 2 в, г, стрелка) и сливались между собой, что приводило к формированию толстого темного, неоднородного по плотности слоя (Рис. 2 д, стрелка),
Рис. 3. Особенности строения клеток гиф (а-ж) и прорастающих конидий (к) А. /итщаЬк в ткани легкого (а-ж), а также клеток гиф в содержимом сосуда (з, и) и содержимом маркофагов (л-и). а - \ показана таллоконидия, б - стрелками показаны клеточные стенки, е - \ показан цитозоль, ж - | показана клеточная стенка, з - | показана клеточная стенка разрушенной клетки гифы, к -1 показаны прорастающие конидии, н- | показаны секреторные пузырьки.
Ув.: а,и - х12000, б,в,г, о -х 10 ООО; д - х8000, е,ж,з - х5000, к - Х25000; л-н, р - х4000
а иногда - и по толщине (Рис. 3 б). В зрелых клетках гиф толщина описанного слоя могла в 2-6 раз (до 1,0-
1,2 мкм) превышать таковую клеточной стенки. При сравнении ультраструктуры внеклеточного матрикса гиф тканевых и культуральных [1] форм A. fumigaLus установлено, что у первых он был в 4-5 раз более толстый, а также плотный и темный (в паренхиме легких), что, очевидно, служит проявлением его протек-тивной функции. Отметим, что в условиях культуры внеклеточный матрикс нами был выявлен и у других видов аспергиллов, таких как A. niger [8], A. flavus [9], Л. versicolor [10] и A. terreus [11], однако степень его развития была намного ниже. По мнению Muller F.-M. с соавторами [12], благодаря присутствию внеклеточного матрикса гиф мицелия A. fumigatus, они способны к адгезии и формированию биопленки как in vitro, так и in vivo. На рисунках 1 (в, д) настоящей статьи также виден плотный контакт между гифами мицелия, несущего на своей поверхности внеклеточный матрикс.
Клетки гиф мицелия отделены друг от друга однослойными клиновидными септами (Рис. 1 г, 3 в, г), по толщине и строению порового аппарата септ сходные с таковыми клеток вегетативного мицелия этого штамма ранее изученного in vitro [1]. Компонентами порового аппарата септ были тельца Воронина (Рис. 3 в) и пробки (Рис. 3 г). Тельца Воронина - темные, гомогенные, плоско-гексагональной формы, число их вблизи септы варьировало от двух до пяти. Атрибутами септ молодых растущих клеток гиф гриба были только тельца Воронина, тогда как зрелых -тельца Воронина и пробки, обычно располагающиеся в просвете септальной поры, и стареющих - только темные поровые пробки (Рис. 3 г) разнообразной формы. Таким образом, мы не обнаружили различий в строении септ и компонентов порового аппарата септ клеток гиф мицелия тканевых и культуральных форм изученного штамма A. fumigatus.
В стареющих клетках гиф мицелия заметно сокращалась толщина клеточной стенки, в ней формировались локальные просветления (Рис. 2 е), возникали перфорации; клетки приобретали неправильную форму. Отмечали лизис внеклеточного матрикса, который приобретал более однородную текстуру и причудливую форму (Рис. 2 е). Со временем он полностью исчезал, оголяя клеточные стенки (Рис. 3 е,
ж, з). Отметим, что вакуолизация клеток гиф сопровождалась снижением числа митохондрий, которые часто теряли групповое расположение и располагались одиночно вблизи клеточной стенки.
Диаметр гиф гриба, формирующих скопления выраженным радиальным ростом (Рис. 1 б), варьировал от 3,0 до 3,5 мкм. Выявили четкие различия в их тонком строении в зависимости от зоны локализации. Так, клетки гиф периферической маргинальной зоны, где и осуществлялся активный апикальный рост и деление клеток, были слабо вакуолизирова-ны (Рис. 3 а, д), содержали многочисленные интерфазные ядра, митохондрии, свободные рибосомы и
плотный цитозоль. Ядра, как правило, попарно сближены (Рис. 3 д). Запасные вещества в одних гифах отсутствовали, в других - в форме небольшого числа мелких(0,2-0,3 мкм), в основном, одиночных липидных капель умеренной электронной плотности (Рис.
3 д), локализующихся в цитозоле, либо одиночных, редких, темных белковых глобул варьирующего диаметра (0,1-0,4 мкм) в содержимом вакуолей. Крайне редко отмечали гифы, содержащие в качестве запасных веществ мелкие темные гомогенные либо со светлым центром полифосфатные гранулы (Рис. 1 з), скопления розеток гликогена (Рис. 1 к), а также хорошо развитых тяжей фибриллярного белка (Рис. 1 и), свободно локализующихся в толще цитозоля и вблизи клеточных стенок. Отметим, что в условиях культуры клетки гиф вегетативного мицелия аналогичного штамма формировали сходный набор запасных веществ [1], однако степень насыщенности их запасными веществами была намного выше, что можно связать с необходимостью формировать многочисленные конидиогенные аппараты.
В средней части описанного скопления гиф можно было наблюдать все стадии созревания их клеток, сопровождающиеся постепенным усилением уровня вакуолизации (Рис. 3 е) и синтезом запасных веществ. По мере роста и развития клеток мицелия, значительного утолщения клеточной стенки не наблюдали, что нельзя сказать о внеклеточном матриксе (Рис. 2 д, стрелка). Иногда встречались картины формирования одиночных таллоконидий (Рис. 3 а, стрелка) еще молодыми, слабо вакуолизи-рованными клетками мицелия, что отмечалось нами и для клеток гиф мицелия культуральных форм этого вида гриба [1, 13] через 5 суток после посева, однако более вакуолизированных. Таллоконидии имели сферическую (0,5-0,6 мкм) форму, тонкие, гладкие, светлые, тонко-фибриллярные клеточные стенки и были лишены внеклекточного матрикса. Остается открытым вопрос о том, характерны ли таллоконидии штаммам A.fumigatus, выделенным не только из ткани легкого человека, но и из других субстратов. Однако несомненен тот факт, что эта способность обеспечивает A.fumigatus - объекту настоящего исследования быстро и с минимальными энергетическими затратами формировать в тканях хозяина потомство в виде покоящихся таллоконидий, присутствие которых, по нашему мнению, может вызывать вторичный инфекционный процесс. Для тканевых форм это весьма важно, поскольку формирование настоящих конидиогенных аппаратов в тканях довольно стеснено, прежде всего, пространственно, и необходима предварительная аккумуляция клетками мицелия большого количества запасных веществ. По данным из научной литературы, таллоконидии способны формировать клетки вегетативного мицелия таких видов аспергиллов, как А. 1еггеш [11, 14] и А. сагпеш [15]. По мнению Роге К.Б. с соавторами [15], способность некоторых видов аспергиллов формировать талоконидии («алейроспоры» - по термино-
логии данных авторов) является таксономическим признаком ранга группы.
Центральная часть радиально растущего скопления грибов формировалась за счет отмирающих (Рис. 3 ж) и отмерших (Рис. 3 з) клеток гриба. Содержимое преобладающего числа клеток было лишено цитозоля (Рис. 3 ж, стрелка), а иногда - даже разрушающихся органелл. Характерный для клеточных стенок интактных клеток внеклеточный матрикс, как правило, отсутствовал либо сохранялся на небольшом протяжении, имел неровный контур и небольшую толщину В гифах с отмершим содержимым клеточные стенки «спадали» (Рис. 3 з), теряли форму некогда живых клеток.
Довольно часто встречались клетки гиф, формирующие вторичные клеточные стенки, по толщине и строению сравнимые с первичными (Рис. 3 б). Между первичными и вторичными клеточными стенками обнаружили тонкий, неравномерный по толщине, темный, гомогенный слой, а снаружи последних - хорошо развитый внеклеточный матрикс. В содержимом описанных клеток наблюдали электронно-плотный цитозоль, маскирующий присущие им компоненты (Рис. 3 б). Иными словами, наличие утолщенных клеточных стенок и темного содержимого таких клеток является показателем того, что часть клеток гиф исследуемого штамма, будучи в ткани легкого, «впадает» в состояние покоя и таким образом представляет собой «тлеющий уголь». По нашему мнению, со временем они могут вызывать вторичный инфекционный процесс в ткани легкого. Саму способность формировать описанные элементы, а также таллоконидии и внеклеточный матрикс, можно отнести к цитологическим факторам вирулентности использованного в настоящей работе штамма А. fumigatus.
В паренхиме легких крайне редко присутствовали одиночные конидии (Рис. 3 л, стрелки), находящиеся на ранних стадиях формирования ростковых трубок. В цитозоле последних отмечали одно ядро, многочисленные митохондрии и мелкие вакуоли с темными включениями. Остается загадкой вопрос о возможном их источнике: 1) конидиогенные аппараты, которые нам не удалось выявить либо 2) конидии, используемые для инфицирования мышей и попавшие в ткань легкого через эпителий бронхов.
Нам удалось наблюдать профили интактных, стареющих и отмерших (без содержимого) клеток гиф в сосудах легких мышей (Рис. 3 и, стрелки). Интактные клетки, судя по степени их вакуолизации и степени насыщенности запасными веществами, находились на разных стадиях развития. Особенностью зрелых клеток гиф гриба, локализующихся в просвете сосудов, в отличие от тканевых форм гриба, является большее количество запасных веществ, которые более однообразны - в виде крупных, округлой формы, липидных включений умеренной электронной плотности, практически заполняющих весь просвет клеток гиф и часто находящихся в плотном контакте
друг с другом (Рис. 3 к). Клеточные стенки по толщине и строению не отличались от таковых у тканевых форм гриба, снаружи они также были окружены хорошо развитым внеклеточным матриксом (Рис. 3 к), отличительной особенностью которого была более низкая электронная плотность. Факт наличия гиф в сосудах легких мышей мы интерпретируем как показатель высокой вирулентности штамма и возможного перехода инфекционного процесса в генерализованную форму.
В содержимом сосудов можно было наблюдать также стареющие и полностью отмершие (Рис. 3 и, стрелка) клетки гиф. Клеточные стенки последних сохраняли форму, присущую живым клеткам, были сильно утоньшены и полностью лишены внеклеточного матрикса, находясь в кровяном русле, благополучно проходили весь цикл своего развития.
В паренхиме легких часто встречались макрофаги, находящиеся на разных стадиях фагоцитоза клеток гиф гриба, в числе от одного (Рис. 3 м) до четы-рех-пяти. В их содержимом наблюдали одиночные профили клеток гриба (Рис. 3 н) либо два (Рис. 3 р) и более (Рис. 3 п) - до пяти-шести. Отметим, что фагоцитированные клетки гиф гриба, в основном, находились на ранних стадиях развития (были слабо вакуолизированы и практически не содержали запасных веществ) и, соответственно, были лишены внеклеточного матрикса (Рис. 3 н, о-р). Небольшой толщины внеклеточный матрикс отмечали лишь иногда у клеток гиф, находящихся в состоянии фагоцитоза (Рис. 3 м). Этот факт опосредованно также подтверждает протективную функцию внеклеточного матрикса.
В ткани легкого, в основном, доминировали макрофаги с разрушенным или разрушающимся содержимым (Рис. 3 р) и дегенерирующими пикнотически-ми ядрами. В их содержимом выявляли интактные клетки гиф. Реже наблюдали разрушающиеся макрофаги, в которых часть клеток гриба была интактной, а часть - в состоянии дегенерации (Рис. 3 п). При этом в последних наблюдали лизис клеточной стенки клеток гриба, резкое сокращение их диаметра, уплотнение цитозоля, сокращение числа органелл за счет дегенерации. Поскольку дегенерирующие клетки гриба, вплоть до завершающих этапов этого процесса, были окружены плазмалеммой, некогда принадлежащей макрофагу, после полного лизиса которых в их содержимом можно было встретить крупные вакуоли с остатками грибных элементов в виде обрывков мембран и небольших по размерам сгустков темного фибриллярного материала. В интактных макрофагах, содержащих элементы гриба (Рис. 3 о), вблизи последних выявлялись многочисленные мелкие светлые пузырьки (Рис. 3 о, стрелки) и картины их слияния (экзоцитоза) с плазмалеммой фагоцита. Клеточные стенки таких клеток гиф сильно утоньшены, цитозоль по электронной плотности не отличался от такового макрофагов, в целом, судя по ультраструктуре, налицо «угнетенное» состоя-
ВЫВОДЫ
ние первых. Анализ «сценария» взаимоотношений ультраструктуре интерфазных ядер, митохондрий и
макрофагов и грибных элементов в тканях легких компонентов эндомембранной системы, однако раз-
мышей доказывает, что клетки иммунной системы личались по количеству и качеству аккумулируемых
проявляли угнетенное состояние против грибной запасных веществ.
инфекции, вызванной патогенным штаммом A. fu- 4. Культуральная и тканевая формы A. fumigatus
migatus, к тому же уже вышедшей за пределы тканей не различались между собой по строению латераль-
легкого и колонизирующей кровеносную систему. ных клеточных стенок, септ и компонентов порового
аппарата. Гифы тканевых форм A. fumigatus, в отличие от культуральных, формировали в 4-5 раз более
1. При светооптическом исследовании срезов толстый, а также плотный и темный (в паренхиме
легких зараженных A. fumigatus мышей доказано на- легких) внеклеточный матрикс.
личие в их паренхиме небольших, хаотично локали- 5. Способность изученных тканевых форм гриба
зующихся, скоплений гиф гриба, а также довольно формировать таллоконидии, покоящиеся клетки гиф
крупных скоплений радиально ориентированных мицелия, а также хорошо развитый внеклеточный
гиф. матрикс снаружи клеточных стенок, можно отнести
2. Морфогенез клеток мицелия A. fumigatus в лег- к цитологическим факторам его вирулентности,
ких мышей сопровождался усилением уровня вакуо- 6. Наличие гиф гриба в сосудах легких мышей мо-
лизации, аккумуляцией небольшого числа запасных жетбыть показателем перехода инфекционного провеществ, формированием снаружи клеточных стенок цесса в генерализованную форму.
наружного темного гомогенного внеклеточного ма- 7. Через пять суток после начала эксперимента
трикса значительной толщины (1,0-1,2 мкм). большая час ть альвеолярных макрофагов мышей на-
s. Гифы мицелия, инфицирующие паренхиму лег- ходилась в угнетенном состоянии, то есть не справ-
ких мышей, не различались между собой по числу и ляласьс грибной инфекцией, вызванной A. fumigatus.
ЦИТИРОВАННАЯ ЛИТЕРАТУРА
1. Степанова А.А., Синицкая И.А., Авдеенко Ю.А. Субмикроскопическое изучение клеток вегетативного мицелия Aspergillus fumigatus Fres. //Проблемы мед. микологии. — 2004. — Т. 6, №3. — С. 34-40.
2. Степанова А.А., Синицкая И.А. Цитологическое изучение морфогенеза конидиогенного аппарата Aspergillus fumigatus // Проблемы мед. микологии. - 2005. - Т. 7, №3. - С. 41-49.
3. Степанова А.А., Синицкая И.А. Ультраструктурные аспекты старения клеток некоторых видов рода Aspergillus II Проблемы мед. микологии. - 2009. - Т. 11, №4. - С. 24-29.
4. Степанова А.А., Синицкая И.А. Некоторые аспекты цитологического изучения прорастающих конидий Aspergillus fumigatus Fres. // Проблемы мед. микологии. — 2010. — Т. 12, №2. — С. 134.
5. Stepanova A. A., Sinitskaya I.A. Cytological investigations of Aspergillus fumigatus Fres. germinating conidia / / Проблемы мед. микологии. — 2012. - Т. 14, №2. - P. 43-53.
6. Balloy V., Huerre М., Latge J.P, Chignard M. Differences in patterns of infection and inflammation for corticosteroid treatment and chemotherapy in experimental invasive pulmonary aspergillosis // Infect, and Immun.. - 2005. - Vol. 73, №1. — P. 1-15.
7. Loussert C, Schmitt C, Prevost М.-C., etal. In vivo biofilm composition of Aspergillus fumigatus II Cell. Microbiol. - 2009. - P. 1-6.
8. Степанова A.A., Синицкая И.А. Ультраструктура клеток Aspergillus niger. Вегетативный мицелий // Проблемы мед. микологии. — 2003. — Т. 5, №4. - С. 32-39.
9. Степанова А.А., Синицкая И.А. Ультраструктура клеток вегетативного мицелия Aspergillus flavus Link, выращенного in vitro // Проблемы мед. микологии. - 2006. — Т. 8, №1. — С. 40-45.
10. Степанова А.А., Синицкая И.А. Цитология клеток выращенного in vitro вегетативного мицелия Aspergillus versicolor (Vuill.) Tiraboshi II Проблемы мед. микологии. - 2006. - Т. 8, №3. — С. 22-28.
11. Степанова А.А., Синицкая И.А. Электронно-микроскопическое изучение клеток вегетативного мицелия Aspergillus terreus Thom // Проблемы мед. микологии. - 2007. - Т. 9, №3. - С. 26-33.
12. Muller F.-M., Se'uller М., Beauvais A. Aspergillus fumigatus biofilms in the clinical setting // Medical Mycology. — 2011. — Vol. 49, Suppl. 1. - P. 96-100.
13. Степанова А. А., Синицкая И. А. Ультраструктура таллоконидии Aspergillus fumigatus. Мат.2-го Всеросс. кош p. но мед. микологии. - 2004. - Т. 3. — С. 41.
14. Brunmozhi В. Aspergillus terreus complex // Medical Mycology. - 2009. - Vol. 47, Suppl. 1. - P. 542-546.
15. Pore R.S., Pyle G, Larsh H.W., Skvarla /./. Aspergillus carneus aleurospore cell wall ultrastructure // Mycologia. - 1967. -Vol. 61, №2. - P. 418-422.
Поступила в редакцию журнала: 18.03.2013 г. Рецензент: Шевяков М.А.
