CC BY
4
DOI: 10.48612/sbornik-2024-1-78 УДК 619:[577.12:618.14-002]:636.2
ЦИТОКИНОВЫЙ ПРОФИЛЬ КРОВИ КЛИНИЧЕСКИ ЗДОРОВЫХ И БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ЭНДОМЕТРИТОМ КОРОВ
Болотова Валерия Сергеевна
Пасько Надежда Валерьевна, канд. биол. наук
ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии», г. Воронеж, Российская Федерация
Изучено содержание провоспалительных (ФНОа, ИЛ-2) и противоспалительных цитоки-нов и относительный уровень их экспрессии в крови коров при развитии хронического эндометрита. Содержание ФНОа в крови коров с хроническим эндометритом выше в 1,31 раза, чем у клинически здоровых животных, ИЛ-2 - в 2,11 раза, а концентрация ИЛ-4 и ИЛ-10, наоборот, ниже в 1,73 и 1,6 раза соответственно. Уровень относительной экспрессии генов ФНОа и ИЛ-2 у больных хроническим эндометритом коров выше в 3,0-3,1 раза, а ИЛ-4 и ИЛ-10 - ниже на 32,151,2%, свидетельствующее о преобладании провоспалительных процессов над противовоспалительными.
Ключевые слова: коровы; эндометрит; цитокины; экспрессия генов
BLOOD CYTOKINE PROFILE OF CLINICALLY HEALTHY COWS AND COWS WITH CHRONIC ENDOMETRITIS
Bolotova Valeriya Sergeevna
Pasko Nadezhda Valeryevna, PhD Biol. Sci.
FSBSI "All-Russian Veterinary Research Institute of Pathology, Pharmacology and Therapy", Voronezh, Russian Federation
The content of pro-inflammatory (TNFa, IL-2) and anti-inflammatory cytokines and the relative level of their expression in the blood of cows in case of chronic endometritis development have been studied. The blood content of TNFa in cows with chronic endometritis is by 1.31 times higher than in clinically healthy animals, IL-2 is by 2.11 times higher, and the concentration of IL-4 and IL-10, on the contrary, is lower by 1.73 and 1.6 times, respectively. The level of relative expression of the TNFa and IL-2 genes in cows with chronic endometritis is by 3.0-3.1 times higher, and IL-4 and IL-10 are by 32.1-51.2% lower, indicating the predominance of pro-inflammatory processes over anti-inflammatory.
Key words: cows; endometritis; cytokines; gene expression
В системе воспроизводительной функции у высокопродуктивных молочных коров особое место занимают воспалительные заболевания матки. К этим патологиям относится и хронический эндометрит. Хроническое воспаление эндометрия у молочных коров регистрируется через 45-60 и более дней после отёла у 24,5-38,9 % бесплодных коров. Хронический эндометрит коров приносит значительные экономические потери отрасли молочного животноводства, складывающиеся из снижения молочной продуктивности, длительного бесплодия, расходов семени на безрезультатные осеменения, стоимости ветеринарных препаратов и др. [4, 5].
Особая опасность хронического эндометрита заключается в наличии воспалительного процесса, препятствующего нормальному развитию зародыша в полости матки. При хроническом эндометрите диагностируется гиперемия, кровоизлияния, дистрофические процессы эпителиальных клеток, разрастание соединительно-тканных элементов. Кроме того, хроническое воспаление эндометрия характеризуется дистрофическими и некробиотическими процессами клеток покровного эпителия, их десквамацией, диффузной нейтрофильной и лимфоидной инфильтрацией эндометрия, некробиозом маточных желез [3, 2].
Гистологическая картина при развитии хронического эндометрита свидетельствует о развитии воспалительного процесса, что отражается и на показателях морфо-биохимического статуса. Одними из интегральных показателей гомеостаза являются интерлейкины крови коров. Цитокины находятся в тесном взаимодействии с гормонами, особенно эстрадиолом и прогестероном, занимающими центральное место в регуляции репродуктивных процессов в организме животного [1, 6].
Цитокины продуцируются иммуноком-петентными клетками, составляют самостоятельную систему, участвующую в регуляции гомеостаза, находятся в тесном взаимодействии с нервной и эндокринной системами. Цитокины определяют характер формирования локальной воспалительной реакции в матке [7, 8].
Поэтому изучение цитокинового профиля, соотношения про- и противовоспалительных цитокинов будет способствовать получению информации о тяжести патологического процесса, его прогнозе.
Методика исследований. Исследования выполнены в условиях ООО «СП Вязнова-товка» Воронежской области на коровах голштинской породы с продуктивностью 6500-7000 кг. В опыт включены клинически здоровые коровы (n=8) и коровы с хроническим эндометритом (n=10) через 60-90 дней после отёла. Диагноз на хронический эндометрит устанавливали при проведении трансректальных и ультразвуковых исследований в соответствии с «Методическим пособием по профилактике бесплодия у высокопродуктивного молочного скота» (Воронеж, 2010). Ультразвуковые исследования выполнены с использованием УЗИ сканера Easy-Scan CURVE, оборудованного датчиком с частотой 4,5-8,0 Мгц. От всех коров, включённых в опыт, отобраны пробы крови для определе-
ния уровня цитокинов, а также экспрессии генов этих цитокинов. В крови определено содержание фактора некроза опухоли альфа (ФНОа), интерлейкина-2 (ИЛ-2), интерлейки-на-4 (ИЛ-4) и интерлейкина-10 (ИЛ-10) методом ИФА с использованием видоспецифичных тест-систем Elisa Kit (Cloud-Clone Corp., USA). Относительный уровень экспрессии генов про- и противовоспалительных цитокинов определён путём выделения РНК из крови, используя набор РНК-Экстран (Синтол, Россия). При проведении реакции обратной транскрипции для получения кДНК использовали амплификатор «Терцик» («НПО ДНК-Технология», Россия) с применением набора реактивов MMLV RT kit («Евроген», Россия). В дальнейшем проведена ПЦР-реакция с учётом праймеров для интерлейкинов (ИЛ -1а, ИЛ -1ß, ИЛ -10). Полимеразная цепная реакция проведена на детектирующем амплификато-ре «ДТлайт» (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия) с готовой коммерчески доступной смесью для PCR 5Х qPCRmix-HS LowROX (Ев-роген, Россия).
Цифровой материал подвергали математической обработке с использованием пакета прикладных программ Statistica 6.0.
Результаты исследований и их обсуждение. Содержание в крови клинически здоровых и больных хроническим эндометритом коров про- и противововспалительных цитокинов представлено в таблице 1. Установлено, что уровень ФНОа в крови коров с хроническим эндометритом выше на 31,1 % (Р<0,05) по сравнению с клинически здоровыми животными, ИЛ-2 - в 2,11 раза (Р<0,001). Концентрация противовоспалительных цитокинов у больных коров ниже по сравнению с клинически здоровыми животными. Так, уровень ИЛ-4 у них ниже в 1,73 раза (Р<0,01), ИЛ-10 - в 1,6 раза (Р<0,001).
Таблица 1 - Содержание цитокинов в крови клинически здоровых и больных хроническим эндометритом коров
Показатели Группы животных
клинически здоровые, n=8 хронический эндометрит, n=10
ФНОа, пг/мл 166,3±13,8 218,1±11,9*
ИЛ-2, пг/мл 41,1±3,1 86,6±5,9***
ИЛ-4, пг/мл 92,2±8,7 53,3±6,1**
ИЛ-10, пг/мл 44,5±2,6 27,8±1,9***
Примечание: * - Р<0,05; **- Р<0,01; ***- Р<0,01 по сравнению с клинически здоровыми животными
Относительная экспрессия генов ФНОа и ИЛ-2 представлены на рисунке 1. Установлено, что уровень относительной экспрессии
генов ФНОа у больных хроническим эндометритом коров выше в 3,1 раза (Р<0,001), чем у клинически здоровых животных.
0,1 0,09 0,08 0,07 0,06 0,05 0,04 0,03 0,02 0,01 0
0,095±0,004
0,031±0,002
клинически здоровые
ФНОа
хроническим эндометрит
0,06 0,05 0,04 0,03 0,02 0,01 0
0,018±0,001
клинически здоровые
ИЛ-2
0,054±0,003
хроническим эндометрит
Рисунок 1 - Относительный уровень экспрессии генов ФНОа и ИЛ-2 у клинически здоровых и
больных хроническим эндометритом коров
Относительный уровень экспрессии ИЛ-2 у больных животных также превышал показатели клинически здоровых в 3,0 раза (Р<0,001).
Результаты изучения экспрессии генов противовоспалительных цитокинов (ИЛ-4, 10) в крови клинически здоровых и с хроническим эндометритом животных представлены на рисунке 2.
Установлено, что уровень относительной экспрессии генов ИЛ-4 при развитии воспалительного процесса в эндометрии ниже на 32,1 % (Р<0,05), ИЛ-10 - на 51,2 (Р<0,001) соответственно, чем у животных без отклонений со стороны органов воспроизводства, что свидетельствует о преобладании провоспалительных процессов над противовоспалительными.
0,03 0,025 0,02 0,015 0,01 0,005 0
0,028±0,002
клинически здоровые ИЛ-4
0,019±0,001
хроническим эндометрит
0,05
0,045
0,04
0,035
0,03
0,025
0,02
0,015
0,01
0,005
0
0,043±0,002
клинически здоровые
ИЛ-10
0,021±0,001
хроническим эндометрит
Рисунок 2 - Относительный уровень экспрессии генов ИЛ-4 и ИЛ-10 у клинически здоровых и
больных хроническим эндометритом коров
Выводы. Результаты проведённых ис- 1,31-2,11 раза содержании в крови коров с следований свидетельствуют о повышенном в хроническим эндометритом провоспалитель-
ных цитокинов по сравнению с клинически здоровыми при одновременном снижении в 1,6-1,73 раза противовоспалительных, указывающих на развитие патологического процесса воспалительного характера в органах воспроизводства у животных.
Уровень относительной экспрессии генов свидетельствует о дисбалансе между экспрессией про- и противоспалительных цитокинов. Преобладание относительной экспрессии генов провоспалительных цитокинов (ФНОа, ИЛ-2) в 3,0-3,1 раза над противовоспалительными (ИЛ-4, ИЛ-10) говорит об истощении и разбалансировке системы общей и локальной защиты организма коров при длительном течении воспалительного процесса в эндометрии.
Список литературы
1. Алешкин В. А. Иммунология репродукции / В. А Алешкин, А. Н. Ложкина, Э. Д. Загородная // - Чита, - 2004. - 79 с.
2. Бондарев И. В. Структурная организация эндометрия коров при хронических воспалительных заболеваниях матки / И. В. Бондарев, В. И. Михалёв, И. С. Толкачев // Учёные записки УО «Витебская ордена «Знак Почёта» государственная академия ветеринарной меди-
цины». - 2019. - Том. 55. - Вып. 4. - С. 12-15.
3. Дубовикова М. С. Фармакотерапия хронического неспецифического эндометрита у коров / М. С. Дубовикова: Автореф. дис. ... канд. вет. наук. - Краснодар, - 2017. - 18 с.
4. Карташов С. Н. Гормональные нарушения в этиологии хронических эндометритов у коров / С. Н. Карташов, Р. В. Клименко, Е. В. Карташова, К. И. Грибов // Ветеринария и кормление. -2010. - №4. - С. 22-30.
5. Назаров М. В. Совершенствование комплексных методов лечения эндометритов у коров / М В. Назаров, Е. А. Коноваленко, Д. П. Винокурова, М. И. Потемина // Молодой ученый. - 2017. - №9. - С. 179-184.
6. Нежданов А. Г. Гормональный и цитоки-новый профиль крови молочных коров в ранний период гестации / А. Г. Нежданов, С. В. Шабунин, В. И Михалёв [и др.] // Российская сельскохозяйственная наука. - 2020. - № 2. -С. 70-73.
7. Симбирцев А. С. Цитокины в патогенезе и лечении заболеваний человека / А. С. Сим-бирцев. - СПБ: Фолиант, - 2018. - 512 с.
8. Quinn K. H. Decidual regulatory T cells in placental pathology and pregnancy complications / K. H. Quinn, M. M. Parast // Am. J. Reprod. Immunol. - 2013. - Vol. 69. - Is. 6. - P. 533-538.
DOI: 10.48612/sbornik-2024-1-79 УДК 619:616.72:636.7
РЕНТГЕНОГРАФИЯ КАК МЕТОД ДИАГНОСТИКИ ДИСПЛАЗИИ ТАЗОБЕДРЕННОГО СУСТАВА У СОБАК
Бородин Валентин Юрьевич, аспирант
Семененко Марина Петровна, д-р вет. наук, доцент
ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии»,
г. Краснодар, Российская Федерация
В статье изложены результаты рентгенографии нижних конечностей собаки породы американский булли, позволившие выявить степень поражения тканей и признаки патологических изменений, характерных для дисплазии тазобедренных суставов. Данный метод, применяемый в условиях ветеринарных клиник, позволяет подтвердить предварительно визуально поставленный диагноз, являясь «золотым стандартом» для оценки и состояния суставов и диагностики дисплазии тазобедренного сустава.
Ключевые слова: собака; патология тазобедренного сустава; рентгенография; дисплазия
RADIOGRAPHY AS A METHOD FOR DIAGNOSING HIP DYSPLASIA IN DOGS
