Цитогенетическое и биохимическое обследование беременных женщин с инфекционными заболеваниями

Чшиева Фатима Таймуразовна; Скупневский Сергей Валерьевич; Майсурадзе Лиана Васильевна; Чопикашвили Лидия Васильевна

УДК 575.224.4

ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКОЕ И БИОХИМИЧЕСКОЕ ОБСЛЕДОВАНИЕ БЕРЕМЕННЫХ ЖЕНЩИН С ИНФЕКЦИОННЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ

1 Институт биомедицинских исследований ВНЦ РАН и РСО-Алания, г. Владикавказ 2 Северо-Осетинская государственная медицинская академия, г. Владикавказ

Поступила в редакцию 03.10.2011

В 72-часовой культуре лимфоцитов периферической венозной крови беременных женщин с инфекционными заболеваниями наблюдается увеличение частоты клеток с хромосомными аберрациями, дисбаланс в системе «перекисное окисление липидов - антиоксидантная защита» (ПОЛ-АОЗ).

Ключевые слова: хромосомные аберрации, кластогенез, перекисное окисление липидов, ферменты антиоксидантной системы

В Государственном докладе о состоянии и об охране окружающей среды и природных ресурсов РСО-А в 2007 г. отмечается высокое загрязнение почвы г. Владикавказа солями тяжелых металлов (свинцом, кадмием, цинком и др.). Общеизвестно, что тяжелые металлы опасны не только для жителей, которые имеют непосредственный контакт с ними, но и для их будущих поколений, так как влияют на репродуктивное здоровье населения, которое является маркером, биологическим индикатором экологического состояния окружающей среды. В последние десятилетия также существенно изменилась характеристика инфекционных заболеваний репродуктивной системы у женщин, наблюдается резкое возрастание вирусной и бактериальной обсемененности.

Цель работы: проведение комплексного обследования беременных женщин с инфекционными заболеваниями, которое включало: определение частоты хромосомных аберраций в культуре лейкоцитов периферической крови и анализ биохимических показателей (малонового диальдегида, церулоплазмина, суперок-сиддисмутазы, каталазы, билирубина, холестерина, щелочной фосфатазы, аланин- и аспар-таттрансаминаз).

Чшиева Фатима Таймуразовна, кандидат биологических наук, младший научный сотрудник. E-mail: [email protected]

Скупневский Сергей Валерьевич, кандидат биологических наук, младший научный сотрудник. E-mail: [email protected]

Майсурадзе Лиана Васильевна, кандидат медицинских наук, доцент

Чопикашвили Лидия Васильевна, доктор биологических наук, заведующая медико-генетическим отделом

Методика исследования. Всего обследовано 35 человек, из которых 9 доноров составили группу здоровых людей (средний возраст 25 лет); 9 человек - беременные женщины в сроке 26-37 недель (средний возраст 33 года); 17 человек - беременные женщины (в сроке 16-40 недель) с инфекционными заболеваниями, такими как: бактериальный вагиноз (5 человек), вирусные инфекции (цитомегаловирус - ЦМВ, вирус простого герпеса - ВПГ) - 3 человека; дрожжевой кольпит (3 человека), уреоплазмоз (2 человека) и 4 беременные женщины, у которых вирусоносительство сочеталось с другими инфекционными заболеваниями. Средний возраст в группе инфицированных беременных женщин был равен 30 лет.

Взятие крови у каждого донора производили из локтевой вены дважды - до начала лечения и в первые 24 часа после завершения курса. По результатам цитогенетического анализа, проведенного у больных женщин до лечения, судили о влиянии заболевания на наследственные структуры клетки и состояние антиоксидантного статуса организма. Результаты анализа после общепринятой терапии свидетельствовали о комплексном воздействии лечения и заболевания на целостность хромосом и антиоксидантный статус беременных женщин [2]. Для анализа хромосомных аберраций лимфоциты периферической крови культивировали макрометодом общепринятой методики [1]. Фиксацию клеточного материала осуществляли на 72-м часу культивирования. На каждого больного анализировали по 200 метафазных пластинок: 100 до и 100 после лечения. Всего проанализировано 5200 метафаз-ных пластинок.

1660

Определение активности церулоплазми-на (ЦП) проводили модифицированным методом Ревина [7], активность каталазы (КТ) определяли по методу Beutler [9], а супероксид-дисмутазы (СОД) - по аутоокислению адреналина в щелочной среде [8]. Активность ами-нотрансфераз определяли по методу Райтмана-Френкеля (АЛТ, АСТ), щелочной фосфатазы (ЩФ) кинетическим методом по нарастанию окраски и-нитрофенола диагностическими наборами LaChema (Чехия), содержание холестерина определяли кинетическим методом, концентрацию общего и прямого билирубина (БО, БП) определяли методом Мэллой-Эвелина с помощью наборов VitalDiagnostics (Россия) на биохимическом анализаторе Chem Well (США) [7]. Статистическую обработку производили по критерию Стьюдента.

Результаты исследования. Представлены результаты комплексного обследования женщин г. Владикавказа, которое показало наличие мутационной нагрузки у этой категории граждан (табл. 1-3). Так, цитогенетическое обследование беременных женщин с инфекционными заболеваниями свидетельствует о повышении средней

частоты хромосомных аберраций (ХА) в данной группе по сравнению с контролем. Как видно из табл. 1 в группе инфицированных женщин уровень мутаций был в 1,7 раз выше чем у здоровых беременных женщин и в 2,3 раза выше среднего уровня ХА здоровых людей.

Исследования показали, что количество клеток с ХА у больных варьировало в широких пределах от 2 до 6%. Частота хромосомных поломок у женщин, в анамнезе которых сочеталось вирусоносительство с другими нозоло-гиями, была выше среди других исследуемых. Обследование беременных женщин с инфекционными заболеваниями после проведенной терапии не выявило (табл. 1) значительного роста частоты ХА (различия статистически недостоверны). Полученные результаты свидетельствуют об отсутствии комутагенных эффектов применяемой терапии и/или снижением кластогенного воздействия на организм обследованных, связанного с проведенной терапией и применением в ее составе антимутагена с антиоксидантными свойствами - аскорбиновой кислоты [3].

Таблица 1. Цитогенетическое обследование беременных женщин

Обследуемые группы людей Кол-во проана-лизирова нных метафаз Всего клеток с аберрациями (М±т), % Аберрации (на 100 клеток) Гепы (на 100 леток) Полиплоидия (на 100 клеток)

одиночные фрагменты хрома-тид-ные обмены парные фрагменты хромо со-мные обмены

здоровые (п=9) 900 1,8±0,4 0,8 0,16 0,16 0,66 4,0 0,2

здоровые беременные (п=9) 900 2,4±0,5 1,4 - 0,7 0,3 0,2 0,1

беременные с инфекционными заболеваниями до терапии (п=17) 1700 4,1±0,5** 1,2 1,03 1,81 5,5 0,3

беременные с инфекционными заболеваниями после терапии (п=17) 1700 4,7±0,5** 1,0 1,4 2,30 4,2

Примечание: **р<0,001 по сравнению с контролем (здоровые беременные).

Таблица 2. Изучение системы ПОЛ-АОЗ у беременных женщин

Обследуемые группы людей ЦП, мг/л М±т МДА, мкмоль/л, М±т СОД, % ин-гибирования, М±т КТ х104, МЕ/г НЬ, М±т

здоровые (п=9) 134,0±14,0 17,5±1,8 68,1±0,9 11,0±1,4

беременные (п=9) 210,0±21,0 21,1±2,2 66,1±1,4 11,5±1,6

беременные с инфекционными заболеваниями до терапии (п=17) 308,0±29,0** 28,0±5,7** 49,0±2,2** 11,5±1,5

беременные с инфекционными заболеваниями после терапии (п=17) 339,0±27,0** 31,4±6,9** 52,6±2,1** 8,5±1,8*

Примечание: *p<0,05; **р<0,001 по сравнению с контролем (здоровые беременные женщины)

1661

Проведенные исследования крови на содержание продукта перекисного окисления липидов - малонового диальдегида (МДА) и активности ферментов антиоксидантной защиты выявили изменения изучаемых показателей у инфицированных беременных женщин. Так, анализ результатов свидетельствует о повышении концентраций МДА у больных женщин по сравнению со здоровыми донорами в 1,3 раза (табл. 2). Увеличение концентраций МДА у больных, выявленные в нашей работе, согласуются с известными сведениями [6] об

Проведенные исследования крови на содержание маркеров цитолиза отдельных клеток (гепатоциты, сердечная мышца, эритроциты и др.) - АЛТ и АСТ, выявили незначительные изменения изучаемых показателей у инфицированных беременных женщин, которые после терапии снижались.

Выводы: результаты проведенного комплексного исследования выявили увеличение уровней хромосомного мутирования и рост свободнорадикальных процессов в организмах беременных женщин с инфекционными заболеваниями. В результате проведенного цитоге-нетического обследования было выявлено значимое превышение среднего числа клеток с ХА в группе больных беременных женщин по сравнению со здоровыми беременными (4,1% против 2,4% соответственно). Полученные данные согласуются с известными сведениями о возможном мутагенном эффекте инфекционных заболеваний [4, 5] и показывают необходимость антимутагенной профилактики у этой категории больных, перспективы использования с этой целью препаратов с антиоксидан-ными свойствами [10].

интенсификации свободнорадикальных процессов ПОЛ, наблюдаемых при большинстве острых заболеваний и состояний. После лечения концентрации МДА в крови беременных женщин изменились незначительно, отличия недостоверны, что, видимо, свидетельствует об эффективности лечения. Определение активности ферментов АОЗ показало, что, у обследованных беременных женщин с инфекционными заболеваниями, изучаемые показатели достоверно отличались от контрольных.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:

1. Бочков, Н.П. Метод учета хромосомных повреждений как биологический индикатор влияния факторов внешней среды на человека. - М., 1974. 34с.

2. Дурнев, А.Д. Комутагенез - новое направление исследований в генотоксикологии / А.Д. Дурнев, С.Б. Середенин // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 2003. Т. 135, № 6. С. 604-612.

3. Дурнев, А.Д. Мутагены - скрининг и фармакологическая профилактика воздействий / А. Д. Дурнев, С.Б. Середенин. - М.: Медицина, 1998. 328 с.

4. Ильинских, Н.Н. Биологические факторы мутагенеза / Н.Н. Ильинских, А.Г. Семенов, М.В. Романова, Е.Н. Ильинских // Актуальные проблемы биологии, медицины и экологии: сб. науч. работ.

- Новосибирск. 2004. Вып. 3, № 1. C 218.

5. Ильинских, Н. Н. Кластогенный эффект агентов инфекционной природы // Актуальные проблемы биологии, медицины и экологии: сб. науч. работ.

- Новосибирск. 2004. Вып. 1. С. 245.

6. Казимирко, В. К. Антиоксидантная система и ее фунционирование в организме // Медицинская газета «Здоровье Украины». 2004. №98.

7. Камышников, В.С. Справочник по клинико-биохимическим исследованиям и лабораторной диагностике. - М.: МЕДпресс-информ, 2009. 920 с.

Таблица 3. Биохимическое обследование беременных женщин

Обследуемые группы людей АЛТ, мккат/л, М±т АСТ, мккат/л М±т К де Рит иса Холестерин., ммоль/ л, М±т БП, мкмол ь/л, М±т БО, мкмол ь/л, М±т %конь юг бил-лир-на ЩФ U/L М±т

здоровые (п=9) 0,068 ±0,05 0,088±0,07 1,29 4,6±0,4 1,4±0,2 3,9±0,4 27,8 87±11

беременные (п=9) 0,071±0,06 0,082±0,07 1,2 4,9±0,4 1,2±0,2 3,6±0,3 33,3 134±15

беременные с инфекционными заболеваниями 0,070±0,06 0,056±0,06 0,8* 5,8±0,5 1,4±0,2 3,8±0,4 36,8 159±21

до терапии (п=17)

беременные с инфекционными заболеваниями 0,098 ±0,06 0,101±0,06 1,0 5,1±0,4 1,9±0,3 5,3±0,5 36,2 147±25

после терапии (п=17)

Примечание: *p<0,05 по сравнению с контролем (здоровые беременные женщины)

1662

8. Сирота, Т.В. Новый подход в исследовании процесса аутоокисления адреналина и использование его для измерения активности супероксиддисму-тазы // Вопросы медицинской химии. 1999. Т. 45, №3. С. 263-272.

9. Справочник по лабораторным методам исследования / под ред. Л.А. Даниловой. - СПб.: Питер, 2003. 736 с.

10. Voronina, E.S. Protective Effect of Vitamins in Induced Mutagenesis / E.S. Voronina, A.D. Durnev, A.K. Zhanataev et al. // Micronutrients and Health Research. - New York: Nova Science Publishers, 2008. Ch. X. P. 279-291.

CYTOGENETIC AND BIOCHEMICAL RESEARCH OF PREGNANT WOMEN WITH THE INFECTIOUS DISEASES

1 Institute of Biomedical Researches VSC RAS and RSO-Alanija, Vladikavkaz 2 North Ossetia State Medical Academy, Vladikavkaz

Has arrived in edition of 10/3/2011

In 72-hours culture of lymphocytes of peripheral blue blood at pregnant women with infectious diseases the increase in frequency of cells with chromosomal aberrations, a disbalance in system «peroxide oxidation of lipids - antioxidant protection» is observed.

Key words: chromosomal aberrations, clustogenesis, peroxide oxidation of lipids, enzymes of antioxidant system

Fatima Chshieva, Candidate of Biology, Minor Research Fellow. E-mail: [email protected]

Sergey Skupnevskiy, Candidate of Biology, Minor Research fellow. E-mail: [email protected]

Liana Maysuradze, Candidate of Medicine, Associate Professor Lidiya Chopikashvili, Doctor of Biology, Chief of the Medical-genetic Department

1663

CYTOGENETIC AND BIOCHEMICAL RESEARCH OF PREGNANT WOMEN WITH THE INFECTIOUS DISEASES

Текст научной работы на тему «Цитогенетическое и биохимическое обследование беременных женщин с инфекционными заболеваниями»