CC BY
107
Приложение
ных ХЛЛ. У 108 (85%) больных были стадии B/C по Binet, у 53 (58%) из 91 - ХЛЛ без мутаций VH-генов, у 69 (58%) из 118 - содержание P2M выше 4 мг/л; 97 - завершили лечение. До первого цикла от пневмонии умер 1 больной. Сняты с терапии из-за непереносимости ритуксимаба 2 больных; доступны для промежуточной и финальной оценки ответа - 94 больных.
Результаты и обсуждение. Эрадикация минимальной остаточной болезни в крови после 2 циклов была достигнута у 19 (20%) из 94 больных, из них у 8 клинический ответ после 2 циклов был полным и они получили еще 2 цикла FCR (всего 4 цикла). При финальной оценке ответа у 3 больных в костном мозге определялась МОБ. Достигли полной ремиссии с эрадикации МОБ 5 больных, не достигли после 2 циклов клинической полной ремиссии (остаточная лимфа-денопатия и спленомегалия) 11 из 19 больных. Эти больные получили все 6 циклов терапии. Достигли полной ремиссии с эрадикацией МОБ с ранним ответом 8 из 11 больных. Эра-
дикация МОБ после 2 циклов предсказывала полную ремиссию: 14 (82%) больных из 17 достигли полной ремиссии, по сравнению с 21 (28%) из 75 в оставшейся группе больных (р <0,0005). У 9 больных не получено ответа на терапию, из них у 7 наблюдалась прогрессия, у 1 - стабилизация, у 1 -развитие трансфузионнозависимой парциальной красноклеточной аплазии (ПККА) после 2 циклов. Рефрактерность к терапии статистически значимо ассоциировалась с делецией p17 (p = 0,0001), содержанием P2M выше 4 мг/л (р = 0,02) и аномальным соотношением СЛЦ (р = 0,013).
Заключение. Наши данные свидетельствуют, что у части больных, даже с ранним ответом, МОБ может выявляться в костном мозге после 4 циклов. Эрадикация МОБ после 2 циклов лучше всего предсказывает достижение полной ремиссии. Сочетанная оценка содержания P2M и СЛЦ предоставляет простой и достоверный способ, предсказывающий рефрактерность к терапии.
"Double-hit" лимфомы
Т.Н. Обухова, Е.А. Барях, Ю.Ю. Лорие, С.А. Черныш, Т.И. Колошейнова, Петрова Г.Д., Е.С. Нестерова, Е.В. Римашевская,
А.А. Семенова, А.У. Магомедова, Е.Е. Звонков, Е.Н. Паровичникова, Г.А. Алимова, И.В. Клеина, А.М. Ковригина, И.Б. Капланская, И.А. Воробьев, С.А. Луговская, Н.Н. Тупицын, С.К. Кравченко, Е.В. Домрачева ФГБУ Гематологический научный центр Минздравсоцразвития России, Москва
Введение. Транслокации локуса гена C-MYC/8q24 являются цитогенетическими маркерами лимфомы Беркитта (ЛБ), но могут выявляться в редких случаях других лимфатических опухолей в качестве вторичного хромосомного нарушения. "Double-hit" лимфомы характеризуются наличием транслокаций C-MYC в сочетании с другими транслокациями в повторяющихся точках разрывов, такими как BCL2/18q21, BCL6/3q27 и CCND1/11q13.
Материалы и методы. За 12-летний период в лаборатории кариологии ГНЦ "Double-hits" выявлены у 13 больных В-клеточными лимфомами (8 женщин и 5 мужчин) в возрасте от 37 до 79 лет (средний возраст 59 лет). Стандартное цитогенетическое исследование и исследование методом флюоресцентной in situ гибридизации (FISH) выполнено 10 больным, у 3 - только парафиновые блоки были доступны для FISH исследования. Для FISH использовали ДНК-пробы: LSI C-MYC/IGH, cep 8 DF TP; LSI C-MYC BAP; LSI BCL-2/IGH DF TP; LSI BCL-2 BAP; LSI BCL-6 BAP; LSI CCND1/IGH DF TP и LSI CCND1 BAP (Abbott); XL IGL BAProbe и XL IGK BAP (MetaSystems).
Результаты и обсуждение. У 6 из 8 первичных больных диагностирована диффузная В-крупноклеточная лимфомой (В-ККЛ), у 1 - фолликулярная лимфома (ФЛ), у 1 - острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ). У 2 больных транслокации C-MYC выявлены в рецидиве заболевания (1 - ФЛ, 1 - лимфома из клеток мантийной зоны (ЛКМЗ), через 9 лет и 8 мес соответственно от момента ремиссии. У 1 больного с MGUS и 1 больного ММ через 2 и 5 лет соответственно заболевание прогрессировало в C-MYC+ плазмобластный лейкоз и экстрамедуллярную плазмоцитому. У 2 больных диффузной В-ККЛ транслокации C-MYC при FISH не выявлялись в дебюте, но обнаружены через 5 и 8 мес в прогрессии заболевания. У 7 больных транслокации C-MYC выявлялись в сочетании с перестройками BCL-2 (ДБККЛ - у 4, ОЛЛ - у 2, ФЛ - у 1);
у 3 больных ДБККЛ с BCL-6; у 3 больных (ЛКМЗ - у 1, множественная миелома (ММ) - у 2) с CCND1. Характерные для лимфомы Беркитта (ЛБ) транслокации C-MYC с Ig хромосомными партнерами выявлены у 6 больных: IgH/14q32 - у 3, включая сложную транслокацию t(8;11 ;14)(q24;q13;q32) у больного с экстрамедуллярной плазмоцитомой; IgT, /22q11 - у 2, IgK /2p12 - у 1. У 7 больных были выявлены не встречающиеся при ЛБ транслокации C-MYC с не-Ig хромосомными партнерами. У 1 больного диффузной В-ККЛ в составе тетра-плоидного клона обнаружены транслокации IgH/14q32 в обоих аллелях - t(8;14)(q24;q32) + t(14;18)(q32;q21). Ki-67~100% наблюдалась во всех случаях, за исключением 1 больного ЛКМЗ (~40%). У 9 больных морфологическая и иммунологическая картина соответствовала Беркиттоподобной лимфоме. Во всех случаях клиническое течение характеризовалось быстрой прогрессией, продвинутыми стадиями заболевания, высоким уровнем ЛДГ, экстранодальными очагами поражения и высокой летальностью независимо от интенсивности полихимиотерапии. Медиана выживаемости составила 5,5 мес.
Заключение. Double-hit" лимфомы являются преимущественно экстранодальными агрессивными опухолями с определенными клиническими и морфологическими чертами лимфомы Беркитта; преобладают женщины; средний возраст 59 лет; характеризуются химиорезистентностью и крайне низкой выживаемостью больных.
Диагностика "double-hit" лимфом возможна только на основании цитогенетического исследования. Цитогенетически характеризуются наличием первичного хромосомного нарушения (BCL2/18q21, BCL6/3q27 или CCND1/11q13) и перестройками С-MYC, чаще с не-Ig хромосомными партнерами. Вторичные транслокации С-MYC могут выявляться как в момент установления диагноза, так и возникать в ходе болезни (прогрессии/рецидиве) при отсутствии в дебюте.
Цитогенетическая диагностика лимфатических опухолей
Т.Н. Обухова, Ю.Ю. Лорие, Е.А. Никитин, Е.А. Барях, А.И. Захарова, Е.И. Зубашева, Б.Б. Красильникова, В.И. Воробьев, Е.Е. Звонков,
А.У. Магомедова, У.Л. Джулакян, Е.А. Илюшкина, Е.С. Нестерова, Г.А. Алимова, Л.А. Шишигина, И.В. Клеина, М.Л. Коннова,
Л.В. Дяченко, Л.А. Гребенюк, И.Б. Капланская, А.М. Ковригина, И.А. Воробьев, Р.С. Самойлова, С.К. Кравченко, Е.В. Домрачева
ФГБУ Гематологический научный центр Минздравсоцразвития России, Москва
Введение. В Гематологическом научном центре (ГНЦ) и центромерными зондами является неотъемлемой частью
стандартное цитогенетическое исследование и флюорес- диагностики лимфом. Исследуют любую ткань, вовлеченную
центная гибридизация in situ (FISH) с локусспецифическими в опухолевый процесс: кровь, костный мозг, лимфатические
17
Гематол. и трансфузиол., 2012, т. 57, № 3
узлы, селезенка, биоптаты опухоли различной локализации. FISH-исследование может также выполняют на мазках крови и костного мозга, отпечатках лимфатических узлов, селезенки и др. и срезах с парафиновых блоков биопсийного материала.
Материалы и методы. К цитогенетическим нарушениям, имеющим диагностическую ценность относят: транслокации t(11;14)(q13;q32) при лимфоме из клеток мантийной зоны, t(14;18)(q32;q21) и вариантные t(18q21/Bcl-2) при фолликулярной лимфоме, t(8;14)(q24;q32) и вариантные t(8q24/ c-MYC) при лимфоме Беркитта, t(3q27/Bcl-6) при диффузных В-крупноклеточных лимфомах, t(11;18)(q21;q21) при МАЛТ-лимфоме, t(2;5)(p23;q35) и другие t(2p23/ALK) при анаплазированной T-крупноклеточной лимфоме, инверсия inv(14)(q11;q32) при Т-пролимфоцитарном лейкозе, изохромосома i(7)(q10) в сочетании с трисомией 8 хромосомы при Т- у5 гепатолиенальной лимфоме.
Результаты и обсуждение. При других опухолях не выявлено единого цитогенетического маркера, но определен спектр наиболее часто встречающихся аномалий хромосом,
позволяющих уточнить вариант заболевания и определить его прогноз. К таким хромосомным нарушениям относятся: делеции 13q14, 11q23/ATM, 17p13/p53 и трисомия хромосомы 12 при хроническом В-клеточном лимфолейкозе; делеция/моносомия хромосомы 13, транслокации t(11;14) (q13;q32), t(4;14)(p16;q32) и t(14;16)(q32;q22) при множественной миеломе.
Заключение. На материале о 1804 больных (лимфома из клеток мантийной зоны - 178, фолликулярная лимфома -117, лимфома Беркитта - 98, диффузные В-крупноклеточные лимфомы - 182, лимфома маргинальной зоны селезенки -56, МАЛТ-лимфома - 38, хронический В-клеточный лимфолейкоз - 912, множественная миелома - 181, Т-клеточные лимфомы - 42) показана диагностическая ценность, прогностическое значение хромосомных нарушений и разработан алгоритм цитогенетического обследования больных с лимфатическими опухолями: выбор материала и методов исследования и последовательность их применения с учетом клинических, гистологических и иммунологических данных.
Оценка влияния фотохимической обработки и у-облучения тромбоконцентратов на экспрессию маркера апоптоза контаминирующих лимфоцитов
М.Д. Огородникова1, Т.Н. Заботина 2, А.А. Борунова 2, З.Г. Кадагидзе 2, Е.В. Огородникова 2, А.Д. Онуфриевич 1, О.А. Рукавицын 1
1ФБУ Главный военный клинический госпиталь им. акад. Н.Н. Бурденко МО РФ; 2ФГБУ Российский онкологический научный центр
им. Н.Н.Блохина РАМН, Москва
Введение. С присутствием в компонентах крови, в том числе, тромбоконцентратах (ТК), резидуальных лейкоцитов донора, связан широкий спектр посттрансфузионных реакций. у-Облучение компонентов крови, используют с 1970-х годов и является "золотым стандартом" для профилактики реакции "трансплантат против хозяина", ассоциированной с трансфузиями (РТПХ-АТ) за счет инактивации жизнеспособных контаминирующих лимфоцитов. Фотохимическая обработка (ФХО) ТК применяется недавно с целью инактивации патогенов и аллогенных лейкоцитов и рассматривается как альтернатива для у-облучения в плане профилактики РТПХ-АТ. Механизм действия ФХО заключается в неизбирательном блокировании генетического материала, присутствующего в ТК. Сравнительное изучение ультраструктурных изменений лимфоцитов в результате физико-химической обработки до настоящего времени не проводилось. Цель работы - проведение сравнительной оценки экспрессии маркера апоптоза резидуальных лимфоцитов в ТК, после у-облучения и после ФХО.
Материалы и методы. Изучено 16 специально полученных пулов тромбоцитов, которые в последующем не применяли для трансфузий. Их получали из лейкотромбослоя 5 доз цельной крови с добавлением 65% PAS. В рамках процедуры заготовки выполнялась лейкоредукция. у-Облучение выполняли в дозе 25 Гр. ФХО проводили с применением фотосенсибилизатора амотосалена и длинноволнового ультрафиолета А. Исследовали пробы пулов тромбоцитов: необработанных на 1-е и 5-е сутки хранения и пробы после ФХО и после у-облучения также на 1-е и 5-е сутки хранения. Методом проточной цитоме-
трии выделяли контаминирующие лимфоциты (использовали моноклональные антитела, меченные флюорохромом PE Cy-7 к панлимфоцитарному маркеру CD45) и определяли на этих лимфоцитах экспрессию маркера апоптоза - фосфатидилсерина PS (связывание Annexin V) с применением ANNEXIN V-FITC Kit.
Результаты и обсуждение. В образцах необработанных пулов тромбоцитов в 1-е сутки хранения экстернализация PS была выявлена только на 10,32 ± 3,79% лимфоцитов. После ФХО и у-облучения при исследовании в 1-е сутки не выявлено статистически значимого (р = 0,78 и р = 0,94) изменения уровня экспрессии маркера апоптоза на лимфоцитах по отношению к таковому до обработки в 1-е сутки хранения: экс-тернализация PS после ФХО наблюдалась на 10,62 ± 4,8%, а после у-облучения - на 10,34 ± 3,95% лимфоцитов. Хранение необработанных пулов тромбоцитов в течение 5-и суток также не привело к статистически значимому (р = 0,51) увеличению в них доли апоптотически-измененных лимфоцитов: экстернализацию PS определили на 10,84 ± 2,81% лимфоцитов. После хранения ФХО образцов в течение 5 суток экс-тернализацию PS выявили на 12,63 ± 4,95% лимфоцитов, что не являлось статистически значимым (р = 0,59) увеличением по сравнению с 1-м днем хранения. К 5-м суткам хранения после у-облучения выявлено статистически значимое увеличение (р = 0,007) маркера апоптоза до 13,22 ± 3,16%.
Заключение. Инактивация генетического материала кон-таминирующих ТК лимфоцитов с помощью у-облучения и ФХО не приводит к их гибели путем апоптоза в течение всего регламентированного срока хранения ТК.
Обнаружение хромосомных аберраций определяет прогноз заболевания у взрослых больных с Ph-негативным острым лимфобластным лейкозом.
Результаты Российского многоцентрового исследования - RALL-группа
Е.Н. Паровичникова1, Ю.Р. Давидян1, Е.В. Домрачева1, С.Н. Бондаренко2, Т.С. Капорская3, Т.В. Рыльцова4,
Е.В. Кондакова5, О.Ю. Баранова6, В.Г. Савченко1
1 ФГБУ Гематологический научный центр Минздравсоцразвития России, Москва; 2 Санкт-Петербургский государственный медицинский университет; 3 Областная клиническая больница, Иркутск; 4 Областная клиническая больница,Тула; 5 Областная клиническая больница, Сургут;
6 Российский онкологический научный центр, Москва.
Введение. Острые лимфобластные лейкозы (ОЛЛ) взрос- Например, частота обнаружения таких неблагоприятных хро-
лых отличаются от ОЛЛ у детей, как по эффективности хими- мосомных аберраций, как t(9;22) и t(4;11), у взрослых значи-
отерапии, так и по многим биологическим характеристикам. тельно выше, чаще определяются миелоидные антигены на
18
