Научная статья на тему 'Цитофлюориметрические исследования некоторых представителей рода Silene L. Алтайской горной страны'

Цитофлюориметрические исследования некоторых представителей рода Silene L. Алтайской горной страны Текст научной статьи по специальности «Биологические науки»

CC BY
204
37
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
АЛТАЙСКАЯ ГОРНАЯ СТРАНА / ХРОМОСОМЫ / КАРИОТИП / ФЛУОРЕСЦЕНЦИЯ / ЦИТОФЛЮОРИМЕТРИЯ / БИОРАЗНООБРАЗИЕ / ГЕНОМ / ПОЛИПЛОИДИЯ / SILENE / DAPI / ALTAI MOUNTAIN COUNTRY / CHROMOSOMES / KARYOTYPE / FLUORESCENCE / DAPI FLUORESCENT DYE / CYTOFLUOROMETRY / BIODIVERSITY / GENOME / POLYPLOIDY

Аннотация научной статьи по биологическим наукам, автор научной работы — Скапцов Михаил Викторович, Белкин Денис Леонидович

Целью работы стало цитофлюориметрическое исследование гербарных образцов Silene chlorantha (Willd.) Ehrh. и Silene turgida Bieb. ex с территории Алтайской горной страны. Основными задачами явились изучение кариотипа Silene vulgaris (Moench) Garcke., S. vulgaris и цитофлюориметрическое изучение S. chlorantha и S. turgida. При цитофлюориметрических исследований использовался гербарный материал S. chlorantha и S. turgida и живой материал S. vulgaris. Исследования проводились согласно стандартным протоколам для определения уровня полиплоидии с использованием кита CyStain® UV Precise P к поточному цитометру Partec CyFlow (Partec, Германия). Экспериментальные образцы для хромосомного анализа брались из кончиков проростков S. vulgaris, при предфиксационной обработке корешки помещались в 0,002 М раствор оксихинолина, а затем промывались в дистиллированной воде. Подготовленные образцы фиксировались в растворе уксусного алкоголя (Фиксатор Кларка). Для получения монослоя клеток проводили раздавливание наиболее интенсивно окрашенных участков материала. Полученные препараты исследовали методом прямой световой микроскопии. Установлено хромосомное число S. vulgaris, произрастающей на территории Алтайской горной страны. Данные цитометрии показали, что хромосомное число S. turgida равно хромосомному числу S. vulgaris. Исследованы хромосомные составы видов S. turgida и S. chlorantha с помощью методов цитофлюориметрии. Хромосомное число S. turgida 2n = 24, а размер генома — 2С ≈ 1,13 пикограмм. Хромосомное число и размер генома S. chlorantha по отношению к S. vulgaris равны 2n = 48, размер генома 2С ≈ 2,26 пикограмм.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

CYTOFLUOROMETRY STUDY OF SOME SPECIES OF THE GENERA SILENEL. OF THE ALTAI MOUNTAIN COUNTRY

The research purpose was a cytofluorimetry study of herbarium samples of Silene chlorantha (Willd.) Ehrh. and Silene turgida Bieb. ex from the Altai Mountain Country. The research objectives involved Silene vulgaris (Moench) Garcke. karyotype investigation, cytofluorometry study of S. vulgaris, and cytofluorometry study of S. chlorantha and S. turgida. A live material of S. vulgaris and herbarium specimens of S. chlorantha and S. turgid were investigated. The studies were conducted according to the standard protocols of polyploidy level estimation using the kit CyStain® UV Precise P for a Partec CyFlow flow cytometer (Partec, Germany). Experimental samples for chromosome analysis were taken from the apexes of S. vulgaris sprouts. During pre-fixing the samples were placed into 0.002 М oxyquinoline solution and then rinsed with distilled water. The prepared samples were fixed in Clarke’s Fixate. We crashed intensive colored parts to have one layer of cells. Those specimens were studied by light microscopy. The chromosome number of S. vulgaris growing in the Altai Mountain Country was revealed. The cytometry data revealed that the chromosome number of S. turgida is equal to that of S. vulgaris. The chromosome structure of the species S. turgida and S. chlorantha were studied by cytofluorimetry. The chromosome number of S. turgida is 2n = 24, and the genome size is 2С ≈ 1.13 pcg. The chromosome number and the genome size of S. chlorantha are 2n = 48, and 2С ≈ 2.26 pcg respectively.

Текст научной работы на тему «Цитофлюориметрические исследования некоторых представителей рода Silene L. Алтайской горной страны»

Cyperaceae (Осока Carex L.), Cannabaceae (Хмель Humulus L.), Urticaceae (Крапива Urtica L.) и др. Фитомелиоративные растения преобладают в семействе Salicaceae (Ива Salix L.), а одиночно встречаются в семействах: Pinaceae (Сосна Pinus L.),

Poaceae (Пырейник Elymus L., Овсяница Festuca L.), Cyperaceae (Осока Carex L.), Fabaceae (Карагана Caragana Lam.) и др.

Для нужд целлюлозно-бумажного производства наиболее активно используются виды семейства Pinaceae (Ель Picea A. Dietr., Лиственница Larix Miller, Сосна Pinus L.), а также семейства Salicaceae (Populus L.).

Самыми малочисленными являются две сырьевые группы, каждая из которых включает всего по одному представителю (табл.), например, каучуконосный род Бубенчик Adenophora Fischer в семействе Campanulaceae и камеденосный представитель семейства Pinaceae (Лиственница Larix Miller).

Выводы

Таким образом, на основании проведенных исследований можно сделать следующие выводы:

- инвентаризация полезных растений лесной флоры Кузнецкого Алатау позволяет говорить о возможностях более широкого их применения;

- приведённые данные являются, по сути, прогнозной оценкой ресурсов полезных растений в лесной флоре Кузнецкого Алатау.

Библиографический список

1. Некратова А.Н. Лесная флора Кузнецкого Алатау: автореф. дис. ... канд. биол. наук. — Томск, 2005. — 20 с.

2. Вульф Е.В., Малеева О.Ф. Мировые ресурсы полезных растений. Пищевые, кормовые, технические, лекарственные и др. — Л., 1969.

3. Соболевская К.А., Якубова А.И., Пленник Р.Я. и др. Полезные растения За-

падной Сибири и перспективы их интродукции. — Новосибирск, 1972.

4. Атлас ареалов и ресурсов лекарственных растений СССР. — М., 1976.

5. Пленник Р.Я., Гонтарь Э.М., Тюрина Е.В. и др. Полезные растения Хакасии: Ресурсы и интродукция. — Новосибирск, 1989.

6. Минаева В.Г. Лекарственные растения Сибири. — Новосибирск, 1991.

7. Блинова К.Ф., Вандышев В.В., Комарова М.Н. и др. Растения для нас: справочное издание. — СПб., 1996.

8. Овеснов С.А. Конспект флоры Пермской области. — Пермь, 1997.

9. Федоров А.А. Изучение растительных ресурсов // Проблемы современной ботаники. — М.; Л., 1965.

10. Некратова Н.А., Некратов Н.Ф., Михайлова С.И. и др. Лекарственные растения Кузнецкого Алатау. Ресурсы и биология. — Томск, 1991.

11. Некратова Н.А. К изучению биологических особенностей Rhaponticum cartha-moides (WiNd.) Н]т и Paeonia anomala L. // Флора, растительность и растительные ресурсы Сибири. — Томск, 1987. — С. 133-144.

12. Положий А.В., Некратова Н.А., Ти-мошок Е.Е. Методические указания по изучению ресурсов лекарственных растений Сибири. — Абакан, 1988.

13. Некратова Н.А. Научно-методические подходы к изучению природных ресурсов лекарственных растений // Проблемы региональной экологии. Региональное природопользование. — Томск, 1994. — Вып. 2. — С. 108-110.

14. Некратова Н.А., Некратов Н.Ф. Опыт

изучения ресурсов лекарственных растений в Алтае-Саянской горной и в Томской областях // Современные проблемы природопользования, охотоведения и зверопроиз-водства: матер. науч.-практ. конф., по-

свящ. 80-летию ВНИИОЗ. — Киров, 2002а. — С. 484-485.

+ + +

УДК 576.316.353.7+582.669.2

М.В. Скапцов, Д.Л. Белкин

ЦИТОФЛЮОРИМЕТРИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ НЕКОТОРЫХ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ РОДА SILENE Ь. АЛТАЙСКОЙ ГОРНОЙ СТРАНЫ

Ключевые слова: Алтайская горная

страна, Silene, хромосомы, кариотип, флуоресценция, DAPI, цитофлюоримет-рия, биоразнообразие, геном, полиплоидия.

Введение

Изучение хромосом и хромосомных чисел у различных видов гвоздичных было начато достаточно давно в работах таких авторов, как: Heitz, 1926; Blackburn, 1928;

Blackburn, Morton, 1957; Жукова, 1967, Гви-нианидзе, 1976 и др. [1-5].

Для территории Алтайской горной страны (АГС) у большей половины видов в настоящее время известны числа хромосом. Так, у рода Silene L. большая часть видов является диплоидами, а основное число хромосом n = 12 (n = 24).

Существует множество групп по всему миру, виды которых характеризуются высокой степенью полиплоидии, а происхождение их не достаточно исследовано. Зачастую, отклонения внутри вида на незначительное число хромосом можно объяснить некачественным подсчетом. Благодаря ци-тофлюориметрическому анализу возможно определение различия хромосомных чисел в подобных группах.

У представителей семейства наблюдается корреляция плоидности в зависимости от географического и поясного распространения. Наибольшее количество полиплоидов в высокогорных областях.

Таким образом, несмотря на широкое и интенсивное изучение хромосом, в настоящее время использовать систематически данные по хромосомным числам практически не удается, поскольку виды с различной плоидностью мало отличаются друг от друга.

Целью работы является цитофлюори-метрическое исследование гербарных образцов Silene chlorantha (Willd.) Ehrh. и Silene turgida Bieb. ex Bunge с территории Алтайской горной страны.

Задачи:

- изучение кариотипа Silene vulgaris (Moench) Garcke.;

- цитофлюориметрическое изучение S. vulgaris;

- цитофлюориметрическое изучение S. chlorantha и S. turgida.

Материалы и методы

При исследовании использовались собственные гербарные сборы с территории АГС, а также гербарные сборы, хранящиеся в Гербарии Южно-Сибирского ботанического сада АлтГУ (ALTB).

Для цитофлюориметрических исследований использовался гербарный материал S. chlorantha и S. turgida, а также живой материал (проростки) S. vulgaris. Исследования проводились согласно стандартным протоколам для определения уровня полиплоидии с использованием кита CyStain® UV Precise P, к поточному цитометру Partec CyFlow (Partec, Германия).

В качестве контроля материала для ци-тофлюориметрии представителей рода Silene применялся живой материал S. vulgaris. Вследствие разнообразных лите-

ратурных данных о хромосомном составе (2n = 24; 48), размере генома (2C = 1,13) и широком распространении вцнутривидо-вой полиплоидии был проанализирован гаплоидный кариотип последнего [6-8].

Экспериментальные образцы для хромосомного анализа брались из кончиков проростков S. vulgaris в промежутки времени с 3:00 до 4:00 ч, характеризующиеся наиболее активным делением клеток.

При предфиксационной обработке корешки помещались в 0,002 М раствор окси-хинолина на 3 ч, а затем промывались 3 раза по 5 мин. в дистиллированной воде. Подготовленные образцы фиксировались в растворе уксусного алкоголя (Фиксатор Кларка) в течение суток при температуре 4оС. После фиксации материал промывали в трех сменах 96%-ного этанола, затем переносили в 70%-ный раствор спирта для хранения.

В результате исследований оптимальным красителем, в нашем случае ацетокармин, корешки после предобработки, хранившиеся в 70%-ном растворе спирта, согревали и переносили в фиксатор Кларка, приготовленный на 45%-ной уксусной кислоте, на 30 мин. Затем переносили в ацетокармин и выдерживали на кипящей водяной бане 6 мин. После чего оставляли для окрашивания на 30 мин. при комнатной температуре

[9].

Для получения монослоя клеток проводили раздавливание наиболее интенсивно окрашенных участков материала в 45%-ном растворе уксусной кислоты под покровным стеклом. Полученные препараты исследовали методом прямой световой микроскопии.

Результаты и обсуждение

Исходя из анализа кариотипа, а также цитогенетических процессов, установлено хромосомное число S. vulgaris, произрастающей на территории Алтайской горной страны, 2n = 24 (рис. 1).

В результате анализа кариотипа и литературных данных о размере генома, равного 1,13 пикограмм и хромосомному числу S. vulgaris, используемого в нашей работе в качестве контроля, исследованы хромосомные составы некоторых представителей рода Silene с неизвестными хромосомными числами, такими как S. turgida и S. chlorantha, с помощью методов цитофлюо-риметрии. Характерным для S. vulgaris на цитофлюорограмме является наличие двух пиков, исключая «шумы», которые располагаются в левой части графика, размер которых варьирует в зависимости от качества образца (рис. 2).

Исходя из данных цитометрии, можно предположить, что хромосомное число S.

turgida равно хромосомному числу S. vulgaris в связи с расширением флуоресценции 2-го пика, а S. chlorantha в два раза

превышает хромосомное число S. vulgaris в связи с появлением 3-го пика (рис. 3, 4).

Д

И»:>т

/I

Рис. 1. Окрашенные ацетокармином хромосомы в (А) интерфазе, (Б) профазе, (В) метафазе, (Г) анафазе и (Д) Гаплоидный кариотип S. vulgaris

Рис. 2. Показатели цитофлюориметрии, характерные для S. vulgaris

Уровень флуоресценции Рис. 3. Сравнительный анализ S. vulgaris (Moench) Garcke и S. turgida Bieb. ex Bunge.

Уровень флуоресценции

Рис. 4. Сравнительный анализ S. vulgaris (Moench) Garcke и S. chlorantha (Willd.) Ehrh

Показатели достоверности и интерпретация результатов позволяют утверждать, что хромосомное число S. turgida Bieb. ex Bunge. 2n = 24, а размер генома 2С~ 1,13 пикограмм. Хромосомное число и размер генома S. chlorantha (Willd.) Ehrh по отношению к S. vulgaris (Moench) Garcke равны 2n = 48 и 2С«2,26 соответственно.

Библиографический список

1. Heitz E. Der Nachweis der Chromo-somen. Vergleichende Studien uber ihre Zahl, Grosse und Form im Pflanzenreich. I // Zeitschr. Bot., 1926. — Vol. 18. — N. 11-12. — P. 625-681.

2. Blackburn K.B. Chromosome number in Silene and the neighbouring genera / / Zeitschr. induct. Abstamm. u. Vererbung-slehre, 1928. — Suppl. 1. — P. 439-446.

3. Blackburn K.B., Morton J.K. The incidence of polyploidy in the Caryophyllaceae of Britain and of Portugal // New Phytol., 1957. — Vol. 56. — N. 3. — P. 344-351.

4. Жукова П.Г. К познанию хромосомных чисел растений крайнего Северо-Востока СССР // Бот. журн., 1967. — Т. 52. — № 7. — С. 983-987.

5. Гвинианидзе З.И. О двух представителях субнивального флористического комплекса // Заметки по систематике и гео-

графии растений, 1976. — Вып. 32. —

С. 57-60.

6. Franzen R., Gustavsson L.A. Chromosome numbers in flowering plants from the high mountains of Sterea Ellas, Greece // Willdenowia, 1983. — Vol. 13. — P. 101-106.

7. Horovitz A., Dolberger R. The genetic basis of gender in Silene vulgaris // Heredity, 1983. — Vol. 51. — P. 371-376.

8. Sirokа J., Lysаk M.A., Dolezel J, Kejnovsky E., Vyskot B. Heterogeneity of rDNA distribution and genome size in Silene spp. // Chromosome Research, 2001. — Vol. 9. — P. 387-393.

9. Барыкина Р.П. Справочник по ботанической микротехнике. Основы и методы. — М.: Изд-во МГУ, 2004. — 312 с.

Авторы выражают благодарность к.б.н., доценту кафедры ботаники ФГБОУ ВПО АлтГУ Сергею Владимировичу Смирнову за ценные консультации и помощь при обработке данных.

Работа выполнена в рамках программы стратегического развития ФГБОУ ВПО АлтГУ на 2012-2016 годы «Развитие Алтайского государственного университета в целях модернизации экономики и социальной сферы Алтайского края и регионов Сибири», мероприятие «Конкурс грантов» (№2012.312.1.3).

+ + +

УДК 582.677:580.006(517.17) О.О. Вронская,

Т.В. Роднова ИНТРОДУКЦИЯ ПУЗЫРНИЦЫ ФИЗАЛИСОВОЙ (PHYSOCHLANA PHYSALOIDES (L.) G. DON FIL., SOLANACEAE) В КУЗБАССКОМ БОТАНИЧЕСКОМ САДУ

Ключевые слова: Пузырница физалисо-вая, онтогенез, интродукция.

Введение

Род пузырница — Physoсhlaina G. Don fil. (сем. Solanaceae) насчитывает 6 видов, произрастающих в Средней Азии, Монголии, Японии, Китае, на Дальнем Востоке. Название рода происходит от греческого physa — пузырь, ^laina — наружная одежда. В Сибири произрастает один вид — пузырница физалисовая Physoсhlaina physaloides (L.) G. Don fil. [1].

Так как данный вид на территории Кемеровской области является редким, необходимо его всестореннее изучение как в природе, так и в условиях культуры.

Процесс становления жизненной формы Physoсhlaina physaloides в ходе онтогенеза до настоящего времени никем не изучался.

Цель работы — изучение особенностей биологии и морфологии, способов размножения, феноритмов и этапов онтогенеза Physoсhlaina physaloides в условиях интродукционного опыта в Кузбасский ботанический сад.

Материалы и методика

Материалом для исследования послужили коллекционные фонды Кузбасском ботаническом саду. Фенологические наблюдения проводились проводились согласно методики фенологических наблюдений в ботанических садах [2]. Изучение этапов онтогенеза

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.