CC BY
11
Оригинальные статьи
ОПУХОЛИ ЖЕНСКОЙ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ|И^'2|02^ TUMORS OF FEMALE REPRODUCTIVE SYSTEM Том 17 / Vol. 17
DOI: 10.17650/1994-4098-2021-17-2-23-31
Циркулирующие опухолевые клетки при раке молочной железы: клинико-молекулярные параллели
А.В. Зюзюкина1, 2, М.О. Ватрушкина1, Т.Н. Замай1, О.С. Коловская1, 3, Г.С. Замай1, 3, А.С. Кичкайло1, 3, Р.А. Зуков1, 2
1ФГБОУВО «Красноярский государственный медицинский университет им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого» Минздрава России; Россия, 660022 Красноярск, ул. Партизана Железняка, 1;
2КГБУЗ «Красноярский краевой клинический онкологический диспансер им. А.И. Крыжановского»; Россия, 660133 Красноярск, ул. 1-я Смоленская, 16;
3ФГБНУ«Федеральный исследовательский центр «Красноярский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук»; Россия, 660036 Красноярск, Академгородок, 50
Контакты: Алена Владимировна Зюзюкина alena-vz@mail.ru
Введение. Рак молочной железы (РМЖ) - наиболее распространенный вид злокачественных новообразований среди женщин, имеющий высокий уровень метастазирования. Для увеличения эффективности противоопухолевой терапии необходима ранняя неинвазивная диагностика.
Цель исследования - определить содержание циркулирующих опухолевых клеток (ЦОК) и их производных в периферической крови с помощью аптамера MDA-231, полученные результаты сравнить с клинико-молекулярными характеристиками РМЖ.
Материалы и методы. В исследование включены 22 пациентки с РМЖ. Детекцию ЦОК и циркулирующих опухолевых микроэмболов проводили в 3,5 мл крови больных РМЖ с помощью аффинного клеткам РМЖ аптамера MDA-231, меченного флуоресцентным красителем Cy3. Подсчет ЦОК в мазках образцов крови проводили с помощью флуоресцентной и сканирующей лазерной микроскопии.
Результаты и выводы. C помощью аптамера MDA-231 проанализировано содержание ЦОК и циркулирующих опухолевых микроэмболов в периферической крови больных РМЖ различных молекулярных подтипов. Выявлена зависимость между количеством ЦОК и молекулярно-биологическим подтипом РМЖ. Полученные результаты демонстрируют возможное прогностическое значение использования ЦОК для мониторинга эффективности противоопухолевой терапии и контроля над рецидивами РМЖ.
Ключевые слова: циркулирующие опухолевые клетки, циркулирующие опухолевые микроэмболы, аптамер, рак молочной железы, молекулярно-биологический подтип рака молочной железы
Для цитирования: Зюзюкина А.В., Ватрушкина М.О., Замай Т.Н. и др. Циркулирующие опухолевые клетки при раке молочной железы: клинико-молекулярные параллели. Опухоли женской репродуктивной системы 2021;17(2):23-31. о DOI: 10.17650/1994-4098-2021-17-2-23-31.
- £
£
Circulating tumor cells in breast cancer: clinical and molecular parallels «
s
A. V. Zyuzyukina1,2, M.O. Vatrushkina1, T.N. Zamay1, O.S. Kolovskaya1,3, G.S. Zamay1,3, A.S. Kichkailo1,3, R.A. Zukov1,2
1V.F. Voyno-Yasenetskiy Krasnoyarsk State Medical University, Ministry of Health of Russia; 1 Partizana Zheleznyaka St., Krasnoyarsk
660022, Russia; s
2A.I. Kryzhanovskiy Krasnoyarsk Regional Clinical Oncology Dispensary; 161-ya Smolenskaya St., Krasnoyarsk 660133, Russia;
3Federal Research Center «Krasnoyarsk Research Center», Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences; 50 Akademgorodok, °
Krasnoyarsk 660036, Russia 4
о
Contacts: Alena Vladimirovna Zyuzyukina alena-vz@mail.ru s
S
Background. Breast cancer (BC) is the most common type of malignant neoplasm among women, with a high rate m of metastasis. Early non-invasive diagnosis is required to increase the effectiveness of anticancer therapy. S
Том 17 / Vol. 17
Objective: to determine the content of circulating tumor cells (CTCs) and their derivatives in the peripheral blood using the MDA-231 aptamer, compare the results obtained with the clinical and molecular characteristics of BC. Materials and methods. The study included 22 patients with BC. Detection of CTCs and circulating tumor microemboli was carried out in 3.5 ml of the blood of BC patients with the help of the MDA-231 aptamer which is affine for breast cancer cells, labeled with the fluorescent Cy3 dye. The count of CTCs in the blood samples was performed using fluorescent and laser scanning microscopy.
Results and conclusions. The content of CTCs and circulating tumor microemboli in the peripheral blood of patients with BC of various molecular subtypes was analyzed using the MDA-231 aptamer. The relationship between the number of CTCs and the molecular biological subtype was revealed. The obtained results show the possible prognostic value of CTCs use for monitoring effectiveness of anticancer therapy and control of recurrence of BC.
Key words: circulating tumor cells, circulating tumor microemboli, aptamer, breast cancer, molecular biological subtype of breast cancer
For citation: Zyuzyukina A.V., Vatrushkina M.O., Zamay T.N. et al. Circulating tumor cells in breast cancer: clinical and molecular parallels. Opukholi zhenskoy reproduktivnoy systemy = Tumors of female reproductive system 2021; 17(2): 23-31. (In Russ.). DOI: 10.17650/1994-4098-2021-17-2-23-31.
CT
о
о £ £ re
о S S
iz
Введение
Рак молочной железы (РМЖ) — наиболее распространенный вид злокачественных новообразований среди женщин Европы, Америки и Азии. Согласно данным Международного агентства по исследованию рака, в 2020 г. РМЖ занял лидирующую позицию среди онкологических заболеваний, составляя 11,7 %, зарегистрировано более 2,2 млн новых случаев заболевания, при этом около 684 тыс. связаны со смертельным исходом [1]. В мире наблюдается постоянный рост числа онкологических больных, в частности, отмечается, что в период с 1975 по 2000 г. произошло его удвоение. Прогнозируется, что к 2030 г. число онкологических больных станет в 3 раза больше, а смертность возрастет до 17 млн случаев.
В последнее десятилетие в области диагностики РМЖ достигнуты значительные успехи, в частности, с помощью моноклональных антител. Тем не менее в использовании и производстве антител имеются недостатки, ограничивающие их применение в качестве диагностических препаратов, наиболее важными из которых являются следующие: 1) процедура получения антител, которую трудно масштабировать, не влияя на их характеристики; 2) возможность вирусного или бактериального загрязнения производственного процесса, которое способно изменять качество продукции; 3) ограниченный срок хранения вследствие возможной необратимой денатурации; 4) сложность химической модификации антител для придания им новых свойств и высокая стоимость разработки и производства моноклональных антител [2]. Именно поэтому актуален поиск новых инновационных препаратов, заменяющих моноклональные антитела.
В настоящее время вследствие достигнутых успехов в области молекулярной биологии стало понятно, что наиболее приемлемой заменой моноклональным антителам могут стать их синтетические функциональные аналоги — аптамеры. Аптамеры, состоящие из ко-
ротких ДНК- или РНК-олигонуклеотидов (15—100 нт.), образуют сложные третичные или квадрупольные структуры путем гибридизации комплементарных последовательностей [3]. Большие площади поверхности аптамеров, несмотря на их малую молекулярную массу (5—30 кДа), обеспечивают их высокое сродство с молекулярными мишенями [2]. Константы диссоциации (И) аптамеров, как правило, находятся в диапазоне от нескольких микро- до нескольких пикомолей [4], что сопоставимо с аффинностью антител. В настоящее время синтез аптамеров автоматизирован, что обеспечивает экономичное и быстрое объемное производство с минимальным изменением от партии к партии, в отличие от моноклональных антител. Кроме того, структурная стабильность аптамеров обеспечивает им длительный период хранения. Аптамеры способны выдерживать широкий диапазон температур, их функциональная третичная структура легко восстанавливается после тепловой денатурации. Другим значительным преимуществом аптамеров является их способность к химическим модификациям.
Рак молочной железы — онкологическое заболевание, характеризующееся очень ранним метастазирова-нием в лимфатические узлы, костную ткань и висцеральные органы. Поэтому для увеличения эффективности противоопухолевой терапии и ее мониторинга необходимо раннее выявление РМЖ и его метастазов. Одним из важных агентов метастазирования являются циркулирующие опухолевые клетки (ЦОК), представляющие собой эпителиальные клетки карцином, попадающие в кровоток в ходе развития злокачественного новообразования. Три и более соединенные вместе ЦОК, имеющие пролиферативный потенциал, формируют циркулирующие опухолевые микроэмболы (ЦОМ), которые могут разрывать стенки капилляров и закупоривать сосуды, давая новые метастазы [5]. Определение количества ЦОК в крови больных РМЖ поможет оценить риск рецидива или прогрессирования
Том 17 / Vol. 17
заболевания, провести количественный мониторинг в реальном времени, идентифицировать терапевтические цели и механизмы резистентности к терапии [6, 7].
Цель настоящего исследования — определить содержание ЦОК и ЦОМ в периферической крови с помощью аптамера MDA-231, полученные результаты сравнить с клинико-молекулярными характеристиками РМЖ.
Материалы и методы
В исследование включены 22 пациентки со злокачественными новообразованиями молочной железы, получавшие лечение в отделении онкомаммологиче-ской хирургии КГБУЗ «Красноярский краевой клинический онкологический диспансер им. А.И. Крыжанов-ского» в 2017 г. Возраст пациенток составил 35—79 лет, в среднем — 54 ± 12 лет, из них 3 (13,6 %) пациентки проходили лечение по поводу злокачественного новообразования, в 2 случаях проводили комбинированное лечение по поводу рака контралатеральной молочной железы, у 1 женщины проведено радикальное хирургическое лечение по поводу базалиомы кожи. Неоадъювантную полихимиотерапию получили
4 (18,2 %) пациентки с размером опухолевой ткани Т3—4 с различными молекулярно-биологическими подтипами.
Детекцию ЦОК и ЦОМ проводили из 3,5 мл крови пациенток через 1,0—1,5 ч после сбора в вакутейнеры с гепарином. ЦОК выделяли из крови с помощью аптамера MDA-231, конъюгированного с магнитными шариками, а затем окрашивали аптамером MDA-231, меченным Cy5. Из полученной суспензии делали мазки, которые фиксировали в метаноле и окрашивали красителем Романовского—Гимзе. ЦОК подсчитывали с использованием флуоресцентного микроскопа Axiostar Plus (Carl Zeiss Group, Германия) и анализировали с помощью лазерной сканирующей микроскопии.
Классификацию РМЖ проводили согласно системе TNM (7-е издание, 2010 г.) [8]. Патоморфологиче-скую стадию заболевания определяли на основании заключения морфолога после изучения тканей, удаленных во время операции. Распределение пациенток по стадиям заболевания было следующим: I стадия —
5 (22,7 %), II стадия - 12 (54,6 %), III стадия - 5 (22,7 %) пациенток. Положительный статус регионарных лимфатических узлов выявлен у 45,5 % пациенток, из них у 30 % на основании патологоанатомического заключения было установлено поражение N2 и N3.
Гистологическую степень злокачественности (G) определяли по Ноттингемской системе. Согласно данной классификации оценивали 3 признака: формирование трубочек, ядерный полиморфизм, число митозов.
I степень (низкая злокачественность) — 3-5 баллов,
II степень (умеренная злокачественность) - 6-7 баллов,
III степень (высокая злокачественность) — 8—9 баллов
[9, 10]. Распределение больных по степени злокачественности: I степень — 18,2 %, II степень — 72,7 %, III степень — 9,1 % пациенток.
Экспрессию рецепторов эстрогенов (ЭР) и прогестерона (ПР) оценивали полуколичественным методом при помощи Allred Scoring System [11]. Определение экспрессии HER2/neu проводили с помощью имму-ногистохимии. Результат 0—1+ — отрицательная экспрессия, 2+ — сомнительная, 3+ — положительная [12]. Всем больным с сомнительной экспрессией выполнялась флуоресцентная гибридизация in situ (fluorescence in situ hybridization, FISH).
Распределение больных по биологическим подтипам РМЖ осуществляли на основании следующих критериев [13]:
1) люминальный А: положительный статус ЭР (по Allred) и ПР (>6), экспрессия HER2/neu (0—1+), уровень Ki-67 <20 %;
2) люминальный В HER2-отрицательный: положительный статус ЭР и/или ПР (<5 по Allred), уровень Ki-67 >20 %. Люминальный В HER2-положитель-ный: положительный статус ЭР и/или ПР, гиперэкспрессия HER2/neu (3+), уровень Ki-67 любой;
3) HER2-сверхэкспрессирующий РМЖ: гиперэкспрессия HER2/neu (3+), отсутствие экспрессии ЭР и ПР, уровень Ki-67 любой;
4) трижды негативный РМЖ: отсутствие экспрессии ЭР и ПР, отсутствие экспрессии HER2/neu (<2+), уровень Ki-67 любой.
Распределение пациенток по биологическим подтипам РМЖ представлено в табл. 1.
Таблица 1. Распределение пациенток по биологическим подтипам рака молочной железы
Table 1. Distribution of patients by biological subtypes of breast cancer
Биологический подтип рака молочной железы Число пациенток, n (%)
Biological subtype of breast cancer
Люминальный А Luminal A 2 (9,1)
Люминальный В: Luminal B: HER2- отрицательный HER2-negative HER2-положительный HER2-positive 13 (59,1) 4 (18,2)
НЕК2-сверхэкспрессирующий HER2-overexpressing 1 (4,5)
Трижды негативный Triple negative 2 (9,1)
Всего Total (100)
CT
о
о £ £ re
2J2 0 21 ОПУХОЛИ ЖЕНСКОЙ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ Том 17 / Vol. 17 TUMORS OF FEMALE REPRODUCTIVE SYSTEM
Результаты
Примеры ЦОК из крови больных РМЖ, выделенных и окрашенных с помощью аптамера MDA-231, меченного Су3, представлены на рисунке.
Сводные данные по содержанию ЦОК в крови больных РМЖ представлены в табл. 2. Из таблицы видно, что в крови 90,9 % пациенток были выявлены ЦОК, в периферической крови остальных больных ЦОК не обнаружены. Количественный диапазон ЦОК, выявленных в крови больных РМЖ, варьировал от 0 до 20 клеток в 3,5 мл крови. У 50 % пациенток количество ЦОК соответствовало высокому значению (>5), во всех остальных случаях содержание ЦОК находилось в интервале от 1 до 4 клеток. ЦОМ выявлены в 31,8 % случаев и в большинстве случаев ассоциированы с высоким числом ЦОК.
С целью оценки прогностических возможностей использования аптамера MDA-231 для выявления ЦОК была проведена оценка зависимости количества ЦОК и ЦОМ от показателей экспрессии ЭР и ПР,
рецептора человеческого эпидермального фактора роста 2-го типа; пролиферативной активности; степени дифференцировки опухоли; гистологической структуры опухолевого процесса.
Анализ связи между количеством ЦОК и молекулярным подтипом РМЖ показал, что у больных с лю-минальным А подтипом РМЖ отсутствовали ЦОК. У пациентки с HER2-сверхэкспрессирующим подтипом выявлено 20 ЦОК. При люминальном В (HER2-отри-цательном) подтипе, представленном наибольшим числом клинических случаев, содержание ЦОК в периферической крови находилось в интервале от 2 до 10 клеток. При люминальном В (НЕЯ2-положитель-ном) подтипе количество ЦОК варьировало от 3 до 6 клеток. У больных с трижды негативным подтипом РМЖ количество ЦОК было практически одинаковым и составляло 6—8 клеток. Таким образом, в целом прослеживается определенная взаимосвязь между содержанием ЦОК и молекулярно-биологическим подтипом РМЖ.
Cy3 MDA-231 аптамер ЦОК / Cy3 MDA-231 aptamer CTC
Cy3 MDA-231 аптамер ЦОК от разных пациенток / Cy3 MDA-231 aptamer CTC from different patients
о
о £ £ re
о S
s
re
Cy3 MDA-231 аптамер микроэмбола из 2 клеток / y3 MDA-231 aptamer of a microembolus consisting of 2 cells
Циркулирующие опухолевые клетки (ЦОК), выделенные из крови больныхраком молочной железы и окрашенные с помощью аптамера MDA-231, меченного Cy3
Circulating tumor cells (CTC) isolated from blood of breast cancer patients and stained with Cy3-labeled MDA-231 aptamer
Том 17 / Vol. 17
Таблица 2. Сводная таблица количества циркулирующих опухолевых клеток и циркулирующих опухолевых микроэмболов, выделенных из 3,5мл периферической крови больных раком молочной железы различных молекулярных подтипов
Table 2. Summary table showing the number of circulating tumor cells and circulating tumor microemboli isolated from 3.5 mL of peripheral blood of patients with different molecular subtypes of breast cancer
Пациентка Возраст, лет TNM G ЭР, ПР, Ki-67, HER2 ER, PR, Ki-67, HER2 Количество циркулирующих опухолевых клеток Количество циркулирующих опухолевых микроэмболов
Patient Ä; H Number of circulating 1 tumor cells 1 Number of circulating tumor microemboli
l 50 T3N0M0 2 ЭР - 0, ПР - 0, Ki-6l - l0 %, HER2 - 3 ER - 0, PR - 0, KÍ-67 - 7O %, HER2 - 3 20 1
2 54 T3N1M0 3 ЭР - 0, ПР - 0, Ki-67 - 90 %, HER2 - 1 ER - 0, PR - 0, Ki-67 - 90 %, HER2 - 1 6 0
3 43 TlcNlMO 1 ЭР - l, ПР - 6, Ki-67 - 40 %, HER2 - 1 ER - 7, PR - 6, Ki-67 - 40 %, HER2 - 1 5 0
4 44 T2N1M0 2 ЭР - S, ПР - S, Ki-67 - 40 %, HER2 - 0 ER - S, PR - S, Ki-67 - 40 %, HER2 - 0 10 3
5 3S Т1сШМ0 2 ЭР - S, ПР - 4, Ki-67 - 20 %, HER2 - 2, FISH - отрицательный ER - S, PR - 4, Ki-67 - 20 %, HER2 - 2, FISH - negative 9 0
б 35 T1N1M0 2 ЭР - S, ПР - 3, Ki-67 - 70 %, HER2 - 2, FISH - отрицательный ER - S, PR - 3, Ki-67 - 70 %, HER2 - 2, FISH - negative 10 3
l б0 Т1сШМ0 2 ЭР - 6, ПР - 5, Ki-67 - 70 %, HER2 - 1 ER - 6, PR - 5, Ki-67 - 70 %, HER2 - 1 9 0
S б3 T2N0M0 2 ЭР - S, ПР - S, Ki-67 - 50 %, HER2 - 3 ER - S, PR - S, Ki-67 - 50 %, HER2 - 3 2 0
9 51 Т1сШМ0 2 ЭР - S, ПР - 4, Ki-67 - 40 %, HER2 - 1 ER - S, PR - 4, Ki-67 - 40 %, HER2 - 1 2 0
lO б4 T4N2M0 3 ЭР - S, ПР - S, Ki-67 - 60 %, HER2 - 0 ER - S, PR - S, Ki-67 - 60 %, HER2 - 0 4 0
ll бб Т1сШМ0 2 ЭР - 7, ПР - 5, Ki-67 - 40 %, HER2 - 3 ER - 7, PR - 5, Ki-67 - 40 %, HER2-3 4 0
l2 6s T2N1M0 2 ЭР - S, ПР - l, Ki-67 - 20 %, HER2 - 1 ER - S, PR - 7, Ki-67 - 20 %, HER2 - 1 3 0
13 б! Т1сШМ0 2 ЭР - S, ПР - 5, Ki-67 - 40 %, HER2 - 0 ER - S, PR - 5, Ki-67 - 40 %, HER2 - 0 7 0
l4 60 T2N0M0 2 ЭР - S, ПР - S, Ki-67 - 90 %, HER2 - 0 ER - S, PR - S, Ki-67 - 90 %, HER2 - 0 2 0
l5 44 T3N1M0 2 ЭР - S, ПР - 5, Ki-67 - 20 %, HER2 - 1 ER - S, PR - 5, Ki-67 - 20 %, HER2 - 1 4 2
1б 4l T4N0M0 2 ЭР - S, ПР - l, Ki-67 - 50 %, HER2 - 3 ER - S, PR - 7, Ki-67 - 50 %, HER2 - 3 3 0
ll 68 T2N0M0 1 ЭР - S, ПР - l, Ki-67 - 10 %, HER2 - 0 ER - S, PR - 7, Ki-67 - 10 %, HER2 - 0 0 0
lS 45 Т1сШМ0 1 ЭР - S, ПР - S, Ki-67 - 40 %, HER2 - 1 ER - S, PR - S, Ki-67 - 40 %, HER2 - 1 2 0
l9 45 Т1сШМ0 2 ЭР - S, ПР - S, Ki-67 - 40 %, HER2 - 0 ER - S, PR - S, Ki-67 - 40 %, HER2 - 0 5 1
CT
о
о £ £ re
2l
2 '2 О 21
Том 17 / Vol. 17
Окончание таблицы 2 End of the table 2
Пациентка
2l
22
Возраст, лет
TNM
G
ЭР, ПР, Ki-67, HER2
ER, PR, Ki-67, HER2
20 4б T3N0M0 l ЭР - 8, ПР - б, Kí-67 - l0 %, HER2 - 0 20 4б T3N0M0 l er - 8, PR - б, Kí-67 - l0 %, HER2 - 0
45
79
T3N0M0 2 ЭР - О, ПР - 0, KÍ-67 - 90 %, HER2 - 0 T3N0M0 2 er - 0, PR - 0, Ki-67 - 90 %, HER2 - 0
T^NlM0 2
ЭР - 8, ПР - 8, Ki-67 - 80 %, HER2 - 2, FISH - положительный ER - 8, PR - 8, Ki-67 - 80 %, HER2 - 2, FISH - positive
Примечание. ЭР — рецепторы эстрогенов; ПР — рецепторы прогестерона. Note. ER — estrogen receptors; PR — progesterone receptors.
Количество циркулирующих опухолевых клеток
Количество циркулирующих опухолевых микроэмболов
Number of circulating tumor microemboli
CT
о
о £ £ re
о S S re
Проведенная оценка зависимости количества ЦОК от степени дифференцировки опухоли показала у пациенток с высокодифференцированной опухолевой тканью как отсутствие ЦОК и ЦОМ в крови, так и их наличие. У всех больных с умеренно- и низкодиф-ференцированной опухолью обнаружены ЦОК и представлены в широком диапазоне — от минимального до максимального количества.
У пациенток с метастазами в регионарных лимфатических узлах (N1—3) выявлены ЦОК в периферической крови, у больных со статусом N0 количество ЦОК составляло от 0 до 20.
Все пациентки с неблагоприятными прогностическими факторами (размер опухоли, наличие метастазов в регионарных лимфатических узлах, гистологическая степень злокачественности, биологический подтип) получали лечение в неоадъювантном режиме (табл. 3). У пациенток с трижды негативным и НЕЯ2-сверхэкс-прессирующим подтипами РМЖ отмечен выраженный и полный лечебный патоморфоз, сопровождающийся высокими показателями количества ЦОК (6—20 клеток). Люминальные подтипы РМЖ продемонстрировали умеренную степень патоморфоза и низкие значения ЦОК (3—4 клетки).
Пациентки с наличием злокачественного новообразования в анамнезе представлены в табл. 4. Данные таблицы свидетельствуют о высоком риске рецидива или прогрессирования заболевания у 2 больных РМЖ. Вывод сделан на основании высокого содержания ЦОК, выделенных из периферической крови этих больных.
Обсуждение
Диссеминация опухолевых клеток из первичной опухоли в кровоток является критическим этапом
в опухолевом процессе РМЖ и считается предшественником отдаленных метастазов [14]. По данным литературы, наиболее широко используемое предельное значение количества ЦОК при метастатическом РМЖ составляет 5 ЦОК на 7,5 мл периферической крови [15].
Выполненное исследование выявило взаимосвязь между количеством ЦОК и молекулярно-биологиче-ским подтипом опухоли. Проводимые клинические наблюдения показывают наиболее неблагоприятный результат по показателю общей и безрецидивной выживаемости при HER2-сверхэкспрессирующем и трижды негативном подтипах РМЖ [16]. В нашем исследовании все пациентки с такими подтипами имели высокое содержание ЦОК. При этом люминальный А РМЖ с благоприятным прогнозом продемонстрировал отсутствие опухолевых клеток в периферической крови.
Проведенная оценка зависимости количества ЦОК и ЦОМ от клинико-молекулярных показателей продемонстрировала отсутствие ЦОК у больных с люми-нальным А молекулярно-биологическим подтипом и высокой степенью дифференцировки опухолевой ткани. Минимальное число ЦОК, в нашем исследовании равное 2, отмечается у пациенток со степенью дифференцировки опухоли G2 и отсутствием метаста-зирования в регионарные лимфатические узлы. Для средних и максимальных значений количества ЦОК в крови больных характерно неблагоприятное гистологическое строение опухоли, высокая степень пролиферативной активности.
Необходимо учитывать, что исследуемая группа не была равномерно распределена по анализируемым клиническим признакам. У ряда пациенток, включенных в исследование, имелись факторы, которые могут
0
0
8
l
б
2
ОПУХОЛИ ЖЕНСКОЙ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ TUMORS OF FEMALE REPRODUCTIVE SYSTEM
Том 17 / Vol. 17
Таблица 3. Некоторые диагностические показатели больных раком молочной железы, получавших неоадъювантную терапию Table 3. Some diagnostic parameters of breast cancer patients receiving neoadjuvant therapy
Воз-Паци- раст,
ентка лет TNM G Patient Age,
HIHI
15
16
50 T2N3M0
44 T3N1M0
47 T4N0M0 2
ЭР, ПР, Ki-67, HER2
ER, PR, Ki-67, HER2
Количество циркулирующих опухолевых клеток
ЭР - 0, ПР - 0, 2 Ki-67 - 70 %, HER2 - 3 2 ER - 0, PR - 0,
Ki-67 - 70 %, HER2 - 3
ЭР - 8, ПР - 5, 2 Ki-67 - 20 %, HER2 - 1 2 ER - 8, PR - 5,
Ki-67 - 20 %, HER2 - 1
ЭР - 8, ПР - 7, Ki-67 - 50 %, HER2 - 3 ER - 8, PR - 7, Ki-67 - 50 %, HER2 - 3
20
Количество циркулирующих опухолевых микроэмболов
Неоадъювантное лечение
Neoadjuvan treatment
Трастузумаб + цисплатин Trastuzumab + cisplatin
Степень патоморфоза
Grade of pathomorphosis
III
Доксорубицин + , ".Мет™
ж ж в 1 лимфатическом циклофосфа- ^
^ ^ узле подмышечной мид
области
Doxorubicin + тт .. . . . . , II. Metastasis in 1
cyclophosphamide
Трастузумаб Trastuzumab
an axillary lymph node
II
21
45 T3N0M0 2
ЭР - 0, ПР - 0, Ki-67 - 90 %, HER2 - 0 ER - 0, PR - 0, Ki-67 - 90 %, HER2 - 0
Доксорубицин + циклофосфамид
Doxorubicin + cyclophosphamide
Примечание. ЭР — рецепторы эстрогенов; ПР — рецепторы прогестерона. Note. ER — estrogen receptors; PR — progesterone receptors.
IV
Таблица 4. Клинико-лабораторные данные пациенток со злокачественными новообразованиями в анамнезе Table 4. Clinical and laboratory parameters of patients with a history of malignant tumors
ЭР, ПР, Ki-67, HER2
Количество циркулирующих опухолевых клеток
Количество циркулирующих опухолевых микроэмболов
Злокачественные новообразования в анамнезе
History of malignant tumors
38
T1cN0M0 2
13
67
T1cN0M0 2
ЭР — 8, ПР — 4, Ki-67 — 20 %, HER2 — 2, FISH — отрицательный ER — 8, PR — 4, Ki-67 — 20 %, HER2 — 2, FISH — negative
ЭР — 8, ПР — 5, Ki-67 — 40 %,
HER2 — 0 ER — 8, PR — 5, Ki-67 — 40 %, HER2 — 0
14
60
ЭР - 8, ПР - 8, Ki-67 - 90 %, T2N0M0 2 HER2 - 0 ER - 8, PR - 8, Ki-67 - 90 %, HER2 - 0
2011 г.: злокачественное новообразование молочной железы IIa
(T2N0M0) 2011: stage IIa breast cancer (T2N0M0)
2015 г.: злокачественное новообразование кожи
лица T1N0M0 2011: skin cancer of the face (T1N0M0)
2011 г.: злокачественное новообразование молочной железы IIIa
(T3N0M0) 2011: stage IIIa breast cancer (T3N0M0)
Примечание. ЭР — рецепторы эстрогенов; ПР — рецепторы прогестерона. Note. ER — estrogen receptors; PR — progesterone receptors.
CT
о
о £ £ re
1
1
4
2
3
0
8
1
5
9
0
7
0
2
0
Том 17 / Vol. 17
ОПУХОЛИ ЖЕНСКОЙ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ TUMORS OF FEMALE REPRODUCTIVE SYSTEM
дополнительно влиять на количество ЦОК и их производных, такие как злокачественное новообразование в анамнезе (п = 4) или неоадъювантный режим лечения заболевания (п = 4).
В результате проведенного анализа невозможно выделить единый клинический критерий, который был бы полностью ассоциирован с содержанием ЦОК. Поэтому при оценке количества ЦОК в периферической крови необходимо учитывать основные клинические и молекулярные характеристики опухолевого процесса.
Выводы
Использование аптамера MDA-231 позволяет выявить ЦОК и их производные у больных РМЖ. Полученные результаты указывают на взаимосвязь между количеством ЦОК и молекулярно-биологическим подтипом, а также степенью дифференцировки опухолевой ткани. Проведенное исследование демонстрирует прогностическое значение содержания ЦОК для мониторинга эффективности противоопухолевой терапии и развития рецидивов заболевания.
ЛИТЕРАТУРА/REFERENCES
CT
о
о £ £
<о
1. Breast. Source: Globocan 2020. World Heath Organization. Available at: https:// gco.iarc.fr/today/data/factsheets/ cancers/20-Breast-fact-sheet.pdf.
2. Brody E.N., Gold L. Aptamers as therapeutic and diagnostic agents. J Biotechnol 2000;4(1):5-13.
DOI: 10.1016/s1389-0352(99)00004-5.
3. Ellington A.D., Szostak J.W. In vitro selection of RNA molecules that bind specific ligands. Nature 1990;346(6287):818-22.
DOI: 10.1038/346818a0.
4. Seo H.B., Gu M.B. Aptamer-based sandwich-type biosensors. J Biol Eng 2017;11:11. DOI: 10.1186/s13036-017-0054-7.
5. Yang J., Mani S.A., Weinberg R.A. Exploring a new twist on tumor metastasis. Cancer Res 2006;66(9):4549-52.
DOI: 10.1158/0008-5472. CAN-05-3850.
6. Russano M., Napolitano A., Ribelli G. et al. Liquid biopsy and tumor heterogeneity in metastatic solid tumors: the potentiality of blood samples. J Exp Clin Cancer Res 020;39(1):95.
DOI: 10.1186/s13046-020-01601-2.
7. Banys-Paluchowski M., Reinhardt F., Fehm T. Circulating tumor cells
in metastatic breast cancer: Clinical applications and future possibilities.
Appl Sci 2020;10(9):3311. DOI: 10.3390/app10093311.
8. Edge S.B., Byrd D.R., Compton C.C. et al. AJCC Cancer Staging Manual. 7th ed. New York: Springer; 2010.
9. Bloom H.J., Richardson W.W. Histological grading and prognosis in breast cancer;
a study of 1409 cases of which 359 have been followed for 15 years. Br J Cancer 1957;11(3):359-77. DOI: 10.1038/bjc.1957.43.
10. Elston C.W., Ellis I.O. Pathological prognostic factors in breast cancer. I. The value of histological grade in breast cancer: experience from a large study with long-term follow-up. Histopathology 1991;19(5):403-10. DOI: 10.1111/j.1365-2559.1991. tb00229.x.
11. Hammond M.E., Hayes D.F., Dowsett M. et al. American Society of Clinical Oncology/College of American Pathologists guideline recommendations for immunohistochemical testing
of estrogen and progesterone receptors in breast cancer. J Clin Oncol 2010;28(16):2784-95. DOI: 10.1200/ JCO.2009.25.6529. Erratum in: J Clin Oncol 2010;28(21):3543.
12. Wolff A.C., Hammond M.E., Schwartz J.N. et al. American Society
of Clinical Oncology; College of American
Pathologists. American Society of Clinical Oncology/College of American Pathologists guideline recommendations for human epidermal growth factor receptor 2 testing in breast cancer. J Clin Oncol 2007;25(1):118-45. DOI: 10.1200/jc0.2006.09.2775.
13. Goldhirsch A., Winer E.P., Coates A.S. et al. Panel members. Personalizing
the treatment of women with early breast cancer: highlights of the St Gallen International Expert Consensus on the Primary Therapy of Early Breast Cancer 2013. Ann Oncol 2013;24(9):2206-23. DOI: 10.1093/annonc/mdt303.
14. Janni W.J, Rack B., Terstappen L.W. et al. Pooled analysis of the prognostic relevance of circulating tumor cells in primary breast cancer. Clin Cancer Res 2016;22(10):2583-93.
DOI: 10.1158/1078-0432.CCR-15-1603.
15. Cristofanilli M., Budd G.T., Ellis M.J. et al. Circulating tumor cells, disease progression, and survival in metastatic breast cancer. N Engl J Med 2004;351(8):781—91.
DOI: 10.1056/NEJMoa040766.
16. Parker J.S., Mullins M., Cheang M.C. et al. Supervised risk predictor of breast cancer based on intrinsic subtypes. J Clin Oncol 2009;27(8):1160-7.
DOI: 10.1200/JCO.2008.18.1370.
о S S
iz
Вклад авторов
А.В. Зюзюкина: набор материала, анализ полученных данных, написание текста рукописи; М.О. Ватрушкина: обзор литературы;
Т.Н. Замай: написание текста рукописи, анализ полученных данных;
О.С. Коловская: определение количества циркулирующих опухолевых клеток методами флуоресцентной и сканирующей лазерной микроскопии;
Г.С. Замай: разработка метода выделения циркулирующих опухолевых клеток, выделение циркулирующих опухолевых клеток из периферической крови больных и их окрашивание аптамерами;
А.С. Кичкайло: микроскопия циркулирующих опухолевых клеток с использованием лазерной сканирующей микроскопии, написание текста рукописи, анализ полученных данных;
Р.А. Зуков: разработка дизайна исследования, коррекция/написание текста рукописи. Authors' contributions
Том 17 / Vol. 17
A.V. Zyuzyukina: performing data collection and analysis, writing the article;
M.O. Vatrushkina: reviewing the literature;
T.N. Zamay: writing the article, performing data analysis;
O.S. Kolovskaya: measuring the number of circulating tumor cells using fluorescence microscopy and scanning laser microscopy;
G.S. Zamay: developing the method of circulating tumor cell isolation, isolated circulating tumor cells from peripheral blood of patients and performing
their staining with aptamers;
A.S. Kichkaylo: performing scanning laser microscopy of circulating tumor cells, writing the article, performing data analysis; R.A. Zukov: developing the study design, writing and editing the article.
ORCID авторов / ORCID of authors
А.В. Зюзюкина / A.V. Zyuzyukina: https://orcid.org/0000-0002-6758-4800 М.О. Ватрушкина / M.O. Vatrushkina: https://orcid.org/0000-0002-2318-6296 Т.Н. Замай / T.N. Zamay: https://orcid.org/0000-0002-7493-8742 О.С. Коловская / O.S. Kolovskaya: https://orcid.org/0000-0002-2494-2313 А.С. Кичкайло / A.S. Kichkaylo: https://orcid.org/0000-0003-0690-7837 Р.А. Зуков / R.A. Zukov: https://orcid.org/0000-0002-7210-3020
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
Финансирование. Исследование выполнено без спонсорской поддержки. Financing. The study was performed without external funding.
Соблюдение прав пациентов и правил биоэтики
Протокол исследования одобрен локальным этическим комитетом КГБУЗ «Красноярский краевой клинический онкологический диспансер им. А.И. Крыжановского» № 6 от 22 марта 2016 г. Все пациентки подписали информированное согласие на участие в исследовании. Compliance with patient rights and principles of bioethics
The study protocol was approved by the local Ethics Committee of A.I. Kryzhanovskiy Krasnoyarsk Regional Clinical Oncology Dispensary (protocol No. 6 dated 22.03.2016). All patients gave written informed consent to participate in the study.
CT
о
о £ £ re
Статья поступила: 28.02.2021. Принята к публикации: 29.03.2021. Article submitted: 28.02.2021. Accepted for publication: 29.03.2021.
