CC BY
38
Полунина Ольга Сергеевна, доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой внутренних болезней педиатрического факультета ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, д. 121, тел.: (8512) 52-41-43, е-таП: agma@astranet.ru.
УДК 616.36-005.755-091.8:616.89 © А.В. Дробленков, П.С. Бобков, Н.Р. Карелина, 2013
А.В. Дробленков, П.С. Бобков, Н.Р. Карелина
ЦЕНТРОАЦИНАРНАЯ НАПРАВЛЕННОСТЬ КАПИЛЛЯРИЗАЦИИ И ПЕРИСИНУСОИДАЛЬНОГО ФИБРОЗА ПЕЧЕНИ ПРИ АЛКОГОЛЬНОМ СТЕАТОЗЕ У ЧЕЛОВЕКА
ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный педиатрический медицинский университет»
Минздрава России
Гистологически исследованы численность и строение эндотелиоцитов, перисинусоидальных клеток и макрофагов, соединительно-тканный каркас синусоидов печени в норме и при стеатозе у 10 здоровых людей и при алкогольном стеатозе в перипортальной, центральной и периферической частях ацинуса Раппопорта. В результате исследования установлено, что капилляризация синусоидных капилляров и перисинусоидальный фиброз при алкогольном стеатозе печени у человека более выражены в перипортальной, менее в центроацинарной и слабее всего - в периферической части ацинуса.
Ключевые слова: синусоидные капилляры печени, ацинус печени, перисинусоидлальный фиброз, алкогольный стеатоз печени.
A.V. Droblenkov, P.S. Bobkov, N.R. Karelina
THE CENTROACYNATORY DIRECTION OF CAPILLARIZATION AND PERISINUSOIDAL OF LIVER FIBROSIS AT THE ALCOHOLIC STEATOSIS IN A MAN
There were investigated the quantity and structure of endotheliosytes, perisinusoidal and Kupfer cells of 10 healthy man and alcoholic steatosis in periportal, central and periacinar parts of a liver. In the result there was established that capillarization and perisinusoidal fibrosis at alcoholic damages of a liver in a man were more expressed in periportal less in centroacinar and was the weakest - in periacinar part of liver.
Key words: sinusoidal capillaries of a liver, liver acinus, perisinusoidal fibrosis, alcoholic steatosis of a liver.
Введение. Дискуссионность представления об источниках, направленности и степени выраженности процесса капилляризации и фиброза синусоидов печени при длительной алкогольной интоксикации может быть связана с недостаточной изученностью расположения соустий мельчайших вокругдольковых венул (Вв) с синусоидными капиллярами (СК) печени и численности основных клеток последних. По данным A.M. Rappaport и W.D. Wilson [9, 10], соустья Вв с СК находятся в средней и терминальной частях венул. Известно также, что внутридольковый фиброз начинается с активации этанолом и токсичным ацетальдегидом перисинусоидальных клеток (ПС) и эндотелиоцитов (Э). Их реакция заключается в пролиферации и синтезе коллагеновых волокон (КВ) I, III и IV типов, компонентов основного аморфного вещества [6, 7]. В свете этих данных логично предположить, что наибольшей чувствительностью к этанолу и его метаболитам должны обладать ПС и Э, расположенные вблизи средней и дистальной частей Вв. Определенную роль в перисинусоидальном алкогольном фиброзе должны играть и печеночные макрофаги (ПМ), однако данные об их численности в различных частях ацинуса (или дольки) в доступной печати не найдено. Сведения о количественных изменениях ПМ получены при гепатите С [5]. Чем менее был выражен перисинусоидальный фиброз, тем большее число CD68 макрофагов содержалось в дольках. Противоречия представлений о направленности процесса коллагенизации долек и капилляризации стенки СК также могут быть обусловлены отсутствием систематических сведений о роли всех основных клеток печени, способных синтезировать коллаген. Так, одни авторы [3, 4] полагают, что при длительном воздействии этанола и
токсичного ацетальдегида на печень одновременно активируются как фибробласты стромы портальных трактов (ПТ), так и прилежащие к ней ПС клетки, инициирующие перилобулярный фиброз. Другие считают алкогольный фиброз более выраженным в центре долек и связывают утолщение адвен-тициальной оболочки центральных вен с активацией ближайших к ним клеток Ито [8].
Цель: уточнить источники и направленность процесса капилляризации и фиброза синусоидов печени при алкогольном стеатозе у человека.
Задача: установление изменения численности и строения основных клеток СК в различных частях ацинуса печени при алкогольном стеатозе у человека по сравнению с нормой.
Материалы и методы исследования. Печень человека была исследована у здоровых мужчин в возрасте 24-45 лет. Норму (n = 5) составили умершие вследствие сочетанной травмы при дорожно-транспортном происшествии. Макро- и микроскопические признаки патологических изменений внутренних органов, по данным судебно-медицинского вскрытия, отсутствовали. Вторую группу (n = 5) объединили гистологические признаки стеатоза печени, слабо выраженные признаки алкогольной болезни во внутренних органах, 3-10-летний «алкогольный стаж» и судебно-медицинский диагноз «алкогольная кардиомиопатия». Фрагменты правой доли печени, извлеченные не позже, чем через 12 часов после смерти, фиксировали в 9 % растворе формалина, проводили через спирты и заливали в парафин по стандартной методике.
Для выявления КВ и идентификации клеток в серийных парафиновых срезах толщиной 3 мкм использовали окраску анилиновым синим водным, оранжевым G и кислотным красным по методу Маллори. При помощи микроскопа Leica DM 2500 (Германия), программы морфометрического исследования Imagescope (Россия) подсчитывали количество Э СК, ПС клеток и ПМ на площади 0,03 мм2, прилежащей к строме ПТ с терминальной междольковой веной (определена по мельчайшему калибру триады [2]), к центральной венуле и в центре зоны 1 ацинуса Раппопорта. Численность ПМ, полученная при подсчете в срезах, окрашенных по Маллори, была сопоставлена с их количеством в срезах, окрашенных с помощью моноклональных концентрированных антител к CD68 (клон PG-M I, Dako, Дания) и докрашенных гематоксилином (контроль). Была определена ошибка среднего арифметического (X ± ) для группового n = 30. Значимость различий средних определяли по критерию
Стьюдента (t) при р < 0,05.
Результаты исследования. Исследованные клетки СК печени были идентифицированы по их различным топографо-морфологическим свойствам (рис. 1). Э численно преобладали в периферической части ацинуса (вблизи центральной венулы - зоне 3) над их количеством в перипортальном и центральном его отделах (зоны 1-3 и 1). ПС клетки и ПМ, наоборот, являлись наиболее многочисленными в перипортальной части ацинуса, чем в центральной и периферической (зоны 1 и 3). Количество ПМ в разных частях ацинуса, сосчитанное в срезах, окрашенных методом Маллори, и в срезах, окрашенных CD-68 и гематоксилином, значительно не различалось (табл. 1). Полученное соотношение числа клеток СК в различных частях ацинуса у человека было близким, но в абсолютном значении на единицу площади - значительно большим, чем у крыс [1].
При стеатозе печени человека в различных частях ацинусов (долек) определялись диффузная крупнокапельная жировая дистрофия гепатоцитов и отдельные небольшие участки некрозов гепато-цитов. Преимущественно в перипортальной части долек был выявлен рост КВ, связанных со стромой портального тракта, стенкой СК и ПС клетками. Волокнистый каркас стенки синусоидов на большей части их длины выглядел сплошным, более контрастным и в некоторых участках несколько утолщенным (рис. 1А). Строение ядросодержащей части Э СК с нормой визуально не различалось. Большинство ПС клеток стали более крупными и гиперхромными. Их цитоплазма приобрела отчетливую отростчатую форму и была связана с КВ утолщенной стенки СК. ПМ выглядели уменьшенными в размерах, гиперхромными и частично утратившими отростки. Соустья СК и Вв были выявлены в отдельных срезах перипортальной части ацинусов у человека в норме и при стеатозе (рис. 1Б), как и у крыс [1], что дополняет и развивает представление об ацинусе [9, 10].
Численность Э СК при стеатозе печени в различных частях ацинуса была увеличена в разной степени. Кратность увеличения числа этих клеток была большей в перипортальной части ацинуса (в области первых соустий СК с Вв), несколько меньшей - в центральной и значительно меньшей -вблизи центральных венул. Число ПС клеток в перипортальной и центральной частях ацинуса возросло, а количество ПМ во всех исследованных частях ацинуса сократилось (табл. 1).
Ii
- м
• J8 ;
с * £ i
Чг Ml V >
ПС •• % ^ Г
: б H '
^ Û - .
а,'!. • ^ л - 7 *
* 7
Q □ * • и -■
£ *
ЁР »
V ________—
} I 50мкм
Рис. 1. Количество клеток синусоидных капилляров на площади 0,03 мм (ограничена пунктиром) в перипортальной части ацинуса печени здорового человека (А) и при алкогольном стеатозе (Б). Окраска по Маллори. Обозначения: МВ - терминальная междольковая вена, Вв - вокругдольковая венула, МЖП - междольковый желчный проток; стрелки - эндотелиоциты (17/39), ПС - перисинусоидальные клетки (9/11), М - макрофаги (12/5), Л - лимфоидные (1/1). Численные обозначения: вверху - у здоровых людей, внизу - при стеатозе печени
Таблица 1
Количество основных клеток синусоидных капилляров печени человека при стеатозе на площади 0,03 мм2 в различных отделах ацинуса Раппопорта (X ± 5 )
Патоморфоло-гическое состояние печени Отделы ацинуса печени Количество (n = 30)
эндотелиоци-тов перисинусоидальных клеток макрофагов
окраска по Маллори окраска CD-68
Не изменено перипортальный (зоны 1-3) 14,33 ± 0,57 (3,06) 8,23 ± 0,46 (2,28) 11,27 ± 0,59 (3,19) 11,13 ± 0,63 (3,40)
центральный (центр зоны 1) 13,23 ± 0,72 (3,87) 4,10 ± 0,16 (1,82) 9,03 ± 0,80 (4,32) 8,70 ± 0,68 (3,67)
перифериический (зона 3) 17,87 ± 0,64 (3,48) 3,73 ± 0,17 (1,89) 7,73 ± 0,60 (3,24) 7,53 ± 0,57 (3,08)
Стеатоз перипортальный (зоны 1-3) 39,53 ± 1,42* (7,66) 11,27 ± 0,55* (2,96) 4,60 ± 0,36* (1,94) -
центральный (центр зоны 1) 28,60 ± 1,47*# (7,94) 8,07 ± 0,57* (3,06) 4,77 ± 0,27* (0,46) -
перифериический (зона 3) 20,10 ± 1,10*# (5,94) 4,23 ± 0,39 (2,10) 3,67 ± 0,32* (1,73) -
Примечание: *— различие количества клеток при воздействии этанола с их числом у здоровых людей значимо (р < 0,05); # - различие с числом в перипортальной части ацинуса при стеатозе значимо (р < 0,05); в скобках приведено значение среднего квадратического отклонения.
Заключение. Капилляризация синусоидных капилляров и перисинусоидальный фиброз при алкогольном стеатозе печени у человека более выражены в перипортальной, менее в центроацинар-ной и слабее всего - в периферической части ацинуса. Направленность к центру ацинуса - к дисталь-ному концу вокругдольковой венулы - является выражением защитно-приспособительных реакций печени на длительное воздействие этанола и его метаболитов, зависящих от условий микрогемоцир-куляции. Они могут быть связаны с наличием соустий синусоидов и этой венулы в перипортальной зоне, интенсивной пролиферацией эндотелиоцитов в этой части ацинуса, подавлением активности макрофагов и активацией перисинусоидальных клеток, синтезирующих коллаген. Полученные данные впервые позволили уточнить имеющиеся общие сведения о количестве клеток синусоидов в разных частях ацинуса (дольки) печени человека в норме [2, 3, 5, 8] и получить приоритетные данные при стеатозе, что улучшает понимание морфогенеза и диагностику промежуточной стадии алкогольного повреждения печени при развитии алкогольного гепатита и цирроза.
Список литературы
1. Бобков, П. С. Количество эндотелиоцитов синусоидных капилляров печени как показатель направленности алкогольного фиброза / П. С. Бобков, А. В. Дробленков, Н. Р. Карелина // Ученые записки СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова. - 2011. - Т. 18, № 2. - С. 29-30.
2. Логинов, А. С. Клиническая морфология печени / А. С. Логинов, Л. И. Аруин. - М. : Медицина, 1985. - 240 с.
3. Мироджов, Г. К. Сравнительная морфология и морфогенез алкогольных и вирусных поражений печени (по материалам пункционной биопсии печени) : автореф. дис. ... д-ра мед. наук / Г. К. Мироджов. - М., 1980. - 37 с.
4. Пауков, В. С. Патологическая анатомия алкогольной болезни : обзор / В. С. Пауков, А. И. Угрюмов // Итоги науки и техники, серия : Медицина, выпуск : Алкогольная болезнь / ВИНИТИ. - 1997, № 5, С. 1-4.
5. Шевелдин, А. Г. Хронический гепатит С и резидентные макрофаги печени / А. Г. Шевелдин // Фундаментальные исследования. - 2010. - № 2. - С. 138-147.
6. Bedossa, P. Liver extracellular matrix in health and disease / P. Bedossa, V. Paradis // J. Pathol. -2003. - Vol. 200, № 4 - P. 504-515.
7. Colecchia, A. Hepatic steatosis in obese patients: clinical aspects and prognostic significance / A. Colecchia, D. Festi, T. Sacco et al. // Obesity Reviews. - 2004. - Vol. 5. - P. 27-42.
8. Ramon, B. Liver fibrosis / B. Ramon, A. B. David // Journal of Clin. Inv. - 2005. - Vol. 115, № 2. -Р.209-218.
9. Rappaport, A. M. The stuctural and functional unit in the human liver (liver acinus) / A. M. Rap-paport, W. D. Wilson // Anat. Rec. - 1958. - Vol. 130. - Р. 673-689.
10. Rappaport, A. M. The microcirculatory acinar concept of normal and pathological hepatic stucture / A. M. Rappaport // Beitr. Pathol. - 1976. - Vol. 157, № 3. - Р. 215-243.
Дробленков Андрей Всеволодович, доктор медицинских наук, доцент кафедры гистологии, ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный педиатрический медицинский университет» Минздрава России, Россия, 194100, г. Санкт-Петербург, ул. Литовская, д. 2, тел.: 8-911-735-12-00, е-таЛ: Droblenkov_a@mail.ru.
Бобков Павел Сергеевич, ассистент кафедры анатомии человека, ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный педиатрический медицинский университет» Минздрава России, Россия, 194100, г. Санкт-Петербург, ул. Литовская, д. 2, е-таП: spb@gpma.ru.
Карелина Наталья Рафаиловна, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой анатомии человека, ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный педиатрический медицинский университет» Минздрава России, Россия, 194100, г. Санкт-Петербург, ул. Литовская, д. 2, е-таЛ: spb@gpma.ru.
