CC BY
15
УДК 616.36-002.2 616.36-004
ТРИПСИНОПОДОБНАЯ АКТИВНОСТЬ СЫВОРОТКИ КРОВИ У ПАЦИЕНТОВ, СТРАДАЮЩИХ ХРОНИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ПЕЧЕНИ Прищепенко В.А.
Научный руководитель - д.м.н., профессор Юпатов Г.И.
Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет, Республика Беларусь, 210023, г. Витебск, пр-т. Фрунзе, 27. [email protected] - Прищепенко Вячеслав Александрович.
Резюме. Целью исследования являлось изучить трипсиноподобную активность сыворотки крови пациентов с хроническими заболеваниями печени и оценить ее взаимосвязи с клинико-лабораторными показателями пациентов. Методика. Трипсиноподобная активность сыворотки крови оценивалась у 39 пациентов с циррозом печени, 9 пациентов с хроническим гепатитом и 25 донора станции переливания крови с использованием модификации метода Эрлангера. В результате исследования было установлено достоверное снижение трипсиноподобной активности сыворотки крови в группе пациентов с циррозом печени. Установлены корреляции трипсиноподобной активности с клинико-лабораторными показателями пациентов.
Ключевые слова: цирроз, хронический гепатит, трипсиноподобная активность.
TRYPSIN-LIKE ACTIVITY OF BLOOD SERUM IN PATIENTS AFFECTED WITH CHRONIC LIVER DISEASES
Prischepenko V.A.
Scientific adviser -, professor Yupatov G.I., Doctor of Medicine
Vitebsk State Order of Peoples Friendship Medical University, Republic of Belarus, 210023, Vitebsk, pr-t. Frunze, 27.
[email protected] - Pryshchepenka Vyacheslav Alexandrovich.
Summary. The aim of the study was to analyse the trypsin-like activity of blood serum of patients with chronic liver diseases and to evaluate its relationship with the clinical and laboratory parameters of patients. Trypsin-like activity of blood serum was evaluated in 39 patients with liver cirrhosis, 9 patients with chronic hepatitis and 25 donors from the blood transfusion station using modified Erlanger method. As a result of the study, a significant decrease in trypsin-like serum activity in the group of patients with cirrhosis was established. Correlations of trypsin-like activity with clinical and laboratory parameters of patients were established. Keywords: cirrhosis, chronic hepatitis, trypsin-like activity.
Введение. Хронические заболевания печени входят в число десяти основных причин смертности в мире, а цирроз печени - в число шести основных причин смерти пациентов от 35 до 60 лет, составляя 14-30 случаев на 100 тыс. населения в экономически развитых странах.
До настоящего времени отсутствуют ранние достоверные неинвазивные критерии диагностики перехода хронического гепатита в цирроз печени. Несмотря на множество методов лабораторной диагностики, основным методом подтверждения диагноза «фиброз и цирроз печени» остается биопсия с гистологическим исследованием. Однако
проведение биопсии печени имеет определенные противопоказания и может изредка осложняться кровотечениями. В связи с этим, активно ведутся поиски неинвазивных методов диагностики хронического гепатита и цирроза печени, а также определения стадии заболевания. Применяемые в клинике биохимические показатели не могут в полной мере отразить происходящие процессы. В связи с этим ведутся разработки новых критериев диагностики, прогноза развития, эффективности лечения изучаемых заболеваний [4].
В патогенезе хронических заболеваний печени большая роль принадлежит некрозу печеночных клеток,
который приводит к печеночно-клеточнои недостаточности и прогрессирующему нарушению функций печени. Одним из проявлений нарушения синтетической функции печени является снижение выработки белковых соединений, таких как альбумин, фибриноген, протромбин, проконвертин, проакцелерин и других [1, 2, 4]. Некоторые из этих соединений обладают ферментативными свойствами, в частности проявляют трипсиноподобную активность.
Для оценки трипсиноподобной активности в настоящее время в качестве хромогенного субстрата широко используется бензоиларгинин-р-
нитроанилид (БАПНА). При расщеплении этого субстрата по амидной связи образуется р-нитроанилин, который изменяет цвет и оптическую плотность реакционной смеси [3], что удобно для оценки трипсиноподобной активности биологических материалов.
БАПНА-амидазная активность
изучалась в различных группах пациентов, в частности И.И. Генераловым [1] с соавторами была исследована БАПНА-амидазная активность сыворотки крови и иммуноглобулинов пациентов с хроническим вирусным гепатитом. Было установлено, что у пациентов с вирусными гепатитами средний уровень
каталитической активности значительно превышал уровень контрольной группы.
Изменение уровня
трипсиноподобной активности сыворотки крови может явиться показателем степени печеночно-клеточной недостаточности.
Цель исследования: изучить трипсиноподобную активность сыворотки
крови пациентов с хроническими заболеваниями печени и оценить ее взаимосвязь с клинико-лабораторными показателями пациентов.
Методика. Нами обследованы пациенты с хроническими заболеваниями печени (цирроз печени, хронический гепатит), находившиеся на лечении в отделении гастроэнтерологии УЗ «Витебский областной клинический специализированный центр».
Трипсиноподобная активность
сыворотки крови определялась у 39 пациентов с циррозом печени и у 9 - с хроническим гепатитом. Средний возраст исследуемой группы 53+11,2 года. Контрольную группу составили 25 доноров станции переливания крови.
Определение трипсиноподобной активности сывороток проводили с использованием модификации метода Эрлангера [3]. При определении БАПНА-амидазной активности сывороток крови реакционная смесь состояла из 0,2 мл раствора БАПНА и 0,005 мл исследуемой сыворотки. В качестве отрицательного контроля использовали 0,005 мл физиологического раствора и 0,2 мл раствора БАПНА. Оценка результатов проводилась спектрофотометрически при длине волны 405 нм после 20 ч инкубации при температуре 370С. Для устранения искажения результатов вследствие собственной окраски сыворотки оптическую плотность в лунках определяли как разницу оптической плотности после инкубации и до инкубации.
Для пересчета полученного результата в пикокаталы (пкат) использовалась формула:
Y=0,028+ПxEоп ,
где Y - уровень БАПНА-амидазной активности, Еоп - оптическая плотность пробы минус оптическая плотность контроля.
Кроме того, проводился анализ историй болезни данных пациентов с оценкой степени тяжести заболевания, клинических данных, общего и биохимического анализов крови, общего анализа мочи, показателей коагулограммы.
Статистический анализ проводился в пакете программ Statistica 10 и Statgraphics Plus 5. В связи с распределением, отличным от
нормального, при статистическом анализе результатов использовались
непараметрические методы статистики.
При проверке статистических гипотез критический уровень значимости р принимался равным 0,05. Оценка достоверности различий проводилось с использованием критерия Манна-Уитни, поиск взаимосвязей - методом Спирмена и построением регрессионных моделей. При описании результатов исследования использованы следующие сокращения: Ме
Исследование показало, что уровень трипсиноподобной активности сыворотки крови в группе пациентов с циррозом печени (Ме = 0,716 пкат [10-90 персентиль: 0,0 - 2,096 пкат]) с высокой степенью достоверности ниже, чем в группе доноров (Ме = 2,283 пкат [10-90 персентиль: 1,557 - 3,581 пкат]; Z-критерий Манна-Уитни - 5,12; p <0,000001), и ниже, чем в группе пациентов с хроническим гепатитом (Ме = 2,92 пкат [10-90 персентиль: 0,0225 - 5,105 пкат]; Z-критерий Манна-Уитни - 2,998; p <0,01). Различий в уровнях БАПНА-амидазной активности в группах пациентов с хроническим гепатитом и доноров не выявлено ф> 0,05).
У пациентов с хроническими заболеваниями печени были выявлены обратные взаимосвязи уровня
трипсиноподобной активности со следующими клинико-лабораторными показателями: с баллами по Чайлд-Пью (г = 0,56; г2 = 0,318; p<0,001); с наличием и выраженностью асцита (г = -0,35; г2 = 0,123; р = 0,027); со стадией порто-системной энцефалопатии (г =-0,33; г2 = 0,111; р = 0,036); со скоростью оседания эритроцитов (г = -0,55; г2 = 0,309; p = 0,0002); с уровнем прямого билирубина сыворотки крови (г = -0,35; г2 = 0,124; p = 0,024); с активностью щелочной фосфатазы сыворотки крови (г = 0,35; г2 = 0,125; p=0,027); с временем частичной активации тромбопластина (АЧТВ) (г =
- медиана, г - коэффициент корреляции, г2
- коэффициент детерминации.
Исследование одобрено этическим комитетом УО «Витебский
государственный ордена Дружбы народов медицинский университет».
Результаты исследования и обсуждение. Полученные результаты представлены в таблице 1.
0,38; г2 = 0,144; p=0,022); наличием и количеством белка в моче (г = -0,43; г = 0,188; p = 0,0058).
Кроме того, установлены прямые корреляции: с количеством эритроцитов (г = 0,44; г2 = 0,198; p=0,0036); с количеством лимфоцитов (г = 0,40; г2 = 0,16; p=0,0096);
уровнем холестерина сыворотки крови (г = 0,41; г2 = 0,164; p = 0,0142); протромбиновым индексом (г = 0,52; г = 0,28; p = 0,0008).
Полученные в ходе исследования данные показали, что снижение уровня трипсиноподобной активности сыворотки крови может использоваться в качестве дополнительного критерия поражения печени при циррозе. Выявленные различия в группе пациентов с циррозом печени и группах доноров и пациентов с хроническим гепатитом (при отсутствии различий в группе доноров и пациентов с хроническим гепатитом) показывают возможность использования уровня БАПНА-амидазной активности при дифференциальной диагностике цирроза печени и хронического гепатита. Однако эти данные должны быть подтверждены на больших выборках.
Поскольку соединения,
проявляющие трипсиноподобную
активность, являются белками, то очевидно снижение их активности при развитии печеночно-клеточной
недостаточности и потерях белка. Установленные корреляции БАПНА-
Таблица 1. Уровень трипсиноподобной активности сыворотки крови у пациентов _с хроническими заболеваниями печени_
Группа N Медиана, пкат 10 персентиль, пкат 90 персентиль, пкат
Пациенты с циррозом печени 39 0,716 0,0 2,096
Пациенты с хроническим гепатитом 9 2,92 0,0225 5,105
Доноры станции переливания крови 25 2,283 1,557 3,581
амидазной активности с АЧТВ, ПТИ и уровнем белка в моче подтверждают это предположение.
Кроме того, уровень
трипсиноподобной активности
коррелирует с показателями синдрома холестаза (прямой билирубин, щелочная фосфатаза, холестерин), что косвенно может отражать степень фиброзного процесса в печени.
Корреляции с клиническими данными также указывают, что уровень трипсиноподобной активности отражает степень поражения печени.
Выводы
В результате исследования установлено достоверное снижение уровня трипсиноподобной активности у пациентов с циррозом печени по сравнению с донорами ^-критерий Манна-Уитни - 5,12; р <0,000001) и пациентами с хроническим гепатитом (2-критерий Манна-Уитни - 2,998; р <0,01).
Установлены обратные корреляции трипсиноподобной активности с клинико-лабораторными показателями пациентов: с баллами по Чайлд-Пью, с наличием и выраженностью асцита, со стадией порто-системной энцефалопатии, со скоростью оседания эритроцитов, с уровнем прямого билирубина сыворотки крови, с активностью щелочной фосфатазы сыворотки крови, с временем частичной активации тромбопластина, наличием и количеством белка в моче. Кроме того, установлены прямые корреляции: с количеством эритроцитов, с количеством лимфоцитов, с уровнем холестерина сыворотки крови, протромбиновым индексом.
Таким образом, уровень
трипсиноподобной активности при хронических заболеваниях печени отражает степень ее поражения.
Литература
1. Генералов И.И. Абзимная активность иммуноглобулинов. - Витебск : изд-во Витебского госуд. Мед. ун-та, 2000. - 152 с.
2. Жильцов, И.В. Ферментативная активность препаратов IgG при вирусных гепатитах // Иммунопатология, аллергология, инфектология. - 1998. - № 4. - С. 73-77.
3. Окулич, В.К. «Определение БАПНА-амидазной активности микроорганизмов, сывороток крови и иммуноглобулинов класса G» / В.К. Окулич, А.Н. Косинец, С.А. Сенькович, Е.А. Конопелько, // Инструкция на метод, регистрационный №6-0101 - 2002 г.
4. Юпатов, Г.И. Трипсиноподобная активность сыворотки крови пациентов с циррозом печени //Современные проблемы инфекционной патологии человека: сб. науч. тр. МЗ РБ РНПЦ эпидемиологии и микробиологии; под ред. Л. П. Титова и др.. - Минск : ГУ РНМБ, 2013. - Вып. 6. - С.345-348.
