CC BY
11
Здравоохранение Российской Федерации. 2020; 64(2): 83-87 РО! http://dx.doi.org/10.46563/0044-197X-2020-64-2-83-87 Токсикология (профилактическая, клиническая, экологическая)
ТОКСИКОЛОГИЯ ^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^ (профилактическая, клиническая, экологическая)
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2020
Ракитский В.Н., Чхвиркия Е.Г., Епишина Т.М.
Токсичность технического продукта, производного триазолинтионов
ФБУН «Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора, 141014, Мытищи, Московская область, Россия
Введение. Технические продукты, входящие в состав пестицидов, рекомендуемых к применению в сельском хозяйстве, должны пройти всестороннее санитарно-токсикологическое исследование, что является основой для предотвращения неблагоприятного влияния пестицидов на здоровье работающих и населения, а также на санитарное состояние окружающей среды.
Целью исследования являлось изучение характера биологического действия исследуемого технического продукта — производного триазолинтионов на организм млекопитающих (крысы) в хроническом эксперименте, определение действующей и недействующей доз, обоснование допустимой суточной дозы (ДСД) для человека.
Материал и методы. Хронический (1 год) эксперимент проведен на 80 крысах-самцах массой 200-210 г. Испытаны дозы 5, 50 и 500 мг/кг массы тела. Наблюдали за состоянием и поведением животных, потреблением воды и пищи, фиксировали сроки гибели, регистрировали изменения массы тела, физиологические, биохимические и гематологические показатели. Результаты. Установлено, что доза 5 мг/кг массы тела не вызывает достоверных изменений по всем изученным показателям, дозы 50 и 500 мг/кг массы тела оказали политропное воздействие на организм опытных животных.
Обсуждение. Изученный технический продукт при многократном поступлении в дозах 50 и 500 мг/кг массы тела вызывает изменения в состоянии центральной нервной системы животных (статистически достоверные изменения суммационно-порогового показателя, общей активности, длины пути, времени отдыха), а также изменения углеводного, липидного, ли-попротеидного обмена в организме. Дозы 50 и 500 мг/кг массы тела оказывают политроп-ное действие на организм крыс-самцов и являются действующими. Доза 5 мг/кг массы тела, при введении которой у животных опытной группы по сравнению с животными контрольной группы отсутствуют изменения по всем изученным показателям на протяжении всего эксперимента, принята как недействующая.
Выводы. На основании недействующей дозы и коэффициента запаса 100 нами научно обоснована ДСД производного триазолинтионов для человека на уровне 0,05 мг/кг.
Ключевые слова: технический продукт; хроническая токсичность; лабораторные животные; характер биологического действия; допустимая суточная доза для человека.
Для цитирования: Ракитский В.Н., Чхвиркия Е.Г., Епишина Т.М. Токсичность технического продукта, производного триазолинтионов. Здравоохранение Российской Федерации. 2020; 64(2): 83-87. DOI: http://dx.doi.org/10.46563/0044-197X-2020-64-2-83-87
Для корреспонденции: Ракитский Валерий Николаевич, доктор медицинских наук, профессор, академик РАН, заместитель директора по научной работе ФБУН «Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора, 141014, Мытищи, Московская область. E-mail: [email protected] Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. Фитнсирование. Исследование не имело финансовой поддержки.
Участие авторов: все авторы сделали эквивалентный вклад в подготовку публикации (по 33,3%).
Поступила 03.02.20 Принята в печать 18.02.20 Опубликована 20.04.20
Rakitskii VN., Chkhvirkiya E.G., Epishina T.M
The toxicity of the technical product, derived triazolinones
Federal Scientific Center of Hygiene named after F.F.Erisman, Mytishchi, 141014, Moscow Region, Russia
Introduction. Technical products that are part of pesticides recommended for use in agriculture must undergo a comprehensive sanitary and Toxicological examination, which is the basis for preventing the adverse effects of pesticides on the health of workers and the population, as well as on the sanitary state of the environment.
Health care of the Russian Federation. 2020; 64(2): 83-87
84_DOI: http://dx.doi.org/10.46563/0044-197X-2020-64-2-83-87
Toxicology (preventive, clinical, ecological)
Purpose of research — the study of the biological effect of the technical product derived triazolinthionov, with its repeated oral intake in mammals (rats), justification of the permissible daily dose (DSD) for humans.
Material and methods. Chronic (12 months) experiment was conducted on male rats with a body weight of 200-210 g tested doses: 5.0; 50.0 and 500.0 mg/kg body weight (1 control and 3 experimental groups and 20 individuals each). In the dynamics of the experiment, we observed the condition and behavior of animals, water and food consumption, fixed the timing of death, recorded changes in body weight, physiological, biochemical and hematological parameters. Results. It was found that the dose of 5.0 mg/kg body weight does not cause significant changes in all studied parameters, doses of 50.0 and 500.0 mg/kg body weight had a polytropic effect on the body of experimental animals.
Discussion. The studied technical product at repeated intake in doses of 50,0 and 500,0 mg/kg of body weight causes changes in the state of the Central nervous system of animals (statistically significant changes in SPP, total activity, path length, rest time), as well as changes in carbohydrate, lipid, and lipoprotein metabolism in the body, as evidenced by statistically significant changes in biochemical and hematological indicators. Consequently, doses of 50,0 and 500,0 mg/kg of body weight have a polytropic effect on the body of male rats and are effective. The dose of 5.0 mg/kg of body weight, when administered in animals of the experimental group in comparison with animals of the control group, there are no changes in all the studied parameters throughout the experiment, is accepted as invalid. On the basis of an inactive dose of 5.0 mg/kg of body weight and a reserve factor of 100, we have scientifically justified DSD for humans at the level of 0.05 mg/kg. Conclusion. Studies have shown that long-term repeated oral administration of the studied product into the body of animals (male rats) at a dose of 5.0 mg per 1 kg of body weight does not cause statistically significant changes in all the studied parameters, so the indicated dose is invalid. Doses of 50,0 and 500,0 mg/kg MT have a polytropic effect on the body of male rats and are effective. DSD for humans at the level of 0.05 mg/kg is justified based on the inactive dose at the level of 5.0 mg per 1 kg of body weight, established in a 12-month chronic experiment conducted on male rats, and the reserve coefficient of 100 (taking into account the unexpressed specific and long-term effects).
Keywords: technical product; chronic toxicity; laboratory animals; nature of biological action; permissible daily dose for humans.
For citation: Rakitskii V.N., Chkhvirkiya E.G., Epishina T.M. The toxicity of the technical product, derived triazolinones. Zdravookhranenie Rossiiskoi Federatsii (Health Care of the Russian Federation). 2020; 64 (2): 83-87. (In Russ.). DOI: http://dx.doi.org/10.46563/0044-197X-2020-64-2-83-87
For correspondence: Valery N. Rakitskii, PhD (Med.), D. Sci. (Med.), professor, Academician of RAS, acting
director of the Federal Scientific Center of Hygiene named after F.F. Erisman, Mytishchi, 141014, Moscow
Region, Russia. E-mail: [email protected]
Information about the authors:
Rakitskii V.N., http://orcid.org/0000-0002-9959-6507
Chkhvirkiya E.G., http://orcid.org/0000-0003-4543-7364
Epishina T.M., http://orcid.org/0000-0003-0331-0701
Acknowledgements. The study had no sponsorship.
Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
Contribution: the authors participated in writing the article in equal shares.
Received 03 February 2020 Accepted 18 February 2020 Published 20 April 2020
Введение
Пестициды исторически с медицинских позиций оцениваются строже, чем другие химические вещества, т.к. такие их особенности, как преднамеренность внесения в окружающую среду, возможность контакта с ними больших масс населения, высокая биологическая активность определяют их потенциальную опасность для человека [1-4].
Технический продукт (ТП) — это вещество, получаемое в технологическом процессе и содержащее примеси, при этом ассортимент и количественный уровень этих примесей непосредственно зависит от конкретной технологии получения продукта.
ТП, входящие в состав пестицидов, рекомендуемых к применению в сельском хозяйстве, должны пройти всестороннее санитарно-токсикологическое исследование, что является основой для предотвращения неблагоприятного влияния пестицидов на здоровье работающих и населения, а также на санитарное состояние окружающей среды [5, 6].
Научной основой безопасного применения ТП, входящих в состав пестицидов, являются комплексные санитарно-токсикологические исследования по изучению их токсичности и характера биологического действия, позволяющие установить величину максимально недействующей дозы, необходимой для обоснования допустимой суточной до-
Здравоохранение Российской Федерации. 2020; 64(2): 83-87 DOI: http://dx.doi.org/10.46563/0044-197X-2020-64-2-83-87
Токсикология (профилактическая, клиническая, экологическая)
зы (ДСД) соединения для человека. Установление ДСД действующих веществ пестицидов проводится в соответствии с принципом комплексного гигиенического нормирования: возможное поступление пестицидов в организм человека с пищевыми продуктами, водой и атмосферным воздухом не должно превышать величины их ДСД [7, 8].
Все вышесказанное показывает актуальность и значимость изучения особенностей биологического действия ТП, входящих в состав пестицидов. В нашем эксперименте проведено санитарно-ток-сикологическое исследование ТП класса триазо-линтионов, входящего в состав смесевого пестицида на основе 4 действующих веществ — «дже-нериков». Данные о характере биологического действия указанного ТП отсутствуют.
Целью исследования являлось изучение биологического действия ТП — производного триазо-линтионов — на организм млекопитающих (крысы) в хроническом эксперименте, определение действующей и недействующей доз, обоснование ДСД для человека.
Материал и методы
Исследования проведены в виварии ФБУН «Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрис-мана». Хронический (12-месячный) эксперимент [8-11] проведен на 80 белых крысах-самцах массой 200-210 г., которые были разделены на 4 группы по 20 животных. Контрольная (1-я) группа животных ТП не получала. В опытных группах испытывали действие ТП в 3 дозах: 2-я группа — 5 мг/кг массы тела; 3-я — 50, 4-я — 500.
Подопытные крысы на протяжении 12 мес получали ТП с кормом. Крысы контрольной группы получали корм в аналогичном с опытными группами объеме без добавления ТП.
В динамике опыта проводили наблюдение за состоянием и поведением животных, потреблением воды и пищи, фиксировали сроки гибели животных, регистрировали изменения массы тела (каждый месяц). Через 1, 3, 6 и 12 мес исследования определяли биохимические и гематологические показатели, оценивали состояние центральной нервной системы1 по способности животных суммировать подпороговые импульсы (суммационно-пороговый показатель, В) и на основании изучения поведенческих реакций (общая активность, длина пути, время отдыха, норковый рефлекс, ориентировочная реакция) на совмещенной установке «открытого поля» и «открытой площадки» с автоматической регистрацией поведения крыс на приборе «ОРТО-МАКС» («Columbus Instruments») [13-15].
Гематологические показатели регистрировали в цельной крови животных с помощью автомати-
'Методические рекомендации по использованию поведенческих реакций животных в токсикологических исследованиях для целей гигиенического нормирования. Киев, 1980. 47 с.
ческого гематологического анализатора «Abbott Cell-Dyn 3700 Hematology Analyzer». Изучали количество лейкоцитов (лимфоцитов, нейтрофилов, эозинофилов, базофилов, моноцитов), эритроцитов, тромбоцитов, гемоглобина, гематокрит, средний объем эритроцита, среднее содержание гемоглобина в эритроците, среднюю концентрацию гемоглобина в эритроците [14, 15].
Биохимические исследования выполняли на автоматическом биохимическом анализаторе «Chem Well» («Awarness Technology») с использованием диагностических наборов реактивов производства «Hospitex Diagnostics S.r.L.».
Показатели изучали c помощью следующих методов:
• аланин- и аспартатаминотрансаминаза — кинетический, рекомендованный Международной федерацией клинической химии (IFCC);
• альбумин — бромкрезол зеленый;
• общий белок — колориметрический, биурето-вый метод;
• мочевая кислота — ферментативный, с урика-зой и пероксидазой;
• мочевина — энзиматический, ультрафиолет;
• глюкоза — энзиматический, колориметрический;
• щелочная фосфатаза — кинетический;
• триглицериды — энзиматический, колориметрический;
• холестерин — энзиматический, колориметрический;
• лактатдегидрогеназа — кинетический UV-тест, метод SFBC;
• холинэстераза — кинетический метод, рекомендованный Немецким обществом клинической химии (DGKC), с бутирилтиохолином;
• креатинин — метод Яффе, двухточечная кинетика;
• амилаза — кинетический метод;
• хлориды — колориметрический.
По окончании эксперимента проведена эвтаназия животных в СО2-боксе с последующим определением абсолютной и относительной массы внутренних органов крыс контрольной и опытных групп.
Результаты исследований обработаны статистически в программе IBM SPSS Statistics 22 [16, 17].
Величину ДСД определяли как отношение максимально недействующей дозы к коэффициенту запаса [18].
Результаты
В динамике исследований в 1-й и 2-й группах гибель животных не зарегистрирована. В 3-й группе погибла 1 крыса при получении 320 доз. В 4-й группе погибли 2 крысы при получении 265 и 393 доз соответственно.
У крыс 2-й группы во все сроки исследования не выявлено статистически достоверных измене-
Health care of the Russian Federation. 2020; 64(2): 83-87 DOI: http://dx.doi.org/10.46563/0044-197X-2020-64-2-83-87
Toxicology (preventive, clinical, ecological)
ний по всем изученным показателям по сравнению с контрольными животными.
При многократном пероральном поступлении исследуемого продукта в дозах 50 и 500 мг/кг массы тела выявлены изменения в состоянии центральной нервной системы. Об этом свидетельствуют достоверное снижение суммационно-порогового показателя, а также снижение общей активности, длины пути, повышение времени отдыха через 6 и 12 мес воздействия ТП ^ < 0,05), причём данные изменения имеют дозозависимый характер.
В динамике исследований при анализе биохимических показателей сыворотки крови у крыс, получавших ТП в дозах 50 и 500 мг/кг массы тела, выявлены следующие статистически достоверные изменения:
• через 1 мес воздействия — повышение содержания глюкозы ^ < 0,05);
• через 3 мес — снижение содержания мочевины, альбумина, триглицеридов (^ < 0,05);
• через 6 мес — снижение содержания креати-нина и триглицеридов, повышение активности амилазы (^ < 0,05);
• через 12 мес — повышение содержания мочевины, снижение содержания общего белка, триглицеридов и активности щелочной фосфатазы Ф < 0,05).
Кроме того в 4-й группе выявлены следующие изменения:
• через 1 мес воздействия — снижение активности холинэстеразы ^ < 0,05);
• через 6 мес — снижение активности аспарта-таминотрансаминазы и лактатдегидрогеназы Ф < 0,05).
При анализе гематологических показателей периферической крови у крыс 3-й и 4-й групп выявлены следующие статистически достоверные изменения:
• через 1 мес воздействия — снижение концентрации эритроцитов, уровня гемоглобина, количества гематокрита, повышение концентрации тромбоцитов ^ < 0,05);
• через 3 мес — снижение концентрации лейкоцитов ф < 0,05);
• через 6 мес — повышение концентрации тромбоцитов ^ < 0,05).
При определении абсолютной и относительной массы внутренних органов у крыс 3-й и 4-й групп зарегистрировано повышение абсолютной и относительной массы печени; в 4-й группе также выявлено повышение абсолютной и относительной массы селезенки по сравнению с контрольными животными.
Обсуждение
Изучение характера биологического действия исследуемого производного триазолинтионов на организм млекопитающих (крысы-самцы) в хро-
ническом эксперименте выявило, что при длительном пероральном поступлении в организм крыс-самцов в дозах 50 и 500 мг/кг массы тела ТП оказывает отрицательное воздействие на состояние центральной нервной системы животных (статистически достоверные изменения суммаци-онно-порогового показателя, общей активности, длины пути, времени отдыха), а также вызывает изменения углеводного, липидного, липопротеид-ного обмена, о чем свидетельствуют статистически достоверные изменения биохимических и гематологических показателей.
Следовательно, дозы 50 и 500 мг/кг массы тела обладают политропным действием на организм крыс-самцов и являются действующими.
Доза 5 мг/кг массы тела, при введении которой у животных этой группы по сравнению с животными контрольной группы отсутствуют изменения по всем изученным показателям на протяжении всего эксперимента, принята как недействующая.
На основании недействующей дозы 5 мг/кг массы тела и коэффициента запаса 100 нами научно обоснована ДСД для человека на уровне 0,05 мг/кг.
Проведенные исследования свидетельствуют о целесообразности санитарно-токсикологических исследований с целью гигиенического нормирования указанного ТП в объектах окружающей среды.
Выводы
1. Длительное многократное пероральное введение исследованного ТП в организм крыс-самцов в дозе 5 мг/кг массы тела не вызывает статистически достоверных изменений по всем изученным показателям, поэтому указанная доза является недействующей.
2. Дозы 50 и 500 мг/кг массы тела оказывают политропное действие на организм крыс-самцов и являются действующими.
3. Обоснована ДСД для человека на уровне
0.05.мг/кг, исходя из недействующей дозы на уровне 5 мг/кг массы тела, установленной в 12-месячном хроническом эксперименте на крысах-самцах, и коэффициента запаса 100 (с учётом невыраженных специфических и отдалённых эффектов).
ЛИТЕРАТУРА
1. Потапов А.И., Ракитский В.Н., Чхвиркия Е.Г. Система обеспечения безопасности пищевых продуктов при применении пестицидов. М.-Ярославль; 2013.
2. Potapov А., Rakitski V., Nikolaeva N. New Russian toxicologi-cal-hygienic classification of pesticides. Toxicol. Lett. 2005; 158(Suppl. 1): 136.
3. Тутельян В.А. Безопасность пищевых продуктов - ведущее направление в токсикологии. В кн.: Онищенко Г.Г., Курлянд-ский Б.А., ред. IV Съезд токсикологов России: Сборник трудов. М.: 2013; 39-41.
4. Ракитский В.Н. Проблемы и перспективы профилактической токсикологии. В кн.: Онищенко Г.Г., Курляндский Б.А., ред. IV Съезд токсикологов России: Сборник трудов. М.; 2013: 30-3.
Здравоохранение Российской Федерации. 2020; 64(2): 83-87
DOI: http://dx.doi.org/10.46563/0044-197X-2020-64-2-83-87
Токсикология (профилактическая, клиническая, экологическая)
5. Ракитский В.Н., Чхвиркия Е.Г., Епишина Т.М., Мухина Е.А. Оценка антиоксидантного статуса ПАВ на основе рапсового масла. Гигиена и санитария. 2018; 97(6): 498-500.
DOI: http://doi.org/10.18821/0016-9900-2018-97-6-498-500
6. Ракитский В.Н., Чхвиркия Е.Г., Епишина Т.М. Научное обоснование допустимой суточной дозы технического продукта, производного хлорацетамидов. Здравоохранение Российской Федерации. 2019; 63(3): 147-51.
DOI: http://doi.org/10.18821/0044-197X-2019-63-3-147-151
7. Епишина Т.М. Оценка биологического действия антидота производного хлорхинолина. Гигиена и санитария. 2018; 97(6): 505-8. DOI: http://doi.org/10.18821/0016-9900-2018-97-6-505-508
8. Антонович Е.А., Каган Ю.С., Белоножко Г.А., Болотный А.В., Бурый В.С., Войтенко Г.А. Методические указания по гигиенической оценке новых пестицидов. Киев; 1988.
9. Жуленко В.Н., Рабинович М.И., Таланов Г.А. Ветеринарная токсикология. М.: Колос С; 2002.
10. Каган Ю.С. Общая токсикология пестицидов. Киев: Здоров'я; 1981.
11. Рылова М.Л. Методы исследования хронического действия вредных факторов среды в эксперименте. Ленинград: Медицина; 1964.
12. Павленко С.М. Применение суммационно-порогового показателя в токсикологическом эксперименте на белых крысах. В кн.: Методики санитарно-токсикологического эксперимента: Сборник научных трудов МНИИГ им. Ф.Ф. Эрисмана. М.; 1975: 5-7.
13. Анохин П.К. Очерки по физиологии функциональных систем. М.: Медицина; 1975.
14. Меньшиков В.В., Делекторская Л.Н., Золотницкая Р.П. Лабораторные методы исследований в клинике. Справочник. М.: Медицина; 1987.
15. Калб В.Г., Камышников В.С. Клиническая биохимия: Пособие для врачей-лаборантов. Минск; 1976.
16. Ноткин Е.Л. Статистика в гигиенических исследованиях. М.; 1986.
17. Прозоровский В.Б. Использование метода наименьших квадратов для пробит-анализа кривых летальности. Фармакология и токсикология. 1962; 25(1): 115-9.
18. WHO. Manual on the Development and Use of FAO and WHO Specifications for Pesticides; 2016. Available at: https://www. who.int/whopes/resources/9789251092651/en/
REFERENCES
1. Potapov A.I., Rakitskiy V.N., Chkhvirkiya E.G. System for Ensuring Food Safety when Applying Pesticides [Sistema obespeche-niya bezopasnosti pishchevykh produktov pri primenenii pestit-sidov]. Moscow-Yaroslavl'; 2013. (in Russian)
2. Potapov А., Rakitski V., Nikolaeva N. New Russian toxicologi-cal-hygienic classification of pesticides. Toxicol. Lett. 2005; 158(Suppl. 1): 136.
3. Tutel'yan V.A. Food safety is the leading direction in toxicology. In: Onishchenko G.G., Kurlyandskiy B.A., eds. IV Congress of Toxicologists of Russia: Proceedings [IV S"ezd toksikologov Rossii: Sbornik trudov]. Moscow: 2013; 39-41. (in Russian)
4. Rakitskiy V.N. Problems and prospects of preventive toxicology. In: Onishchenko G.G., Kurlyandskiy B.A., eds. IV Congress
of Toxicologists of Russia: Proceedings [IV S"ezd toksikologov Rossii: Sbornik trudov]. Moscow: 2013; 30-3. (in Russian)
5. Rakitskiy V.N., Chkhvirkiya E.G., Epishina T.M., Mukhina E.A. The assessment of the antioxidant status of the organism of rats under the chronic intake of surface-active substances based on the rape oil. Gigiena i sanitariya. 2018; 97(6): 498-500.
DOI: http://doi.org/10.18821/0016-9900-2018-97-6-498-500 (in Russian)
6. Rakitskiy V.N., Chkhvirkiya E.G., Epishina T.M. Scientific substantiation of the permissible daily dose of a technical product derived from chloroacetamides. Zdravookhranenie Rossiyskoy Federatsii. 2019; 63(3): 147-51.
DOI: http://doi.org/10.18821/0044-197X-2019-63-3-147-151 (in Russian)
7. Epishina T.M. Assessment of biological influence of chloroquino-line derivative. Gigiena i sanitariya. 2018; 97(6): 505-8.
DOI: http://doi.org/10.18821/0016-9900-2018-97-6-505-508 (in Russian)
8. Antonovich E.A., Kagan Yu.S., Belonozhko G.A., Bolotnyy A.V., Buryy V.S., Voytenko G.A. Methodical Instructions on Hygienic Assessment of new Pesticides [Metodicheskie ukazaniya po gi-gienicheskoy otsenke novykh pestitsidov]. Kiev; 1988. (in Russian)
9. Zhulenko V.N., Rabinovich M.I., Talanov G.A. Veterinary Toxicology [Veterinarnaya toksikologiya]. Moscow: Kolos S; 2002. (in Russian)
10. Kagan Yu.S. General Toxicology of Pesticides [Obshchaya toksikologiya pestitsidov]. Kiev: Zdorov'ya; 1981. (in Russian)
11. Rylova M.L. Methods of Studying the Chronic Effects of Harmful Environmental Factors in the Experiment [Metody issledovaniya khronicheskogo deystviya vrednykh faktorov sredy v eksperi-mente]. Leningrad: Meditsina; 1964. (in Russian)
12. Pavlenko S.M. The application of the summation-threshold index in Toxicological experiments on white rats. In: Methods of Sani-tary-Toxicological Experiment: Collection of Scientific Works of the MNIIG named after F.F. Erisman [Metodiki sanitarno-toksikologicheskogo eksperimenta: Sbornik nauchnykh trudov MNIIG im. F.F. Erismana]. Moscow; 1975: 5-7. (in Russian)
13. Anokhin P.K. Essays on the Physiology of Functional Systems [Ocherkipofiziologii funktsional'nykh sistem]. Moscow: Meditsina; 1975. (in Russian)
14. Men'shikov V.V., Delektorskaya L.N., Zolotnitskaya R.P. Laboratory Methods of Research in the Clinic. Guide [Laboratornye metody issledovaniy v klinike. Spravochnik]. Moscow: Meditsina; 1987. (in Russian)
15. Kalb V.G., Kamyshnikov V.S. Clinical Biochemistry: Handbook for Laboratory Doctors [Klinicheskaya biokhimiya: Posobie dlya vrachey-laborantov]. Minsk; 1976. (in Russian)
16. Notkin E.L. The Statistics in Health Researches [Statistika v gi-gienicheskikh issledovaniyakh]. Moscow; 1986. (in Russian)
17. Prozorovskiy V.B. Using the least squares method for probit analysis of mortality curves. Farmakologiya i toksikologiya. 1962; 25(1): 115-9. (in Russian)
18. WHO. Manual on the Development and Use of FAO and WHO Specifications for Pesticides; 2016. Available at: https://www. who.int/whopes/resources/9789251092651/en/
