CC BY
48
ТКАНЕВЫЕ БАЗОФИЛЫ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ У ЖЕНЩИН ПРИ ПРОЛИФЕРАТИВНОЙ МАСТОПАТИИ И ФИБРОЗНО-КИСТОЗНОЙ МАСТОПАТИИ С АТИПИЧЕСКОЙ ГИПЕРПЛАЗИЕЙ
М.Э. ДЗОДЗИКОВА, К.Д. САЛБИЕВ, А.В. ТУРИЕВ
Центральная научно-исследовательская лаборатория, кафедра гистологии, цитологии и эмбриологии Северо-Осетинской государственной медицинской академии.
РСО-Ллания, 362040, г. Владикавказ, ул. Пушкинская д. 40.
E-mail: dzodzikova [email protected] В. М. ГАБАРАЕВА 3-е хирургическое отделение, Республиканского онкологического диспансера.
362000, РСО-А, г. Владикавказ, ул. Зортова, д.2.
Т.Т. БЕРЁЗОВ
Кафедра биохимии, РУДН. 117437, г. Москва, ул. М. Макпая д. 8.
Медицинский факультет.
В.А. Ill АХ JI AM ОВ
НИИ морфологии человека РАМН, лаборатория экспериментальной патологии клетки.
117418 г. Москва, ул. Цурюпы д. 3.
Методами световой и электронной микроскопии изучали морфометрические и функциональные характеристики популяции тучных клеток (ТК) и их представительства в здоровой молочной железе (МЖ), в пролиферативной мастопатии (ПМ) и фиброзно-кистозной мастопатии с атипической гиперплазией (ФКМАГ). Изучено 27 оперативно удаленных опухолей МЖ. Проведенное исследование демонстрирует активацию системы ТК при всех видах изученных опухолей МЖ. Активация эта динамична, имеет циклический характер и зависит от вида опухоли. Количество и активность ТК МЖ от ПМ к ФКМАГ нарастает. Постепенное увеличение частоты и степени дегрануляции, появление в окружающих основной узел тканях и в самой опухоли большого количества мелких, незрелых 'ГК свидетельствует о явлениях декомпенсации в системе и начале развития необратимых изменений в МЖ.
Ключевые слова: тканевые базофилы, молочная железа, пролиферативная мастопатия, фибрознокистозная мастопатия с атипической гиперплазией.
В России каждая пятая опухоль локализуется в молочной железе (МЖ), более 17,2% -в других органах репродуктивной системы [2,8]. Самые высокие показатели заболеваемости раком молочной железы (РМЖ) по РФ в последние годы отмечаются в Северной Осетии [4].
Формирование опухоли длительно протекающий процесс и происходит он не без участия системы соединительной ткани [9]. О функциональной активности соединительной ткани можно судить по количеству и состоянию тканевых базофилов (ТБ), так как их реакции отражают обменные сдвиги в основном веществе соединительной ткани [4,10,12]. Полифункциональность ТБ, их участие в любом патологическом процессе и любых приспособительных реакциях побудила нас к изучению роли этой системы клеток в развитии опухолевого процесса.
Целью проведенного исследования было изучение локализации, количества, степени функциональной активности и представительства ТБ в здоровой МЖ и в МЖ при пролиферативной мастопатии (ПМ) и фиброзно-кистозной мастопатии с атипической гиперплазией (ФКМАГ).
Материал и методика.
Изучено 27 оперативно удаленных опухолей МЖ. В 11 из них гистологически обнаружена - пролиферативная мастопатия, в 16 - фиброзно-кистозная мастопатия с атипической гиперплазией. Весь материал патоморфологически верифицирован. Контролем - 7 -служили МЖ здоровых женщин, погибших в результате несчастного случая или не от заболеваний женских репродуктивных органов.
Возраст больных пролиферативной мастопатией колебался от 27 до 49 лет, фиброзно-кистозной мастопатии с атипической гиперплазией от 42 до 63 лет.
Для светооптического изучения кусочки 1-0,8 см3 помещали в холодный 10% забу-ференный раствор формалина, обезвоживали в спиртах и хлороформе и заливали в па-
рафин. Срезы толщиной 5 мкм окрашивали 1% раствором метиленовой сини и по Рома-новскому-Гимза. Общую гистологическую структуру опухолей изучали на препаратах, окрашенных гематоксилин-эозином.
Светооптический анализ полученных данных производился на микроскопе Микмед-1, фотосъёмка с использованием цифрового фотоаппарата Power Shot А40 фирмы Canon. Для каждого случая определяли количество ТК в 100-150 стандартных полях зрения (окуляр Х7, объектив Х40) и соотношение зрелых, дегранулированных и тотально де-гранулированных форм. Подсчитывали среднее количество ТБ в соотношении с другими клетками микроокружения с использованием измерительной сетки Автандилова Г.Г. в модификации Салбиева К.Д. (1984). Статистически материал обрабатывался с использованием критерия Стьюдента.
Для улътраструктурного изучения материал фиксировали в течение 2-х часов в 2,5% растворе глутаральдегида на какодилатном буфере с дофиксацией в 1% растворе четы-рехокиси осмия. Обезвоживали в спиртах и ацетоне и заключали в эпоксидные смолы Эпон-812 и Аралдит М. Полутонкие срезы окрашивали 1% раствором метиленовой сини с 0,5% раствором буры по Линну. Ультратонкие срезы контрастировали 0,2% раствором уранилацетата и цитратом свинца по Рейнольдсу. Изучение и фотосъемка препаратов осуществлялась в электронном микроскопе Тесла-BS 500.
Полученные результаты.
Анализ полученных данных показал, что во всех случаях патологии МЖ все параметры системы ТБ отличаются от контрольных, при этом изменения эти носят строго специфический, зависящий от вида опухоли характер.
В МЖ здоровой женщины ТБ не много, овальной, округлой реже веретеновидной формы, зрелые. Расположены они вдоль кровеносных сосудов, в небольшом количестве вдоль млечных протоков и в ацинусе чаще в соединительнотканных прослойках иногда фуппами по 2-3, но чаще одиночные. Степень дегрануляции умеренная (табл.1). Соотносительно с другими клетками микроокружения ТБ в МЖ 1,56 %.
Таблица 1
Морфофункциональные параметры тканевых базофилов здоровой молочной железы, пролиферативной мастопатии и фиброзно-кистозной мастопатии с атипической ________________________гиперплазией (ув. 280) (М±т)____________________
Тканевые базофилы Здоровая молочная железа Пролифиративная мастопатия Фиброзно-кистозная мастопатия с атипической гиперплазией
Общее КОЛ-ВО 2,84±0,16 3,77±0,19* 5,03±0,67***
Зрелые 0,68±0,11 0,82±0,18 0,67±0,14
Дегранулированные. 1,44±0,16 1,86±0,15 2,40±0,31*
Тот. дегранулированные 0,72±0,10 1,09±0,22 1,96±0,39**
Примечание: Различие с показателями здоровой железы достоверно *- р<0,02, **- р<0,01, ***-р<0,001
Количество ТБ в МЖ при ПМ больше (<0,02) чем в здоровой МЖ (Табл.1). В периферических отделах опухоли ТБ - крупные, округлой или вытянутой формы, с выраженной дефануляцией (рис.1).
Зрелых форм ТБ также больше, чем в контроле, что можно объяснить процессами ми-фации в системе и синтетической активностью в ТБ (рис.2). В глубине опухоли ТБ мелкие, чаще тотально дефанулированные и опустошенные, среди них появляется некоторое количество клеток с бледно окрашенными, светло розовыми фанулами и иногда явно крупным ядром, которые напоминают собой ТБ, ранее наблюдавшиеся нами у животных в эксперименте [4]. ТБ составляют 3% от общего количества клеток микроокружения.
Рис. 1. Тканевые базофилы молочной железы (1) при пролиферативной мастопатии, вблизи микрососудов (2). Окраска по Романовскому-Гимза (У в. 1300).
60^
1 2 3
Рис. 2 Функциональный профиль тканевых базофилов здоровой молочной железы, пролиферативной мастопатии и фиброзно-кистозной мастопатии с атипической гиперплазией: 1 - здоровая молочная железа; 2 -пролиферативная мастопатия; 3 - фиброзно-кистозная мастопатия с атипической гиперплазией.
ТБ в МЖ при ФКМАГ вдвое больше, чем в контроле (рис.З). В некоторых случаях внутри кист видна эритроцитарная масса, вокруг этих кист ТБ особенно много и отличаются они тем, что среди них появляются очень мелкие ТБ, которые чаще располагаются парами, и гранулы их имеют бледно розовую окраску (рис.4). Фигуры дегрануляции среди этих мелких ТБ редки, хотя возможно плохо визуализируются из-за цвета гранул. Крупные ТБ при этом демонстрируют реакцию явной активации, то есть основная масса ТБ находится в состоянии дегрануляции, чаще умеренной, хотя уровень тотальной дегрануляции также существенно высок (рис. 2). В процентном соотношении ТБ также почти вдвое больше, чем в контроле. Все изменения в МЖ, как при ПМ, так и ФКМАГ происходят на фоне отчетливо выраженной лимфогистиоцитарной инфильтрации.
На ультраструктурном уровне синхронно с усугублением общей ситуации при ФКМАГ в популяции ТБ МЖ отмечается учащение случаев деформации, а также нарастающий полиморфизм и бледность секреторных гранул ТБ, свидетельствующие о снижении степени их зрелости. В цитоплазме ТБ появляются пустоты, число их нарастает,
Рис. 3. Представительство тканевых базофилов в здоровой молочной железе, пролиферативной мастопатии и фиброзно-кистозной мастопатии с атипической гиперплазией (%): 1 - здоровая молочная железа, 2 -пролиферативная мастопатия; 3 - фиброзно-кистозная мастопатия с атипической гиперплазией.
что является следствием их активной дегрануляционной деятельности. В МЖ при ФКМАГ' чаще наблюдается выраженный полиморфизм секреторных гранул. В них встречаются гранулы диаметром от 0,9 до 0,2 мкм2. В МЖ при ФКМАГ, чаще, чем при ПМ, появляются ТБ с крупным инвагинированным ядром, занимающим почти всю площадь клетки, с ободком крупных, но бледных гранул. Форма этих необычных ТБ от слегка вытянутой, до округлой. Учащаются также случаи плотной агрегации ТБ по 3-5 клеток и более, а также нарастание в ТБ деструктивных изменений. На ультраструктур-ном уровне при ФКМАГ отмечается учащение случаев явно выраженных деструктивных изменений, разбухания, вакуолизации и разрушения ТБ.
Обсуждение полученных результатов.
Проведенное исследование демонстрирует активацию системы ТБ как при ПМ, так и при ФКМАГ. Активация эта имеет специфический характер и зависит от вида патологии и степени запущенности процесса. Так, количество ТБ при ПМ достоверно превышает уровень такового в здоровой МЖ, а при ФКМАГ наблюдается максимальный уровень количества ТБ, вдвое превышающий контрольные показатели. Число ТБ в МЖ, соотносительно с другими клетками микроокружения, удвоено как при ПМ, так и при ФКМАГ, то есть, несмотря на высокий уровень функциональной активности, количество их не снижается. Степень функциональной активности системы также неоднозначна при этих видах патологии МЖ. При этом, чем более запущен процесс, тем чаще встречаются фигуры тотальной экскреции с элементами деструкции и распадом ТБ. Функциональный профиль ТБ при ФКМАГ свидетельствует о нарастающих явлениях истощения компенсаторных возможностей популяции ТК, что согласуется с ранее полученными данными [4]. Появление ТБ с крупным инвагинированным ядром является также признаком нарастания явлений апоптоза. Сходные явления описываются в раковых опухолях, при этом авторы приходят к выводу, что интенсивность апоптоза является надежным прогностическим маркером. Чем она выше, тем выше потенция злокачественности и хуже прогноз [1]. При этом, по нашим данным, признаки апоптоза в системе ТБ отмечаются раньше, чем в каких-либо других клетках МЖ и чаще при ФКМАГ, чем при ПМ, что может иметь определенную прогностическую ценность. Обращает на себя внимание и тот факт, что, несмотря на повышенную функциональную активность ТК при ФКМАГ, прогноз при этом виде патологии хуже, чем при ПМ, что связано с возрастным иммунным статусом этой категории больных [5,7].
Анализ всего комплекса полученных в рамках проведенного эксперимента данных подтверждает мысль о том, что ТБ являются активной частью системы местного имму-
Рис. 4. Группа тканевых базофилов молочной железы (1) при фиброзно-кистозной мастопатии с атипической гиперплазией, увеличение количества мелких, незрелых ТК (2). Кистозные полости (3). Окраска по Романовскому-Гимза (Ув. 1100).
нитета и ответственны за экстрацеллюлярные сигналы, направленные на поддержание гомеостаза микрорегиона. [4,9,11]. Осуществляется эта функция ТБ благодаря их экскреторной активности. Проведенное исследование отчетливо демонстрирует попытки ТБ популяции нормализовать взаимодействие клеток микроокружения, и по-видимому, ей это удаётся, при этом ТБ система наращивает свое представительство в тканях МЖ и проявляет повышенную функциональную активность.
Выводы. Сопоставление полученных результатов с данными литературы позволяет заключить, что ТБ популяция может играть существенную роль в патогенезе ПМ и ФКМАГ, длительность и тяжесть течения которого определяется постоянным характером антигенной стимуляции, постепенной хронизацией процесса, наступающим дисбалансом соединительной ткани и в итоге полной капитуляцией иммунной системы и начале развития необратимых изменений в МЖ. Ни одно из этих явлений, характерных для опухолевого заболевания, не может протекать без участия ТБ [4,9,11]. При этом нет пока единого мнения по поводу тормозящей или ускоряющей роли ТБ в развитии опухолевого процесса [4,10-12]. Изучение системы ТБ в онкогенезе, помимо фундаментальной и прогностической, может иметь и практическую ценность. Возможно своевременное воздействие на систему ТБ официнальными препаратами (хорошо известными аллергологам), физическими факторами [6,8] и природными биорегуляторами [2,3] наряду с активацией других компенсаторных механизмов организма могло бы привести к стагнации, а в ряде случаев и к регрессу начинающихся патологических изменений микрорегиона в процессе формирования РМЖ и других опухолевых заболеваниях.
Литература
1. Богомоловава И.В., Гад.исиханова И.Г., Сулейманова Л.В. Явления апоптоза в раковых опухолях // Мат. 7-й Всеросс Конф. по патологии клетки.-ГУ НИИ МЧ РАМН, Москва-2005.-С.25-26.
2 Вершинина С.Ф., Потявина Е.В. Применение природных регуляторов в онкологии. // Вопросы онко-логии.-2003.-Т 49,- №2.-С.145-151.
3. Воробьев А.А., Гершановт М.Л., Петров Л.Н. Предпосылки и перспективы применения пробиотиков в комплексной терапии онкологических больных. // Вопросы онкологии.-2004.-Т.50.-№3.-С.361-365.
4. Дзодзикова М.Э., ТТ. Березов,В.А.. Шахламов, К.Д. Сачбиев. Тучные клетки молочной железы в процессе формирования рака молочной железы в эксперименте. // Вестник ВНЦ РАН.-2003.-№4.-С.37-43.
5. Дзодзикова М.Э., Кастуева Н.З.. Дзугкоева Ф.С., Цамагова Л.В., Плиева Э.А. Возможности адъювантной терапии больных с диффузной фиброзно-кистозной мастопатией. // Мат 5-Росс, онкол конф Москва.-2002.-С.321-322.
6. Иовик А.А., Камилова Т А., Цыган В.И. Новая парадигма и новые мишени терапии рака. II Вопросы онкологии.-2003 .-Т.49.- №6.-С.695-703.
7. Плотникова Н.А., Абрамова С В., Харитонова Т.В., Кемайкин С.П., Харитонов С.В. Морфофункциональная характеристика иммунокомпетентных клеток у женщин в перименопаузе. // Морфология.-2004.-Т. 126-№4.-С.101.
8. Чистяков С.С., О.П. Гребенников, В.Е. Шишкина. Комплексное лечение фиброзно-кистозной болезни.// Русский мед. журн. 0нкология.-2003.-Т. 11.-№11.-С.666-669.
9. Юрина Н.А., Радостина А.И. Морфофункциональная гетерогенность и взаимодействие клеток соединительной ткани. -М.-Изд. УДН.-1990.-398с.
10. Bowrey PF, King J, Magarey С, Schwartz P, Marr P, Bolton E, Morris DL. Histamine, mast cells and tumour cell proliferation in breast cancer1, does preoperative cimetidine administration have an effect? // Br J Cancer. 2000.-82(1): 167-70.
11. Meininger C.J.: Mast cells and tumor-associated angiogenesis. // Chem. Immunol-1995.- 62.-P.239-257.
12. Samoszuk M, Corwin MA. Mast cell inhibitor cromolyn increases blood clotting and hypoxia in murine breast cancer. 11 Int J Cancer.-2003.-107(1): 159-63.
TISSUE BASOPHILES OF THE MAMMARY GLAND WOMEN WITH PROLIFERATIVE MASTTOPATHY AND FIBROTIC-CYSTIC MASTOPATHY WITH ATYPIC HYPERPLASIA
M.E. DZODZIKOVA, K.D. SALBIEV, A.V. TURIEV
Central Scientific-Investigative Laboratory, Histology, Cytology and Embriology Department of North Ossetian State Medical Academy.
362040, RNO-Alania, Vladikavkaz, Pushkinskaya Str., 40.
E-mail: dzodzikova [email protected] V.M. GABARAEVA Therd Surgical department of Republic oncology department.
362000, RNO-A, Vladikavkaz, Zortova Str. 2.
T.T. BEREZOV Byochemycal department of University of Peoples Friendsip.
11743 7, Moscow, Myclucho-Maclay Str. 8.
V.A. SHAHLAMOV III of Human Morphology RAMS, laboratory of experimental cell pathology.
117418, Moscow, Tsuryupa Str. 3.
By the means of light and electronic microscopy, morphometric and functional characteristics of tissue baso-philes poppulation (TB) and their representation in a healthy mammary gland (MO), in proliferative masthopathy (PM) and tibrotic-cystic mastopathy with atypic hyperplasia (FCMAH) were being stadied. Twenty seven surgically removed tumours of MG were studied. Conducted investigation demonstrates TB system activation in all types of stadied MG tumours. This activation is dynamic has cyclic character and depends on the tumour type. Guantity and activity MG TB from PM to FCMAH increases. Gradual increasing of the rate and level of degranulation, appearing in the main node surrounding tissues and in the tumour itself large quantity of fine, unmaturated TB testifies the phenomenon of decompensation in the system and the beginning of the unreversed changes in MG development.
Key words: tissue basophiles, mammary gland, proliferative mastopathy, fibrotic-cystic mastopathy with athypic hyperplasia.
