CC BY
9
2016, Т. 6, № 3
ТИПИРОВАНИЕ ИЗОЛЯТОВ ЛЕПТОСПИР МЕТОДОМ MALDI-TOF МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ
Е.В. Зуева, Н.А. Стоянова, Н.К. Токаревич, Арег А. Тотолян
ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург
Лептоспироз — зоонозное заболевание, вызываемое патогенными видами бактерий рода Leptospira. Согласно серологической классификации, основанной на структурной неоднородности полисаха-ридных O-антигенов, представители рода лепто-спир подразделяются более чем на 300 сероваров. Серотипирование является специализированной сложной процедурой, но чрезвычайно ценным инструментом эпидемиологических исследований. Цель — определение возможности применения метода MALDI-TOF масс-спектрометрии для идентификации изолятов лептоспир на уровне сероваров.
Использовали восемь референсных штаммов Leptospira spp., а так же 10 штаммов патогенных леп-тоспир, выделенных в Северо-Западном регионе России. Эталонные спектры референсных штаммов получены путем объединения отдельных спектров каждого штамма в главный спектральный профиль. Оценку идентификации лептоспир осуществляли путем вычисления коэффициентов совпадения отдельных спектров каждого изолята с эталонными спектрами. Различие между коэффициентами оценивали однофакторным дисперсионным анализом ANOVA.
Анализ отдельных спектров, включенных в состав эталонных спектров референсных штаммов, показал четкое разделение на кластеры соответственно их сероварам. Визуализация главных профилей всех исследуемых штаммов в виде дендрограммы показала наличие трех подгрупп: подгруппа I включала штаммы, относящиеся к серогруппе Tarassovi,
II включала штаммы серогруппы Grippotyphosa,
III содержала профили штаммов серогрупп Pomona, Canicola, Icterohaemorrhagiae и непатогенного штамма Patoc. Малое различие между спектрами в III подгруппе свидетельствовало о значительной близости между патогенными штаммами и сапрофитом L. biflexa. При проведении идентификации для каждого изолята был назначен контрольный эталонный спектр серовара, на уровне которого изо-лят был предварительно серотипирован. Наиболее высокие баллы коэффициентов регистрировались у соответствующих контрольных сероваров. В то же время у большинства изолятов не было достоверно значимого различия между оценками совпадения с контрольным сероваром и с сапрофитным штаммом Patoc. Полученные данные свидетельствуют о присутствии в спектрах лептоспир пиков полиса-харидных O-антигенов, которые позволяют дифференцировать серовары патогенных штаммов. Таким образом, использование такого показателя как максимальная величина среднего значения коэффициентов совпадения с эталонными спектрами патогенных штаммов в целом позволило правильно идентифицировать изоляты согласно их серологической классификации.
Материалы II Национального конгресса бактериологов
