CC BY
67
Валентина Петровна Дерягина1, Наталья Ильинична Рыжова2
ВЛИЯНИЕ ФЛАВОНОИДОВ И ИНДОЛОВ НА РОСТ АДЕНОКАРЦИНОМЫ ЭРЛИХА У МЫШЕЙ
1 К. б. н., старший научный сотрудник, лаборатория профилактики канцерогенных воздействий и
профессионального рака НИИ клинической онкологии ГУ РОНЦ им.. Н. Н. Блохина РАМН (115478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24)
2 К. б. н., старший научный сотрудник, лаборатория профилактики канцерогенных воздействий и
профессионального рака НИИ клинической онкологии ГУ РОНЦ им.. Н. Н. Блохина РАМН (115478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24)
Адрес для переписки: 115478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24, НИИ клинической онкологии ГУ РОНц им. Н. Н. Блохина РАМН, лаборатория профилактики канцерогенных воздействий и профессионального рака, Дерягина Валентина Петровна; e-mail: Derygina@inbox.ru
Изучено влияние источников флавоноидов и пищевых индолов на рост подкожно перевитой аденокарциномы Эрлиха у мышей CBA/Lac. В качестве источников флавоноидов и пищевых индолов использовали пикногенол («Biolandes», Франция) — стандартизованный препарат олигомерных проан-тоцианидинов из виноградных косточек с содержанием олигомерных проантоцианидинов 43,2% («la Gardonnenque»), диквертин («Флавир», Россия), индол-3-карбинол («Sigma»). Показано, что продолжительное пероральное введение мышам водной суспензии веществ пикногенол (150 мг/кг) и индол-3-карбинол (75 мг/кг) вызывало достоверное торможение роста аденокарциномы Эрлиха, определяемое по объему, соответственно на 52 и 56% (р < 0,01). При этом эффект пикногенола удерживался на протяжении всего опыта и был подтвержден снижением массы опухоли на 31% (р < 0,01). Пероральное введение мышам суспензии из виноградных косточек приводило к достоверному усилению на 45% роста аденокарциномы Эрлиха, определяемого по объему. Введение пикногенола, диквертина и препарата из виноградных косточек мышам с аденокарциномой Эрлиха увеличивало эндогенное образование производных оксида азота. Можно предположить, что реализация ингибирующего эффекта пикногенола и индол-3-карбинола не зависит от интенсивности образования производных оксида азота в организме.
Ключевые слова: мыши CBA/lac, аденокарцинома Эрлиха, торможение роста опухоли, флавонои-ды, пищевые индолы, производные оксида азота, эндогенное образование.
Список сокращений
АКЭ аденокарцинома Эрлиха
АОА антиоксидантная активность
БАД биологически активная добавка
ВК виноградные косточки
Дкв диквертин
И-3-К индол-3-карбинол
Кв кверцитин
На нитраты
Ни нитриты
ОПц олигомерные проантоцианидины
Пг пикногенол
СРС свободнорадикальные соединения
ТРО торможение роста опухоли
© Дерягина В. П., Рыжова Н. И., 2009 УДК 616-006.66-092.9
ФК фенольные кислоты
Фл флавоноиды
ХЛ хемилюминесценция
NO оксид азота
iNOS индуцибельная изоформа NO-синтазы
К настоящему времени получены экспериментальные и эпидемиологические доказательства того, что многие растительные продукты, а также входящие в их состав соединения (Фл, каротиноиды, индолы, ретиноиды, витамины, аминокислоты и др.) предупреждают развитие опухолевого процесса. Защитное действие овощей и фруктов и их составляющих связывают, прежде всего, с антиоксидантной активностью, направленной против окислительного повреждения ДНК, а также с регуляцией сигнальных путей, задействованных в канцерогенезе, в частности транскрипционного ядерного фактора NF-кB, активирующего белка-1, митогенактивирующих протеинкиназ и др.
В качестве перспективных биологически активных соединений, способных проявлять антирадикальные, им-муно-, гормонорегулирующие, противовоспалительные и другие свойства, являющихся одновременно физиологичными для человека, можно рассматривать полифе-нольные соединения, в частности Фл, к которым относят ФК и их производные, а также процианидины, проанто-цианидины и др. [1; 2]. Фл присутствуют в большинстве съедобных растений, концентрируясь в семенах, кожуре ягод, фруктов и овощей. Благодаря структурным особенностям, определяющим их биологические свойства, Фл считают потенциально наиболее активной группой природных антиоксидантов.
Экстракт из ВК является смесью полифенолов, содержащей димеры, тримеры и другие олигомеры (про-цианидины) катехина и эпикатехина и их галловых производных, которые известны как проантоцианидины [3]. В экспериментах на моделях опухолей простаты, толстой кишки, молочной железы при введении мышам экстракта из ВК ингибировался опухолевый процесс, уменьшались частота возникновения и объем опухолей, увеличивалась продолжительность жизни животных без проявления токсичности [4]. Поиск потенциальных молекулярных мишеней для действия проантоцианидинов позволил выявить, что ВК подавляют активность ядерного фактора NF-kB, циклооксигеназы-2, iNOS, митогенакти-вирующих протеинкиназ, ангиогенных факторов, стимулируют индукцию апоптоза и др. [4].
В экспериментах in vitro на культурах опухолевых клеток получены доказательства антипролиферативно-го действия ФК (галловая и таниновая кислоты), модулирующих активность ряда ферментов и сигнальных путей и играющих важную роль в процессе канцерогенеза [5; 6].
В последние годы проявляется особый интерес к биологическому действию антиоксиданта Кв (3,3',4',5,7-пен-тагидроксифлавон). Кв широко распространен в овощах, во фруктах, в ягодах, особенно им богаты черника, яблоки. На культурах опухолевых клеток показано, что Кв проявлял антипролиферативную активность, инициируя апоптоз, некроз, регулируя клеточный цикл, но при этом не оказывал токсического действия на здоровые клетки [7]. Кв предотвращал индуцированные бензо(а)пиреном предопухолевые изменения в легких мышей, препятствуя повреждению ДНК периферических лимфоцитов [8]. В то же время продолжают появляться публикации об участии Кв в прооксидантных эффектах [9]. В ряде исследований Кв проявлялся как мутаген [10].
Значительный интерес у исследователей вызывают индолы растений семейства крестоцветных, проявившие антиканцерогенный эффект на разных опухолевых моделях у животных [11; 12]. Изучение механизмов антиканцерогенного действия И-3-К позволило выявить его влияние на активность ферментов, участвующих в метаболизме и элиминации различных ксенобиотиков, а также на процесс метилирования ДНК, ремоделирование хроматина, инвазию опухолевых клеток, ангиогенез, регуляцию клеточного цикла и др. [12—14]. Наряду с этим авторы ряда исследований обнаружили, что введение И-3-К животным на стадии постинициации значи-
мо потенцирует развитие опухолей печени, щитовидной железы, толстой кишки и матки [15—17].
С учетом приведенных противоречивых сведений, а также способности антиоксидантов полифенольного происхождения проявлять при определенных условиях прооксидантную активность [10; 18] нам представлялось целесообразным выявить противоопухолевые свойства у источников Фл и пищевых индолов.
Задачами исследования явились оценка влияния препаратов — источников Фл — Пг (препарата из ВК), Дкв и И-3-К на рост перевивной АКЭ, а также на эндогенное образование NO.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Экспериментальные исследования проводили на 50 мышах-самцах CBA/Lac массой 29—31 г разводки питомника РАМН «Столбовая». Штамм опухоли АКЭ получен из банка ГУ РОНц, использовали 2—3 пассажа опухоли in vivo. Схема введения веществ в виде водной суспензии была общей для всех опытных групп. До перевивки АКЭ мышам перорально 8 раз в течение 12 дней вводили водную суспензию действующего вещества, затем перевивали АКЭ. Весь последующий период эксперимента животным продолжали 5 раз в неделю вводить действующее вещество следующим образом: 1-й группе — суспензию препарата Пг в дозе 150 мг/кг, 2-й группе — суспензию препарата из ВК в дозе 300 мг/кг, 3-й группе — суспензию Дкв из расчета 150 мг/кг, 4-й группе — суспензию И-3-К из расчета 75 мг/кг; 5-я группа — контроль, мыши с перевитой АКЭ.
Ингибирующий эффект соединений оценивали в динамике по стандартным критериям торможения роста опухоли [19], учитывая объем, а также массу опухоли, которую определяли после умерщвления животных передозировкой эфирного наркоза на 24-е сутки опыта.
АОА источников проантоцианидинов и антоциани-динов in vitro определяли хемилюминесцентным методом, используя систему генерации свободных радикалов, предложенную Ю. О. Теселкиным и соавт. [20]. В работе использовали коммерческий препарат Hb, лю-минол («Sigma», США), остальные реактивы были отечественного производства квалификации «чистый для анализа» (ч. д. а.). Все растворы реагентов, в том числе изучаемых препаратов, готовили на бесцветном растворе Хенкса. ХЛ регистрировали при температуре 37 °С на хемилюминометре (Berthoold, ФРГ). Измерение проводили с интервалом 30 с в течение 30 мин. Реакционная среда общим объемом 1 мл содержала 0,02 мл плазмы крови здоровых мышей, 2,6 мкМ Hb, 56 мкМ люминола, 10 мкМ ЭДТА, рН 7,4. Инициирование свободнорадикального окисления люминола осуществляли введением Н2О2 (35,2 мкМ). В качестве измеряемых параметров использовали максимальную интенсивность ХЛ и латентный период развития ХЛ (соответствует временному интервалу задержки развития ХЛ). Суспензию изучаемого препарата вносили в реакционную смесь перед инициированием реакции свободнорадикального окисления. АОА плазмы крови выражали в аскорбатном эквиваленте.
Содержание Ни в моче определяли спектрофотометрическим методом Грисса [21]. При определении На их
предварительно восстанавливали до Ни пористым кадмием и анализировали методом Грисса. Для сбора мочи мышей помещали по 5 штук в обменные клетки на сутки, лишив корма при свободном доступе к дистиллированной воде. Во избежание разрушения Ни в емкости для сбора мочи вносили 0,3 мл 30% гидроксида натрия.
Приводим краткую характеристику препаратов, использованных в эксперименте и зарегистрированных как БАД или являющихся основой БАД:
• Пг («Biolandes», Франция) получен на основе экстракта французской приморской сосны, состоит из смеси фенольных и полифенольных структур. В его состав входят процианидин (не менее 60%) и ФК: прото-катехиновая кислота, галловая кислота, ванилиновая, р-кумариновая, катеховая кислота и др.;
• стандартизованный препарат олигомерных проан-тоцианидинов из ВК с содержанием ОПц 43,2% (La Gardonnenque);
• Дкв («Флавир», Россия) получен из древесины сибирской лиственницы, содержит более 90% флавоноида дигидрокверцитина. По молекулярному строению и свойствам дигидрокверцитин близок к КВ;
• И-3-К («Sigma»), индол, входит в состав растений семейства крестоцветных (капуста, редис, репа, брюква). Остальные реактивы отечественного производства
квалификации ч. д. а.
Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием стандартного критерия Стью-дента.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Для подтверждения АОА препаратов из ВК и виноградной кожицы, содержащих проантоцианидины и ан-тоцианы, были проведены испытания in vitro с использованием системы генерации СРС, основанной на взаимодействии Hb, люминола и пероксида водорода в водной среде [20].
Согласно данным, представленным в табл. 1, внесение препарата из ВК («Breko», Германия) в инкубационную смесь, содержащую помимо указанных реагентов плазму крови, приводило к выраженному возрастанию АОА плазмы крови мышей. Прослеживается положительная линейная зависимость АОА плазмы крови от количества вносимого препарата из ВК в интервале концентраций его в смеси от 0,05 до 0,5 мкг/мл. Наряду с задержкой развития хемилюминесцентной реакции препарат из ВК достоверно снижал (на 50—90%) амплитуду интенсивности ХЛ.
Внесение в генерирующую СРС реакционную смесь препарата из виноградной кожицы (антоци-анин, «Enocanossa», Италия) в концентрации от 0,05 до 0,5 мкг/мл приводило к возрастанию АОА плазмы крови в 1,7—5,6 раза (табл. 2). Полное гашение ХЛ происходило при внесении препарата в концентрации, равной 0,5 мкг/мл и более.
Полученные результаты свидетельствуют о выраженной антирадикальной активности препаратов из ВК и виноградной кожицы и согласуются с данными о способности источников проантоцианидинов и антоцианов повышать АОА плазмы крови и усиливать резистентность плазмы крови к окислению [22].
Таблица 1
Влияние препарата из ВК на АОА плазмы крови мышейа
Концентрация препарата, мкг/мл Показатель
АОА в эквиваленте аскорбиновой кислоты, мкМ максимальное значение ХЛ, тыс. уд/10 с
Контроль 0,0 184,7 ± 28,8 2бб,7 ± 55,4
0,05 232,3 ± 23,1б 137,9 ± 25,бв
0,1 432,2 ± 31,2в б8,0 ± 17,4в
0,2 507,б ± 9,9в 25,8 ± 5,4в
0,5 Гасит ХЛ 0
а Приведены среднеарифметические величины для 5—6 образцов (М ± Бй, Бй — стандартное отклонение).
б р < 0,02 (по критерию Стьюдента при сравнении с контролем). в р < 0,01 (по критерию Стьюдента при сравнении с контролем).
Результаты влияния Пг, ВК, Дкв и И-3-К на опухолевый рост, приведенные в табл. 3 и 4 (рассчитанные на основе данных табл. 3), свидетельствуют, что на ранних стадиях развития опухолей у мышей клетки АКЭ были чувствительны к введению 2 из 4 испытанных веществ — Пг и И-3-К. Противоопухолевое действие Пг было наиболее устойчивым и достигало максимальных значений к 14-му дню наблюдения, максимальное ТРО при этом составило 52%. В дальнейшем ингибирующее действие Пг
Таблица 2
Влияние препарата из виноградной кожицы на АОА плазмы крови мышей
Концентрация препарата, мкг/мл Показатель
АОА, мкМ аскорбиновой кислоты максимальное значение ХЛ, тыс. уд/10 с
Контроль 0,0 185,4 ± б4,2 204,0 ± б4,б
0,05 315,2 ± 99,3б 1б8,б ± 21,5
0,1 383,1 ± 137,0в 111,б ± 30,бв
0,2 58б,б ± 139,9г 119,0 ± 21,бб
0,4 1043,8 ± 154,0г 78,9 ± 21,3г
0,5 Гасит ХЛ 0
а Приведены среднеарифметические величины для 5 образцов (М ± Бй. Бй — стандартное отклонение).
б р < 0,05 (по критерию Стьюдента при сравнении с контролем). в р < 0,02 (по критерию Стьюдента при сравнении с контролем). г р < 0,01 (по критерию Стьюдента при сравнении с контролем).
Таблица 3
Влияние препаратов Пг, И-3-К, Дкв и ВК на рост подкожно перевитой АКЭ у мышей CBA/Lac
Группа/доза вещества, мг/кг Объем опухоли (М ± SD), мм3 Масса опухоли на 24-е сутки, мг
сутки после перевивки опухоли
7-е 10-е 14-е 17-е 21-е
Пг/150 244 ± 96 588 ±395 853 ± 496а 1419 ± 828а 3356 ±1342 2860 ± 994а
ВК/300 507±293 1071 ± 556 2128 ±1319 3333 ±1425 6098 ± 2427б 4556 ±1259
Дкв/150 336 ± 260 1213 ± 426 1735 ± 837 2532±990 4958 ±1476 4469 ±660
И-3-К/75 163 ± 97а 696 ±327 1234± 506 1887 ± 765б 4345 ±1377 4040 ± 1108
Контроль 370 ± 174 1049 ±631 1785±737 2579 ± 624 4195±1183 4116±740
М — среднее арифметическое значение; Бй — стандартное отклонение. а р < 0,01. б р < 0,05.
сохранялось, но было менее выражено. В конце эксперимента при взвешивании выделенных опухолей подтвердился ингибирующий эффект Пг по отношению к АКЭ: средняя масса опухолей у животных, потреблявших Пг, была на 31% меньше (р < 0,01), чем у мышей контрольной группы.
Действие И-3-К было наиболее выраженным на ранней стадии развития опухоли. Через неделю после перевивки АКЭ у животных, получавших И-3-К, регистрировали максимальную величину ТРО, которая составила 56% (р < 0,01). Затем действие И-3-К ослабевало и сохранялось до 17-го дня наблюдения, при этом ТРО было в пределах 27—34%. В дальнейшем объем и масса опухоли у мышей этой группы не отличались от таковых в контроле.
Введение Дкв почти не сказалось на скорости роста опухоли, определяемой по изменению ее объема, по сравнению с этим показателем у мышей контрольной группы.
У мышей, которым вводили водную суспензию ВК, объем опухолей первые 2 нед не отличался от контроля, затем наметилась тенденция к потенцированию роста опухолей, а в конце 3-й недели отмечено достоверное увеличение объема АКЭ (на 45%, р < 0,05; см. табл. 3, 4). При вскрытии мышей этой группы выявлено усиление признаков некроза в опухолевой массе и значительное накопление асцитической жидкости. Результаты взвешивания опухолей у мышей не подтвердили стимулирующее действие ВК; возможно, из-за потери асцитической жидкости вес опухолей был на 11% выше, чем в контроле.
Таблица 4
Торможение роста АКЭ у мышей CBA/Lac при длительном введении источников флавоноидов и И-3-Ка
Группа/разовая доза, мг/кг ТРО, %, и суммарная доза препарата на сутки после перевивки ТРО по массе, %
7-е 10-е 14-е 17-е 21-е
Пг/150 -34 (р = 0,06) [1950] -44 (р = 0,06) [2400] -52б [2700] -45б [3150] -20 [3450] -31б
ВК/300 +37 [3900] +2 [4800] + 19 [5400] +29 [6300] +45в [6900] + 11
Дкв/150 -9 [1950] + 16 [2400] -3 [2700] -2 [3150] + 18 [3450] +9
И-3-К/75 -56б [975] -34 [1200] -31 (р = 0,07) [1350] -27в [1575] -4 [1725] -2
ТРО со знаком минус означает ингибирование роста опухоли, со знаком плюс — усиление роста.
а Табл. 4 рассчитана на основе данных табл. 3. В квадратных скобках приведена суммарная доза, мг/кг, полученная каждой мышью на момент измерения объема опухоли. б р < 0,01. в р < 0,05.
Следует подчеркнуть, что ни в одной из экспериментальных групп не отмечено гибели мышей. При оценке переносимости препаратов выявлено, что в случае длительного перорального введения всех испытанных соединений у мышей отсутствуют признаки нарушения поведения и состояния.
Как показывают результаты исследований, проведенных нами ранее [23], рост АКЭ сопровождается усилением эндогенного образования N0, количество которого в моче увеличивается в линейной зависимости от объема опухоли. Источником генерации избыточных количеств N0 являются преимущественно опухолевые клетки [24]. Возможность образования повышенного количества N0 обнаружена исследователями при опухолях полости рта, гортани, легкого, репродуктивных органов, центральной нервной системы и др. у человека [25; 26], при этом определяется положительная зависимость между стадией опухоли и количеством/активностью iN0S, ответственной за гиперпродукцию N0. Учитывая, что Пг, Дкв и ВК являются выраженными антиоксидантами [4; 22; 27], можно ожидать, что поступление их в организм снизит характерное для опухолевого процесса интенсивное образование свободнорадикальных соединений, в том числе высокореактивного N0. Тем самым можно снизить неблагоприятные эффекты N0, обусловленные потенцированием ангиогенеза, метастазирования, повреждением ДНК и др. [26].
Результаты количественного анализа ионов Ни и На в моче мышей с опухолями свидетельствуют, что выделение их у животных опытных групп, получавших активные вещества, было таким же, как у мышей контрольной группы, или превышало этот показатель. Максимальные уровни суммарного эндогенного образования производных N0 обнаружены у мышей, получавших Пг и Дкв; они превышали на 44 и 47% уровень, определяемый у мышей контрольной группы (табл. 5).
Таким образом, результаты экспериментального исследования показывают, что Пг и И-3-К вызывают замед-
Таблица 5
Выделение Ни и На с мочой у мышей СВАДас на 21-е сутки после перевивки АКЭа
Группа Выделение нитросоединений, мкг/сут
N0-2 N0-3 в эквиваленте N0-! по сравнению с контролем, %
Пг 21,9 118,5 148,1 +44,2
ВК 17,9 93,3 117,5 + 14,4
Дкв 21,9 121,7 151,3 +47,3
И-3-К 15,7 85,0 106,2 +3,4
Контроль 15,6 81,6 102,7 0
«+» — увеличение выделения производных N0. а В каждой группе по 5 мышей; приведенные данные усреднены.
ление роста АКЭ у мышей СБЛ/Ьае. Максимальный эффект Пг проявился после поступления вещества в суммарной дозе 2700 мг/кг, в то время как для достижения максимального эффекта потребовалось введение 975 мг/кг И-3-К. Зарегистрирован потенцирующий эффект богатого источника проантоцианидинов — ВК, причем достоверный эффект проявлялся только после поступления вещества в количестве 6900 мг/кг.
Введение антиоксидантов (Пг, ВК, Дкв) мышам с АКЭ не только не подавляло образование производных N0, но и усиливало его. По-видимому, действие исследованных антиоксидантов не сводится только к реакциям со СРС, но затрагивает и другие механизмы, в том числе возможна активация фермента iN0S, ответственного за избыточное образование N0. Следует отметить, что стимулирующее действие антиоксидантов на эндогенное образование N0 отмечалось редко, минуя путь активации N0-синтазы. Как предполагают авторы, природные антиоксиданты могли способствовать ослаблению межклеточного взаимодействия N0 с белками и другими соединениями, тем самым повышая выход его производных в межклеточное пространство [1]. Необходимо учесть еще и то, что количественная оценка эндогенных производных N0 осуществлялась на 21-й день исследования, когда ингибирующее действие тестируемых соединений на опухолевый рост либо отсутствовало, либо было слабо выраженным. На этой стадии опухоль достигала значительных размеров и, возможно, ее рост сопровождался интенсификацией свободнорадикальных реакций. По-видимому, для получения точного ответа необходимы дополнительные исследования, учитывающие динамику роста АКЭ.
Полученные данные о потенцировании опухолевого процесса под действием ВК настораживают и нуждаются в подтверждении в расширенных исследованиях. Остается не совсем понятым метаболизм проанто-цианидинов, входящих в состав ВК, которые являются полимерными Фл. Установлено, что чем выше степень полимеризации ОПЦ, тем выше АОА этого вещества. Однако с ростом полимеризации снижается биодоступность ОПц. Имеются данные о том, что эти полимеры катаболизируются нормальной микрофлорой толстой кишки до соединений с меньшей степенью полимеризации. Возможно, поэтому в плазме обнаруживаются только мономеры, АОА которых намного ниже [28].
заключение
Пг (150 мг/кг) и И-3-К (75 мг/кг) при продолжительном пероральном введении мышам СБЛ/Ьае достоверно тормозили, соответственно на 52 и 56%, рост подкожно перевитой АКЭ, при этом эффект Пг удерживался на протяжении всего опыта и был подтвержден уменьшением на 31% массы опухоли у животных.
Продолжительное пероральное введение мышам СБЛ/Ьае суспензии из ВК приводило к потенцированию на 45% роста АКЭ, определяемого по объему и усилению асцита и некротических процессов в опухоли.
Введение природных антиоксидантов (Пг, ВК, Дкв) мышам с АКЭ усиливало эндогенное образование производных N0 — На и Ни. Можно предположить, что реа-
лизация ингибирующего эффекта Пг и И-3-К не зависит от интенсивности образования производных NO в организме.
Авторы выражают, искреннюю благодарность ведущему научному сотруднику ГУ НИИ питания РАМН Л. В. Кравченко за ценную консультативную помощь при планировании исследования.
ЛИТЕРАТУРА
1. New insights on the anticancer properties of dietary polyphenols / Fresco P., Borges F., Diniz C., Marques M. P. // Med. Res. Rev. — 2006. — Vol. 26, N 6. — P. 747—766.
2. The antitumor activities of flavonoids / Kandaswami C., Lee L. T., Lee P. P., Hwang J. J., Ke F. C., Huang Y. T., Lee M. T. // In Vivo. —
2005. — Vol. 19, N 5. — P. 895—909.
3. Characterization of proanthocyanidins in grape seeds using electrospray mass spectrometry / Hayasaka Y., Waters E. J., Cheynier V., Herderich M. J., Vidal S. // Rapid. Commun. Mass. Spectrom. — 2003. — Vol. 17. — Р. 9—16.
4. Nandakumar V., Singh T., Katiyar S. K. Multi-targeted prevention and therapy of cancer by proanthocyanidins // Cancer Letters. — 2008. — Vol. 269, N 2. — P. 378—387.
5. Agarwal C., Tyagi A., Agarwal R. Gallic acid causes inactivating phosphorylation of cd25A/cdc25C-cdc2 via ATM-Chk2 activation, leading to cell cycle arrest, and induces apoptosis in human prostate carcinoma DU145 cells // Mol. Cancer Ther. — 2006. — Vol. 5, N 12. — P. 3294—3302.
6. Anticancer effects of callic acid isolated from Indonesian herbal medicine, Phaleria macrocarpa (Scheff.) Boerl, on human cancer cell lines / Faried A., Kurnia D., Faried L. S., Usman N., Miyazaki T., Kato H., Kuwano H. // Int. J. Oncol. — 2007. — Vol. 30, N 3. — Р. 605—613.
7. Antioxidant and cytotoxic activities of naturally occurring phenolic and related compounds: comparative study / Rao Y. K., Geethangi-li M., Fang S. H., Tzeng Y. M. // Food Chem. Toxicol. — 2007. — Vol. 45, N 9. — Р. 1770—1776.
8. Preventive effects of quarcetin against benzo[a]pyrene-in-duced DNA damages and pulmonary precancerous pathologic changes in mice / Jin N. Z., Zhu Y., Zhou J. W., Mao L., Zhao R. C., Fang T. N., Wang X. R. // Basic Clin. Pharmacol. Toxicol. — 2006. — Vol. 98, N 6. — Р. 593—598.
9. Quercetin may act as cytotoxic prooxidant after its metabolic activation to semiqunone and quinoidal product / Metodiewa D., Jais-wal A. K., Cenas N., Dickancaite E., Segura-Aguilar J. // Free Radic. Biol. Med. — 1999. — Vol. 26, N 1—2. — Р. 107—116.
10. Prooxidant а^у^ of flavonoids: copper-dependent strand breaks and the formation of 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine in DNA / Yo-shino M., Haneda M., Naruse M., Murakami K. // Mol. Genet. Metab. — 1999. — Vol. 68, N 4. — P. 468—472.
11. Conaway C. C., Yang Y. M., Chung F. L. Isothiocyonates as cancer chemopreventive agents: their biological activities and metabolism in rodents and humans // Curr. Drug. Metab. — 2002. — Vol. 3. — Р. 233—255.
12. Cruciferous vegetables and human cancer risk: epidemiologic evidence and mechanistic basis / Higdon J. V., Delage B., Williams D. V., Dashwood R. H. // Pharmacol. Res. — 2000. — Vol. 55. — P. 224—236.
13. Indole-3-carbinol inhibits the expression of cyclin-dependent kinase-6 and induces a G1 cell cycle arrest of human breast cancer cells independent of estrogen receptor signaling / Cover C. M., Hsieh S. H., Tran S. H., Hallden G., Kim G. S., Bjeldanes L. F., Firestone G. L. // J. Biol. Chem. — 1998. — Vol. 273, N 7. — Р. 3838—3847.
14. Indole-3-carbinol in maternal diet provides chemoprotection for the fetus against transplacental carcinogenesis by the polycyclic aromatic hydrocarbon, dibenzo[a,I]pyrene / Yu Z., Mahadevan B., Lohr C. V., Fischer K. A., Louderback M. A., Krueger S. K., Pereira C. B., Alber-shardt D. J., Baird W. M., Bailey G. S., Williams D. E. // Carcinigene-sis. — 2006. — Vol. 27, N 10. — P. 2116—2123.
15. Dashwood R. H. Indole-3-carbinol: anticarcinogen or tumor promoter in brassica vegetables? // Chem. Biol. Inter. — 1998. — Vol. 110. — P. 1—5.
16. Promotion of aflotoxin B1 carcinogenesis by the natural tumor modulator indole-3-carbinol: influence of dose, duration, and intermittent exposure on indole-3-carbinol promotional potency / Dash-wood R. H., Fong A. T., Williams D. E., Hendricks J. D., Bailey G. S. // Cancer Res. — 1991. — Vol. 51. — Р. 2362—2365.
17. Lee B. M., Park K. K. Beneficial and adverse effects of chemopre-ventive agents // Mutat. Res. — 2003. — Vol. 523—524. — Р. 265—278.
18. Free radicals, metals and antioxidants in oxidative stress-induced cancer / Valko M., Rhodes C. J., Moncol J., Izakovic M., Mazur M. // Chem. Biol. Inter. — 2006. — Vol. 160, N 1. —P. 1—40.
19. Методические указания по изучению противоопухолевой активности фармакологических веществ / Трещалина Е. М., Жукова О. С., Герасимова Г. К., Андронова Н. В., Гарин А. М. // В кн.: Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под общ. ред. чл.-корр. РАМН, проф. Р. У. Хабриева. — 2 изд., перераб. и доп. — М.: Медицина, 2005. — С. 637—651.
20. Ингибирование сывороточными антиоксидантами окисления люминола в присутствии гемоглобина и пероксида водорода / Теселкин Ю. О., Бабенкова И. В., Любицкий О. Б., Клебанов Г. И., Владимиров Ю. А. // Вопр. мед. хим. — 1997. — Т. 43, Вып. 2. — С. 87—93.
21. Дерягина В. П. Экспериментальное изучение функциональной активности нейтрофилов и макрофагов в условиях воздействия нитрита натрия // Биомед. хим. — 2003. — Т. 49, № 1. — С. 19—26.
22. Кравченко Л. В., Морозов С. В., Тутельян В. А. Влияние фла-воноидов на резистентность микросом к повреждающему действию ПОЛ in vitro и ex vivo // Бюлл. экспер. биол. и мед. — 2003. — Т. 136, № 12. — С. 648—652.
23. Дерягина В. П., Рыжова Н. И. Действие модуляторов NO-синтаз на рост перевивной аденокарциномы Эрлиха // Вестн. РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН. — 2007. — Т. 18, № 2. — С. 32—37.
24. Действие грибов Lentinus edodes (Шиитаке) на рост подкожно перевитой аденокарциномы Эрлиха у мышей / Дерягина В. П., Рыжова Н. И., Разин А. Н., Филлипова И. А., Волков М. Ю., Бочарова О. А. // Рос. биотер. журн. — 2006. — Т. 5, № 1. — С. 98—104.
25. Оксид азота в неопластическом процессе / Проскуряков С. Я., Коноплянников А. Г., Иванников А. И., Скворцов В. Г., Цыб А. Ф. // Вопр. онкол. — 2001. — Т. 47, № 3. — С. 257—269.
26. Laudansky P., Anchim T., Wolczynski S. The role of nitric oxide in carcinogenesis and progression of neoplastic processes // Ginekol. Pol. — 2001. — Vol. 72, N 4. — P. 251—260.
27. Antiproliferative effect of guercetin in the human U138MG glioma cell line / Braganhol E., Zamin L. L., Canedo A. D., Horn F., Tamajusu-ku A. S., Wink M. R., Salbego C., Battastini A. M. // Anticancer Drugs. —
2006. — Vol. 17, N 6. — P. 663—671.
28. Polymeric proanthocyanidins are catabolized by human colonic microflora into low-molecular-weight phenolic acid / Deprez S., Brezillon C., Rabot S., Philippe C., Mila I., Lapierre C., Scalbert A. // J. Nutr. — 2000. — Vol. 130. — Р. 2733—2738.
Поступила 01.10.2008
Valentina Petrovna Deryagina1, Natalia Ilyinichna Ryzhova2
THE EFFECT OF FLAVONOIDS AND INDOLES ON GROWTH OF EHRLICH ADENOCARCINOMA IN MICE
1 MSc, PhD, Senior Researcher, Laboratory for Prevention of Carcinogenic Effects and Occupational Cancer,
Clinical Oncology Research Institute, N. N. Blokhin RCRC RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, 115478, Russian Federation)
2 MSc PhD, Senior Researcher, Laboratory for Prevention of Carcinogenic Effects and Occupational Cancer,
Clinical Oncology Research Institute, N. N. Blokhin RCRC RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, 115478, Russian Federation)
Address for correspondence: Deryagina Valentina Petrovna, Laboratory for Prevention of Carcinogenic Effects and Occupational Cancer, Clinical Oncology Research Institute, N. N. Blokhin RCRC RAMS,
24, Kashirskoye sh., Moscow, 115478, Russian Federation; e-mail: Derygina@inbox.ru
We have studied the effect of flavonoids and dietary indoles on growth of cutaneously implanted Ehrlich adenocarcinoma in CDA/Lac mice. Picnogenol (Biolandes, France), a standardized formulation of oligomer proanthocyanidins from grape seeds containing 43.2% of oligomer proanthocyanidins (La Gardonnenque), diquertine (Flavir, Russia) and indole-3-carbinol (Sigma) were used as flavonoid and dietary indole agents. Chronic oral administration of water suspensions of picnogenole (150 mg/kg) and indole-3-carbinol (75 mg/kg) led to a significant inhibition of Ehrlich adenocarcinoma growth of 52 and 56% by volume (p < 0.01). The picnogenole effect was sustained for the entire experiment duration and confirmed by a 31% tumor mass reduction (p < 0.01). Oral administration of grape seed suspension resulted in a 45% growth of Ehrlich adenocarcinoma volume. Picnogenole, diquertine and grape seed preparation increased endogenous production of nitric oxide derivatives in mice with Ehrlich adenocarcinoma. This suggests that picnogenole and indole-3-carbinol inhibitory effects do not depend upon intensity of production of nitric oxide derivatives in mice.
Key words: CDA/Lac mice, Ehrlich adenocarcinoma, tumor growth inhibition, dietary indoles, nitric oxide derivatives, endogenous production.
